KR20040074614A

KR20040074614A - 초본식물, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트로부터추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약제제, 그것의 제조방법, 및 그것의 사용

Info

Publication number: KR20040074614A
Application number: KR1020040010530A
Authority: KR
Inventors: 투펭페이; 송지홍; 레이리
Original assignee: 신파 파마세우티컬 코리미티드
Priority date: 2003-02-18
Filing date: 2004-02-18
Publication date: 2004-08-25
Also published as: US7087252B2; US20060233896A1; JP2012021022A; CA2457996A1; AU2004200624A1; JP4926376B2; JP2004250449A; AU2004200624B2; TWI331529B; CA2457996C; JP5352655B2; US20040162246A1; TW200416036A

Abstract

초본 식물의 줄기인, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)가 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며, 상기 제제의 10 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 상기 제제의 1 내지 40 중량%의 악테오시드를 포함하는 의약 제제를 제조하는데 사용된다. 본 발명의 의약 제제는 노인성 치매를 예방하고 혈소판 응고를 억제하는데 사용하는 의약 조성물의 활성 성분으로서 사용된다.

Description

초본식물, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트로부터 추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제, 그것의 제조방법, 및 그것의 사용{MEDICINAL PREPARATION CONTAINING PHENYLETHANOID GLYCOSIDES EXTRACTED FROM HERBACEOUS PLANT, CISTANCHE TUBULOSA(SCHENK.)WIGHT, PROCESS OF MAKING THE SAME, AND USES OF THE SAME}

본 발명은 일반적으로는 초본식물로부터 유도되는 의약 제제(製劑)에 관한 것이며, 좀더 구체적으로는 시스탄체(Cistanche) 속에 속하는 초본 식물로부터 추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제에 관한 것이다. 제제는 노인성 치매를 예방하고 혈소판의 응고를 억제할 수 있는 약물의 활성 성분으로서 사용된다. 본 발명은 또한 의약 제제의 사용 뿐만 아니라 의약 제제의 제조방법도 포함하고 있다.

일반적으로 노인들은 완전한 치료법이 존재하지 않는 다양한 신체적 및 정신적 손상을 입기 쉽게 마련이다. 노인성 치매가 그 적절한 예이다. 그러나, 시스탄체(Cistanche) 속에 속하는 허브의 다육질 줄기가 불임, 성교불능, 변비증 등에 효능이 있다는 것은 임상적으로 분명한 것이다. 또한, 상기한 다년생 허브의 다육질 줄기로부터 생성된 제제는 혈액 및 신장에 영양을 공급해준다. 이러한 기생질 다년생 허브는 중국의 북서 지방에서 널리 경작되고 있으며, 그 지역에서는 "사막의 인삼"으로 알려져 있다. 시스탄체(Cistanche) 속중 가장 많이 경작되는 종은 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)이다.

다년생 허브 (시스탄체(Cistanche) 속)의 화학적 성분 및 약리학적 활성에 대한 일본 과학자들의 분류학적 연구에 따르면, 페닐에타노이드 글리코시드가 다년생 허브의 주요 활성 성분이다. 상기 활성 성분은 효과적인 항산화제, 대사 증진제, 기억력 향상제, 및 성욕 증진제이다. 많은 연구자들이 여러 페닐에타노이드 글리코시드 화합물의 의약적 특성들을 연구해 왔다. 상기 연구에 대한 정보를 위해서는 아래의 출판물을 참고하기 바란다: 사토 티(Sato T.) 등, 야쿠가쿠 자시(Yakugaku Zasshi), 1985, 105 (12): 1131; 지메네즈 씨(Jimenez C.) 등, 나트 프로드 레프(Nat Prod Rep), 1994, 11 (6): 591; 코메타 에프(Cometa F.) 등, 피토테라피아(Fitoterapia), 1993, 64 (3): 195.

본 발명의 주요 목적은 초본식물인, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)로부터 추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제의 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 노인성 치매를 예방하고 혈소판의 응고를 예방하는 의약 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 의약 제제는 상기 제제의 10 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 상기 제제의 1 내지 40 중량%의 악테오시드를 함유한다.

바람직하게는, 본 발명의 제제는 상기 제제의 25 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 상기 제제의 5 내지 40 중량%의 악테오시드를 함유한다.

바람직하게는, 본 발명의 의약 제제는 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기로부터 제조된다.

바람직하게는, 본 발명의 의약 제제는 2'-아세틸악테오시드, 캄프네오시드 I, 캄프네오시드 II, 시스탄투부로시드 A, B₁, B₂, C₁, C₂, 크레나토시드, 데카페오일악테오시드, 이소악테오시드, 로디오로시드, 시린갈리드 A, 3'-α-L-람노피라노시드, 및 투부로시드 A를 각각 상기 의약 제제의 5 중량% 미만의 양으로 더 함유한다.

의약 제제를 제조하는 본 발명의 방법은 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부를 제 1 극성 용매로 추출하는 제 1 단계를 포함한다. 그렇게 얻어진 추출물을 소수성 조공극성 고분자 비드로 충진된 칼럼에 도입하여 페닐에타노이드 글리코시드를 고분자 비드에 흡수시킨다. 이동상으로서 작용하는 제 2 극성 용매를 사용하여 비교적 덜 강하게 흡수된 화합물을 대부분의 페닐에타노이드 글리코시드가 고분자 비드에 여전히 흡수되어 있는 칼럼으로부터 용리시킨다. 최종적으로, 제 3 극성 용매를 사용하여 페닐에타노이드 글리코시드를 칼럼으로부터 용리시켜 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 용리액을 얻는다. 제 3 극성 용매는 제 2 극성 용매보다 극성면에서 낮다.

바람직하게는, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부는 다육질 줄기이다. 지하부를 제 1 극성 용매와 혼합시키며, 결과적인 혼합물을 0.5 내지 10 시간동안 가열한다. 그 후 혼합물을 여과하여 용액을 얻는다. 용액은 감압에 의해 농축된 형태로 존재하는 추출물이다. 바람직하게는, 혼합물은 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부와 제 1 극성 용매를 1:4 내지 1:20의 중량비로 함유한다. 바람직하게는, 제 1 극성 용매는 물, 또는 물과 에탄올의 혼합용매이다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에서 사용된 칼럼의 고분자 비드는 교차결합된 방향족 고분자이다. 좀더 바람직하게는, 고분자 비드는 교차결합된 폴리스티렌, 또는 스티렌과 디비닐 벤젠의 교차결합된 공중합체의 형태이다. 바람직하게는, 제 2 극성 용매는 물이다. 바람직하게는, 제 3 극성 용매는 메탄올, 에탄올, 물-메탄올 혼합물, 또는 물-에탄올 혼합물이다. 좀더 바람직하게는, 제 3 극성 용매는 물과 에탄올의 혼합물이다.

본 발명의 방법은 용리액에 함유된 용매를 제거하여 건조 제제를 생성시키는 단계를 더 포함한다.

본 발명의 제제는 노인성 치매를 예방하는 의약 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다. 의약 조성물은 활성 성분으로서 치료적으로 효과적인 양의 제제, 및 활성 성분에 대한 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 함유한다.

본 발명의 제제는 혈소판의 응고를 억제하는 의약 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다. 의약 조성물은 치료적으로 효과적인 양의 제제 및 의학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 함유한다. 제제는 화합물의 활성 성분으로서 사용된다.

본 발명은 또한 환자의 노인성 치매 질환을 예방하고 치료하는 약제의 제조에서의 본 발명의 제제의 사용을 개시한다.

본 발명은 또한 환자의 혈소판 응고를 억제하는 약제의 제조에서의 본 발명의 제제의 사용을 개시한다.

본 발명은 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)로부터의 페닐에타노이드 글리코시드 화합물을 함유하며, 제제의 10 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 제제의 1 내지 40 중량%의 악테오시드를 포함하는 제제를 제공한다. 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)로부터 유도되는 페닐에타노이드 글리코시드 화합물은 하기 화학식 1의 구조를 가진다.

페닐에타노이드 글리코시드 화합물은 하기 표 1에 기재된 2'-아세틸악테오시드, 캄프네오시드 I, 캄프네오시드 II, 시스탄투부로시드 A, B₁, B₂, C₁, C₂, 크레나토시드, 데카페오일악테오시드, 이소악테오시드, 로디오로시드, 시린갈리드 A, 3'-α-L-람노피라노시드, 및 투부로시드 A를 포함하며, 에키나코시드 및 악테오시드를 제외한 대부분의 화합물은 제제내에서 적은 양 또는 미량으로 존재한다.

제제의 주요 성분

성분	R₁	R₂	R₃	R₄	R₅	R₆	R₇
2'-아세틸악테오시드	Ac	Rha	Cf	H	H	OH	OH
악테오시드	H	Rha	Cf	H	H	OH	OH
캄프네오시드 I	H	Rha	Cf	H	OMe(S/R)	OH	OH
캄프네오시드 II	H	Rha	Cf	H	OH(S/R)	OH	OH
^*시스탄투부로시드 A	H	Rha	Cf	Glc	H	H	OH
^*시스탄투부로시드 B₁/B₂	H	Rha	Cm/c-Cm	Glc	H	OH	OH
^*시스탄투부로시드 C₁/C₂	H	Rha	Cf	Glc	OH(S/R)	OH	OH
데카페오일악테오시드	H	Rha	H	H	H	OH	OH
에키나코시드	H	Rha	Cf	Glc	H	OH	OH
이소악테오시드	H	Rha	H	Cf	H	OH	OH
로디오로시드(살리드로시드)	H	H	H	H	H	H	OH
시린갈리드 A
3'-α-L-람노피라노시드	H	Rha	Cf	H	H	H	OH
투부로시드 A	Ac	Rha	Cf	Glc	H	OH	OH
크레나토시드	하기 화학식 2의 구조 참조

^*신규 화합물

Ac: 아세틸 Cf: 트랜스-카페오일 Cm: 트랜스-코우마로일

c-Cm: 시스-코우마로일 Glc: β-D-글루코피라노스

Rha: α-L-람노피라노스

크레나토시드

표 1에 기재된 모든 화합물은 정지상이 C18 알킬 실란의 실리콘이고, 이동상이 아세토니트릴-0.05M 인산 수용액이며 (용리변화(4:96→15:85)), 1 ml/분의 유속, 및 330 nm의 검출 파장의 조건하에서 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 확인하였다.

이후로는 본 발명의 의약 제제의 제조방법을 상세히 설명할 것이다. 본 발명의 방법은 추출과 정제의 두 단계로 이루어진다. 첫번째 단계에서는, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기를 엷은 조각들로 잘라내거나 또는 미세 입자 또는 분말로 빻는다. 엷은 조각들 또는 미세 입자를 물, 에탄올, 메탄올, 또는 저지방 알콜의 매질에 흡수시킨다. 추출을 실온에서 실시한다. 여과물을 진공에서 농축시켜서 추출물을 형성시킨다. 추출물을 D-101 형 또는 AB-8 형 조공극성 흡착수지로 충진된 흡착 칼럼으로 이송하기 전에 물 속에서 추출물을 가열하여 추출물을 정제시킨다. 칼럼에 대해 물, 메탄올,에탄올, 물 함유 메탄올, 또는 물 함유 에탄올 등으로 용리공정을 수행한다. 용리는 일정농도의 용액 또는 변화농도의 용액으로 실시할 수 있다. 용리액을 모으고, 농축시키고, 종래의 건조법으로 건조시킨다. 용리액을 건조시킨 후 본 발명의 의약 제제를 얻는다. 이렇게 제조된 의약 제제는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며, 노인성 치매를 예방하거나 또는 혈소판의 응고를 억제하는데 사용하는 의약 조성물을 제조하는데 사용한다.

본 발명의 의약 제제의 약리학적 테스트를 소위 "워터 메이즈 (water maze) 실험"에 따라 실시하여 본 발명의 의약 제제를 함유하는 음식물을 작은 마우스들로 구성된 테스트 군에 제공하였다. 대조군과 비교할 때, 테스트 군의 작은 마우스의 학습 기억력이 향상되었으며, 에탄올 또는 약물로 인한 테스트 군의 기억력 감소는 확연히 감소하였다. 유사한 방법으로, 본 발명의 의약 제제를 함유하는 음식물을 한 무리의 래트에게 제공하였다. 상기 결과와 비교하면, 이들 래트는 혈전증에 덜 취약하며, 또는 혈소판 응고면에서 덜 취약하다는 것을 알 수 있었다. 상기한 약리학적 테스트 결과를 근거로 임상 테스트를 수행하여 본 발명에 따른 의약 제제의 VD 및 AD를 포함한 노인성 치매의 예방과 치료에 대한 영향을 연구할 수 있다.

본 발명의 의약 제제의 추출, 정제, 및 약리학적 효과를 하기 비제한적인 실시예 및 비교 실시예를 참고하여 상세히 설명할 것이다.

추출:

실시예 1

시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기 조각들 10 kg을 조각의 8배 양의 물에 침지시켰다. 조각들을 물에 한시간 동안 침지시키고난 후 2 시간동안 전제시켰다. 전제된 혼합물을 여과하여 제 1 여과물을 얻었다. 나머지를 그것의 6 배 양의 물과 함께 전제시키고, 전제된 혼합물을 여과하여 제 2 여과물을 얻었다. 제 2 여과물과 동일한 과정으로 제 3 여과물을 얻었다. 세가지 여과물들을 조합하고 진공에서 농축시켜서 1.10의 비중 (50℃)을 갖게 하였다. 농축된 형태의 여과물을 에탄올과 혼합하여 60 %의 에탄올을 함유한 혼합물을 형성시키고 12 시간동안 냉각시켰다. 그 후 냉각된 혼합물 위에 떠오른 상청액(上淸液)을 모으고, 나머지를 여과하여 여과물을 얻었으며, 여과물을 상청액과 조합하여 최종 추출물을 형성시켰다. 최종 추출물을 진공 속에서 농축시켜 1.10의 비중 (50℃)을 갖게 하였으며, 에탄올은 재생시켰다. 이와 같이 생성시킨 최종 추출물은 5.6 kg의 중량을 가졌다.

실시예 2

시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기 분말 10 kg을 분말의 15배 양의 물에 2 시간동안 침지시키고, 3 시간동안 전제시켰다. 그 후 전제시킨 혼합물을 여과하여 제 1 여과물을 얻고, 전제시킨 혼합물의 나머지를 그것의 12배 양의 물과 혼합시키고 2 시간동안 전제시키고 여과하여 제 2 여과물을 얻었다. 상기 과정을 2회 더 반복하여 제 3 여과물 및 제 4 여과물을 얻었다. 네가지 여과물들을 조합하고 진공에서 농축시켜서 1.25의 비중 (50℃)을 갖게 하였다. 농축된 형태의 여과물을 에탄올과 혼합하여 80 %의 에탄올을 함유한 혼합물을 형성시키고 24 시간동안 냉각시켰다. 그 후 냉각된 혼합물 위에 떠오른 상청액을 모으고, 나머지를 여과하여 여과물을 얻었으며, 여과물을 상청액과 조합하여 최종 추출물을 형성시켰다. 최종 추출물을 진공에서 농축시켜 1.25의 비중 (50℃)을 갖게 하였으며, 에탄올은 재생시켰다. 이와 같이 생성시킨 최종 추출물은 7.2 kg의 중량을 가졌다.

실시예 3

시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기 조각들 10 kg을 조각의 7배 양의 물에 침지시켰다. 조각들을 물에 3 시간 동안 침지시키고난 후 4 시간동안 전제시켰다. 전제된 혼합물을 여과하여 제 1 여과물을 얻었다. 나머지를 그것의 5 배 양의 물과 함께 전제시키고, 전제된 혼합물을 여과하여 제 2 여과물을 얻었다. 제 2 여과물과 동일한 과정으로 제 3 여과물 및 제 4 여과물을 얻었다. 네가지 여과물들을 조합하고 진공에서 농축시켜서 1.05의 비중 (50℃)을 갖게 하였다. 농축된 형태의 여과물을 에탄올과 혼합하여 50 %의 에탄올을 함유한 혼합물을 형성시키고 10 시간동안 냉각시켰다. 그 후 냉각된 혼합물 위에 떠오른 상청액을 모으고, 나머지를 여과하여 여과물을 얻었으며, 여과물을 상청액과 조합하여 최종 추출물을 형성시켰다. 최종 추출물을 진공에서 농축시켜 1.10의 비중 (50℃)을 갖게 하였으며, 에탄올은 재생시켰다. 이와 같이 생성시킨 최종 추출물은 6.5 kg의 중량을 가졌다.

실시예 4

시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기 분말 10 kg을 분말의 4배 양의 40% 에탄올에 3 시간동안 침지시키고, 3 시간동안 환류하에서 전제시켰다. 그 후 전제시킨 혼합물을 여과하여 제 1 여과물을 얻고, 전제시킨 혼합물의 나머지를 그것의 4배 양의 40% 에탄올과 혼합시키고 4 시간동안 전제시키고 여과하여 제 2 여과물을 얻었다. 상기 과정을 2회 더 반복하여 제 3 여과물 및 제 4 여과물을 얻었다. 네가지 여과물들을 조합하고 진공에서 농축시켜서 1.05의 비중 (50℃)을 갖게 하였으며, 이로써 6.2 kg의 중량을 가지는 최종 추출물을 생성시켰다.

정제:

실시예 5

최종 추출물 6 kg을 가열하면서 물에 용해시켰다. 물의 양은 최종 추출물 양의 반이었다. 추출 용액을 전처리된 D-101 형 조공극성 흡착 수지로 충진된 흡착 칼럼에 가하였다. 물을 사용하여 칼럼에 대해 1차로 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 2배 양의 수용리액을 얻었으며, 그 후 20 % 에탄올을 사용하여 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 2배 양의 제 1 에탄올 용리액 (20% 에탄올)을 얻었다. 수용리액을 또 다른 흡탈착 조작을 거치게 하여 제 2 에탄올 용리액을 얻었다. 두가지 20% 에탄올 용리액을 조합하고, 농축시키고, 건조시켜서 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며 865 g의 중량을 가진 제제를 생성시켰다.

에키나코시드 및 악테오시드의 함량을 정지상이 C18 알킬 실란의 실리콘이고, 이동상이 메탄올-0.15% 아세트산(30:70)이며, 1 ml/분의 유속, 및 333 nm의 검출 파장의 조건하에서 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 측정하였다.

60℃에서 진공에서 24 시간동안 건조된 에키나코시드 및 악테오시드를 측정하고 50% 메탄올에 용해시켜서 참고용액을 제조하였다. 참고용액 1 ml는 0.1 mg의 용질을 함유하였다.

눈금이 있는 25 ml의 용기내 적절한 양의 50% 메탄올에 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제 50 mg을 초음파 처리를 하면서 용해시켜서 테스트 용액을 제조하였다. 50% 메탄올을 용기내 결과적인 용액이 25 ml 눈금에 도달할 때까지 더 가하였다. 정확히 1 ml의 용액을 취하여 50% 메탄올이 가해진 눈금이 있는 10 ml 용기에 옮겨 담았다. 용액을 0.45 ㎛의 막으로 여과하여 테스트 용액을 얻었다.

참고용액 및 테스트 용액을 각각 5 ㎕씩 취하여 액체 크로마토그래피 칼럼에 주입하였으며, 에키나코시드 및 악테오시드의 피크면적을 측정하였다. 피크면적을 이용하여 함량을 계산하였다. 에키나코시드의 함량은 제제의 37.5 중량%인 반면에 악테오시드의 함량은 제제의 6.7 중량%였다.

실시예 6

최종 추출물 6 kg을 가열하면서 물에 용해시켰다. 물의 양은 최종 추출물양의 5배이었다. 추출 용액을 전처리된 AB-8 형 조공극성 흡착 수지로 충진된 흡착 칼럼에 가하였다. 물을 사용하여 칼럼에 대해 1차로 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 8배 양의 수용리액을 얻었으며, 그 후 60 % 에탄올을 사용하여 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 8배 양의 제 1 에탄올 용리액 (60% 에탄올)을 얻었다. 다육질 줄기의 6배 양의 물과 60% 에탄올을 차례로 사용하여 칼럼에 대해 용리공정을 수행함으로써 수용리액을 또 다른 흡탈착 조작을 거치게 하여 다육질 줄기의 7배 양의 제 2 에탄올 용리액을 얻었다. 두가지 60% 에탄올 용리액을 조합하고, 농축시키고, 건조시켜서 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며 1203 g의 중량을 가진 제제를 생성시켰다.

실시예 5에 기재된 HPLC법을 이용하여 에키나코시드 및 악테오시드의 함량이 각각 제제의 48.6 중량% 및 11.8 중량%임을 확인하였다.

실시예 7

최종 추출물 6 kg을 가열하면서 물에 용해시켰다. 물의 양은 최종 추출물 양의 3배이었다. 추출 용액을 전처리된 AB-8 형 조공극성 흡착 수지로 충진된 흡착 칼럼에 가하였다. 물을 사용하여 칼럼에 대해 1차로 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 8배 양의 수용리액을 얻었으며, 그 후 95 % 에탄올을 사용하여 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 8배 양의 제 1 에탄올 용리액 (95% 에탄올)을 얻었다. 다육질 줄기의 6배 양의 물과 95% 에탄올을 차례로 사용하여 칼럼에 대해 용리공정을 수행함으로써 수용리액을 또 다른 흡탈착 조작을 거치게 하여 다육질 줄기의 8배 양의 제 2 에탄올 용리액을 얻었다. 두가지 95% 에탄올 용리액을 조합하고, 농축시키고, 건조시켜서 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며 1260 g의 중량을 가진 제제를 생성시켰다.

실시예 5에 기재된 HPLC법을 이용하여 에키나코시드 및 악테오시드의 함량이 각각 제제의 41.3 중량% 및 7.4 중량%임을 확인하였다.

실시예 8

최종 추출물 6 kg을 가열하면서 물에 용해시켰다. 물의 양은 최종 추출물 양과 동일하였다. 추출 용액을 조공극성 흡착 수지로 충진된 흡착 칼럼에 가하였다. 물을 사용하여 칼럼에 대해 1차로 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 4배 양의 수용리액을 얻었으며, 그 후 40 % 에탄올을 사용하여 용리공정을 실시하여 다육질 줄기의 5배 양의 제 1 에탄올 용리액 (40% 에탄올)을 얻었다. 다육질 줄기의 3배 양의 물과 40% 에탄올을 차례로 사용하여 칼럼에 대해 용리공정을 수행함으로써 수용리액을 또 다른 흡탈착 조작을 거치게 하여 다육질 줄기의 4배 양의 제 2 에탄올 용리액을 얻었다. 두가지 40% 에탄올 용리액을 조합하고, 농축시키고, 건조시켜서 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하며 1107 g의 중량을 가진 제제를 생성시켰다.

실시예 5에 기재된 HPLC법을 이용하여 에키나코시드 및 악테오시드의 함량이 각각 제제의 31.7 중량% 및 6.1 중량%임을 확인하였다.

약리학적 효과

실시예 9

본 발명의 의약 제제를 워터 메이즈 실험에 사용하여 의약 제제의 LACA 마우스의 학습 기억력에 대한 영향을 연구하였다. 일주일에 6일 테스트 하는 동안 피라세탐 정제를 양성 비교약물로서 사용하였다. 테스트는 27일 동안 지속하였다. 테스트의 결과를 하기 표 2에 기재하였다.

본 발명의 제제의 경구투여시 마우스의 학습 기억력에 대한 영향

테스트	비교군	d 값 (n = 27)
		≥0.5	≥0.8	≥0.5합계
		일	%	일	%	일	%
1차 테스트	대조군-페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제를 50 mg/kg 포함	4	14.8	5	18.5	9	33.3
1차 테스트	대조군-페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제를 200 mg/kg 포함	10	37.0	3	11.1	13	48.2
2차 테스트	대조군-페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제를 400 mg/kg 포함	0	0	27	100.0	27	100.0
	대조군-피라세탐 400 mg/kg을 포함하는 양성 비교군	5	18.5	2	7.4	7	25.5
	피라세탐군-페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제를400 mg/kg 포함	7	25.9	16	59.3	23	85.2

표 2에 기재된 데이타로부터, 본 발명의 제제는 마우스의 학습 기억력에 의미있는 효과를 나타낸다는 것을 쉽게 알 수 있으며, 이는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제 50 mg/kg, 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제 200mg/kg, 및 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제 400 mg/kg을 각각 도핑시킨 도핑군과 대조군 사이에 반응시간면에서의 차이점에 의해 예시된다. 반응시간이 d 값 분석에 의해 의미있는 차이를 보이는 기간은 50 mg/kg을 도핑시킨 군의 경우 9일 이었으며, 200 mg/kg을 도핑시킨 군의 경우 13일 이었고, 및 400 mg/kg을 도핑시킨 군의 경우 27일 이었다. 반응시간이 의미있는 차이를 보이는 기간은 투여량이 증가함에 따라 증가하였다. 또한, 반응시간이 의미있는 차이를 보이는 기간은 양성 대조군 (피라세탐군)의 경우 7일 이었으며, 이는 400 mg/kg을 도핑시킨 군의 기간보다 짧은 것이고, 따라서 피라세탐 정제는 본 발명의 제제에 비해 마우스의 학습 기억력에 대한 효과가 떨어졌다.

실시예 10

본 발명에 따른 제제의 LACA 마우스의 기억력 감소 예방에 대한 효과를 워터 메이즈 실험으로 검토하였다. 마우스에 약물을 경구투여하였다. 경구투여한지 한 시간 후, 30 % 에탄올 0.1 ml/10 g BW를 마우스에 투여하였다. 30분 내에 워터 메이즈 실험을 시작하였다. 마우스의 수영능력의 결과를 하기 표 3에 기재하였다.

1주간 경구투여된 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제의 에탄올에 의해 유도된 수컷 LACA 마우스의 기억력 감소의 예방에 대한 영향

군	투여량(mg/kg)	동물의 수	훈련 후목적지에 도착	알콜 투여 후목적지에 도착
군	투여량(mg/kg)	동물의 수	시간 (초)	에러 횟수/동물의 에러 횟수	시간 (초)	에러 횟수/동물의 에러 횟수	에러율, 시간/동물의 수	군 에러율, 시간/동물의 수
본발명의 제제	50	12	7.46 ±0.13	0/0	34.40 ±21.71^*	47/8	5.88	3.92
	200	11	7.14 ±0.18	0/0	16.99 ±9.06^##	8/3^△△	2.67	0.73
	400	10	7.91 ±0.19	0/0	24.38 ±27.84	46/7	6.57	4.60
파라세탐	400	10	8.00 ±0.46	0/0	24.08 ±32.52	54/6	9.00	5.40
대조		10	7.73 ±0.75	0/0	37.78 ±15.90	62/10	6.20	5.17

t 연구: 비교군과의 비교 ##P<0.01, 200 mg/kg 군과의 비교^*P<0.05

X²연구: 비교군과의 비교 △△P<0.01

표 3에 기재된 데이타에 따르면, 본 발명의 의약 제제가 피라세탐보다 마우스의 기억력 감소 예방에 더 효과적이었다. 마우스에 에탄올을 제공한 후, 본 발명의 제제를 투여한 군의 도착시간은 피라세탐군의 도착시간보다 짧았다. 제제 200 mg/kg을 도핑시킨 군과 대조군 사이의 차이는 P < 0.01이었다. 제제 50 mg/kg을 도핑시킨 군과 제제 200 mg/kg을 도핑시킨 군 사이의 차이는 P < 0.05이었다. 결과적으로, 제제의 투여량이 인자인 셈이었다. 제제 400 mg/kg을 도핑시킨 군, 피라세탐군, 및 대조군 사이에 큰 차이는 없었으며, 이는 200 mg/kg의 투여량이 기억력 감소 예방에 가장 효과적인 것을 나타내는 것이다. 표 3에 기재된 "에러" 데이타를 근거로 할때, 200 mg/kg의 투여량이 기억력 감소 예방에 가장 효과적인 것이다.

실시예 11

히오신에 의한 마우스의 기억력 증진장애에 대한 본 발명의 제제의 영향을 연구하였다.

1) 약물 및 동물

테스트 약물 및 비교 약물은 실시예 9와 동일하였다. 마우스를 정상 비교군, 모델군, 600 mg/kg의 피라세탐군, 400 mg/kg, 200 mg/kg, 및 100 mg/kg의 제제군들로 무작위로 분류하였다. 각 군은 15 마리의 마우스를 포함하였다. 체중 10 g 당 0.2 ml를 기준으로 약물을 투여하였다. 투여한지 29째 되는 날부터 점프훈련을 시작하였다. 훈련하기 한시간 전에 약물을 주입하였다. 정상 비교군을 제외하고, 각 군에 1 mg/kg의 히오신을 복강주입하였다. 30일째 되는 날에 테스트를 실시하였으며, 훈련하기 한 시간 전에 약물을 주입하였다. 결과를 표 4에 기재하였다.

히오신에 의한 기억력 증진 장애를 가진 마우스에 대한 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제의 영향 (평균X ±SD)

군	투여 량(mg/kg)	동물 수	잠복 테스트(S)	테스트 에러빈도(회/5 분)
대조 군		14(1)	194.1±101.5^*	1.36±1.45^*
모델 군		15	67.1±78.4	3.13±2.47
파라세탐 군	600	15	144.5±117.4^*	1.60±1.40^*
대조군	400	12(3)	206.1±98.8^**	1.08±1.16^**
	200	12(3)	183.2±115.2^**	1.42±1.38^*
	100	14(1)	191.8±117.5^**	1.50±2.07

모델군과의 비교,^*p<0.05,^**p<0.01; 괄호안의 숫자는 전기 충격에 의해 죽은 숫자를 나타낸다

표 4에 기재된 데이타에 따르면, 군들의 테스트 잠복기가 정상 비교군보다 줄어들었다. 그러나, 테스트 에러의 빈도는 증가하였다. 모델군과 비교할때, 600 mg/kg의 피라세탐군과 400 mg/kg의 제제군, 및 200 mg/kg의 제제군의 경우 잠복기가 연장되었고 테스트 에러의 빈도가 감소되었으며, 이로써 기억력이 향상되었음을 알 수 있다. 100 mg/kg의 제제군의 경우 잠복기가 연장되었으며, 에러의 빈도면에서는 모델군과 차이점이 없었다.

실시예 12

래트의 정맥 바이패스의 혈전증에 대한 본 발명에 따른 제제의 영향을 연구하였다.

수컷 SD 래트를 이용하여 아스피린과 비교하는 연구를 실시하였다.

결과를 하기 표 5에 기재하였다.

혈전증 억제율 (%) =

(증류수 비교군 혈전생성량 - 약물군 혈전생성량) / 증류수 비교군 혈전생성량 ×100 %

래트의 정맥 바이패스의 혈전증에 대한 경구 투여된 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제의 영향

군	투여 량(mg/kg)	동물 수	혈전생성량(mg, X ±SD)	혈전증 억제 율(%)
증류수		10	44.9±3.83
아스피린	100	10	29.2±4.00^**	34.97
제제	200	10	37.7±7.42^*	16.04
	100	10	36.1±5.16^*	19.60
	50	10	42.6±7.12	5.12

증류수 비교군과의 비교,^*p<0.05,^**p<0.01

표 5에 기재된 데이타를 근거로, 200 mg/kg의 제제 및 100 mg/kg의 제제는 증류수 비교군과 비교할 때 각각 16.04 %, 19.60 %의 억제비율로 래트의 정맥 바이패스의 혈전증을 억제할 수 있었다. 그러나, 제제의 효과는 34.97 %의 억제율을 가지는 100 mg/kg의 아스피린보다는 약했다. 50 mg/kg의 제제는 혈전증 형성에는 아무런 영향도 끼치지 못하였다.

실시예 13

본 발명의 제제의 래트의 혈소판 응고에 대한 영향을 연구하였다.

혈소판 응고를 아데노신 이인산 이나트륨 (ADP)을 사용하여 발생시켰다. 1 mg/ml ADP 용액은 사용 전에 냉각상태로 유지하였다. ADP 용액을 사용하려 할 때, 인산 완충용액으로 3회 희석시켰다.

수컷 SD 래트를 체중에 따라 다섯 군으로 무작위로 나누었다. 이들 다섯 군은 증류수 비교군, 아스피린군, 200 mg/kg의 제제군, 100 mg/kg의 제제군, 및 50 mg/kg의 제제군이었다. 0.5 mg/ 100 g의 약물을 경구투여하였다. 증류수 비교군의 래트들에게는 동일한 양의 증류수를 투여하였다. 투여를 7일 동안 지속하였다. 최종 투여전 12 시간 동안은 래트에게 아무 것도 먹이지 않았다. 최종 투여한지 한 시간 후에 대동맥에서 혈액을 채취하였다. 3.8 %의 시트르산 나트륨 (1:9)으로 채취한 혈액의 응고를 방지하였다. 혈액 샘플을 1000 rpm으로 3분 동안 원심분리하여 혈장 풍부 혈소판 (PRP)의 제거를 촉진시켰다. 혈액 샘플의 나머지를 300 rpm으로 10분 동안 추가로 원심분리하여 혈장 빈약 혈소판 (PPP)의 분리를 촉진시켰다. 200 ㎕의 PRP를 불투명한 비교관에 넣었으며, 그것의 불투명성은 PPP에 0점이 맞추어져 있었다. 혈소판의 응고를 일으키는 50 ㎕ ADP 용액을 가하기 전에 혼합물을 5 분 동안 항온으로 보온하였다. SPA-4 다기능 혈소판 응고 측정기를 사용하여 응고도를 측정하였다. 혈소판 응고의 억제율을 하기 식으로 계산하였다.

억제율 (%) =

(대조군 최대 응고도 - 실험군 최대 응고도) / (대조군 최대 응고도) ×100%

테스트의 결과를 표 6에 기재하였다. 200 mg/kg, 100 mg/kg, 및 50 mg/kg의 제제들 모두 혈소판의 응고를 억제할 수 있었으며, 200 mg/kg의 제제가 59.48 %의 최고 억제율을 나타내었음을 쉽게 알 수 있다.

래트의 혈소판 응고에 대한 경구 투여된 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 제제의 영향

군	투여 량(mg/kg)	래트 수	최대응고 (%)(^*±SD)	응고 억제(%)
증류수		10	54.82±7.88
아스피린	100	11	32.73±11.14^**	40.30
제제	200	10	22.21±6.23^**	59.48
	100	11	34.54±15.69^*	36.99
	50	10	31.65±12.81^**	42.26

증류수 군과의 비교,^*p<0.01,^**p<0.001

본 발명의 발명가들은 10년 넘게 시스탄체(Cistanche) 속의 다년생 허브에 대한 연구를 해왔던 경험을 가지고 있다. 시스탄체(Cistanche) 속의 모든 종들 중에서, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)종이 페닐에타노이드 글리코시드 화합물을 다량 함유하고 있음을 알았다. 본 발명의발명가들에 의해 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)로부터 페닐에타노이드 글리코시드를 추출하는 신규한 방법, 및 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제가 제시되었다. 본 발명의 발명가들에 의해 수행된 수많은 약리학적 테스트의 결과, 상기 의약 제제가 기억력 증진, 혈전증 예방, 혈소판 응고의 억제 등에 탁월한 효능이 있음이 발견되었다.

그리고, 본 발명의 의약 제제는 노인성 치매를 예방하고 혈소판 응고를 억제하는데 사용하는 의약 조성물의 활성 성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)로부터 추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제로서, 상기 제제가 상기 제제의 10 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 상기 제제의 1 내지 40 중량%의 악테오시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 제제.
제 1 항에 있어서, 상기 제제의 25 내지 70 중량%의 에키나코시드 및 상기 제제의 5 내지 40 중량%의 악테오시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 제제.
제 1 항에 있어서, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 다육질 줄기로부터 추출되는 것을 특징으로 하는 의약 제제.
제 1 항에 있어서, 2'-아세틸악테오시드, 캄프네오시드 I, 캄프네오시드 II, 시스탄투부로시드 A, B₁, B₂, C₁, C₂, 크레나토시드, 데카페오일악테오시드, 이소악테오시드, 로디오로시드, 시린갈리드 A, 3'-α-L-람노피라노시드, 및 투부로시드 A를 각각 상기 제제의 5 중량% 미만의 양으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 제제.
페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약 제제를 제조하는 방법으로서,

가) 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부를 제 1 극성 용매로 추출하는 단계;

나) 가) 단계로부터의 결과적인 추출물을 소수성 조공극성 고분자 비드로 충진된 칼럼에 도입하여 페닐에타노이드 글리코시드를 고분자 비드에 흡수시키는 단계;

다) 이동상으로서 작용하는 제 2 극성 용매를 사용하여 칼럼에 대해 용리공정을 수행하여 비교적 덜 강하게 흡수된 화합물을 대부분의 페닐에타노이드 글리코시드가 고분자 비드에 여전히 흡수되어 있는 칼럼으로부터 용리시키는 단계; 및

라) 제 2 극성 용매보다 낮은 극성을 가지는 제 3 극성 용매를 사용하여 칼럼에 대해 용리공정을 수행하여 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 용리액을 얻는 단계

를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 가) 단계의 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부가 다육질 줄기인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 가) 단계가 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트(Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight)의 지하부를 제 1 극성 용매와 혼합시키는 단계, 결과적인 혼합물을 0.5 내지 10 시간동안 전제시키는 단계, 및 전제시킨 혼합물을 여과하여 액 추출물을 얻거나 또는 진공속에서 액을 농축시켜 농축된 형태로 추출물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서, 제 1 극성 용매가 물, 또는 물과 에탄올의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 나) 단계의 고분자 비드가 교차결합된 방향족 고분자인 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서, 고분자 비드가 교차결합된 폴리스티렌 또는 스티렌과 디비닐 벤젠의 교차결합된 공중합체의 형태인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 제 2 극성 용매가 물이며, 제 3 극성 용매가 메탄올, 에탄올, 물과 메탄올의 혼합물, 또는 물과 에탄올의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 11 항에 있어서, 제 3 극성 용매가 물과 에탄올의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 라) 단계로부터의 용리액에 함유된 용매를 제거하여 건조제제를 생성시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
노인성 치매를 예방하는데 사용하는 의약 조성물로서, 활성 성분으로서 치료적으로 효과적인 양의 제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 따른 제제를 활성 성분에 대한 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와의 혼합물로 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
혈소판의 응고를 억제하는데 사용하는 의약 조성물로서, 활성 성분으로서 치료적으로 효과적인 양의 제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 따른 제제를 활성 성분에 대한 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와의 혼합물로 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
환자의 노인성 치매 질환을 예방하고 치료하는 약제의 제조방법에 있어서, 제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 따른 의약 제제를 사용하는 약제의 제조방법.
환자의 혈소판 응고를 억제하는 약제의 제조방법에 있어서, 제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 따른 의약 제제를 사용하는 약제의 제조방법.