CN102670436B - 含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种管花肉苁蓉提取物的制备方法及美白抗衰老化妆品，所述管花肉苁蓉提取物的制备方法包括粉碎、粗提取、将粗提取物进行离心收集、并经过静置后洗脱、烘干，得管花肉苁蓉提取物。该制备方法简单并无污染，所述提取物的松果菊苷的含量≥25%，毛蕊花糖苷的含量≥55%，总苷含量≥80%；将此方法制得的管花肉苁蓉提取物经过抗氧化性活性等的测试后，证明管花肉苁蓉提取物具有抗氧化，美白、抗衰老的作用。将其添加到化妆品制得美白抗衰老化妆品，并对化妆品进行细胞毒性及安全性等测试，验证了化妆品的安全无刺激、且具有很好的美白效果。

Description

含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种作为化妆品原料的管花肉苁蓉提取物的制备方法，属于天然植物深加工技术领域。

背景技术

肉苁蓉是一种天然保健品，中外科学家利用现代医学科技实验证明：肉苁蓉中含有如苯乙醇苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷及其他生命活性物质；日本科学家从肉苁蓉中发现“养命因子”并研制出“救命酒”。最新研究成果证明：肉苁蓉具有抗衰老、防止和治疗中老年“痴呆症”等显著疗效。

如中国专利200510126563.6揭示了肉苁蓉具有防止皮肤暗沉的作用，近年来由于不合理地大量采挖其资源遭受严重破坏，正品肉苁蓉药源十分紧缺。管花肉苁蓉种植对生态环境、湿度、水质和土壤要求不高，易于引种且产量高，有很大开发前景，且管花肉苁蓉活性成分及功效作用均与肉苁蓉相似。

迄今为止，国内有关管花肉苁蓉的报道，主要集中在种植产量，保健食品和医药应用上，也曾有报道管花肉苁蓉提取物中的苯乙醇苷类成分对酪氨酸酶具有抑制作用，中国专利200610117216.1中也揭示了管花肉苁蓉中含有具美白功效的提取物，但是未进行功效验证，也未揭示出简单有效的提取方法。

发明内容

本发明的目的在于解决上述的技术问题，提供一种简单、高效、绿色环保的管花肉苁蓉提取物制备方法，并将制备出管花肉苁蓉提取物应用于美白抗衰老化妆品中。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品，包含基质和活性物，所述活性物是管花肉苁蓉提取物，该提取物当中，总苷含量≥80Wt%，其中，松果菊苷的含量≥25Wt %，毛蕊花糖苷的含量≥Wt55%。

优选地，所述基质是动植物油、矿物油、蜡、高级醇、脂肪醇、硅油、表面活性剂、磷脂、醇类、多元醇类、水溶性聚合物、油溶性聚合物类、矿物质或去离子水，所述化妆品的剂型为水剂、霜剂、油剂、洗液或乳状液。

所述的含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品的制备方法，按以下步骤制得管花肉苁蓉提取物，作为化妆品的活性物，然后根据化妆品的剂型选取相应的基质，复配后即得所述美白抗衰老化妆品，

步骤一、粉碎：将干燥的管花肉苁蓉粉碎至100目；

步骤二、粗提取：在步骤一的管花肉苁蓉粉碎料中加入30%～70%乙醇水溶液煮沸，粉碎料与乙醇液质量体积比为1:5～1:20（g/ml），在50℃～90℃温度下提取4～6小时，重复提取三次；

步骤三、离心收集：将步骤二的粗提取物在离心机中以转速为3000rpm离心30min，收集上清，减压浓缩至步骤二中提取液体积的1/2至1/4；

步骤四、静置待洗脱：在步骤三所得的浓缩液中加入无水乙醇，再调节至乙醇浓度为85%～95%，4℃静止24～48小时；

步骤五、洗脱并收集：将步骤四所得浓缩液在离心机中以转速5000rpm离心30min，收集上清，浓缩至步骤四中得到的浓缩液体积的1/10-1/20，经D101树脂分离，用30%～70%乙醇洗脱，并收集30%～70%乙醇洗脱部分，烘干，得管花肉苁蓉提取物。

本发明的有益效果主要体现在：

1、本发明在制备管花肉苁蓉提取物的过程中，只经过离心、静置和D101树脂分离纯化几个过程，整个提取工艺简便易操作，降低了生产成本；但是，提取物中活性成分的含量依然达到较高水平，高于或相当于曾经报道过的其它提取方法的提取率，证明本发明披露的提取工艺具有简便高效的特点。

2、本发明在提取过程中，只用到水和乙醇两种溶剂，通过低温静止的方式去除提取物中的极性油脂，未引入其它萃取用有机溶剂，是一种绿色环保的制备工艺。

附图说明

图1：HPLC测定管花肉苁蓉提取物中毛蕊花糖苷的含量图谱。

图2：HPLC测定管花肉苁蓉提取物中松果菊苷的含量图谱。

图3：HPLC测定管花肉苁蓉提取物中的含量图谱。

图4：管花肉苁蓉提取物抑制酪氨酸酶活性示意图。

图5：管花肉苁蓉提取物抗氧化活性示意图。

图6：管花肉苁蓉提取物的不同PH值对其颜色变化关系示意图。

图7：管花肉苁蓉提取物在不同PH值下抗氧化活性变化示意图。

图8：管花肉苁蓉提取物的抗氧化活性稳定性对温度、光线的影响示意图。

图9：管花肉苁蓉提取物的抑制活性稳定性对温度、光线的影响示意图。

图10：管花肉苁蓉提取物的细胞毒性测试示意图。

图11：管花肉苁蓉提取物对B16细胞中含色素含量的抑制作用示意图。

图12：添加有管花肉苁蓉提取物的美白霜美白效果示意图。

图13：添加有管花肉苁蓉提取物的抗衰老晚霜对皮肤弹性改善效果示意图。

具体实施方式

以下结合优选的具体实施例对本发明作进一步说明。

管花肉苁蓉提取物的制备方法，所述提取物的松果菊苷的含量≥25%，毛蕊花糖苷的含量≥55%，总苷含量≥80%；所述管花肉苁蓉提取物的制备方法包括如下步骤：

步骤一、粉碎：将干燥的管花肉苁蓉粉碎至100目；

步骤二、粗提取：在步骤一的管花肉苁蓉粉碎料中加入50%乙醇水溶液煮沸，粉碎料与乙醇液质量体积比为1:5～1:20（g/ml），在70℃下提取4～6小时，重复提取三次；

步骤三、离心收集：将步骤二的粗提取物在离心机中以转速为3000rpm离心30min，收集上清，减压浓缩至步骤二中提取液体积的1/2至1/4；

步骤四、静置待洗脱：在步骤三所得的浓缩液中加入无水乙醇，再调节至乙醇浓度为90%，4℃静止24～48小时；

步骤五、洗脱并收集：将步骤四所得浓缩液在离心机中以转速5000rpm离心30min，收集上清，浓缩至步骤四中得到的浓缩液体积的1/10-1/20，经D101树脂分离，用50%乙醇洗脱，并收集50%乙醇洗脱部分，烘干，得管花肉苁蓉提取物。

一种美白抗衰老化妆品，该化妆品包含上述制备方法获得的管花肉苁蓉提取物，具有美白抗衰老功效。

具体按以下步骤制备美白抗衰老化妆品：

步骤一：考察管花肉苁蓉提取物的颜色稳定性和美白抗氧化活性稳定性。证明管花肉苁蓉提取物在酸性条件下PH<8.5，其颜色和美白抗氧化活性保持良好，经过光照（28天），温度考察（28天）后未发生明显变化，PH对此提取物的颜色和活性具有显著影响。

步骤二：经过B16黑色素细胞和Hacat角质形成细胞模型，证明此提取物具有良好的美白，抗氧化，抗紫外作用。

步骤三：经过动物刺激性，毒理性实验及人体斑贴实验证明管花肉苁蓉提取物安全，无刺激。

步骤四：将管花肉苁蓉提取物应用于各剂型的化妆品中，该化妆品的基质是动植物油、矿物油、蜡、高级醇、脂肪醇、硅油、表面活性剂、磷脂、醇类、多元醇类、水溶性聚合物、油溶性聚合物类、矿物质或去离子水，化妆品的剂型为水剂、霜剂、油剂、洗液或乳状液。

最后进行非创伤性人体功效评价，表明添加了管花肉苁蓉提取物的化妆品具有显著的美白和抗衰老作用。

以下具体检测下采用本发明的方法制得的管花肉苁蓉提取物的性能。

一、通过HPLC法检测松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量。

仪器：岛津LC-20AD高效液相，SPD-20A紫外检测器，VP-ODS反相C₁₈柱（4.6 mm×250mm，5μm；）

流动相：CH₃CN-MeOH-1％HAc(10：15：75)；

检测波长：334nm；

流速：0.7mL/min；

柱温：30℃。

实验步骤：

1、通过HPLC测定，制作毛蕊花糖苷和松果菊苷含量的标准曲线。

2、计算提取物中毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量，如图1、图2所示，分别是指HPLC测定管花肉苁蓉提取物中毛蕊花糖苷的含量及HPLC测定管花肉苁蓉提取物中松果菊苷的含量。

 结合图3，管花肉苁蓉提取物的HPLC图谱，管花肉苁蓉提取物中苯乙醇苷总含量≥80%，毛蕊花糖苷含量≥25%，松果菊苷含量≥55%。

二、管花肉苁蓉提取物抑制酪氨酸酶活性的测定。

抑制酪氨酸酶活性测定方法为现有技术，在此不再赘述，详见ZL 200910034310.4。测定结果见图4肉苁蓉提取物抑制酪氨酸酶活性。管花肉苁蓉提取物抑制酪氨酸酶的IC50=0.15mg/ml，管花肉苁蓉提取物抑制酪氨酸酶活性与熊果苷（IC50=0.16mg/ml）相当。

三、管花肉苁蓉提取物抗氧化活性的测定。

测定方法为现有技术，在此不再赘述，详见ZL 200910034310.4。测定结果见图5肉苁蓉50%醇冲部分DPPH活性，管花肉苁蓉提取物清除DPPH的IC50=0.012mg/ml，管花肉苁蓉提取物清除DPPH的活性与Vc乙基醚（IC50=0.017mg/ml）相当。

四、管花肉苁蓉提取物的颜色、抗氧化活性与PH的关系。

（一）管花肉苁蓉提取物的颜色与PH值变化关系：

测定方法如下：将0.1%的管花肉苁蓉提取物的乙醇水（50%）溶液分别用1M盐酸和1N氢氧化钠将PH调节为4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，10.0，10.5，11.0，观察其颜色变化情况。如图6所示，随PH上升颜色逐渐加深，基本分为三段：PH=4.0～5.5，颜色最浅；PH=6.0～9.0颜色加深，深浅程度基本一致；PH=9.0～11.0，颜色最深，深浅程度基本一致。

（二）管花肉苁蓉提取物的抗氧化活性与PH值变化关系：

测定不同PH值下的抗氧化活性，测定方法为现有技术，参见ZL 200910034310.4。结果如图7所示，PH上升，活性逐渐下降；PH≤5.5时活性上升；5.5≤PH≤8.5略有下降；PH≥8.5活性有大幅下降，所以管花肉苁蓉提取物的最适PH<6.0，活性稳定的PH=4.0～8.5，PH大于9.0时，活性会逐步降低。

图7为肉苁蓉提取物不同PH下的DPPH活性。

五、管花肉苁蓉提取物的颜色、抗氧化活性及抑制酪氨酸酶活性在光照、温度变化时的变化情况。

（一）管花肉苁蓉提取物对光照及温度变化时颜色变化情况：

将不同PH值的管花肉苁蓉提取物的乙醇水溶液（50%）分别在50℃、25℃、-15℃、太阳光下及避光处放置一个月，观察其颜色变化。结果如表1所示。

表1：光照及温度变化对管花肉苁蓉颜色影响对照表。

（二）管花肉苁蓉提取物的抗氧化活性在温度、光线变化下的稳定性变化，如图8所示。

图8是指肉苁蓉提取物不同考察条件下抗氧化活性的变化。

（三）管花肉苁蓉提取物的抑制酪氨酸酶活性在温度、光线变化下的稳定性变化，如图9所示，指经过六周考察条件下的样品抑制酪氨酸酶的活性与初始活性的比值。

六、管花肉苁蓉提取物的细胞毒性测试。

细胞毒性的测试方法为现有技术，参见ZL 200910034310.4，测定结果如图10所示，管花肉苁蓉提取物对B16的MTT。

七、管管花肉苁蓉提取物对B16细胞中含色素含量的抑制作用。

采用现有技术中的黑色素抑制率的测定方法测定，参见ZL 200910034310.4，测定结果如图11所示，管花肉苁蓉提取物黑色素抑制率。

八、管花肉苁蓉提取物在化妆品中对温度、光线变化时颜色变化。

将不同PH值的含有0.1%管花肉苁蓉提取物的化妆品在50℃、25℃、-15℃及太阳光下放置一个月，观察其颜色变化，结果如表2所示。

表2：温度、光线变化对管花肉苁蓉颜色变化对照表。

九、管花肉苁蓉提取物的安全性和刺激性测定。

通过动物实验和人体斑贴试验证明管花肉苁蓉提取物安全、无刺激性实验，动物实验委托上海医药工业研究院进行，人体斑贴试验由本公司专业人员进行。

十、添加有管花肉苁蓉提取物的化妆品的美白和抗衰老作用。

测定方法为现有技术，参见ZL 200910034310.4。分别测试含管花肉苁蓉提取物的美白霜的美白效果及含管花肉苁蓉提取物的抗衰老晚霜对皮肤弹性的改善效果，结果分别如图12、图13所示，图12指添加有管花肉苁蓉提取物的美白霜的美白效果，图13指含有管花肉苁蓉提取物的抗衰老晚霜对皮肤弹性的改善效果。

图12中△MC指皮肤黑色素减少量与0周时皮肤黑色素含量的比值，△L指皮肤亮白度L的增加量与0周时皮肤亮度L的比值，其中测试人数为80人，测试周期四周，以黑色素含量及皮肤亮度为测试指标。

图13中R2指无负压使皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸之比，越接近1，弹性越好。R5指在测试的第一过程中，皮肤恢复过程的弹性部分与加负压过程的弹性部分之比，越接近1弹性越好。测试人数为80人，测试周期四周，以皮肤弹性为测试指标。

通过以上理化性质检测，细胞模型评价，动物模型评价和非创性人体评价，证明管花肉苁蓉提取物是一种质量稳定，指标与成分明确。具有美白，抗氧化，抗衰老作用的植物性原料，安全无刺激，可以作为功能原料单独或复配其他功能原料使用在任何剂型的化妆品中。

本发明改进和简化管花肉苁蓉提取工艺，使提取更加简便易行，降低提取成本低，新改进的工艺对环境无污染，产物中也无有机溶剂残留；并利用细胞培养技术和非创性皮肤评价技术进行研究，验证了管花肉苁蓉提取物具有抗氧化，美白、抗衰老的作用。

当然，本发明尚有多种具体的实施方式，凡采用等同替换或者等效变换而形成的所有技术方案，均落在本发明要求保护的范围之内。

Claims (1)

1. 含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品的制备方法，所述抗衰老化妆品包含基质和活性物，所述活性物是管花肉苁蓉提取物，该提取物当中，总苷含量≥80Wt%，其中，松果菊苷的含量≥25Wt %，毛蕊花糖苷的含量≥55Wt%；

所述基质是动植物油、矿物油、蜡、表面活性剂、醇类、水溶性聚合物、油溶性聚合物类、矿物质或去离子水，所述化妆品的剂型为水剂、霜剂、油剂、洗液或乳状液；

其特征在于：按以下步骤制得管花肉苁蓉提取物，作为化妆品的活性物，然后根据化妆品的剂型选取相应的基质，复配后即得所述美白抗衰老化妆品，

步骤一、粉碎：将干燥的管花肉苁蓉粉碎至100目；

步骤二、粗提取：在步骤一的管花肉苁蓉粉碎料中加入50%乙醇水溶液煮沸，粉碎料与乙醇液质量体积比为1:5～1:20g/ml，在70℃温度下提取4～6小时，重复提取三次；

步骤三、离心收集：将步骤二的粗提取物在离心机中以转速为3000rpm离心30min，收集上清，减压浓缩至步骤二中提取液体积的1/2至1/4；

步骤四、静置待洗脱：在步骤三所得的浓缩液中加入无水乙醇，再调节至乙醇浓度为90%，4℃静止24～48小时；

步骤五、洗脱并收集：将步骤四所得浓缩液在离心机中以转速5000rpm离心30min，收集上清，浓缩至步骤四中得到的浓缩液体积的1/10～1/20，经D101树脂分离，用50%乙醇洗脱，并收集50%乙醇洗脱部分，烘干，得管花肉苁蓉提取物。

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