KR20190012329A - 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부진정 및 아토피 개선용 조성물에 관한 것으로서, 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리를 포함하는 혼합 추출물 및 그 외에 유효성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물에 관한 것으로서, 유효성분은 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 소듐하이알루로네이트 1.5 ~ 2.5 중량%, 부틸렌글라이콜 2.5 ~ 3.5 중량%, 글리세린 2.5 ~ 3.5 중량%, 스쿠알란 3.5~4.5 중량% 및 호호바오일 3.5~4.5 중량%로 포함될 수 있다.

Description

천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물{Composition for skin soothing and atopy improvement comprising natural plant complex components}

본 발명은 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물에 관한 것이다.

과학의 발달에 따른 산업화로 지구 환경의 급격한 변화가 초래되어 사람의 건강에 심각한 영향을 미쳐, 그 결과 각종 만성 및 난치성 질환이 급속히 증가하고 있다.

특히 전 세계적으로 아토피 피부염, 알레르기 비염, 천식 등과 같은 환경성 질환의 발생 빈도가 많이 증가하는 추세를 보이고 있다.

아토피 피부염은 만성적이고 반복적으로 발생하는 습진성 질환으로 염증과 소양감을 수반한다. 그 원인은 유전적, 환경적, 피부 장벽의 손상 및 면역체계의 이상 등 복잡한 요인에 의해 발생하는 것으로 생각하고 있지만 뚜렷한 진단 방법조차 없어 임상증상으로 진단을 하고 있는 실정이다.

명확한 병인은 아직 밝혀지지 않고 있으며 환자의 70~80%에서 아토피 질환의 가족력이 인정되어 유전적 요인이 중요한 것으로 여겨지며, 감염, 정신적 스트레스, 계절과 기후의 변화, 자극 및 알레르겐에 의해 악화된다. 하지만, 이것만으로는 설명이 되지 않는 부분들이 많아 최근에는 아토피 피부염에서 피부 장벽기능의 이상이 주요한 원인으로 대두 되고 있다.

피부 장벽이란 피부를 구성하는 구조 중 표피, 진피, 표피 부속기, 피하지방 등의 구조 중 표피의 가장 바깥쪽에 위치하는 각질층에 존재하며 각질세포와 지질로 이루어진다. 피부 장벽기능의 손상은 알레르겐이나 자극성 물질의 피부투과성을 높여서 피부염증을 악화시키는 여건을 만들게 되고 면역학적 기전에 의하여 발생한 피부의 염증 반응은 피부장벽의 손상을 유도할 수 있는 것으로 알려져있다.

아토피 피부염의 치료는 건조한 피부에 대해 적절한 수화(hydration)와 비누나 세제, 화학약품과 화학섬유 같은 자극원, 집먼지 진드기, 꽃가루, 우유, 달걀, 콩, 생선등의 알레르겐, 피부감염 같은 악화요인을 제거시키는 것이 목표가 되며, 특히 정서적 요인도 예후에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져있다.

현재 사용되고 있는 현대의학적인 치료법은 보습제나 국소 스테로이드제 사용, 악화요인의 분석 및 제거와 같은 기본적인 치료와 소양증 치료를 위한 항히스타민제, 피부 감염 조절을 위해 항생제나 항바이러스제를 사용하는 보조적인 치료 및 광선치료, 면역반응 조절제, 면역 억제제, 류코트리엔 길항제, 정신과적인 심리치료 같은 선택치료로 구분할 수 있다.

아토피 피부염을 한의학에서는 유선(乳癬), 태열(胎熱), 태선(胎癬), 내선(癬), 태렴창(胎斂瘡), 사만풍(四彎風) 등의 범주로, 문헌에 원인, 증상 및 치법이 기록되어 있고 현재까지 다양한 처방과 치료법으로 우수한 치료효과를 보이고 있다. 최근 아토피 피부염 환자의 증가로 다양한 보습제, 특히 개별 한약재나 한방 처방을 이용한 제품들이 판매되고 있으며 이러한 경향에 맞추어 국내외 화장품 업계에서도 아토피 피부염과 관련된 다양한 제품을 출시 또는 개발하고 있는데 손상된 피부를 개선하기 위한 제품 개발의 방향을 단순 효능 위주의 제품에서 한 단계 높은 기능과 다양한 효능을 갖추어 사용자들로 하여금 만족감과 신뢰성을 주는 제품 개발에 역점을 두고 있다. 또한, 한방화장품은 수입품과 경쟁할 수 있는 유일한 제품군으로서 자연주의를 지향하는 웰빙 열풍과 함께 큰 폭으로 성장하고 있다. 이는 한방화장품의 주요성분이 천연 약재로서 피부에 좀 더 안전하며, 좀 더 효능을 줄 수 있는 기대감에서 오는 것으로 보인다. 주름개선, 미백 소재의 개발에 천연 한방 소재를 이용하는 것 외에 아토피, 염증, 가려움 등의 피부질환을 개선 시킬 수 있는 소재 및 제품을 개발하는 데 있어 동의보감, 방약합편 등의 한방 약재로 구성된 다양한 처방 활용의 필요성이 증가하고 있다.

본 발명이 해결하고 자 하는 기술과제는 피부진정 및 아토피 개선할 수 있도록 녹색식물로부터 추출된 유효 성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리 중 어느하나 이상을 포함하는 혼합 추출물 및 그 외에 유효성분을 포함할 수 있다.

또한, 유효성분은 소듐하이알루로네이트, 부틸렌글라이콜, 글리세린, 스쿠알란 및 호호바오일을 추가적으로 포함할 수 있다.

또한, 혼합추출물의 함량비가 전체 유효성분 함량 대비 1~5중량 %인 유효성분을 포함할 수 있다.

또한, 유효성분은 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 소듐하이알루로네이트 1.5 ~ 2.5 중량%, 부틸렌글라이콜 2.5 ~ 3.5 중량%, 글리세린 2.5 ~ 3.5 중량%, 스쿠알란 3.5~4.5 중량% 및 호호바오일 3.5~4.5 중량%로 포함할 수 있다.

또한, 조성물은 로션제, 리니먼트제, 연고제, 유제, 현탁제 및 크림제로 구성된 군으로부터 선택되는 화장품 제형일 수 있다.

본 발명의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물은 병풀추출물을 포함하고 있어, 우수한 상승적인 피부재생 및 아토피 개선 효과를 가진다.

또한, 본 발명의 조성물은 천연물질로서 인체에 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 약제학적 및 화장품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

도 1은 실험예 1에서 비만세포 수 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 아토피 완화 효과를 나타내는 그래프,
도 2는 실험예 1에서 임상증상 스코어 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 아토피 완화 효과를 나타내는 그래프,
도 3은 실험예 2에서 COX-2의 억제율 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프,
도 4는 실험예 2에서 프로스타글란딘의 농도 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프,
도 5는 실험예 2에서 NO의 억제율 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프,
도 6은 실험예 3에서 피부 수분수치 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 보습 효과를 나타내는 그래프,
도 7은 실험예 4에서 세균 수 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 향균 효과를 나타내는 그래프,
도 8은 실험예 5에서 홍반의 Skin Score 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 자외선 차단 효과를 나타내는 그래프,
도 9는 실험예 6에서 과산화물 수치 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항산화 효과를 나타내는 그래프,
도 10은 실험예 7에서 Tyrosinase 수치 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 미백 효과를 나타내는 그래프,
도 11은 실험예 8에서 LDH 효소 활성도 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 주름 및 노화방지 효과를 나타내는 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피)%이다.

실시예 1: 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물의 제조

하기 표1에 기재된 성분의 조성으로 실시예 1과 비교예 1의 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물을 제조하였다.

본 발명에 따른 조성물은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리 중 어느 하나 이상을 포함하는 혼합 추출물을 포함할 수 있다.

병풀(Asiatic Pennywort)은, 쌍떡잎식물, 이판화군, 산형화목, 미나리과의 여러해살이 풀로서, 한국, 일본 및 중국에 주로 분포하며 다습한 지역에서 서식하는데, 인도에서는 약용으로 사용되고 있다.

캐모마일(Chamomile)은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과에 속하는 풀이다. 카모밀, 카모마일, 또는 카밀레 등의 이름으로 불리기도 한다. 원산지는 영국이나, 현재는 전 세계에서 찾아볼 수 있다. 또한, 캐모마일은 벼룩, 접촉 알레르기와 다양한 종류의 세균성, 진균성 감염에 의한 피부 염증에 차게 한 카모마일차를 사용하면 증상을 완화, 치료하는데에 도움이 되며, 항균제 역할을 하기도 한다.

녹차(문화어: 푸른차, 한자: 綠茶, 일본어: りょくちゃ)란 발효시키지 않은, 푸른 빛이 그대로 나도록 말린 찻잎(茶葉), 또는 찻잎을 우린 물을 말한다. 녹차에는 비타민A와 탄닌성분이 피부를 건강한 상태로 유지시키는 작용을 하고 비타민C성분이 레몬에 비해 5 ~ 8배가 많고 멜라닌 색소를 억제하며 피부를 하얗게 만들어 준다. 또한, 피부의 진정효과, 보습작용과 피부노화를 지연시키는 작용을 하며, 녹차에서 풍겨나오는 은은한 향기는 심신의 피로를 풀어준다. 녹차추출물이 각종 유해요인으로부터 피부를 보호하여 더욱 깨끗하고 건강한 피부로 가꾸어 주는 효능이 있다.

감초(甘草, Glycyrrhizae Radix)는 콩과(Leguminosae)에 속하는 다년생 초본식물로 시베리아, 몽고 및 중국의 내몽고(內蒙古), 감숙(甘肅) 등 북부 지방에서 자라며, 주성분은 트리테르펜 사포닌(triterpene saponins), 글리시렉틱 산(glycyrrhetic acid), 플라보노이드(flavonoids), 이소플라보노이드(isoflavonoids), 쿠메스탄 유도체(cumestan derivatives), 하이드록시코마린(hydroxycoumarins), 스테로이드(steroids), 발라틸 오일(volatile oil) 등으로, 해독작용, 간염, 두드러기, 피부염, 습진, 진해·거담, 근육이완, 이뇨작용, 항염작용 등이 있다고 알려져 있다. 감초는 콩과(Leguminosae)에 속하는 감초(Glycyrrhiza uralensis) 및 동속식물의 근경으로서, 그 성분으로는 글리시리진(glycyrrhizin), 리퀴리티게닌(liquiritigenin), 이소리퀴리티게닌 (isoliquiritigenin), 네오이소리퀴리티게닌(neoisoliquiritigenein), 등을 함유하고, 해독작용, 진해거담작용, 항알레르기작용, 위액분비억제작용 등의 효능이 알려져 있다.

호장은 다년초인 호장, 왕호장 및 둥근잎호장 등 마디풀과에 속하는 호장의 뿌리 및 근경을 말린 것으로, 호장근은 옛날부터 민간에서 이뇨, 통경제, 진정제로 사용되어 왔으며, 완하, 이뇨, 통경, 화농성 피부염, 뇨도염, 방광염, 고혈압, 암 동맥경화 등의 여러 질병을 치료하기 위하여 우리나라를 비롯하여 동양권의 전통의학에서 이용되어 왔다.

황금(Scutellariae baicalensis Labitae)은 속썩은 풀의 주피를 벗긴 뿌리를 일컬으며, 부장, 공장, 골무꽃이라 도고 불린다. 꿀풀과에 속하며, 동아시아 대륙 또는 중국 북부지방이 원산지로 우리나라 각지에서 자생한다. 약용식물로 들여와 각처의 약초농가에서 재배하는 귀화식물이며 흔히 밭에서 재배한다. 뿌리에 바이칼린, 워고닌, 스쿨캅플라본 등이 함유되어 있고, 잎에는 워고노시드, 카르타미딘, 이소카르카미딘이 있다. 한방에서는 뿌리를 가을에 채취하여 햇볕에 말려 이뇨, 소염성 해열, 충혈성 염증에 쓰고, 혈압으로 인한 동맥경화 개선에 사용하기도 한다. 또한, 농혈, 복통, 악창, 치질, 황달, 구토, 지사제 등의 약재로 사용하기도 하고 목욕탕의 향료로도 쓴다.

라벤더(Lavender)는 학명 (Botanical Name)은 Lavandula officinalis로 향은 허브와 발삼 향취이며, 색은 무색에서 약간 노란 색의 액체를 띠며 라벤더 꽃을 증기 증류법으로 하여 추출하여 얻는다. 주요 구성 성분으로는 d-bprneol, cineol, carophyllene, coumarin, geraniol, ester, l-pinene, linalyl, butyric acid, valerianic acid 등을 함유하며, 피지 분비 조절로 여드름, 지성 피부에 효과적이며, 일광화상 완화에 도움을 주고, 피부 진정 및 재생 효과가 우수한 특징이 있다. 라벤더 성분은 본 발명의 화장료 조성물의 성분 중에서 0.1 내지 5중량 %를 함유하며, 0.1 중량% 미만은 여드름 완화 효과가 미비하며, 5중량 % 이상은 함유량이 높아 향이 너무 강하여 피부 적용시 거부감을 줄 수 있다.

로즈마리 잎 추출물(Rosmarinus Officinalis Leaf Extract)은 플라보노이드(Flavonoids), 페놀(Phenols), 에센셜오일(Essential oils), 테르펜(Terpenes) 등의 성분을 함유하고 있으며, 진정 효과 및 항균 효과가 있다. 나아가, 자외선에 의하여 생성되는 자유 라디칼(Free radical)이나 라디칼 스트레스(Radical stress)로부터 피부를 보호할 수 있다.

한편, 상기 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리를 포함하는 추출물은, 공지의 다양한 추출법에 의해 제조될 수 있으며, 본 실시예에서는 초음파 추출법에 의해 제조되는 예를 설명한다.

일반적으로 초음파란 인간의 가청주파수 범위보다 더 높은 주파수를 가지며, 초음파 추출법은 일반적인 용매추출에 비해 매우 짧은 시간에 추출을 완료할 수 있으며, 초임계 추출에 비해 대략 10배 이상 추출시간이 단축되는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

상기 병출 추출물을 추출하는 방법은 다음과 같이 설명할 수 있다.

즉, 35 ~ 45kHz 파장의 초음파, 특히 40kHz 파장의 초음파를 이용하며, 출력은 대략 300 내지 500 Watt의 조건의 초음파로 상기 병풀 추출물을 추출한다. 상기 병풀 원재료 2중량부와 추출용매(정제수 68중량부와 1,3-부틸렌글라이콜 30중량부)를 공지의 초음파 추출기에 넣고 초음파를 작동시켜서 40 내지 50℃의 온도에서 약 2 시간 동안 추출과정을 수행하여 1차 추출물을 얻는다. 상기 부틸렌글라이콜은 입자가 큰 유기체 알코올로서 수분을 당기는 효과를 가지므로 피부의 수분을 유지하는 보습효과를 나타내며 피부 자극도가 없는 안전한 용매에 해당한다.

보다 상세하게는 대략 40℃에서 300 Watt의 출력으로 1시간 동안 초음파를 가한 후에, 50℃의 온도에서 500 Watt의 출력으로 1시간 동안 초음파를 가하여 수득되는 1차 병풀 추출물을 실온까지 냉각시켜서 상기 병풀 원재료를 제거한다. 그리고 상기 1차 추출물을 0.4~0.8㎛의 여과지로 여과하여 액상의 상기 병풀 추출물을 얻었다.

상기 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리 추출물도 상기 병풀 추출물의 제조과정과 동일한 방식으로 동일한 양의 원재료를 사용하여 초음파 추출법으로 얻을 수 있다.

본 발명은 피부 개선에 유용한 다양한 종류의 생약 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 민감성, 자극성 또는 반응성 피부를 안정화시키고 가려움, 열감과 염증을 완화하여 아토피성 피부 등 민감성 피부를 효과적으로 개선하고, 피부에 대한 자극을 완화 또는 방지하는 화장품 조성물로서 아래 [표 1]의 실시예로 제조되었다.

원료명	실시예1 (중량%)	비교예1 (중량%)
천연 식물성 복합성분	1	0
베타인	1	1
소듐하이알루로네이트	2	2
부틸렌글라이콜	3	3
글리세린	3	3
세테아릴알코올	0.5	0.5
스테아릭애씨드	1	1
폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트	1.6	1.6
스쿠알란	4	4
호호바오일	4	4
글리세린스테아레이트	0.8	0.8
디메치콘	0.5	0.5
폴리아크릴레이트-13 & 폴리이소부텐 & 폴리소르베이트20	0.7	0.7
향	미량	미량
보존제	미량	미량
정제수	잔량	잔량

실험예 1: 아토피 완화 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 아토피 완화 효과를 나타내는지 시험하였다. 그리고 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1를 비교 데이터로 이용하였다.

도 1은 실험예 1에서 비만세포 수 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 아토피 완화 효과를 나타내는 그래프, 도 2는 실험예 1에서 임상증상 스코어 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 아토피 완화 효과를 나타내는 그래프이다.

도 1 및 도 2를 참조하면, BG(1,3-butylene glycol)은 입자가 큰 유기체 알코올로 알코올 성분이 수분을 끌어당기는 기능을 이용하여 피부에 수분을 유지시키는 습윤성을 수치로 확인할 수 있다. 이에 BG(1,3-butylene glycol)를 대조군으로 비만세포(Mast cells)수의 측정을 통해 피부에 염증세포의 침윤을 관찰하여 아토피 완화 효과를 확인할 수 있다. 아토피 완화 효과 분석결과는 도 1 및 도 2에 나타내었다.

효과는 천연 식물성 복합 성분의 저 농도와 고 농도 처리시 BG(1,3-butylene glycol)비만세포 수의 증감을 관찰함으로써 아토피 완화 효과를 판단하였다. 또한, 42일 동안 피부염을 유발시킨 실험쥐에 천연 식물성 복합성분의 첨가 유무에 따른 육안으로 3일 주기로 관찰함으로써 아토피 완화 효과를 판단하였다.

또한, 42일 동안 피부염을 유발시킨 실험쥐에 천연 식물성 복합성분의 첨가 유무에 따른 육안으로 3일 주기로 관찰함으로써 아토피 완화 효과를 판단하였다.

도 1에서 확인할 수 있듯이, 저 농도의 천연 식물성 복합 성분은 고 농도의 BG(1,3-butylene glycol)에 비해 비만세포의 수를 줄여주는 결과가 관찰되었고, 이는 아토피 완화 효과가 나타남을 알 수 있다.

도 2에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 것에 비해 피부염이 완화되는 결과가 관찰되었고, 이는 아토피 완화 효과가 나타남을 알 수 있다.

실험예 2: 항 염증 효과

본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 알아보기 위하여 천연 식물성 복합성분의 농도에 따른 COX-2 억제율 및 NO 생성 억제율을 관찰하였다. 그리고 실험예 1에서 BG(1,3-butylene glycol)를 첨가하여 제조한 대조군을 비교 데이터로 이용하였다.

도 3은 실험예 2에서 COX-2의 억제율 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프, 도 4는 실험예 2에서 프로스타글란딘의 농도 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프, 도 5는 실험예 2에서 NO의 억제율 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타내는 그래프이다.

도 3 내지 도 5를 참조하면, 천연 식물성 복합성분의 농도에 따른 COX-2 억제율 측정방법은 샘플을 PBC로 씻어낸 후 lysis buffer(50mM HEPES pH 7.0, 250mM NaCl, 5mM EDTA, 0.1% nonicet P-40, 1mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 0.5mM dithiothreitol, 5mM NaF, 0.5mM Na orthovanadate)로 단백질을 추출하고 추출한 단백질을 원심분리하고 상등액을 취하여 단백질 농도를 Bio-Rad protein assay reagent로 정량한 후 50㎍의 단백질을 취했다. 추출된 단백질은 8%의 SDS-Polyarylamide GEL에 영동시킨 후 NC membrane으로 GEL의 단백질을 영동 시켰다. 5% skim milk로 하룻밤 동안 Blocking한 후 1:500의 비율로 INOS와 COX-2 antibody를 3시간 동안 상온에서 Blotting시켰고, 그 후 TTBS로 2회 15분 간격으로 씻어낸다. 그리고 상온에서 Blotting 시켰다. 다시 TTBS로 3회 15분 간격으로 씻어낸 후 Chemiluminescence으로 발현시켜서 사진으로 노출한 후 Cytometry를 찍었다.

천연 식물성 복합성분의 농도에 따른 NO 생성 억제율 측정방법은 Macrophage로부터 생성된 Nitic oxide(NO)의 양은 세포배양액 중에 존재하는 NO2-의 형태로서 Griess 시약을 이용하여 측정하였다. 즉 세포배양 상등액 100㎖와 Griess 시약 [동량의 1% (w/v) sulfanilamide in 5%(v/v) phosphoric acid와 0.1%(w/v) naphtylethylenediamine-HCL] 100㎖를 혼합하여 96 multiwell plates에서 10분 동안 반응시킨 후, 550nm에서 흡광도를 측정하였다.

항염증 결과는 도 3 내지 도 5에 나타내었다.

효과는 천연 식물성 복합성분의 투입농도에 따른 COX-2의 억제율을 관찰함으로써 항염증 효과를 판단하였다. 또한, 240분 동안 30분 간격으로 프로스타글란딘 농도 변화를 관찰함으로써 항염증 효과를 판단하였다. 또한, 효과는 천연 식물성 복합성분의 투입농도에 따른 NO생성 억제율을 관찰함으로써 항염증 효과를 판단하였다.

도 3에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합성분의 투입농도를 높여감에 따라 COX-2의 억제율이 증가하는 결과가 관찰되었고, 이는 프로스타글란딘의 존재량이 감소함을 의미하므로 항염증 효과가 나타남을 알 수 있다.

도 4에서 확인할 수 있듯이, 시간의 변화에 따라 천연 식물성 복합성분이 첨가된 시료의 프로스타글란딘 농도가 상당히 줄어드는 결과가 관찰되었고, 이는 강한 항염증 효과가 나타남을 알 수 있다.

도 5에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합성분의 투입농도를 높여감에 따라 NO의 억제율이 증가하는 결과가 관찰되었고, 이는 염증 악화, 홍반, 가려움 등의 완화 및 항염증 효과가 나타남을 알 수 있다.

실험예 3: 보습 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 보습 효과를 나타내는지 시험하였다. 그리고 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1을 비교 데이터로 이용하였다.

도 6은 실험예 3에서 피부 수분수치 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 보습 효과를 나타내는 그래프이다.

도 6을 참조하면, 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1을 대조군으로 각질층 수분 부가실험을 통해 고주파 전도계를 이용한 피부전도도 수치의 변화를 관찰하여 수분흡수 및 수분보유 효과를 확인할 수 있다. 또한, 보습효과는 수분흡수능력 및 수분보유능력을 관찰하여 확인할 수 있다.

각질층 수분보유기능을 평가하는 방법으로 자주 사용되는 고주파 전도계를 이용한 각질층 수분 부가실험에서는 일정량의 물을 피부에 부가하여 닦아낸 후 피부전도도 수치의 경시변화를 측정하면 순간적으로 수분을 흡수하는 능력과 1, 2분 걸려서 서서히 방출하는 수분보유기능을 평가하여 보습효과를 판단할 수 있다.

보습효과 측정결과는 도 6에 나타내었다. 간략하게 효과는 천연 식물성 복합성분을 첨가했을 때 피부에 존재하는 수분의 수치가 증가함을 확인할 수 있고, 증가한 수분은 오랫동안 유지되고 있는 것을 관찰함으로써 보습 효과를 판단하였다. 또한, 12시간 동안 피부에 존재하는 천연 식물성 복합성분의 첨가 유무에 따른 고주파 전도계로 1시간, 3시간, 6시간, 12시간 시간경과에 따라 관찰함으로써 보습 효과를 판단하였다.

도 6에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 것에 비해 피부에 존재하는 수분흡수력 증가 및 12시간 동안 수분이 유지되는 결과가 관찰되었고, 이는 보습 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 4: 항균 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 세균 (B. subtillis)을 첨가하여 향균 효과를 나타내는지 시험하였다. 그리고 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1을 비교 데이터로 이용하였다.

도 7은 실험예 4에서 세균 수 비교를 통해 본 발명의 실시예 1에 따른 조성물의 향균 효과를 나타내는 그래프이다.

도 7을 참조하면, 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1에 세균 (B. subtillis)을 첨가한 것을 대조군으로 천연 식물성 복합 성분의 유무에 따른 세균의 수를 관찰하여 세균증식을 억제하는 항균 효과를 확인할 수 있다.

항균 분석결과는 도 7에 나타내었다. 간략하게 효과는 천연 식물성 복합 성분의 유무에 따른 세균의 수를 관찰함으로써 항균 효과를 판단하였다. 또한, 천연 식물성 복합성분의 첨가 유무에 따른 염증반응을 초래할 수 있는 세균(B. subtillis)의 증식이 억제되는 것을 관찰함으로써 항균 효과를 판단하였다.

도 7에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합 성분이 첨가된 것이 세균의 숫자를 감소시키는 결과가 관찰되었고, 이는 얼굴에서 염증반응 초래할 수 있는 세균들의 증식을 억제하는 항균 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 5: 자외선 차단 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 자외선 차단 효과를 나타내는지 시험하였다. 그리고 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1을 비교 데이터로 이용하였다.

Vaseline이 첨가된 비교예 1을 대조군으로 천연 식물성 복합 성분의 유무에 따른 skin score를 관찰하여 자외선을 차단하는 효과를 확인할 수 있다. Vaseline은 Skin Protection Complex 성분이 피부를 건조하게 만드는 외부 환경(바람, 건조한 날씨 등)적 요인으로부터 피부를 보호하여 피부의 촉촉함과 매끄러움을 오랫동안 유지시켜주는 비타민, 리피드, 프로틴 등이 포함되어 피부보습을 위해 사용되고 있다.

마우스 피부를 구획한 후 자외선을 조사한 후, 16~24시간 사이에 피부의 홍반 상태를 판정하였다. 홍반은 밝은 광원하에서 복수의 숙련된 사람이 육안으로 판정하였다. 전면에 홍반이 나타난 부위에 조산한 UVB의 광량 중 최소량을 최소홍반량으로 측정하여 관찰하였다. 광원의 선정은 일광 또는 인공광원을 사용하며 광원으로는 태양광과 유사한 연속적인 방사 스펙트럼을 갖고 특정 피크를 나타내지 않는 Xenon arc lamp를 장착한 Solar simulator 또는 이와 유사한 광원을 사용하여 측정하였다. 이때 290nm 이하의 파장은 적절한 Filler를 사용하여 제거하여 측정하여 관찰함으로써 자외선 차단 효과를 판단하였다.

자외선 차단 측정결과는 도 8에 나타내었다. 간략하게 효과는 육안으로 홍반 상태를 관찰함으로써 자외선 차단 효과를 판단하였다. 또한, 생쥐의 피부에 인위적으로 자외선을 조사한 후에 피부가 손상된 지표인 홍반의 Skin Score를 관찰함으로써 자외선 차단 효과를 판단하였다.

도 8에서 확인할 수 있듯이, Vaseline을 도포한 피부에 비해 천연 식물성 복합 성분이 첨가된 것이 자외선으로부터 피부를 보호해 주는 결과가 관찰되었고, 이는 자외선 차단 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 6: 항산화 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 항산화 효과를 나타내는지를 시험하였다. 그리고 천연 식물성 복합 성분을 첨가하지 않은 비교예 1을 비교 데이터로 이용하였다.

녹말이 첨가된 비교예 1을 대조군으로 천연 식물성 복합 성분의 유무에 따른 과산화물 수치를 관찰하여 항산화 효과를 확인할 수 있다. 항산화 작용은 우리 몸속에 있는 활성산소가 세포를 공격하여 노화를 촉진하는 현상을 막는 성분이고, 녹말이 보라색의 아이오딘 용액과 반응하여 청남색으로 변화되는 것을 육안으로 관찰하여 녹말이 분해된 것을 확인할 수 있다.

항산화 측정결과는 도 9에 나타내었다. 간략하게 효과는 과산화물 수치가 녹말을 첨가한 대조군보다 더 적은 과산화물 수치의 거동을 관찰함으로써 항산화 효과를 판단하였다.

도 9에서 확인할 수 있듯이, 녹말이 첨가된 대조군에 비해 천연 식물성 복합 성분이 첨가된 것이 자외선으로부터 과산화물 수치가 작은 것은 유지의 산화진행이 적게 되는 결과가 관찰되었고, 이는 항산화 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 7: 미백 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 미백 효과를 나타내는지 시험하였다.

Tyrosinase 활성은 3H-tyrosine이 효소반응에 의해 DOPA로 전환되면서 유리되는 3H2O의 방사능량을 측정함으로써 정량하였다. Tyrosinase는 이 효소를 함유한 Melan-a 세포의 추출물을 이용하였다. 배양액을 제거한 Melan-a 세포를 PBS로 세척한 뒤 Tyrosinase buffer(80 mM phosphate buffer, 1.0% Triton X-100)를 가하여 세포를 회수하였다. Sonicator를 이용하여 세포를 파쇄하고, Tyrosinase의 추출을 위하여 4℃에서 1시간 동안 정치하였다. 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 이용하여 단백질을 정량하였다. 각 반응액에 10ug의 세포추출액과 제니스테인, L-tyrosine은 2.3 uM,는 23 uM이 되도록 첨가하고, 5 uCi의 L-[3,5-3H]-tyrosine과 200 uL의 phosphate buffer(80 mM, pH 6.8)를 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 후 0.2% BSA 250 uL와 10% trichloroacetic acid(TCA) 500 uL를 가하여 반응을 정지시키고 원심분리하여 단백질을 침전시키고 상층액에 500 uL의 charcoal(1:1 in PBS)을 넣고 상온에서 1시간 흡착시킨 후 원심분리하여 침전물을 제거하고, 그 상층액을 취하여 liquid scintillation counter (Beckman LS5000, Ramsey, MN, USA)로 방사능량을 측정하였다. 이때, 3H2O의 방사능량이 적을수록 tyrosinase 활성 억제 효과가 큰 것을 확인하였다.

미백 효과 측정결과는 도 10 에 나타내었다. 간략하게 효과는 50분 동안 10분 간격으로 시간의 경과에 따른 멜라닌 합성 억제 정도를 관찰함으로써 미백 효과를 판단하였다.

도 10에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합 성분이 첨가된 Sample을 도포한 피부가 Tyrosinase 수치가 증가 되는 결과가 관찰되었고, 이는 미백 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 8: 주름 및 노화방지 효과

본 발명의 실시예 1의 천연 식물성 복합 성분은 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리의 혼합 추출물로 주름 및 노화방지 효과를 나타내는지 시험하였다.

DTT는 Protein의 3차 구조의 결합을 끊어주는 역할을 하며 강한 산화제로 이용함으로써 효소의 활성 거동을 확인할 수 있다. 또한, LDH 효소 활성도 비교 예시로 DTT를 첨가하여 관찰하였다.

LDH 효소 활성도는 1.5mM 피루브산과 0.14mM NADH를 함유하는 0.1M potassium phosphate buffer (pHY 6.85)에 시료를 가한 후 NADH로부터 NAD+로 산화되는 정도를 spectrophotometer(Shimadzu UV-160A)를 사용하여 25℃, 340nm에서 측정하였다. 활성의 단위는 1분 동안 감소되는 흡광도 1.0을 1 unit으로 하였다. LDH 효소 활성도 분석은 PAGE GEL을 Bioprofile image analysis system(Vilber Lourmat, France)으로 사진을 찍은 후 BIO-ID++소프트웨어를 이용하여 확인하였다.

주름 및 노화방지 측정결과는 도 11에 나타내었다. 간략하게 효과는 천연 식물성 복합 성분과 강한 산화제인 DTT가 포함되어 LDH 효소의 활성이 5배 이상 증가하여 사멸이 일어날 확률이 증가할 것으로 추정하였지만 LDH 효소의 활성 수치가 감소하는 것을 관찰함으로써 주름 및 노화 방지 효과를 판단하였다.

도 11에서 확인할 수 있듯이, 천연 식물성 복합 성분이 첨가된 sample의 LDH 효소 활성 수치가 감소되는 결과가 관찰되었고, 이는 주름 및 노화 방지 효과를 나타냄을 알 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (5)

1. 병풀, 캐모마일, 녹차, 감초, 호장, 황금, 라벤더 및 로즈마리 중 어느 하나 이상을 포함하는 혼합 추출물 및 그 외에 유효성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 식물성 복합성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 유효성분은 소듐하이알루로네이트, 부틸렌글라이콜, 글리세린, 스쿠알란 및 호호바오일을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 혼합추출물의 함량비가 전체 유효성분 함량 대비 1~5중량%인 유효성분을 포함하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 유효성분은 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 소듐하이알루로네이트 1.5 ~ 2.5 중량%, 부틸렌글라이콜 2.5 ~ 3.5 중량%, 글리세린 2.5 ~ 3.5 중량%, 스쿠알란 3.5~4.5 중량% 및 호호바오일 3.5~4.5 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부진정 및 아토피 개선용 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 로션제, 리니먼트제, 연고제, 유제, 현탁제 및 크림제로 구성된 군으로부터 선택되는 화장품 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.

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