CN102552420A - 一种抗衰老中草药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

一种中草药提取物，其特征在于，是10～50重量份雪莲花，10～50重量份肉苁蓉及20～60重量份黄芪的水和/或溶剂的提取物，所述溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合。该提取物及包含该提取物的中草药组合物，可直接用于预防皮肤衰老尤其光老化，也可以作为功效添加剂加入到化妆品中使用。本发明的中草药提取物及中草药组合物具有抗衰老作用，尤其抗光老化作用，帮助皮肤抗氧化、促进真皮成纤维细胞增殖尤其能够帮助皮肤抵御UVB和UVA的紫外线照射，保护皮肤，减少损伤，预防皮肤光老化，而且对皮肤无刺激。

Description

一种抗衰老中草药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，特别是涉及中草药提取物及其制备和应用，以及包含该中草药提取物的具有抗衰老尤其抗光老化作用的中草药组合物及其制备和在化妆品中的应用。
背景技术
研究表明，皮肤光老化主要由日光中的中波紫外线(UVB，290～320nm)和长波紫外线(UVA，320～400nm)共同引起。紫外线对人皮肤的老化有明显促进作用，高暴露人群皮肤老化危险性比低暴露人群高一倍，老化发生时间提前10年。长期暴露于日光紫外线引起皮肤光老化，并可导致严重的美容问题，因而近年来倍受行业关注，抗光老化的产品纷纷问世，相关研究如火如荼。随着天然、安全与环保要求的提出，绿色化妆品越来越为人们所青睐。但目前国内外市场抗光老化化妆品多以生化制剂、合成化合物为主要功效支持添加剂，具有一定中医药理论指导的中草药抗光老化添加剂仍是空缺。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种中草药提取物。
本发明的中草药提取物，是10～50重量份雪莲花，10～50重量份肉苁蓉和20～60重量份黄芪的水或溶剂提取物，其中，所述溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合。
上述配方中，雪莲花、肉苁蓉、黄芪都有明确抗衰老功效。
在本发明中，雪莲花是指植物雪莲的花这个药用部位。雪莲是菊科凤毛菊属雪莲亚属的草本植物，主要包括大苞雪莲花Saussureainvolucrata Kar.et Kir.、绵头雪莲花Saussurea laniceps Hand.-Mazz.、鼠曲雪莲花S.gnaphaloides(Royle)Sch.-Bip.、水母雪莲花S.medusa Maxim.等的带花全株。雪莲花主产于四川、云南、西藏、新疆、甘肃、青海等地，6～7月间，待花开时拔取全株，除去泥土，晾干，切段，生用。
雪莲花清热养血，平衡阴阳，补益，一千多年前的《道藏》将雪莲花称为“千年仙草”，《忆旧游诗话》：“雪莲花，千年不化元雪深处有之，形似莲花，高可丈许。取以酿酒，倍增春色。盖阴极而阳生之意耳。”《纲目拾遗》：″雪荷花，产伊犁西北及金川等处大寒之地，积雪春夏不散，雪中有草，类荷花，独茎，亭亭雪间可爱。″。
肉苁蓉是指植物肉苁蓉或管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎这个药用部位。肉苁蓉是列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。多于春季苗未出土或刚出时采挖，除去花序，切段，晒干。肉苁蓉主要分布于内蒙、甘肃、新疆、青海等地。
苁蓉始载于《神农本草经》，据记述：苁蓉味甘、成、性温，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，主治阳痿、不孕、血崩、腰膝酸软冷痛、筋骨无力等症。苁蓉历代被作为西域各国贡奉朝庭的御用珍品，因而又名肉苁蓉。肉苁蓉补肾益血润颜色，可调整内分泌，促进代谢及机体强壮，并有抗氧化的作用。《药性论》：“益髓、悦颜色，延年，大补益”“补精败，面黑劳伤”。
黄芪，又名黄耆，为植物和中药材的统称。黄芪是指植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根这个药用部位。黄芪是豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。春、秋二季采挖，除去须根及根头，晒干。黄芪产于我国华北、东北、内蒙古和西北，主产于山西、黑龙江、辽宁、河北等省，四川，前苏联、朝鲜和蒙古也有分布。膜荚黄芪主要分布于我国东北、华北、甘肃、四川、西藏等省区；蒙古黄芪主产内蒙古、山西及黑龙江；现广为栽培。
中药材黄芪具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。黄芪补益驻颜泽面，可以增强机体抵抗力，抗氧化，延缓衰老。
本方黄芪平衡滋补气血，增强肌肤免疫为君药；肉苁蓉强化补精益髓，雪莲花养血、对抗光辐射与氧化，用为臣药；结合古代美容文献研究，增减配伍，选择黄芪、肉苁蓉、雪莲花之合理配比，采用药用植物之根、茎、花，共同抵御肌肤衰老。功效全面，其组合物较单一中药更适用于在化妆品中体现中药的协同功效。
优选地，本发明的中草药提取物，是30重量份雪莲花，20重量份肉苁蓉，50重量份黄芪的水或溶剂提取物，所述溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合。
优选地，所述提取选自煎煮、回流、浸渍、渗漉或其组合。
上述提取物的形式可以是选自溶液剂、粉剂、软膏剂、膜剂或膏霜。
本发明还提供一种具有抗光老化作用的中草药组合物，该组合物包含上述提取物。
本发明的中草药提取物及中草药组合物，可直接用于预防皮肤衰老尤其光老化，也可以作为功效添加剂加入到化妆品中使用。本发明的中草药提取物及中草药组合物具有抗衰老作用，尤其抗光老化作用，帮助皮肤抗氧化、促进真皮成纤维细胞增殖尤其能够帮助皮肤抵御UVB和UVA的紫外线照射，保护皮肤，减少损伤，预防皮肤光老化，而且对皮肤无刺激。所述化妆品可以是美容护肤霜、眼霜、面膜、洗面奶、柔肤水或精华素。
本发明还提供上述中草药提取物的制备方法，该方法包括：
将10～50重量份雪莲花，10～50重量份肉苁蓉和20～60重量份黄芪充分混合，用水和/或溶剂浸泡0.5～1小时并提取，所述溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合；
过滤，并重复提取滤渣，合并滤液；
将滤液浓缩至药材总重量的2倍量左右(V/W)，倍量是指溶剂体积与药材总重量的比值，其中溶剂体积的单位是ml，药材总重量的单位是g；
再进行醇沉；
醇沉上清液回收溶剂。
醇沉物可配制成各种剂型，如溶液剂、粉剂、软膏剂、膜剂或膏霜。
优选地，所述醇沉采用选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇或其组合的醇。
本发明的提取液可加水制成含生药量50～1000mg/ml的组合物。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行较为详细的说明。
实施例1
取纯正中药材雪莲花10g、黄芪60g、肉苁蓉30g总计100g，充分混合，加10倍量(倍量：指溶剂体积与药材总重量的比值，其中溶剂体积的单位是ml，药材总重量的单位是g，下同)75％乙醇(v/v)冷浸48小时，滤过，滤液回收乙醇，所得提取物用水溶解，制成含生药量为500mg/ml的溶液，得到提取液A。
实施例2
取纯正中药材雪莲花30g、黄芪30g、肉苁蓉40g总计100g，充分混合，加10倍量甲醇回流提取2小时，滤过，滤液回收甲醇，所得提取物用水溶解，制成含生药量为50mg/ml的溶液，得到提取液B。
实施例3
取纯正中药材雪莲花40g、黄芪50g、肉苁蓉10g总计100g，充分混合，用10倍量水煎煮提取约2小时，浓缩，滤过，上清液加水制成含生药量为1000mg/ml的溶液，得到提取液C。
实施例4
取纯正中药材雪莲花30g、黄芪40g、肉苁蓉30g总计100g，充分混合，用10倍量水煎煮提取约2小时，浓缩，加2倍量乙醇沉淀，滤过，滤液回收乙醇，所得提取物用水溶解滤过，制成含生药量为500mg/ml的溶液，得到提取液D。
实验例1DPPH实验
自由基是一类性质活泼、具有极强氧化能力的化学物质。紫外线UVA/UVB的照射会产生大量自由基，对机体造成损伤，加速衰老。在此采用DPPH自由基清除法测定实施例中提取物的体外抗氧化活性。
用蒸馏水将实施例中的提取物分别稀释到1％和0.5％(v/v)两个浓度。然后取实施例提取物2ml、浓度为500μmol/L的DPPH乙醇溶液0.5ml和1.5ml水，先后加入同一试管中，摇匀，静置，30min后在517nm处测定其吸光度(OD)，并以相应的混合液作为空白对照。实施例提取物对DPPH的清除率根据以下公式计算：
其中：
T-DPPH+实施例提取物的吸光度，
T0-实施例提取物+溶剂的吸光度，
C-DPPH+溶剂的吸光度。
本发明的抗衰老中草药组合物抗氧化能力评估结果如表1所示。
表1
  浓度   自由基清除率   浓度   自由基清除率
  实施例1提取物A   1％   35.04％   0.5％   15.25％
  实施例2提取物B   1％   19.92％   0.5％   8.9％
  实施例3提取物C   1％   42.89％   0.5％   19.64％
  实施例4提取物D   1％   54.54％   0.5％   20.31％
实验结果表明，实施例1提取物A、实施例2提取物B、实施例3提取物C、实施例4提取物D在体外1％和0.5％浓度均有较好清除自由基的抗氧化能力，其中0.5％的自由基清除率均在15％以上，1％浓度的自由基清除率均在35％以上，以实施例4提取物D效果最好。
实验例2成纤维细胞增殖试验
皮肤中的成纤维细胞是合成胶原蛋白的主要细胞，成纤维细胞的大量增殖或成纤维细胞合成和分泌胶原蛋白能力的增强，都可以使胶原蛋白总量增加，从而减缓皮肤的衰老。因此，研究促成纤维细胞的增殖作用是评价样品抗衰老活性的重要方法之一。本试验根据以上皮肤衰老的机理，采用体外培养人成纤维细胞的方法，来初步评价本发明中的中药组合物的抗衰老功效。
将制备好的细胞悬液(配制成浓度为5*103个/ml)接种于96孔板内，待细胞贴壁后，除空白对照组，其他每孔加入20ul相应浓度的实施例的中草药提取物，设4个浓度组，每组6个孔，置孵箱(37℃，5％CO2)中培养24h，然后加人MTT液20ul，继续在孵箱(37℃，5％CO2)中培养4h。取出酶标板后，小心吸去每孔内的培养液，加入DMSO，混合均匀。用酶联免疫检测仪测定光密度(570nm)，通过与对照组的比较得到样品组的相对增殖率.
抗衰老中草药组合物对成纤维细胞的增殖活性结果如表2所示。
表2
Figure BSA00000409424000061
实验结果表明，实施例1提取物A、实施例2提取物B、实施例3提取物C、实施例4提取物D均可以促进成纤维细胞的增殖，以实施例3提取物C的效果最好，其0.001％浓度促成纤维细胞增殖达10.4％。
实验例3UV照射对成纤维细胞损伤的保护作用
皮肤光老化主要由日光中的中波紫外线(UVB，290～320nm)和长波紫外线(UVA，320～400nm)共同引起，紫外线对人皮肤的老化有明显促进作用。UVA/UVB照射会引起成纤维细胞的损伤死亡，对皮肤造成伤害，导致光老化。在此通过UV照射实验来考察实施例的中草药提取物对UV照射的细胞保护的抵御光老化作用。
分别取实施例中提取物0.5ml，加4.5ml PBS进行稀释，配成1/10浓度(v/v)进行抽滤，然后取0.1ml加9.9ml无菌PBS最后稀释成1/1000的浓度(v/v)。以正常DMEM液培养的皮肤成纤维细胞(Fb)为对照组，以正常DMEM液培养后用UVA(5-20J/cm2)/UVB UVB(20-80J/cm2)照射的Fb细胞为模型组，以实施例提取物(0.15mg/ml)和DMEM液共培养并经UVA/UVB照射的Fb细胞为加药组。紫外线处理后24h，通过CCK-8用酶标仪测定各孔的吸光度(OD值)，细胞增殖率为各处理组OD值占阴性对照组OD值的百分率，每个试验重复三次。
实验结果见表3和表4。
表3UVA照射
  细胞增殖率   P值
  实施例1提取物A   (86.96±4.68)％   ＜0.01
  实施例2提取物B   (79.80±3.80)％   ＜0.01
  实施例3提取物C   (89.25±4.00)％   ＜0.01
  实施例4提取物D   (95.8±9.9)％   ＜0.01
  对照组   (100±7.6)％
  模型组   (73.4±2.3)％   ＜0.01
表4UVB照射
  细胞增殖率   P值
  实施例1提取物A   (88.27±3.51)％   ＜0.01
  实施例2提取物B   (82.58±4.20)％   ＜0.01
  实施例3提取物C   (90.86±2.85)％   ＜0.01
  实施例4提取物D   (94.1±6.8)％   ＜0.01
  对照组   (100±5.4)％
  模型组   (76.9±3.5)％   ＜0.01
实验结果表明，实施例1提取物A、实施例2提取物B、实施例3提取物C、实施例4提取物D均可以减少UV照射对成纤维细胞的损伤，使细胞增值率基本均恢复至80％以上，并以实施例4提取物D的效果最好。

Claims (13)

1.一种中草药提取物，其特征在于，是10～50重量份雪莲花，10～50重量份肉苁蓉及20～60重量份黄芪的水或溶剂提取物，所述溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合。
2.如权利要求1所述的中草药提取物，其特征在于，所述的提取选自浸泡、煎煮、回流、渗漉或其组合。
3.如权利要求1或2所述的中草药提取物，其特征在于，所述中草药提取物形式选自溶液剂、粉剂、软膏剂、膜剂或膏霜。
4.一种具有抗衰老作用的中草药组合物，其特征在于，包含权利要求1～3任一所述的中草药提取物。
5.如权利要求4所述的中草药组合物在化妆品中的应用。
6.一种中草药提取物的制备方法，包括如下步骤：
将10～50重量份雪莲花，10～50重量份肉苁蓉及20～60重量份黄芪用水或溶剂提取，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯或其组合。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括：
过滤，并重复提取滤渣，合并滤液；
将滤液浓缩至药材总量的2倍量左右(V/W)，倍量是指溶剂体积与药材总重量的比值，其中溶剂体积的单位是ml，药材总重量的单位是g；
再进行醇沉；
醇沉上清液回收溶剂。
8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述的醇沉采用选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇或其组合的醇。
9.如权利要求6～8任一所述的方法制备的中草药提取物。
10.如权利要求9所述的中草药提取物，其特征在于，所述中草药提取物形式选自溶液剂、粉剂、软膏剂、膜剂或膏霜。
11.一种具有抗衰老作用的中草药组合物，其特征在于，包含权利要求9或10所述的中草药提取物。
12.如权利要求11所述的中草药提取物在化妆品中的应用。
13.如权利要求5或12所述的应用，其特征在于，所述化妆品是美容护肤霜、眼霜、面膜、洗面奶、柔肤水或精华素。
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