CN110664882B

CN110664882B - 含有去氢钩藤碱的组合物及其护肤应用

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Publication number: CN110664882B
Application number: CN201810738775.7A
Authority: CN
Inventors: 叶希韵; 周艳卿; 尹尉翰; 刘明耀
Original assignee: East China Normal University
Current assignee: East China Normal University
Priority date: 2018-07-02
Filing date: 2018-07-02
Publication date: 2021-12-07
Anticipated expiration: 2038-07-02
Also published as: CN110664882A

Abstract

本发明公开了天然植物单体去氢钩藤碱以及该单体同松果菊苷和穿心莲内酯的组合物在用于制备美白化妆品中的应用，属于中药及化妆品领域。去氢钩藤碱或者其同穿心莲内酯、松果菊苷的组合物作为美白活性成分，能共同抑制皮肤细胞黑色素的生成及减少紫外线(UV)对皮肤细胞的损伤，还具有提高皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，具有抗光老化的作用。三种单体去氢钩藤碱、穿心莲内酯、松果菊苷组合后具有明显的协同作用，功效显著提高，且安全稳定，具有淡化色斑，美白皮肤，提高人体皮肤弹性和水分，具有抗光老化的作用。本发明具有美白功效的植物单体可作为有效活性成分制成膏霜、乳液、精华、面膜、喷雾剂等多种剂型，用于化妆品中。

Description

含有去氢钩藤碱的组合物及其护肤应用

技术领域

本发明属于中药及化妆品领域，涉及一种具有美白功能的天然植物单体组合物，可应用于皮肤护理，尤其是皮肤美白、淡化色斑、防晒、抗光老化的化妆品。

背景技术

东方人自古以白为美，白色的肤色被看作是高贵和尊贵是象征，在一白遮百丑的传统观念下，白色肤色的时尚持续至今。现今环境污染加剧，人体皮肤接触的紫外线更多，现代城市生活节奏快，作息不规律，也容易导致生物钟紊乱，皮肤色素容易沉积，肤色显得暗淡。经济的发展同样还促使了消费者对产品的内在质量有更高要求，产品安全、有效是永恒的主题。据调查，随着经济的发展与观念的改善，越来越多的男性同样十分关注自身护肤问题，重视皮肤颜色的变化，人们对“肤如雪，凝如脂”的皮肤始终有着特别的执着，在中国护肤品市场上，美白类产品始终占据一席之地。

目前国内外的美白产品品种繁多，最常用的亮白成分主要是以抑制黑色素形成的限速酶酪氨酸酶为主，如曲酸、熊果苷、氢醌、抗坏血酸衍生物等，但这些美白成分仍存在一些不足之处。如曲酸、熊果苷易氧化、变色，曲酸在高浓度下会氧化，对甲状腺存在负面影响；熊果苷对黑色素的含量影响则具有双向性，使用不当时可能反而导致黑色素合成过多；氢醌作为一种汞化合物，对皮肤存在一定程度的刺激，严重时还可能导致中毒，因此在一些国家已被限制或禁止添加进化妆品中；抗坏血酸衍生物则存在性质不稳定的问题，且仅在高浓度下有效，在具体使用中容易受到配方的限制。

众所周知，中国传统中医药是一个巨大的宝藏库，现已有越来越多的中草药被应用到化妆品活性成分的开发中，从天然植物中提取的成分分子量小，化学性质稳定，对皮肤刺激弱。因此，从天然植物中寻找安全、有效的活性物质以抑制酪氨酸酶的活性和黑色素的产生，并将其应用于美白类化妆品的开发中，具有十分重要的意义及发展前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于皮肤美白的化妆品植物单体组合物，分子量小，高效安全，其有效成分来源于纯天然中草药，一方面，可根本上减少皮肤黑色素的形成、淡化色斑，美白皮肤；另一方面，可抑制吸收使皮肤变黑的紫外线UV，使皮肤免受紫外线照射导致的损伤而避免晒黑，从而产生更好的美白效果。

本发明提出了一种组合物，所述组合物中含有去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物。

其中，所述去氢钩藤碱占所述组合物的重量百分比为0.002％-0.5％；优选地，为0.05％。

其中，所述去氢钩藤碱的钩藤提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；优选地，为1％。

进一步地，本发明所述组合物还包括含有穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物。

其中，所述穿心莲内酯占组合物的重量百分比为0.001％-0.4％；优选地，为0.01％。

其中，所述穿心莲内酯的穿心莲提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；优选地，为1％。

其中，所述去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物、所述穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物的重量百分比为(1～9):(1～9)；优选地，为(3～5):(5～7)；进一步优选地，为4:6。

进一步地，本发明所述组合物还包括含有松果菊苷或松果菊苷的肉苁蓉提取物。

其中，所述松果菊苷占所述组合物的重量百分比为0.002％-0.5％；优选地，为0.05％。

其中，所述松果菊苷的肉苁蓉提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；优选地，为1％。

其中，所述组合物中，所述去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物、松果菊苷或松果菊苷的肉苁蓉提取物、穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物的重量百分比为(0.005～5)：(0.005～5)：(0.001～1)；优选地，为(0.01～0.1)：(0.01～0.1)：(0.005～0.02)。在一优选实施方式中，所述去氢钩藤碱占所述组合物的重量百分比为0.05％；所述松果菊苷占所述组合物的重量百分比为0.05％；所述穿心莲内酯占所述组合物的重量百分比为0.01％。

其中，所述去氢钩藤碱的提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；所述松果菊苷的肉苁蓉提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；所述穿心莲内酯的提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％。

进一步地，本发明所述组合物还包括化妆品基质，所述化妆品基质可以但不限于是由以下组分构成的基质混合物(重量百分比)：

6％鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯，5％甘油，4％油酸乙酯\硬脂酸乙酯\牛油果树果脂不皂化物\亚油酸乙酯，3％辛酸癸酸甘油三酯，3％甲基丙二醇，3％花生醇\山嵛醇\花生醇葡糖苷\水\葡萄糖，2.5％鲸蜡硬脂醇，2％聚二甲基硅氧烷，1％C14-22醇\C12-20烷基葡糖苷\水\葡萄糖，0.6％苯氧乙醇，0.5％聚丙烯酸酯交联聚合物-6\水\叔丁醇，0.2％乙基己基甘油，0.2％己二醇/辛甘醇，0.2％阿拉伯胶树胶\黄原胶，余量为水。或，

6％甘油，5％矿油，4％棕榈酸异丙酯，3.5％辛酸/癸酸甘油三酯，2％硬脂醇聚醚-2，2％硬脂醇聚醚-21，1.5％鲸蜡硬脂醇，1％聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨醇酯-20，0.8％甘油硬脂酸酯，0.2％尿囊素，0.2％羟苯甲酯，0.15％双(羟甲基)咪唑烷基脲，0.1％羟苯丙酯，0.05％EDTA二钠，其余为水。

本发明还提出了所述组合物在制备美白、祛斑、淡化色斑、抗皱、保湿、抗紫外、促进紫外损伤修复、提高皮肤弹性、提高皮肤水分或抗光老化的药物和/或化妆品中的应用。

本发明还提出了所述组合物用于抑制黑色素生成、防止皮肤黑色素沉积、减少皮肤细胞中黑色素的生成、降解已经沉积的黑色素、抗衰老、提高皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白的能力、防紫外或者抗光老化。

本发明首次提出了去氢钩藤碱在皮肤美白、淡化色斑方面(见图2、图6、图7)的作用，验证了穿心莲内酯的美白作用及松果菊苷在皮肤抗致黑性紫外线UV的作用；同时通过体内、外实验，首次验证了含有去氢钩藤碱、松果菊苷、穿心莲内酯三者的组合物在皮肤美白、淡斑等方面的协同作用。实验结果表明，同时含有去氢钩藤碱、松果菊苷、穿心莲内酯的组合物能通过抑制皮肤黑色素的形成以及抑制吸收致黑性紫外线UV等多条途径来达到协同美白皮肤的功效，且效果显著。

本发明的有益效果在于，本发明首次将去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯三者组合后用于化妆品，去氢钩藤碱和穿心莲内酯能抑制皮肤黑色素生成，松果菊苷能保护致黑性紫外线UV对皮肤造成的损伤，抵抗紫外线对皮肤造成的色素沉淀及老化，含有去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯三者的组合物在人体实验结果表明，能协同促进皮肤黑色素的减少，使皮肤白皙，且有增强防晒作用，能抵抗紫外线照射对皮肤细胞的损伤，还具有明显促胶原蛋白合成，使皮肤弹性增加，同时还具有皮肤保水作用，具有抗光老化的作用，与各单体单独使用的结果比较有明显的提升效果。本发明具有美白防晒功效的植物单体组合物可作为有效活性成分制成膏霜、喷雾剂、粉剂等多种剂型，用于化妆品。

附图说明

图1、去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对细胞活性的影响，其中，图1-1去氢钩藤碱对细胞活性的影响，与对照组0比较，*p<0.05，**P<0.01；图1-2松果菊苷对细胞活性的影响，与对照组0比较，*P<0.05；图1-3穿心莲内酯对细胞活性的影响，与对照组0比较，**P<0.01，***p<0.001。

图2、去氢钩藤碱对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果，与对照组0比较，*P<0.05，***p<0.001。

图3、组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果比较，与对照组比较，***p<0.001；与组合物组比较，^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001。

图4、组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对紫外线UV照射HaCaT细胞保护作用的比较，与UV照射对照组比较，**P<0.01。

图5、去氢钩藤碱与穿心莲内酯不同质量配比组合物对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果，与对照组比较，***p<0.001。

图6、组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对B16F10细胞黑色素生成和降解的影响。

图7、组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对斑马鱼黑色素生成的影响。

图8、组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成的影响，与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；与组合物组比较，^#P<0.05。

图9、钩藤提取物、肉苁蓉提取物和穿心莲提取物对细胞活性的影响，图9-1钩藤提取物对细胞活性的影响，与对照组比较，*p<0.05；图9-2肉苁蓉提取物对细胞活性的影响，与对照组比较，*p<0.05；穿心莲提取物对细胞活性的影响，与对照组比较，*p<0.05。

图10、三种提取物的组合与钩藤提取物、肉苁蓉提取物和穿心莲提取物对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果比较，与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；与组合物组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件及实验方法等，除以下专门提及的内容外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明无特别限制内容。

本发明所述去氢钩藤碱(Corynoxeine)是一种生物碱类化合物，主要来源于茜草科植物钩藤的干燥带钩茎枝，其分子量382.19，分子式为C₂₂H₂₆N₂O₄，结构式如(Ⅰ)所示。

本发明所述松果菊苷(Echinacoside)是管花肉苁蓉提取物的有效成分之一，分子量786.72，分子式C₃₅H₄₆O₂₀，结构式如(Ⅱ)所示。

本发明所述穿心莲内酯(Andrographolide)是一种二萜类内酯化合物，主要来源于爵床科植物穿心莲的全草或叶，其分子量为350.45，分子式为C₂₀H₃₀O₅，结构式如(Ⅲ)所示。

本发明所述去氢钩藤碱的钩藤提取物优选地是大叶钩藤(UNCARIA MACROPHYLLA)提取物(UNCARIAMACROPHYLLA EXTRACT)，该提取物属于化妆品原料可以用于制备化妆品。

本发明所述松果菊苷的肉苁蓉提取物指肉苁蓉(CISTANCHE DESERTICOLA)的提取物(CISTANCHE DESERTICOLA EXTRACT)，该提取物属于化妆品原料可以用于制备化妆品。

本发明所述穿心莲内酯的穿心莲提取物包括穿心莲(ANDROGRAPHIS PANICULATA)提取物(ANDROGRAPHIS PANICULATAEXTRACT)和穿心莲叶提取物(ANDROGRAPHISPANICULATALEAF EXTRACT)，两者均为化妆品原料，可以用于制备化妆品。

本发明的组合物可以作为有效活性成分制成膏霜、喷雾剂、粉剂等多种剂型，用于化妆品。由此获得的化妆品可以为霜剂、乳剂、面膜、爽肤水、护肤水、软膏、油剂、凝胶、气雾剂、溶液剂、或涂膜剂等各种形式。

实施例1.去氢钩藤碱、松果菊苷、穿心莲内酯对细胞活性的影响。

将小鼠黑色素瘤细胞B16F10以1×10⁴个的细胞浓度接种于96孔板中，并加入100μL黑色素细胞培养基。24h后细胞贴壁，弃原有培养基，分别加入含有不同浓度去氢钩藤碱(0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL)或穿心莲内酯(0μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL)的新鲜培养基。48h后，加入含有WTS的培养基，置于CO₂培养箱中培养大约45min，测其在490nm下的吸光值。实验重复3次。结果如图1-1、1-3所示，与不加药物的对照组相比，当去氢钩藤碱浓度低于或等于100μg/mL，穿心莲内酯浓度低于或等于50μg/mL均不会影响B16F10细胞的生长，以下实验均采用该浓度范围内开展实验研究。

类似地，将生长良好的人永生化表皮细胞HaCaT细胞接种于96孔细胞培养板，培养过夜贴壁后弃原有培养基并加入含不同浓度(0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL)的松果菊苷培养基，24h后加含WTS的培养基，测吸光值。结果如图1-2所示，与不加药物的对照组相比，当松果菊苷浓度低于或等于150μg/mL时不会影响HaCaT细胞的正常生长，以下实验均采用该浓度范围内开展实验研究。

实施例2.去氢钩藤碱对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果。

为单独评价去氢钩藤碱的美白功效，在细胞水平进行了如下黑色素生成抑制试验。

B16F10细胞以每孔1×10⁴个的细胞密度接种于96孔板，24h后弃原有的培养基，分别加入含浓度为50μg/mL曲酸(作为阳性对照)、及含25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL、100μg/mL去氢钩藤碱的无酚红培养基，72h后取所有孔板的上清液，酶标仪检测它们在490nm下的吸光值。实验重复3次。结果如图2所示，与对照组相比，曲酸组、不同浓度的去氢钩藤碱组的细胞分泌的黑色素含量均显著降低，并具有浓度依赖性，差异具有统计学意义。*p<0.05，**P<0.01，***p<0.001。

实施例3.组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果比较。

为评价组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯使用后的美白功效，在细胞水平进行了如下黑色素生成抑制试验。

B16F10细胞以每孔1×10⁴个的细胞密度接种于96孔板，24h后弃原有的培养基，分别加入含50μg/mL曲酸(作为阳性对照组)、组合物(含25μg/mL去氢钩藤碱与25μg/mL松果菊苷与5μg/mL穿心莲内酯组成)、50μg/mL去氢钩藤碱、50μg/mL松果菊苷及10μg/mL穿心莲内酯的无酚红培养基，72h后取所有孔板的上清液，酶标仪检测它们在490nm下的吸光值。实验重复3次。结果如图3所示，与对照组相比，松果菊苷组细胞分泌的黑色素含量无显著性差异，曲酸组、组合物组、去氢钩藤碱组和穿心莲内酯组细胞分泌的黑色素含量均显著降低，差异具有明显统计学意义，***p<0.001。组合物组与曲酸组、去氢钩藤碱组、穿心莲内酯组分别比较，细胞黑色素生成率也显著降低，差异具有统计学意义，^##p<0.01，^###p<0.001。

实验结果表明：去氢钩藤碱、穿心莲内酯以及含有去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯组合物均分别对细胞黑色素的生成有明显的抑制作用，组合物组抑制细胞黑色素生成的效果较去氢钩藤碱组和穿心莲内酯组更好，且效果明显好于曲酸对照组，说明组合物有明显的协同作用效果。

实施例4.组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯对紫外线UV照射HaCaT细胞保护作用的比较。

将人永生化表皮细胞HaCaT细胞以1×10⁴个每孔接种到96孔板中，24h内细胞贴壁后，原细胞培养基替换成含有药物的1640培养基，分别加入组合物(含25μg/mL去氢钩藤碱与25μg/mL松果菊苷与5μg/mL穿心莲内酯组成)、50μg/mL去氢钩藤碱、50μg/mL松果菊苷、10μg/mL穿心莲内酯的1640培养基。药物孵育24h后PBS替换药物培养基并进行细胞紫外仪(购自法国)照射，照射剂量为12J/cm2UVA+0.8J/cm2UVB，其中一组细胞不给药也不照紫外作为实验对照组。照射结束后，原含有药物的1640培养基替换PBS，继续在CO₂培养箱中培养24h。酶标仪测定吸光值来检测细胞活力。结果统计见如图4所示。HaCaT细胞活性经过UV照射后显著降低，产生了半致死现象，加入组合物或松果菊苷后活性显著增强，与不加药物的紫外对照组相比差异显著，具有明显的统计学意义，**P<0.01，***p<0.001。组合物组与紫外对照组相比差异显著，但与松果菊苷组比较，无显著性差异。

实验结果表明：松果菊苷以及含有去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯组合物分别对紫外线照射HaCaT细胞有明显保护作用，两者作用差别不明显。

实施例5.去氢钩藤碱及穿心莲内酯不同质量配比组合物对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果。

实验过程参考实施例2，将去氢钩藤碱浓度为50μg/mL和穿心莲内酯浓度为10μg/mL分别看做100％，药物组合物质量配比分别为：组合物1为1:9(即5μg/mL去氢钩藤碱和9μg/mL穿心莲内酯)、组合物2为2:8(即10μg/mL去氢钩藤碱和8μg/mL穿心莲内酯)、组合物3为3:7(即15μg/mL去氢钩藤碱和7μg/mL穿心莲内酯)、组合物4为4:6(即20μg/mL去氢钩藤碱和6μg/mL穿心莲内酯)、组合物5为5:5(即25μg/mL去氢钩藤碱和5μg/mL穿心莲内酯)、组合物6为6:4(即30μg/mL去氢钩藤碱和4μg/mL穿心莲内酯)、组合物7为7:3(即35μg/mL去氢钩藤碱和3μg/mL穿心莲内酯)、组合物8为8:2(即40μg/mL去氢钩藤碱和2μg/mL穿心莲内酯)、组合物9为9:1(即45μg/mL去氢钩藤碱和1μg/mL穿心莲内酯)，如表1所示。

表1各组组合物配比情况

比例	1:9	2:8	3:7	4:6	5:5	6:4	7:3	8:2	9:1
										去氢钩藤碱(μg/mL)	5	10	15	20	25	30	35	40	45
穿心莲内酯(μg/mL)	9	8	7	6	5	4	3	2	1

较于对照组，各组组合物的细胞黑色素生成均明显减少，黑色素分泌到细胞培养液中的含量也显著减少，差异具有明显统计学意义，***p<0.001，结果见图5，其中组合物4即当两个药物质量配比为4:6时，美白效果最为明显。但考虑到后续实验便于比较，做药物组合组实验时选用了药物质量配比为5:5。

实施例6.组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对B16F10细胞黑色素生成和降解的影响。

将B16F10细胞以每孔1×10⁴个的细胞密度接种于96孔板，24h后弃原有的培养基，分别加入组合物组(含25μg/mL去氢钩藤碱、25μg/mL松果菊苷、5μg/mL穿心莲内酯)、50μg/mL去氢钩藤碱组、50μg/mL松果菊苷组及10μg/mL穿心莲内酯组，在无酚红培养基培养72h后取各组孔板的上清液，拍照，实验结果见图6所示。

实施例7.组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷及穿心莲内酯对斑马鱼黑色素生成的影响。

将成熟的斑马雌鱼和雄鱼提前一晚放入孵育鱼缸中，受精后，第二天早上在光照刺激下产卵，当天收卵，用胶头滴管将鱼卵加入24孔板中，每孔约6个卵，并加入稀释有药物的培养液，分别为阴性对照组、组合物组(含25μg/mL去氢钩藤碱、25μg/mL松果菊苷、5μg/mL穿心莲内酯)、去氢钩藤碱组(浓度50μg/mL)、松果菊苷组(浓度50μg/mL)、穿心莲内酯组(浓度10μg/mL)，28℃、14h光照、10h黑暗光照循环条件下培养72h后，在显微镜下观察黑色素生产情况并拍照，较之对照组，本发明组合物组的斑马鱼全身生成的黑色素含量降低明显。实验结果见图7所示。

实施例8.组合物与去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯对皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成的影响。

为探究药物对人皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白的影响，12孔板中接种每孔3.5×10⁵个细胞，贴壁后用0.1％胎牛血清饥饿24h，再分别加入相应含有药物的DMEM，分为阴性对照组、组合物组(含25μg/mL去氢钩藤碱、25μg/mL松果菊苷、5μg/mL穿心莲内酯)、去氢钩藤碱组(浓度50μg/mL)、松果菊苷组(浓度50μg/mL)、穿心莲内酯组(浓度10μg/mL)，药物处理后，用ELISA实验检测细胞培养液上清中胶原蛋白的含量。实验结果如图8所示，与对照组相比，组合物组、松果菊苷组的Ⅰ型胶原蛋白含量显著升高，具有统计学意义，*p<0.05，**p<0.01，组合物组与松果菊苷组相比，差异具有统计学意义，^#p<0.05。

实施例9.钩藤提取物、肉苁蓉提取物和穿心莲提取物对B16F10细胞活性的影响。

钩藤提取物、肉苁蓉提取物和穿心莲提取物购自广州萃纳康生物科技有限公司，分别为钩藤、肉苁蓉及穿心莲的水提物。

实验过程参照实施例1，B16F10细胞贴壁后加入含有不同浓度钩藤提取物(0mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL)或肉苁蓉提取物(0mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL)或穿心莲提取物(0mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL)的新鲜培养基，48h后加入含有WTS的培养基，置于CO₂培养箱中培养大约45min检测细胞活性，结果如图9-1、9-2、9-3所示，与对照组相比，当钩藤提取物浓度低于或等于1.5mg/mL，肉苁蓉提取物浓度低于或等于1.5mg/mL，穿心莲提取物浓度低于或等于1.5mg/mL时均不会对B16F10细胞的活性产生影响。

实施例10.三种提取物的组合物与钩藤提取物、肉苁蓉提取物和穿心莲提取物对B16F10细胞黑色素含量的抑制效果比较。

实验过程参考实施例2，B16F10细胞种板，24h贴壁后弃原有的培养基，实验分为六组，分别是对照组，曲酸组(加入含50μg/mL曲酸)、三种提取物的组合组(含0.25mg/mL钩藤提取物与0.25mg/mL肉苁蓉提取物与0.25mg/mL穿心莲提取物)、钩藤提取物组(0.5mg/mL钩藤提取物)、肉苁蓉提取物组(0.5mg/mL肉苁蓉提取物)及穿心莲提取物组(0.5mg/mL穿心莲提取物)，用无酚红培养基培养，72h后取所有孔板的上清液，酶标仪检测它们在490nm下的吸光值。实验重复3次。结果如图10所示，与对照组相比，肉苁蓉提取物细胞分泌的黑色素含量无显著性差异，曲酸组、组合物组、钩藤提取物组和穿心莲提取物组细胞分泌的黑色素含量均明显减少，差异具有统计学意义。组合物组与曲酸组都具有明显减低黑色素生成的作用，它们之间没有显著差异。组合物组与钩藤提取物组、穿心莲提取物组分别比较，细胞黑色素生成率降低显著，差异具有统计学意义，**p<0.01，***p<0.001，^#p<0.05，^##p<0.01。

实施例11.空白膏霜和药物膏霜的配制。

本实施例的具有皮肤美白功效的植物单体组合物，按重量百分比计算，按以下组份配制。各组药物添加浓度为细胞使用浓度的20倍。

本实施例将去氢钩藤碱组、松果菊苷组、穿心莲内酯组和三者的组合物组分别制成化妆品膏剂。其中，组合物组(简称：试验组1)为添加去氢钩藤碱0.05％、松果菊苷0.05％和穿心莲内酯0.01％；去氢钩藤碱组(简称：试验组2)为添加去氢钩藤碱0.10％；松果菊苷组(简称：试验组3)为添加松果菊苷0.10％；穿心莲内酯组(简称：试验组4)为添加穿心莲内酯0.02％。基础配方成分的重量百分比是6％鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯，5％甘油，4％油酸乙酯\硬脂酸乙酯\牛油果树果脂不皂化物\亚油酸乙酯，3％辛酸癸酸甘油三酯，3％甲基丙二醇，3％花生醇\山嵛醇\花生醇葡糖苷\水\葡萄糖，2.5％鲸蜡硬脂醇，2％聚二甲基硅氧烷，1％C14-22醇\C12-20烷基葡糖苷\水\葡萄糖，0.6％苯氧乙醇，0.5％聚丙烯酸酯交联聚合物-6\水\叔丁醇，0.2％乙基己基甘油，0.2％己二醇/辛甘醇，0.2％阿拉伯胶树胶\黄原胶，余量为水。空白膏霜和各组药物膏霜均请化妆品公司按照化妆品制备流程进行样品打样，装在化妆品的瓶子内。

本实施方式配制的膏霜涂布均匀、易吸收，可进行人群实验。首先进行皮肤重复性开放型涂抹试验，以前臂屈侧作为受试部位，面积3×3cm²，受试部位应保持干燥，避免接触其他外用制剂。将试验各组的膏霜约0.05g/次、每天2次均匀地涂于受试部位，连续4周，同时每天记录观察皮肤反应，实验结果未见皮肤出现红斑、水肿、丘疹等过敏症状。

实施例12.实验各组对人手臂皮肤黑色素、皮肤弹性和水分的结果比较。

实验对象选取健康志愿者60名，随机分成4组，每组15人。年龄：20-40岁(手臂主要症状：黄褐斑、雀斑、色素沉淀等症状)。受试前用德国CK公司的皮肤黑色素和红色素测试仪测量志愿者的左右两臂肤色，两臂肤色区别不大。测定受试部位前2-3天不使用任何产品(化妆品或外用药品)，实验前，受试者统一清洁双手前臂，并用干面巾纸擦拭干净。用仪器(Cutometer MPA 580，德国)检测每个人左右手臂黑色素含量、皮肤弹性、水分的基础值。然后开始实验，测试产品即在基础膏霜中添加了去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯单体组合物组(以下简称为：试验组1)、在基础膏霜中添加了去氢钩藤碱组(以下简称为：试验组2)、在基础膏霜中添加了松果菊苷组(以下简称为：试验组3)、在基础膏霜中添加了穿心莲内酯组(以下简称为：试验组4)、与空白膏霜即不添加任何药物的基础膏霜(以下简称为：对照组)，每天早晚分别涂抹在左右手臂上，一只手臂为对照组，则另一只手臂为试验组，每次涂抹约0.05g，每天2次。涂抹前及涂抹四周后，均使用皮肤黑色素和红色素测试仪测量受试区域，每个受试区域平行检测5次，算平均值。同一志愿者的测试由同一个人员操作完成。

各组实验数值＝(实验后的检测数据-实验前的检测数据)/实验前的检测数据×100％。

实验结果显示，所有参与试验的志愿者手臂均未引起任何皮肤过敏症状，大部分志愿者的试验手臂均有肉眼可见的皮肤明显变白的主观感受。实验测试结果表明：在涂抹试验组1化妆品四周后试验组皮肤的黑色素明显减少，皮肤弹性、水分含量明显增加，与对照组比较有显著差异，*p<0.05，**p<0.01，实验结果见表2。涂抹试验组2化妆品四周后试验组皮肤的黑色素明显减少，皮肤弹性、水分含量均明显增加，与对照组比较也有显著差异，*p<0.05。涂抹试验组3化妆品四周后试验组皮肤的黑色素变化不大，但皮肤弹性和水分明显增加，与对照组比较有显著差异，*p<0.05。涂抹试验组4化妆品四周后试验组皮肤水分含量有上升但与对照组比较没有显著差异。皮肤的黑色素明显减少，皮肤弹性明显增加，与对照组比较有显著差异，*p<0.05。

表2：实验各组对人手臂皮肤黑色素、皮肤弹性和水分的结果比较

人体实验结果表明含有去氢钩藤碱、松果菊苷和穿心莲内酯三者的组合物是非常理想的美白化妆品添加剂，与各组单体药物比较，实验效果更为显著，说明该组合物有明显的协同作用效果。该组合物不仅具有明显的美白效果，能减少皮肤黑色素生成，同时还能保护皮肤免受紫外线损伤，对皮肤弹性和皮肤水分的保持也有明显的作用效果，具有抗光老化的作用，与不加药物的普通膏霜比较，差异非常显著。

本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims

1.去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物在制备美白、祛斑、淡化色斑、抗皱、保湿、抗紫外、促进紫外损伤修复、提高皮肤弹性、提高皮肤水分或抗光老化的药物和/或化妆品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物用于抑制黑色素生成、防止皮肤黑色素沉积、减少皮肤细胞中黑色素的生成、降解已经沉积的黑色素、抗衰老、提高皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白的能力、抗紫外线损伤或者抗光老化。

3.一种组合物，其特征在于，所述组合物用于美白、祛斑、淡化色斑、抗皱、保湿、抗紫外、促进紫外损伤修复、提高皮肤弹性、提高皮肤水分或抗光老化；所述组合物中含有去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物、穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物、松果菊苷或松果菊苷的肉苁蓉提取物；

所述去氢钩藤碱占所述组合物的重量百分比为0.002％-0.5％；

所述去氢钩藤碱的钩藤提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；

所述穿心莲内酯占组合物的重量百分比为0.001％-0.4％；

所述穿心莲内酯的穿心莲提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％；

所述松果菊苷占所述组合物的重量百分比为0.002％-0.5％；

所述松果菊苷的肉苁蓉提取物占所述组合物的重量百分比为0.01％-8％。

4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物、穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物的重量百分比为(1～9):(1～9)。

5.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述去氢钩藤碱或去氢钩藤碱的钩藤提取物、松果菊苷或松果菊苷的肉苁蓉提取物、穿心莲内酯或穿心莲内酯的穿心莲提取物的重量百分比为(0.005～5)：(0.005～5)：(0.001～1)。

6.如权利要求3所述的组合物在制备美白、祛斑、淡化色斑、抗皱、保湿、抗紫外、促进紫外损伤修复、提高皮肤弹性、提高皮肤水分或抗光老化的药物和/或化妆品中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述组合物用于抑制黑色素生成、防止皮肤黑色素沉积、减少皮肤细胞中黑色素的生成、降解已经沉积的黑色素、抗衰老、提高皮肤成纤维细胞合成胶原蛋白的能力、抗紫外线损伤或者抗光老化。