KR20050028565A - 질경이 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유하는 피부 외용제로서, 피부 미세염증 조절 및 피부두께 강화를 통한 주름 개선, 탄력 개선의 효과가 있으며, 우수한 보습효과가 있고 부작용이 없는 효과가 있다.

Description

질경이 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{A composition containing Plantago asiatica Linne extract for skin external application}

본 발명은 질경이 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 질경이과(Plantaginaceae) 식물인 질경이의 전초와 외피를 포함한 씨 및 그 밖의 동속 식물에서 적절한 용매 배합으로 추출하여 얻은 추출물을 함유한 피부 외용제에 관한 것이다. 본 발명은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 에센스 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 형태로 제조될 수 있으며, 피부의 두께를 강화하고, 피부의 미세염증을 조절하고 또한 주름 개선, 탄력 개선 및 우수한 보습효과를 제공하는 것이다.

인간의 피부는 시간이 지남에 따라 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되고, 탄력이 감소될 뿐 아니라, 기미, 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다. 그러나 현대사회는 젊고 아름다운 외모를 중시하기 때문에, 상기 내적 인자 및 자외선 스트레스 등의 외적 인자에 의해 피부 두께가 감소하고, 주름이 증가되고 탄력이 감소되는 문제를 예방 또는 해결하려고 하는 욕구가 크다. 이에 따라, 다양한 주름 개선제, 탄력 개선제, 미백제 등이 개발되고 있다.

피부에 있어서, 주름, 탄력 상실, 피부 건조증 등의 증상들은, 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산, 프로테오글리칸, 글리코스아미노글리칸, 피브로넥틴 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하고, 수분과 결합할 수 있는 능력이 저하되고, 그 결과 피부를 구성하는 기질물질이 감소하고, 피부의 수분함유능력이 상실되어 나타나게 된다. 또한 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인 (proinflammatory cytokine)인 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α), 인터루킨-1베타 (IL-1β, interleukin-1β), 프로스타글란딘(prostaglandin)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2 (Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP, Matrix metalloproteinase) 의 생합성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 상기와 같은 피부 세포를 증식시키거나 피부를 구성하는 기질물질을 증가시킴으로써 피부를 두껍게 할 수 있는 물질, 피부를 구성하는 기질 물질인 콜라겐을 분해하는 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성을 억제할 수 있는 물질, 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제할 수 있는 물질, 종양괴사인자의 생합성을 억제할 수 있는 물질, 피부 섬유아세포에서의 트로포엘라스틴 및 피브릴린 생성을 촉진하는 물질 등을 개발한다면, 주름, 탄력 상실, 피부 건조증 등의 피부의 제증상을 완화시킬 수 있다.

본 발명은, 피부의 미세 염증 상태를 조절하고, 피부 두께를 조절하여, 탄력 있고 건강한 피부 상태를 유지시키고, 또한 진피에서 콜라겐, 엘라스틴, 글리코스아미노글리칸 등의 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타내는 것을 목적으로 한다. 또한, 피부를 촉촉하게 유지시켜 주름을 예방하고 피부가 건조해지는 것을 예방 및 개선시키는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 질경이 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 플란타고 에이시아티카(Plantago asiatica)의 추출물인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 질경이 종자의 추출물인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 질경이 전초의 추출물인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 전체 조성물 중에 0.001 내지 10중량% 함유된 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 전체 조성물 중에 0.01 내지 5중량% 함유된 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 보습용인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 염증 조절용인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 두께를 두껍게 하기 위한 피부세포 증식 촉진용인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 탄력 개선용인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에 있어서, 질경이 추출물은 질경이과 동종에 속하는 질경이의 추출물로써 질경이의 뿌리, 종자, 외피, 씨, 전초 또는 이들의 혼합물임을 특징으로 하며, 그 중에서도 질경이의 종자 또는 전초의 추출물을 이용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 사용된 질경이는 질경이과(Plantaginaceae)에 속하는 다년생 초본으로 어린잎은 식용한다. 한방에서는 뿌리채 뽑아 말려서 차전초(車前草)라 하고, 종자를 차전자(車前子)라는 약재로 사용하고, 한국, 일본, 사할린, 타이완, 중국, 시베리아, 동부 히말라야, 자바, 말레이시아 등지에 분포한다. 질경이 전초의 성분은 오쿠빈(aucubin), 플란타기닌(plantaginin), 호모플란타기닌(homoplantaginin)등의 배당체와 탄닌, 우르솔산(ursolic acid), 피토스테롤글리코시드(phytosterol glycosides)이고, 이들 스테롤류인 베타시토스테롤팔미테이트(β-sitosterol palmitate), 스티그마스테롤팔미테이트(stigmasterol palmitate) 등이 점액성 팽화물질의 주체이다. 차전자(Plantaginis Semen)에는 뮤실라제(mucilage(9%내외))로 플란타산(Plantasan), 플란타고뮤실라제 A(plantago mucilage A(L-arabinose, D-xylose, D-glucuronic acid, D-galacturonic acid))가 함유되어 있고 이리도이드 배당체 (Iridoidal glycoside)인 오쿠빈 (aucubin), 게니피오시딕애씨드 (genipiosidic acid) 가 있고 플라본배당체 (flavone glycoside)로서 플란타고시드 (plantagoside) 기타 아세토시드(acetoside), 시린긴(syringin), 콜린(choline) 및 기타의 지방산 등이 들어 있다.

질경이는 "플란타기닌"이라는 배당체와 탄닌이 함유되어 있어서 이뇨제, 진해, 거담, 건위, 지사(止瀉), 해열, 소염, 강장제 등으로 쓰이고, 간 기능을 활성화하여 어지럼증, 두통에 효과가 있고, 폐열로 인한 해수에도 효과가 있다. 항균작용도 있어서 급만성 세균성 설사, 신장염, 방광염, 요도염의 치료에도 이용한다. 민간약으로는 종기에 생잎을 불에 쬐어 부드럽게 해서 붙이면 좋고 치통에는 생잎을 소금에 비벼서 아픈 이에 물고 있으면 치통이 멎는다고 한다.

질경이에 대한 논문들을 살펴보면, 질경이 종자의 페닐프로파노이드 (phenylpropanoid) 성분이 이뇨효과와 항염효과(특히 간염)가 있다고 알려져 있고, 차전자와 차전자피에는 물을 함유할 수 있는 피토스테롤글리코시드 (phytosterol glyicoside), 뮤실라제 (mucilage)로 대표되는 점액성 성분을 가지고 있어 식품쪽에서는 다이어트와 변비개선의 용도로 사용된다. 또한 보체를 활성화시키는 면역증강작용, 항바이러스작용, 플란타고시드는 알파만노시다제 억제제 (α-mannosidase inhibitor) 로서 면역억제 기능이 있다. 그리고 질경이 잎은 상처재생효과 (wound healing)도 가지고 있으며, 페닐에타노이드 (phenylethanoid)는 생쥐 귀의 부종을 감소시키는 작용도 있다. 질경이에 함유된 우르솔산(Ursolic acid)과 지방산 (Fatty acid)들은 사이클로옥시게나제-2 (COX-2) 억제제로도 작용한다고 알려져 있다.

질경이와 차전자에 대한 특허들을 살펴보면, "탈모방지 및 모발성장 촉진 조성물 (한국등록특허 0382602)", "변비증상 개선 효과가 있는 차 및 이의 제조 방법(한국등록특허 0344325)", "항균성 식물추출물을 함유하는 치약 조성물 (한국등록특허 0313491)", "화상치료용 고약조성물 (한국등록특허 0167535)" 등이 등록되어 있고, 피부에 대한 특허를 살펴보면, "복합생약추출물을 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물 (한국공개특허 2002-0044266)", "기미.주근깨 제거용 한방 팩 재료 (한국공개특허 2000-0049466)", "여드름 예방 및 치료제 (한국공개특허1999-0054326)", "차전자 추출물을 함유하는 피부세정제 조성물 (한국공개특허1998-0067528)" 등이 공개되어 있다. 질경이의 주성분인 오쿠빈(Aucubin) 에 대해서는 "B형 간염바이러스의 복제를 억제하는 약학적 제제 (한국등록특허0218052)" 가 등록되어 있다. 그러나 질경이 및 차전자에 대해 피부두께의 증가나 미세염증의 제어에 의한 피부주름 개선, 탄력개선, 보습의 용도로 밝혀진 바는 전혀 없다.

본 발명에서는 질경이 추출물을 사용하여 주름, 탄력, 보습 등의 증상을 전반적으로 효과적으로 개선할 수 있다. 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물의 사용량은 생체외(in vitro) 실험 및 생체내(in vivo) 실험을 근거로 조성물 총 중량에 대하여 0.001~10중량%, 바람직하게는 0.01~5중량%이다. 추출물 함량이 0.001중량% 미만이면 활성 성분으로서 작용을 기대하기 어려우며, 10중량%를 초과하면 제형 안정성에 문제가 생길 수 있다. 이러한 관점에서 0.01~5중량%이 더욱 바람직하다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 주름 및 탄력을 개선시키고, 보습을 목적으로 사용되는 것으로 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 약제학적 조성물일 수 있으며 이 경우에, 질경이 추출물은 그대로 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 의약에 사용할 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다. 산 부가염 이외에도, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 트리에틸아민, 3차-부틸아민과 같은 염기 부가염도 사용될 수 있다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 약제학적 제형에 있어서, 질경이 추출물의 함유량은 제형에 따라 광범위하게 변할 수 있으며, 통상적인 방법에 따른다.

본 발명에 의한 피부 외용제 약제학적 조성물은, 유효성분에 악영향을 미치지 않는 한, 필요에 따라 의약에 사용되는 각종 보조제, 예컨대 담체나 기타 첨가제, 예컨대 안정제, 완화제, 유화제 등을 첨가하여 제제화될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 질경이 추출물 함유 조성물을 비경구, 경구 등으로 투여할 수 있다. 비경구 루트로는 경피 투여가 바람직하며, 그 중에서도 국소도포가 가장 바람직하다. 제형으로는, 연고, 크림, 주사제, 산제, 과립제, 정제 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 제형으로도 할 수 있다.

본 발명에 의한 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 0.001 내지 1000mg / Kg·day이다.

본 발명에 의한 조성물은 단독으로 투여되거나 다른 약제와 동등하게 또는 다른 약제를 보조하기 위해 함께 투여될 수 있다.

또한, 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

실시예

[실시예 1] 질경이 전초 추출물의 조제

질경이 전초 500g에 중량(Kg)비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80 C에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전 시킨 후, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.

[실시예 2] 질경이 종자 추출물의 조제

질경이 종자 500g에 중량(Kg)비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80 C에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 후, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.

[시험예 1] 피부세포의 증식효과 측정

인간으로부터 직접 채취하거나 혹은 상업적으로 구입한 인간의 피부 각질형성세포에 상기 실시예1 및 실시예2에서 제조된 질경이 추출물을 처리하여, 각질형성세포의 증식 효과를 측정하였다. 즉, 1.0%의 우태아 혈청이 함유된 KGM(Keratinocyte Growth Media)배지가 함유된 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 사람의 각질형성세포를 5,000세포/well가 되도록 넣고, 세포가 부착한 후 우태아혈청이 없는 KGM배지로 갈아주고 70 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 다음, 하기 표 1의 농도대로 처리, 3일 후 살아있는 세포의 수를 측정하여, 피부세포에 대한 증식효과를 관찰하였다. 이 때 조성물을 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 1에 나타내었다.

성분	농도(ppm)	세포수(%)
실시예1	10	198
	1	164
	0.1	142
	대조군	100
실시예2	10	211
	1	178
	0.1	156
	대조군	100

상기 표에 나타난 바와 같이, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물은, 피부세포에 독성을 주지 않으면서 각질형성세포를 증식시켜 표피의 두께를 두껍게 한다는 것을 알 수 있었다. 피부 두께가 얇아지면 바로 주름이 형성되는 원인이 된다. 따라서, 피부가 두꺼워지면 주름을 예방 또는 개선시켜줄 수 있는 것이다.

[시험예 2] 피부세포의 콜라겐 생합성 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양한 후, 상기 실시예 1 및 실시예 2에 따른 각 추출물을, 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확해서(harvest) ELISA (Takara MK101) 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 2에 나타내었다.

농도(ppm)	콜라겐 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	134	139
1	129	132
0.1	116	120
대조군	100	100

상기 표 2로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물은 콜라겐 생합성을 농도 의존적으로 증가시킴을 알 수 있다. 상기 조성 중, 특히 질경이 종자 추출물이 콜라겐 생합성에 대한 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.

[시험예 3] 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 자외선A 를 15J/cm² 로 조사한 후, 상기 실시예 1 및 실시예 2에 따른 추출물을 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서 (harvest) ELISA (AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 3에 나타내었다.

농도(ppm)	타입I 콜라게나제 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	34	31
1	56	49
0.1	80	69
대조군	100	100

상기 표 3으로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물은 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴을 알 수 있다. 그 중에서 특히 질경이 종자 추출물이 타입 I 콜라게나제 생합성 억제에 대한 효과가 매우 우수하여 효과적으로 피부기질의 분해를 막아줄 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 4] 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선A를 15J/cm²로 조사한 후, 상기 실시예 1 및 실시예 2에 따른 추출물을 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서 (harvest) 웨스턴블롯 (Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 덴시토미터(densitometer)로 측정한 비교치를 표 4에 나타내었다.

농도(ppm)	COX-2 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	16	10
1	39	32
0.1	75	64
대조군	100	100

상기 표 4로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물은 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2 (PGE2)에 의한 피부발적, 동통, 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 5] 자외선에 의한 종양괴사인자알파의 생합성 억제 효능 측정

인체 각질형성세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선B를 30mJ/cm²로 조사한 후, 상기 실시예 1 및 실시예 2의 추출물을 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 6-24시간 후 세포를 수확해서 (harvest) ELISA (Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF α)의 양을 정량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 5에 나타내었다.

농도(ppm)	TNF α 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	22	16
1	43	35
0.1	74	65
대조군	100	100

상기 표 5로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물은 자외선에 의한 종양괴사인자알파의 생합성을 농도 의존적으로 감소시키므로, 자외선으로 인해 발생할 수 있는 피부 염증, 피부 기질물질의 감소, 탄력 저하, 주름 형성 등을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 6] 미세염증인자에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 하고, 상기 실시예 1 및 실시예 2에 따른 추출물을 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서 (harvest) ELISA (AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과는 TNF α 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 6에 나타내었다.

농도(ppm)	타입I 콜라게나제 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	44	37
1	66	56
0.1	86	77
대조군	100	100

상기 표 6으로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물이 미세염증인자인 TNF α에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴을 알 수 있다. 특히 질경이 종자 추출물이 타입 I 콜라게나제 생합성 억제에 대한 효과가 매우 우수하여 효과적으로 피부기질의 분해를 막아줄 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 7] 미세염증인자에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α) 20ng/ml 되게 하고, 실시예 1 및 실시예 2를 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서 (harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 덴시토미터(densitometer)로 측정한 비교치를 표 7에 나타내었다.

농도(ppm)	COX-2 생합성(%)
	실시예1	실시예2
10	15	11
1	38	31
0.1	72	62
대조군	100	100

상기 표 7로부터, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물이 미세염증인자에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2 (PGE2)에 의한 피부발적, 동통, 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 8] 미세염증인자에 의한 콜라겐 분해 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 가한 후 상기 실시예 1 또는 실시예 2의 추출물을 0.1pp, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA (Takara MK101) 방법을 사용하여 분해되지 않고 남아있는 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 측정한 비교치를 표 8에 나타내었다.

농도(ppm)	프로콜라겐 양(%)
	실시예1	실시예2
10	100	100
1	92	94
0.1	85	88
TNF α	50	50
대조군	100	100

상기 표 8로부터, 질경이 전초 추출물 및 질경이 종자 추출물이 TNF α에 의한 콜라겐의 분해를 효과적으로 제어할 수 있고 농도 의존적으로 제어함을 알 수 있다.

[시험예 9] 무모생쥐에서 표피두께의 변화 측정

본 발명의 조성물에 의한 피부 두께의 변화를 확인하기 위하여, 본 발명에 의한 조성물(실시예3, 실시예4)을 하기 표 9와 같이 제조하고, 무모 생쥐의 등부위에 실시예 3 및 4와 비교예를 일주일 동안 도포한 후 생검하여 피부 표피의 두께를 H&E 염색을 실시하여 측정하였다.

배합성분	실시예3(%)	실시예4(%)	비교예(%)
정제수	To 100	To 100	To 100
질경이 전초 추출물(실시예 1)	0.1	-	-
질경이 종자 추출물(실시예 2)	-	0.1	-
식물성 경화유	1.50	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60	0.60
글리세롤 스테아레이트	1.00	1.00	1.00
스테아릴 알코올	2.00	2.00	2.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 &소디움 스테아로일 락틸에이트	1.00	1.00	1.00
아라키딜 베헤닐 알코올 &아라키딜글루코사이드	1.00	1.00	1.00
세틸아릴 알코올 & 세테아릴글루코사이드	2.00	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤올레이트 & 프로필렌글리콜	1.50	1.50	1.50
카프릴릭/카르릭 트리 글리세라이드	11.00	11.00	11.00
사이클로메디콘	6.00	6.00	6.00
방부제, 향	적량	적량	적량
트리에탄올 아민	0.1	0.1	0.1

그 결과는 도 1a 내지 도 1c에 나타내었다. 도1a는 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유하지 않은 조성물로 처리한 대조군을 나타내고, 도1b는 질경이 전초 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을, 도1c는 질경이 종자 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을 나타낸다. 도 1a 내지 도1c에서 보이는 것처럼, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 도포하였 경우 비교예에 비해 2-3배 이상 표피가 두꺼워지고, 진피도 현저히 두꺼워지고 밀도가 높아지는 것을 관찰할 수 있는데, 이는 피부의 잔주름을 감소시키고, 탄력을 강화시켜 줄 수 있다는 것을 입증하는 것이다.

[시험예 10] 무모생쥐에서 콜라겐생합성효능과 주름 개선 효과(표피두께의 변화 측정)

본 발명의 조성물에 의한 피부 콜라겐 합성 효과를 확인하기 위하여 무모 생쥐의 등부위에 표9에서와 같이 실시예 3,4와 비교예를 일주일 동안 도포한 후 생검하여 피부 콜라겐 합성정도를 Van Gieson 염색을 실시하여 측정하였다. 그 결과는 도 2a 내지 도 2c에 나타내었다.

도 2a는 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유하지 않은 조성물로 처리한 대조군을 나타내고, 도 2b는 질경이 전초 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을, 도 2c는 질경이 종자 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을 나타낸다.

도 2a 내지 도 2c에서 보이는 것처럼, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유한 조성물을 도포하였을 경우, 비교예에 비해 진피콜라겐의 생합성량이 늘어나고 밀도도 높아지는 것을 관찰할 수 있었다.

또한, 생체에서 주름생성의 개선효과를 확인하기 위하여 무모 생쥐 60마리를 항온 항습실에서 키운 후, 각 군당 20마리씩 3군으로 나누었다. 상기 실시예 3, 4 및 비교예의 조성물을 각각 8주 동안 매일 100㎕씩 등 부위에 도포한 후 실리콘을 이용하여 등 부위의 레플리카(replica)를 뜬 후 화상분석기(visiometer; SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 주름의 깊이, 면적을 측정, 주름 개선 정도를 평가하였고 그 결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에서, 비교예의 경우 세로로 깊게 나타나는 주름이, 실시예 3 및 4에서는 아주 우수하게 개선되어지는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 11] 사람에서의 주름개선효과

상기 표 9의 비교예와 실시예 3 및 4에 대하여 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 30대 여성 60명을 각각 비교예 및 실시예 3군, 4군으로 20명씩 3조로 나누어 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 visiometer (SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany) 로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 하기 표에 나타내었다. 하기 표의 값은, 도포 8주 후의 각각의 parameter 값에서 도포 전 parameter 값을 뺀 것의 평균을 나타내었다.

사용 8주 후임상 결과	R1	R2	R3	R4	R5
비교예	0.28	0.27	0.22	0.04	0.04
실시예3	-0.21	-0.20	-0.12	-0.04	-0.03
실시예4	-0.22	-0.20	-0.13	-0.04	-0.03

R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값

R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균

R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고 치

R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값

R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값

상기 표 10에서와 같이, 실시예 3 및 4의 외용제 조성물은 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 12] 사람 피부 섬유아세포에서의 트로포엘라스틴 및 피브릴린 생성 측정

질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물이 사람 피부에서 탄력에 중요한 역할을 하는 트로포엘라스틴과 피브릴린의 생성을 증가시키는지를 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 피부에서 분리한 섬유아세포를 24웰형 세포배양 플레이트의 각 웰에 5x10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 부착시킨 세포에 시험물질을 아래 표 11의 농도대로 처리한 후, 2일이 지난 다음, 배지를 수확(harvest)했다. 수확한 배지 중의 트로포엘라스틴 및 피브릴린을 정량하는 방법은 효소면역분석법(ELISA)을 사용하였다. 대조군을 100으로 보고 이에 대한 상대적인 비율로 나타내었다.

시험물질	농도(ppm)	트로포엘라스틴 생성량(%)	피브릴린생성량(%)
질경이 전초 추출물(실시예1)	10	135	133
	1	127	125
	0.1	118	116
질경이 종자 추출물(실시예2)	10	140	141
	1	130	129
	0.1	12	121
대조군		100	100

상기 표에 나타난 바와 같이, 각 시험물질의 농도에 의존적으로, 대조군에 비해 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 처리한 경우 트로포엘라스틴 및 피브릴린이 많이 합성된 것을 알 수 있었다.

[시험예 13] 인체에서 피부 탄력 개선 측정

상기 표 9와 같이 제조한 화장수의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 30세 이상의 건강한 여성 30명을 3개조로 나누고, 각 조에 상기 표 9의 비교예와 실시예 3 및 실시예 4의 화장수를 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기 (Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 표 12에 나타내었다. 표 12의 결과치는 Cutometer SEM 575의 △R8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽)) 값으로 기재하였는데, R8값은 피부 점탄성(viscoelasticity) 의 성질을 나타낸다. 이와 별도로 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다. 그 결과는 하기 표 13에 나타내었다.

실험제품	피부탄력효과
비교예	0.11
실시예 3	0.43
실시예 4	0.44

상기 표 12에 나타난 바와 같이, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물이 함유된 실시예 3 및 4의 조성물을 도포한 군에서는 비교예를 도포한 군에 비해서 피부탄력성이 더 증가되었다.

한편, 설문조사를 통해서도 본 발명에 의한 조성물인 실시예 3 및 실시예 4를 도포한 경우 피부탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었다[표13].

도포군	응답자 수 (인)
	매우 양호	양호	보통	미흡
비교예	1	3	3	3
실시예3	3	5	2	0
실시예4	3	6	1	0

[시험예 14] 사람 피부 섬유아세포의 글리코스아미노글리칸 생성 측정

사람 피부 중 진피에서 콜라겐, 엘라스틴 이외의 나머지 부분을 채워주고, 피부를 지지하고, 진피에서 수분을 잡아주는 역할을 하는 글리코스아미노글리칸(GAG)을 정량하였다. 먼저 사람 섬유아세포를 페놀레드가 함유되지 않은 배지와 챠콜(charcoal) 처리한 5% 우태아혈청을 사용하여 24웰형 세포 배양 플레이트에 5 X 10⁴ 개를 넣고 배양하였다. 18시간 후 하기 표 14의 농도대로 시험물질을 처리하고, 다시 18시간 후에 상등액 중에 분비된 GAG의 양을 측정하였다. 분석에는 영국의 Biocolor사에서 제작한 Blyscan Glycosaminoglycan assay kit을 사용하였다. GAG 측정 원리는 sulfated GAG 와 proteoglycan에 (+) charge를 띤 1,9-dimethyl methylene blue 가 binding하여 침전이 생기고 이 침전을 녹여내어 정량하는 것이다. 하기 표의 결과치는, 대조군을 100으로 보고 이에 대한 상대적인 비율로 나타내었다.

시험물질	농도(ppm)	글리코스아미노글리칸 생합성(%)
질경이 전초 추출물(실시예1)	10	145
	1	134
	0.1	123
질경이 종자 추출물(실시예2)	10	148
	1	137
	0.1	129
대조군		100

상기 표에 나타난 바와 같이, 질경이 전초 추출물과 질경이 종자 추출물을 처리한 경우 대조군에 비해 글리코스아미노글리칸 많이 합성되었음을 알 수 있었다.

[시험예 15] 인체에서 피부 보습력 증가 측정

상기 표 9와 제조한 화장수의 피부 보습력 개선 효과를 측정하였다. 피부건조증을 나타내는 50-60대의 성인 남,녀 30명을 3개조로 나누어, 각 조에 상기 표 9의 비교예와 실시예3 및 실시예 4의 화장수를 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점, 그리고 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과)후에 항온, 항습 조건( 24℃, 상대습도 40%)에서 코니오미터로 피부수분량을 측정하였다. 그 결과는 하기 표에 나타내었다. 하기 표의 결과는 시험 개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다. 코니오미터는 표피의 전기전도도 값을 측정하여 피부에 존재하는 수분량을 측정하는 피부수분측정기이다. 이와 별도로 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다.

도포군	수분증가율 (%)
	1주 경과	2주 경과	4주 경과	6주 경과
비교예	32	35	33	13
실시예3	43	48	54	46
실시예4	44	49	56	47

상기 표에 나타난 바와 같이, 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물이 함유된 실시예 3 및 실시예 4의 물질을 도포한 군에서는 비교예를 도포한 군에 비해서 피부수분량이 더 증가되었으며, 또한, 시험물질의 도포를 중지한 2주 후에 피부수분을 측정한 6주 경과 후의 수치가 1주~2주 경과후의 수치와 유사하게 나타나, 시험물질을 도포하지 않아도 어느 정도는 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물에 의해 피부수분이 지속적으로 유지됨을 알 수 있었다.

이와 동시에 피부 건조증 개선효과에 관한 설문조사를 통해서도 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유한 실시예 3 및 실시예 4를 도포한 경우 피부건조증이 개선됨을 확인할 수 있었다[표 16].

도포군	응답자 수 (인)
	매우 양호	양호	보통	미흡
비교예	1	4	3	2
실시예3	3	5	2	0
실시예4	3	6	1	0

이하, 상기의 시험예의 결과를 근거로 하여, 질경이 전초 추출물 및 질경이 종자 추출물 중 1종 이상을 함유함으로써, 피부 주름 및 탄력을 개선하고, 피부에 보습을 주는 여러 가지 제형의 화장료의 조성을 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물이 하기의 예에만 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
질경이 전초 추출물 및/또는 질경이 종자 추출물	0.1
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
질경이 전초 추출물 및/또는 질경이 종자 추출물	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예3] 영양크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
질경이 전초 추출물 및/또는 질경이 종자 추출물	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
푸틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예4] 마사지크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
질경이 전초 추출물 및/또는 질경이 종자 추출물	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예5] 팩

배합성분	중량%
정제수	To 100
질경이 전초 추출물 및/또는 질경이 종자 추출물	0.1
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
핑이지-12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량

이상에서 설명한 바와 같이 질경이 전초 추출물 및 질경이 종자 추출물 중 1종 이상을 함유함으로써, 피부의 미세 염증 상태를 조절하고, 피부 두께를 조절하여, 탄력 있고 건강한 피부 상태를 유지시키고, 또한 진피에서 콜라겐, 엘라스틴, 글리코스아미노글리칸 등의 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 피부를 촉촉하게 유지시켜 주름을 예방하고 피부가 건조해지는 것을 예방 및 개선시킬 수 있다.

도1a 내지 도1c는 무모생쥐에서 표피두께의 변화에 있어서, 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물을 처리한 결과를 나타내는 사진으로서, 도1a는 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유하지 않은 조성물로 처리한 대조군을 나타내고, 도1b는 질경이 전초 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을, 도1c는 질경이 종자 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을 나타낸다.

도 2a 내지 도 2c는 본 발명에 의한 조성물의 무모생쥐에서의 콜라겐 생합성 효능을 나타내는 사진들로서, 도 2a는 질경이 전초 추출물 또는 질경이 종자 추출물을 함유하지 않은 조성물로 처리한 대조군을 나타내고, 도 2b는 질경이 전초 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을, 도 2c는 질경이 종자 추출물을 함유한 조성물로 처리한 실험군을 나타낸다.

도 3은 본 발명에 의한 조성물의 주름 개선 효과를 나타내는 그래프이다.

Claims (12)

1. 질경이 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 질경이 추출물은 플란타고 에이시아티카(Plantago asiatica)의 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 질경이 종자의 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 질경이 전초의 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 질경이 종자의 추출물 및 질경이 전초의 추출물의 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 전체 조성물 중에 0.001 내지 10중량% 함유된 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 질경이 추출물은, 전체 조성물 중에 0.01 내지 5중량% 함유된 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 보습용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 염증 조절용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 두께를 두껍게 하기 위한 피부세포 증식 촉진용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 탄력 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.