KR101073284B1

KR101073284B1 - 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR101073284B1
Application number: KR1020040031727A
Authority: KR
Inventors: 김수남; 강학희; 이종찬; 김지현; 이병곤; 장이섭
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2004-05-06
Filing date: 2004-05-06
Publication date: 2011-10-12
Also published as: KR20050106710A

Abstract

본 발명은 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물 중 1종 이상을 함유하는 피부 외용제에 관한 것이다. 본 발명에 의한 피부 외용제는 주름 개선, 탄력 개선의 효과가 뛰어나며, 자외선에 의한 피부의 미세염증 상태를 조절하여 홍반 괴사 등을 방지함으로써 피부를 보호할 수 있는 효과가 있으며, 부작용이 없는 장점이 있다.

검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물, 주름 개선, 피부 탄력, 미세염증 조절

Description

피부 외용제 조성물{A composition for skin external application }

본 발명은 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 콩과 (Leguminosae) 식물인 검은콩의 외피를 포함한 씨 및 그 밖의 동속 식물에서 적절한 용매 배합으로 추출하여 얻은 추출물; 참깨과 (Pedalidaceae) 식물인 검은깨의 외피를 포함한 씨 및 그 밖의 동속 식물에서 적절한 용매 배합으로 추출하여 얻은 추출물; 및 화본과 (Gramineae)에 속하는 검은쌀의 외피를 포함한 씨 및 그 밖의 동속 식물에서 적절한 용매 배합으로 추출하여 얻은 추출물; 중 1종 이상을 함유하는 피부 외용제에 관한 것이다.

인간의 피부는 시간이 지남에 따라, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 외적 스트레스가 증가하여, 전체적으로 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되고, 탄력이 감소될 뿐 아니라, 기미, 주근깨 및 검 버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

피부에 있어서, 주름, 탄력 상실, 피부 건조증 등의 증상들은, 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산, 프로테오글리칸, 글리코스아미노글리칸, 피브로넥틴 또는 당단백질 등의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하고, 수분과 결합할 수 있는 능력이 저하되어, 그 결과 피부를 구성하는 기질물질이 감소하고, 피부의 수분함유능력이 상실되어 나타나게 된다.

한편, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는 내적 및 외적 자극에 의하여, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)인 종양괴사인자 알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α), 인터루킨-1베타 (IL-1β, interleukin-1β) 또는 프로스타글란딘(prostaglandin)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2 (Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하는 것으로 알려져 있다.

이를 방지하기 위하여, 피부 세포를 증식시키거나 피부를 구성하는 기질물질을 증가시킴으로써 피부를 두껍게 할 수 있는 물질; 피부를 구성하는 기질 물질인 콜라겐을 분해하는 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성을 억제할 수 있는 물질; 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제할 수 있는 물질; 종양괴사인자의 생합성을 억제할 수 있는 물질; 피부 섬유아세포에서의 트로포엘라스틴 및 피브릴린 생성을 촉진하는 물질; 등을 개발한다면, 주름, 탄력 상실, 피부 건조증 등의 피부의 제증상을 완화시킬 수 있다.

한편, 검은콩, 검은깨, 검은쌀에 대한 종래 기술들을 살펴보면, 대부분 건강보조식품 등 식음료에 관한 것들로서 "항고혈압기능성 식품(한국특허 81385호; 공고번호 1994-0010258호)", "검정콩을 포함하는 차 및 그의 제조방법 (한국공개특허공보 2003-0091081호)", "발효흑미 (맵쌀흑미, 찰흑미) 혹은 발효흑미와 발효백미를 혼합한 쌀에 검은 콩과 검은 깨 분말 혹은 성분이 혼합된 검은 기능성 쌀 (한국공개특허공보 2003-0086518호)", "비만과 흡연으로 인한 폐질환을 위한 건강보조식품 (한국공개특허공보 2003-0082157호)", "지방간 치유 생식 식품 및 그 제조 방법 (한국공개특허공보 2002-0025143호", "당뇨환자의 혈당조절 생식식품 및 그 제조방법 (한국공개특허고보 2002-0018844호)", "노화예방, 정력보강, 간과 신을 돕고 허손을 보호 근력튼튼, 안색이 아름답고 흰머리 예방 (한국공개특허공보 2002-0090077호)", "인삼성분, 쌀눈 검은 콩 및/또는 쥐눈이 콩이 첨가된 씨리얼 식품 및 그 제조방법 (한국공개특허공보 2002-0080694호)", "국소 도포제 및 환약으로된 발모제의 제조방법 (한국공개특허공보 2001-0106339호)", "혈압강하 및 고지혈증 개선용 한방생약의 식품음료 조성물 (한국공개특허공보 2001-0055194호)" 등이 있고, 피부에 대한 특허를 살펴보면, "검은콩 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (한국특허 0281011호)", "피부미용팩과 그 제조방법 (한국공개특허공보 2004- 0007964호)" 등이 있다.

그러나, 검은콩, 검은깨 및 검은쌀에 대하여 피부주름 개선, 탄력개선외에도 미세염증 제어의 용도가 있음이 밝혀진 바는 없다.

이에 본 발명자들은 주름 개선, 탄력 개선의 효과가 뛰어나며, 자외선에 의한 피부의 미세염증 상태를 조절하여 홍반 괴사 등을 방지함으로써 피부를 보호할 수 있는 효과가 있는 부작용이 없는 피부외용제를 개발하고자 연구하였다.

그 결과, 본 발명자들은 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물을 함유하는 경우 이러한 효과를 나타낼 수 있을 뿐 아니라, 상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물 중 적어도 1종 이상을 함유하거나 또는 2종 이상을 혼합하여 함유할 경우 주름 개선, 탄력 개선, 피부 미세염증 조절 및 홍반 괴사 방지 효과가 더 증진됨을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물의 단독 또는 혼합물을 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 항염증 또는 염증조절 효과를 갖는 피부 염증용 외용제 조성물을 제공하는 것이다. 즉, 피부의 미세 염증 상태를 조절하여, 자외선 등에 의한 홍반, 피부괴사 등을 방지할 수 있는 피부 외용제를 제공하는 것을 목적으로 한다. 아울러, 진피에서 콜라겐, 엘라스틴, 글리코스아미노글리칸 등의 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타낼 수 있는 피부 외용제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물 중 1종 이상을 함유하는 피부 외용제 조성물을 이용하여 피부를 보호하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물의 혼합물 중 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다. 본 발명에 의한 상기 피부 외용제 조성물은, 바람직하게는, 피부 염증용으로서 항염증용 또는 염증조절용으로 적용될 수 있다.

보다 바람직하게는, 본 발명에 의한 상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물은 2종 이상의 혼합물 형태로 외용제에 함유될 수 있다. 또한, 상기 외용제 조성물은 피부 미세염증 조절 또는 홍반 괴사 방지용으로 적용될 수 있을 뿐 아니라 주름 개선, 탄력 개선용으로 적용될 수 있다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 검은콩 추출물은 바람직하게는, 글리신 맥스(Glycine max)의 추출물인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 검은깨 추출물은 바람직하게는, 세사뭄 인디쿰(Sesamum indicum)의 추출물인 것이 좋으며, 상기 검은쌀 추출물은 바람직하게는, 오리자 사티바(Oryza stiva)의 추출물인 것이 더욱 좋다.

상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물들은 각각 단독으로 사용될 수도 있지만 혼합하여 사용할 경우 그 효과가 더 탁월한데, 사용의 형태 및 방법은 필요에 따라 조절할 수 있다.

상기한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 유효성분인 상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물은 단독으로 또는 이들의 혼합물의 형태로 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 함유되는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 5중량%로 함유될 수 있다.

상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물의 사용량은 생체외(in vitro) 실험 및 생체내(in vivo) 실험을 근거로 하여 결정된 것으로서, 추출물의 함량이 0.001중량% 미만이면 활성 성분으로서 작용을 기대하기 어려우며, 10중량%를 초과하면 제형 안정성에 문제가 생길 수 있다. 이러한 관점에서 0.01~5중량%이 더욱 바람직하다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 피부 탄력 개선용, 피부 주름 개선용, 콜라겐을 포함하는 피부단백질 생성 증진용 또는 피부 염증 조절용으로 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서는 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은콩 추출물 중 적어도 1종 이상을 사용하여 주름, 탄력, 자외선에 의한 홍반, 피부괴사 등의 증상을 전반적으로 효과적으로 개선할 수 있다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있다.

또한, 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 있어서, 검은콩 추출물은 콩과 동종에 속하는 콩의 추출물로써 콩의 외피를 포함하는 콩 전체의 추출물임을 특징으로 한다.

본 발명에 사용된 검은콩은 콩과(Leguminosae)에 속하는 일년생 초본으로 원 산지는 중국 동북지방에서 화베이에 걸친 지역이고, 전세계적으로 재배하고 있다. 검은 콩에는 수분 8.6%, 단백질 40%, 지방 18%, 섬유 3.5%, 회분 4.6%, 펜토산 4.4%, 당분 7% 등이 함유되어 있고, 이소플라본인 제니스타인, 다이드제인이 함유되어 있고, 특히 외피에는 항산화효과가 있는 안토시아닌 등의 색소성분이 다량 함유되어 있다.

또한 본 발명에 의한 검은깨 추출물은 참깨과 동종에 속하는 검은깨의 추출물로써 검은깨의 외피를 포함하는 검은깨 전체의 추출물임을 특징으로 한다.

본 발명에 사용된 검은깨는 참깨과(Pedalidaceae)에 속하는 일년생초본으로 원산지는 인도 또는 아프리카 열대지방이고 유럽아시아 등에 재배된다. 한방에서는 종자를 호마인(胡麻仁) 또는 흑지마(黑芝麻)라는 약재로 쓰는데, 피부 점막의 회복을 촉진하고, 혈액의 콜레스테롤 수치를 줄이며, 장운동을 활발하게 한다고 한다. 검은깨에 함유된 성분은 올레인산(oleic acid), 리놀렌산(linolenic acid), 팔미트산(palmitic acid), 스테아린산(stearic acid), 세사민(sesamin), 세사몰(sesamol) 등이 있다.

본 발명에 있어서, 검은쌀 추출물은 화본과 동종에 속하는 검은쌀의 추출물로서 검은쌀의 종자, 외피(현미형태의 외피), 씨 또는 이들의 혼합물임을 특징으로 한다.

본 발명에 사용된 검은쌀은 화본과 (Gramineae)에 속하는 일년생 초본으로 원산지는 동인도이며, 동남아시아, 아프리카, 아메리카 등지에서 재배된다. 흑미 또는 흑향미로 불리며 중국에서는 오래 전부터 자양강장이나 노화방지에 효과가 있는 것으로 알려져 왔다. 검은쌀은 어린이와 임산부의 빈혈에 효과가 있으며, 검정 색소인 안토시아닌(anthocyanin)에 항암작용이 있음이 확인된 바도 있다. 검은쌀은 또 고혈압, 당뇨병 등 각종 성인병과 변비에도 효과가 있는 것으로 알려져 왔다.

이하, 제조예, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서는 검은콩, 검은깨 및 검은쌀의 추출물을 제조하는 것을 제조예로 하였다. 아울러, 상기 추출물은 단독으로 사용될 수 있지만 혼합하여 사용될 수도 있기 때문에, 이들을 혼합한 혼합추출물을 제조하는 경우는 비록 추출물의 제조행위에 해당하기는 하지만 상기 제조예와 구별하기 위하여 실시예로 하였다.

[제조예 1] 검은콩 추출물의 조제

국내에서 "검은콩"이라는 이름으로 시판되는 건조된 검은콩 500g에 중량(Kg)비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃ 에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 후, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다. 참고로 본 발명에 의한 콩 추출물의 경우 유효성분이 단백질만이 아니기 때문에 특별히 저온에서 추출할 필요가 없이 80℃에서 추출할 수 있는 것이다.

[제조예 2] 검은깨 추출물의 조제

국내에서 "검은깨"라는 이름으로 시판되는 건조된 검은깨 500g에 중량(Kg)비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 후, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.

[제조예 3] 검은쌀 추출물의 조제

국내에서 "검은쌀"이라는 이름으로 시판되는 건조된 검은쌀 500g에 중량(Kg)비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃ 에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 후, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.

[실시예 1∼4]

상기 제조예 1, 2 및 3에서 제조된 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물을 동량(10g)을 취한 후 이들을 각각 혼합하여 각각 실시예 1(검은콩 추출물+검은깨 추출물), 실시예 2(검은콩 추출물+검은쌀 추출물), 실시예 3(검은깨 추출물+검은쌀 추출물) 및 실시예 4(검은콩 추출물+검은깨 추출물+검은쌀 추출물)이라고 하였다.

[시험예 1] 피부세포의 콜라겐 생합성 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양한 후, 상기 제 조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4의 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm의 농도로 함유하고 있는 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확해서(harvest) ELISA (Takara MK101) 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 1에 나타내었다.

농도 (ppm)	콜라겐 생합성(%)
농도 (ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	128	123	129	138	137	138	145
1	117	116	119	128	126	129	134
0.1	106	105	108	118	117	117	124
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 1로부터, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물은 콜라겐 생합성을 농도 의존적으로 증가시킴을 알 수 있다.

[시험예 2] 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 자외선 A를 15J/cm²의 세기로 조사한 후, 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4에 따른 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm의 농도로 함유하고 있는 배지로 교체하 였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 자외선 A만 조사하여 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서 (harvest) ELISA (AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 2에 나타내었다.

농도 (ppm)	타입I 콜라게나제 생합성(%)
농도 (ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	53	54	51	40	39	40	26
1	74	76	79	63	62	60	48
0.1	96	98	99	85	83	81	65
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 2으로부터, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물은 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴을 알 수 있다.

[시험예 3] 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선A를 15J/cm²로 조사한 후, 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4에 따른 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 자외선 A만 조사하여 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서 웨스턴블롯 (Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 덴시토미터(densitometer)로 측정한 비교치를 표 3에 나타내었다.

농도 (ppm)	COX-2 생합성(%)
농도 (ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	36	34	35	22	23	22	15
1	59	52	53	45	44	45	30
0.1	85	84	89	72	75	73	52
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 3로부터 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물은 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜, COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E₂ (PGE₂)에 의한 피부발적, 동통, 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 4] 자외선에 의한 종양괴사인자 α의 생합성 억제 효능 측정

인체 각질형성세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선B를 30mJ/cm²로 조사한 후, 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4의 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 3시간 후 세포를 수확해서 (harvest) ELISA (Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF α)의 양을 정 량하였다. 그 결과는 자외선 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 4에 나타내었다.

농도 (ppm)	TNF α 생합성(%)
농도 (ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	42	45	48	33	34	36	20
1	63	66	65	45	48	49	42
0.1	94	89	92	75	73	74	65
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 4로부터, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물은 자외선에 의한 종양괴사인자알파의 생합성을 농도 의존적으로 감소시키므로, 자외선으로 인해 발생할 수 있는 피부 염증, 피부 기질물질의 감소, 탄력 저하, 주름 형성 등을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 5] 미세염증인자에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 하고, 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4에 따른 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 자외선 A만 조사하여 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서 (harvest) ELISA (AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과는 TNF α 대조군을 100으로 하여 비교치를 표 5에 나타내었다.

농도(ppm)	타입I 콜라게나제 생합성(%)
농도(ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	54	47	52	43	42	40	32
1	76	66	72	65	55	60	54
0.1	96	87	89	84	78	79	72
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 5로부터 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물은 미세염증인자인 TNF-α에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴을 알 수 있다.

[시험예 6] 미세염증인자에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁵ 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α) 20ng/ml 되게 하고, 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4를 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 자외선 A만 조사하여 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서 (harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 덴시토미터(densitometer)로 측정한 비교치를 표 6에 나타내었다.

농도 (ppm)	COX-2 생합성(%)
농도 (ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	35	31	38	24	26	25	10
1	58	51	56	48	45	47	28
0.1	92	87	89	81	77	78	60
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 6으로부터, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물이 미세염증인자(TNF α)에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E₂ (PGE₂)에 의한 피부발적, 동통, 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 7] 미세염증인자에 의한 콜라겐 분해 억제 효능 측정

인체 섬유아세포를 10⁴개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자알파 (TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 가한 후 상기 제조예 1 내지 3 및 실시예 1 내지 4의 추출물을 0.1ppm, 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 배양한 것을 대조군으로 하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA (Takara MK101) 방법을 사용하여 분해되지 않고 남아있는 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 측정한 비교치를 표 7에 나타내었다.

농도(ppm)	프로콜라겐 양(%)
농도(ppm)	제조예 1	제조예 2	제조예 3	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
10	91	90	89	95	97	94	100
1	82	79	77	86	87	85	94
0.1	70	68	65	76	79	75	89
종양괴사인자	50	50	50	50	50	50	50
대조군	100	100	100	100	100	100	100

상기 표 7로부터, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물 또는 이들의 혼합물이 TNF α에 의한 콜라겐의 분해를 효과적으로 제어할 수 있고 농도 의존적으로 제어함을 알 수 있다.

[시험예 8] 사람에서의 주름개선효과

본 발명의 조성물에 의해서 주름개선 에 대한 효과를 확인하기 위하여 하기 표 8의 조성비에 따라 외용제를 영양크림의 제형으로 제조하여, 각각 제형예 1∼7 이라고 하였다.

배합성분	제형예 1 (%)	제형예 2 (%)	제형예 3 (%)	제형예 4 (%)	제형예 5 (%)	제형예 6 (%)	제형예 7 (%)	비교예 1(%)
정제수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100
검은콩 추출물(제조예 1)	0.1	-	-	-	-	-	-	-
검은깨 추출물(제조예 2)	-	0.1	-	-	-	-	-	-
검은쌀 추출물(제조예 3)	-	-	0.1	-	-	-	-	-
실시예 1	-	-	-	0.1	-	-	-	-
실시예 2	-	-	-	-	0.1	-	-	-
실시예 3	-	-	-	-	-	0.1	-	-
실시예 4	-	-	-	-	-	-	0.1	-
식물성 경화유	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60
글리세롤 스테아레이트	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
스테아릴 알코올	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 & 소디움 스테아로일 락틸에이트	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
아라키딜 베헤닐 알코올 & 아라키딜글루코사이드	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
세틸아릴 알코올 & 세테아릴글루코사이드	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤올레이트 & 프로필렌글리콜	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
카프릴릭/카르릭 트리 글리세라이드	11.00	11.00	11.00	11.00	11.00	11.00	11.00	11.00
사이클로메디콘	6.00	6.00	6.00	6.00	6.00	6.00	6.00	6.00
방부제, 향	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량
트리에탄올 아민	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1

상기 표 8의 비교예 1과 제형예 1 내지 7에 대하여 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다.

30대 여성 70명을 각각 비교예 1 및 제형예 1 내지 7의 8개 군에 대하여 10명씩 8조로 나누어 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 visiometer (SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany) 로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 하기 표9 에 나타내었다. 하기 표의 값은 도포 8주 후의 각각의 parameter 값에서 도포 전 parameter 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다.

사용 8주 후 임상 결과	R1	R2	R3	R4	R5
비교예 1	0.28	0.27	0.22	0.04	0.04
제형예 1	-0.19	-0.18	-0.12	-0.03	-0.03
제형예 2	-0.18	-0.17	-0.11	-0.03	-0.03
제형예 3	-0.19	-0.18	-0.12	-0.03	-0.03
제형예 4	-0.21	-0.20	-0.13	-0.04	-0.04
제형예 5	-0.22	-0.21	-0.14	-0.04	-0.04
제형예 6	-0.21	-0.20	-0.13	-0.04	-0.04
제형예 7	-0.23	-0.22	-0.14	-0.04	-0.04

R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값

R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1 값들의 평균

R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고치

R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값

R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값

상기 표 9에서 보는 바와 같이, 제형예 1 내지 7, 특히 제형예 4 내지 7의 외용제 조성물은 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 9] 사람 피부 섬유아세포에서의 트로포엘라스틴 및 피브릴린 생성 측정

검은콩 추출물, 검은깨 추출물 또는 검은쌀 추출물이 사람 피부에서 탄력에 중요한 역할을 하는 트로포엘라스틴과 피브릴린의 생성을 증가시키는지를 확인하기 위하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 피부에서 분리한 섬유아세포를 24웰형 세포배양 플레이트의 각 웰당 5×10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 부착시킨 세포에 시험물질을 아래 표 10의 농도대로 처리한 후, 2일이 지난 다음, 배지를 수확(harvest)했다. 상기 추출물들로 처리하지 않고 배양한 것을 대조군으로 하였다. 수확한 배지 중의 트로포엘라스틴 및 피브릴린을 정량하는 방법은 효소면역분석법(ELISA)을 사용하였다. 대조군을 100으로 보고 이에 대한 상대적인 비율로 나타내었다.

시험물질	농도(ppm)	트로포엘라스틴 생성량(%)	피브릴린생성량(%)
검은콩 추출물 (제조예 1)	10	125	123
	1	117	115
	0.1	108	106
검은깨 추출물 (제조예 2)	10	130	126
	1	120	119
	0.1	112	109
검은쌀 추출물 (제조예 3)	10	128	127
	1	118	117
	0.1	110	109
추출물 혼합 (실시예 1)	10	138	135
	1	128	126
	0.1	119	118
추출물 혼합 (실시예 2)	10	137	136
	1	128	127
	0.1	120	117
추출물 혼합 (실시예 3)	10	139	137
	1	129	127
	0.1	121	120
추출물 혼합 (실시예 4)	10	150	149
	1	138	138
	0.1	127	126
대조군		100	100

상기 표10에 나타난 바와 같이, 각 시험물질의 농도에 의존적으로, 대조군에 비해 검은콩 추출물, 검은깨 추출물, 검은쌀 추출물의 혼합물을 처리한 경우 트로포엘라스틴 및 피브릴린이 많이 합성된 것을 알 수 있었다.

[시험예 10] 인체에서 피부 탄력 개선 측정

상기 표 8과 같이 제조한 영양크림의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다.

구체적으로, 온도 24∼26℃, 습도 75% 조건에서 30세 이상의 건강한 여성 80명을 8개조로 나누고, 각 조에 상기 표 8의 비교예 1과 제형예 1 내지 7의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기 (Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 표 11에 나타내었다. 표 11의 결과치는 Cutometer SEM 575의 ΔR8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽)) 값으로 기재하였는데, 상기 기계에서 R8 값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.

실험제품	피부탄력효과
비교예 1	0.11
제형예 1	0.41
제형예 2	0.42
제형예 3	0.41
제형예 4	0.43
제형예 5	0.44
제형예 6	0.44
제형예 7	0.45

상기 표 11에 나타난 바와 같이, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 또는 검은쌀 추출물이 함유된 제형예 1 내지 7의 조성물을 도포한 군에서는 비교예를 도포한 군에 비해서 피부탄력성이 더 증가되었다.

한편, 상기 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다. 그 결과는 하기 표 12에 나타내었다. 설문조사를 통해서도 본 발명에 의한 조성물인 제형예 1 내지 7을 도포한 경우 피부탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었다.

도포군	응답자 수 (인)
도포군	매우 양호	양호	보통	미흡
비교예	1	3	3	3
제형예 1	3	4	3	0
제형예 2	3	5	2	0
제형예 3	3	5	2	0
제형예 4	3	6	1	0
제형예 5	3	6	1	0
제형예 6	4	5	1	0
제형예 7	5	4	1	0

[시험예 11] 사람 피부 섬유아세포의 글리코스아미노글리칸 생성 측정

사람 피부의 진피에서 콜라겐, 엘라스틴 이외의 나머지 부분을 채워주고, 피부를 지지하고, 진피에서 수분을 잡아주는 역할을 하는 글리코스아미노글리칸(GAG)을 정량하였다.

먼저 사람 섬유아세포를 페놀레드가 함유되지 않은 배지와 챠콜(charcoal) 처리한 5% 우태아혈청을 사용하여 24웰형 세포 배양 플레이트에 5×10⁴ 개를 넣고 배양하였다. 18시간 후 하기 표 13의 농도대로 시험물질을 처리하고, 다시 18시간 후에 상등액 중에 분비된 GAG의 양을 측정하였다. 분석에는 영국의 바이오칼라(Biocolor)사에서 제작한 블리스칸 글리코스아미노글리칸 분석 키트(Blyscan Glycosaminoglycan assay kit)를 사용하였다. GAG 측정 원리는 sulfated GAG와 프로테오글리칸(proteoglycan)에 (+)전하를 띤 1,9-디메틸 메틸렌 블루(1,9-dimethyl methylene blue)가 결합하여 침전이 생기고 이 침전을 녹여내어 정량하는 것이다. 하기 표13의 결과치는, 대조군을 100으로 보고 이에 대한 상대적인 비율로 나타내었다.

시험물질	농도(ppm)	글리코스아미노글리칸 생합성(%)
검은콩 추출물 (제조예 1)	10	135
	1	124
	0.1	113
검은깨 추출물 (제조예 2)	10	138
	1	127
	0.1	119
검은쌀 추출물 (제조예 3)	10	138
	1	127
	0.1	119
추출물 혼합 (실시예 1)	10	144
	1	135
	0.1	123
추출물 혼합 (실시예 2)	10	146
	1	136
	0.1	125
추출물 혼합 (실시예 3)	10	145
	1	136
	0.1	124
추출물 혼합 (실시예 4)	10	150
	1	139
	0.1	131
대조군		100

상기 표13에 나타난 바와 같이, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물과 검은쌀 추출물을 처리한 경우에 대조군과 비교해 글리코스아미노글리칸이 많이 합성되었음을 알 수 있었다.

이하, 상기의 시험예의 결과를 근거로 하여, 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물 중 1종 이상을 함유함으로써, 피부 주름 및 탄력을 개선하고, 자외선에 의한 홍반 및 피부괴사를 예방하는 여러 가지 제형의 화장료의 조성을 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물이 하기의 예에만 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
실시예 4	0.1
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)

배합성분	중량%
정제수	To 100
실시예 1	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예3] 영양크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
실시예 4	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
푸틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예4] 마사지크림

배합성분	중량%
정제수	To 100
실시예 2	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[제형예5] 팩

배합성분	중량%
정제수	To 100
실시예 3	0.1
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
핑이지-12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량

이상에서 설명한 바와 같이 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물 중 1종 이상을 함유하는 피부 외용제 조성물은 진피에서 콜라겐, 엘라스틴, 글리코스아미노글리칸 등의 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타내며, 또한 자외선에 의한 피부의 미세 염증 상태를 조절하여 홍반, 피부괴사 등을 방지하고, 탄력 있고 건강한 피부 상태를 유지시킬 수 있다.

Claims

검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 항염증용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량% 함유된 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물의 혼합물을 함유하는 피부 주름 개선능 및 피부 탄력 개선능 피부 외용제 조성물.
제 3항에 있어서, 상기 검은콩 추출물, 검은깨 추출물 및 검은쌀 추출물의 혼합물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량% 함유된 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.