KR100281011B1 - 검은콩 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 검은콩에서 피부개선효과를 갖는 추출물을 얻기 위하여 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 용매에 검은콩을 침지시켜 검은콩의 추출물을 얻고자 하는 발명이다.

검은콩이 피부에 좋다는 사실은 이미 알려진 바이기는 하나, 이를 화장품으로 적용한 사례는 없었으므로, 본 발명은 검은콩에서 피부의 개선효과를 갖는 유효성분을 추출하여 이를 화장품에 혼합하여 상품화하고자 한다. 본 발명의 추출물은 항산화작용, 미백효과가 뛰어나, 피부개선의 효과를 갖는다.

Description

검은콩 추출물을 함유하는 화장료 조성물

본 발명은 피부 화장료에 관한 것으로 좀더 상세하게는 검은콩으로부터 피부의 개선 효과, 항산화 효과가 뛰어나고 안정성 면에서도 우수한 액상의 추출물을 추출하는 방법 및 그 추출물을 함유하는 피부 화장료에 관한 것이다.

피부색은 인종, 계절, 성별에 따라 달라지며, 신체의 부위에 따라 다르다. 또한, 피부의 두께, 헤모글로빈, 카로티노이드와 같은 색소도 영향을 주지만, 대부분의 피부색을 결정하는 것은 멜라노사이트에서 생긴 멜라닌에 의해 영향을 받는다. 멜라닌 생성세포에서 멜라닌의 생성은 티로신이라는 물질이 티로시나제라는 효소에 의해 도파, 도파크롬 등으로 변하는 복잡한 화학적 변화에 의해 멜라닌이라는 흑색색소가 생기는 것에 기인한다.

흑색색소의 피부침착에 의한 기미, 주근깨는 연한 갈색 내지는 암갈색 혹은 흑색의 불규칙한 모양의 색소침착이 피부에 나타나는 것으로, 생성원인은 태양광선에 많이 노출되거나 임신 중 또는 폐경기에 흔히 발생하는데, 출산후에는 보통 서서히 소실되나 그대로 지속되기도 한다. 경구 피임약을 복용하는 경우에 나타나는 예도 있으며, 그 외 난소 종양 등이 있을 때나 다른 내분비질환에 의해서도 발생한다.

이러한 기미, 주근깨가 생기는 것은 피부세포 중 멜라닌 생성세포가 위와 같은 원인에 의해 활성화되어 피부 속의 티로신이라는 아미노산이 티로시나제 효소에 의해 산화과정으로 생기는 멜라닌 흑색 색소의 축척에 의한 것이다.

치유방법으로는 태양광선을 피하고 티로시나제 효소의 활성을 억제시켜 더 이상의 멜라닌 색소가 생성되지 않도록 하며, 이미 생긴 기미, 주근깨는 각질을 빨리 제거시킴으로써 피부를 맑고 투명하게 해 줄 수 있다.

티로시나제의 활성을 억제시키는 미백제로는 박추출물이나 비타민 C 등을 피부에 공급하는 것이며, 오래된 각질을 제거하기 위해서는 AHA(Alpha Hydroxy Acid)와 같은 과일산(포도산, 사과산, 구연산, 주석산 등)을 적당히 사용함으로써 해결할 수 있다.

일반 화장료에 있어서 종래부터 천연물로부터 추출한 원료를 함유하는 화장품이 개발되어 오고 있는 바, 인삼추출물, 효모추출물, 송이버섯 추출물 등의 추출물, 콜라겐 등의 천연 고분자, 아미노산, 비타민 등의 피부부활제 혹은 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 등의 보습제등이 그 예로서 피부손상의 방지 및 개선을 목적으로 피부화장료에 이용되어 오고 있고 천연물질의 유효성분을 화장품에 첨가하는 기술에 관한 연구는 계속되고 있다.

콩은 단백질 및 지방의 함량이 높아 식용으로서의 가치가 높고 특히 검은콩은 단백질 및 지방의 공급원으로서 국민 영양상 매우 중요한 위치를 차지해온 것이 사실이다 뿐만 아니라, 한방 가정요법 대전에 의하면 검은콩은 고운 목소리, 고운 피부를 만드는데 대단히 효과가 높은 식품으로 일년 내내 생식하면 좋다는 기록이 있으며 또한, 검은콩은 신진대사를 돕는 아스파라긴, 혈액을 정화하는 레시틴과 우레아제를 비롯하여 각종효소를 많이 함유하여 간장과 신장의 기능을 강화시키고 이렇게 간장과 신장의 기능이 강화되면 혈액이 정화되고 혈관도 생성하게 되므로 얼룩과 여드름도 치료되어 고운 피부가 된다.

그러나, 이러한 다양한 효능을 갖고 특히 피부의 상태를 향상시키는 기능을 갖는 검은콩에 있어서 이를 화장품으로서 피부에 직접 적용하는 연구는 아직 보고된 바 없다.

따라서, 본 발명은 검은콩으로부터 각종 피부 손상 방지 및 개선효과가 뛰어나고 안정성 면에서도 우수한 액상의 유효성분을 추출하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 의한 액상 추출물을 함유하여 피부잔주름 예방 및 항산화 효과등을 나타내는 화장료를 제공하고자하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 검은콩의 50-95%에탄올 수용액 추출물 또는 1,3-부틸렌글리콜 및 프로필렌 글리콜 및 물의 혼합액에 검은콩을 침지시켜 액상의 추출물을 수득한다.

검은콩은 국내의 농가에서 일반적인 방법으로 노지재배한 것을 사용하였으며 시료로 사용하기 위하여 검은콩이 완전히 익은 것을 채취하여 건조하였다.

액상의 추출물은 화장료에 적용가능하며 이때 본 발명의 액상 추출물의 함유량은 화장료의 0.05-30중량%인 것이 바람직하다.

너무 적은 함량으로는 효과를 기대하기 어렵고 그 이상 배합 시라도 그 효과가 크게 증가하지 않는다.

본 발명의 액상 추출물은 물에 쉽게 혼화되고 유지와 유기성 용매에는 혼화되기 어렵지만 현탁상태에서도 화장료에의 배합은 가능하고 효과에 대하여 어떠한 영향도 주지 아니한다. 본 발명에 의한 액상의 추출물을 화장료에 배합시 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분들 예컨대, 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 향료 등을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다. 본 발명에서 피부 화장료는 피부에 사용하는 것으로서 예를 들면 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 화장료의 형태일 수 있으며, 피부노화방지 화장료로의 응용이 가능하다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만 하기 예에 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

검은콩(속명:Glycine max Merr)은 국내에서 일반적으로 재배된 검은콩을 사용하였으며 시료로서 사용하기 위해 완전히 익은 검은콩을 채취하여 실온에서 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨다.

검은콩을 추출하기 위한 용매로는 화장료에서 일반적으로 사용할 수 있는 용매를 사용할 수 있는데, 본 실시예에서는 에탄올, 1,3-부틸렌, 프로필렌 글리콜을 단독으로 사용하거나 이들과 물의 혼합액을 사용한다.

추출 방법은 각 용매에 검은콩을 5-80%로 넣고 실온 내지 60℃에서 최소한 30일간 침지시키는데 실온 이하의 온도에서는 유효 성분이 거의 나오지 아니하고 60℃이상에서는 단백질 등의 성분의 변성으로 추출물이 엉키는 현상이 나타나 바람직하지 못한 결과가 나온다.

침지 시킨 후 500메쉬 되는 여망으로 여과한 후 여과액을 0.45마이크로미터 여과지로 제균 여과하여 시료로 사용한다.

검은콩을 실온 내지 60℃에서 침지 추출시 온도를 1일 간격으로 순환시키 것이 온도를 고정시키는 것 보다 추출물의 효과가 높게 나타났다.

[실시예 2]

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합하여 용해한다. 실시예 1의 액상 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻는다.

[실시예 3]

세틸알콜 1.2g, 스쿠알렌 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g, 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고 실시예 1의 액상 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열하여 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수/유중계형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻는다.

[실시예 4]

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌 솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민E아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1의 액상 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선의 효과가 있는 미용액을 얻는다.

검은콩의 액상 추출물이 피부에 미치는 각종의 효과를 알아보기 위한 시험예는 하기와 같다.

[시험예 1]

본 실험은 본 발명에 의한 액상 추출물의 효능 효과를 측정하기 위해 항산화 효과를 측정한 것이다.

시험개요:

본 발명에서는 항 산화 효과를 측정하기 위하여 크산틴과 크산틴옥시다제에 의하여 생성하는 활성 산소가 본 발명에 의한 추출물에 의하여 제거되는 효과, 즉 활성 산소효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성 산소를 생성시키고 이 활성 산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitroblue tetrazolium: NBT)과 반응하여 이것에 의하여 생성하는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성 산소량을 측정한다.

시험시약:

가) 0.05M Na₂CO₃완충액(분자량 105.99) 2.4ml

탄산나트륨 5.25g(50mM)을 정제수에 용해한 용액과 50mM NaHCO₃(분자량 84.01)용액을 혼합하여 pH 10.2로 한다.

나) 3mM 크산틴용액 0.1ml

크산틴(분자량 152.11) 45.6mg을 물에 용해하여 10m1로 한다.

다) 3mM EDTA 용액 0.1ml

에틸렌디아민4초산나트륨(분자량 60.1)을 증류수에 용해하여 3mM로 한다.

라) 0.15% BSA용액 0.1ml

BSA(Fraction Y, Powder, Sigma) 15mg을 증류수에 용해하여 10m1로 한다.

마) 0.75mM NBT용액 0.1ml

니트로불루 테트라 졸리움(분자량 817.65) 61.32mg을 증류수에 용해하여 100m1로 한다.

바) 크산틴옥시다아제 용액 0.1ml

크산틴 옥시다제를 증류수로 약 100배로 희석하고 측정조작에서 공시험의 흡광도가 0.2-0.23의 범위에 들도록 한다. 흡광도의 변화가 A56O=0.3/20분이 되게 한다.

사) 6mM 염화 구리용액 0.1ml

염화동(분자량 134.55) 102.29mg을 증류수에 용해하여 100m1로 한다.

측정 방법:

1) 바이엘 병에 가, 나, 다, 라, 마를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.

2) 바를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.

3) 그후 사를 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

4) 공 시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

5) 공 시험용액은 바 대신 증류수를 사용하여 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

항산화 효과는 다음과 같이 산출한다.

억제율(%)=(1-(St-So)/Bt-Bo)×100

St：시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt：공 시험액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So：시료용액의 효소 미첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo：공 시험용액의 효소 미첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

본 실험에서 사용한 시료는 모두 같은 조건으로 추출하여 시험하였으며, 항산화 효과가 높다고 알려진 기존시료와 당사에서 조제한 시료를 시료 원액과 각 시료의 3%수용액을 가지고 실험한 것을 평균한 결과 값이다. 표 1은 각 시료의 항산화 효과에 대한 결과치로서, 본 발명의 액상 추출물에서 항산화 효과가 가장 크게 나타났다.

[시험예 2]

본 발명의 액상 추출물의 세포 증식 효과를 측정한 것이다.

시험방법:

본 발명의 액상 추출물의 세포 증식효과를 측정하기 위하여 MTT환원법으로 배양된 마우스 피부 섬유아세포의 세포 증식을 측정하고 이 작용을 다른 추출물과 비교하였다.

이 MTT 환원법은 세포내 미토콘드리아에 존재하는 NADH에 의하여 MTT가 환원되면 청색으로 발색하는 성질을 이용한 것으로 이 청색량이 미콘드리아의 양이나 대사 활성을 나타내는 것이다.

시약과 시험재료는 Eagle's MEM 배지, 소태아혈청(집코사제), 엠티디시약(시그마제)을 사용하였다. 또 PBS시약과 그외 일반시약은 시약특급을 사용했다. 세포는 NIH3T6를 사용하였으며, 배양을 위해서 세포는 5×10³세포/웰의 밀도가 되게 96웰 플레이트에 5% FBS함유 MEM배지에서 37℃, 14시간 배양하고 각 농도의 시료를 첨가한 0.5% FBS, MEM배지로 교환하고 3일째 다시 배지 교환한 후 MTT 시약을 처리하여 570nm 와 620nm의 흡광도 차이를 측정하였다. 이때, 블랭크의 흡광도 차이를 100으로 하고 그에 대한 흡광도 차이를 블랭크의 흡광도 차이에서 나누는 것으로 세포 증식율을 구했다.

시험결과:

표 2는 각 시료의 배지중 첨가 농도가 10%일때의 세포 증식율을 나타내었으며, 세포증식 효과가 우수한 것으로 알려진 같은 농도의 프라센타 추출액에 비하여 본 발명에 의한 액상 추출액의 세포 증식효과가 우수하였다.

[시험예 3]

본 발명의 액상 추출물의 피부색의 개선, 즉 미백효과를 측정 한 것이다.

시험시료:

시험시료는 시험예 1의 액상 추출물을 각각 다른 함량으로 나타낸 화장료이며, 비교 실험에 사용된 화장료는 크림으로서 조성은 표 3에 나타내었으며, 표 3에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하고 이것에 가)상을 가하여 예비유화후 호모 믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림을 조제한다.

시험대상:

20세-35세 여성 5명

시험방법:

표 3의 각 크림을 시험대상자 얼굴 오른쪽에 1일 2회 연속 1개월간 도포하였다.

결과측정:

시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상 분석기로 얼굴 색을 비교하여 가장 어두운 색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하였다.

표 3은 시험예 및 비교예의 조성을 나타낸다.

표 4는 시험예 B로 조성된 크림 및 비교예로 조성된 크림을 각각 피험자의 피부에 도포한 후 안면 피부색을 비교한 결과로서, 본 발명의 추출물을 함유한 크림을 도포한 결과 피부색 개선효과가 뚜렷이 나타났으며 시험예 A 조성의 크림을 도포시 개선효과가 가장 뚜렷하였고, 시험예 C 조성의 크림을 사용시 개선효과는 약간만이 나타났다.

[시험예 4]

본 발명의 검은콩 추출물과 대조군에 대한 미백효과를 대비하기 위해, 티로시나제라는 효소가 기능억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다. 티로시나제는 생체내에서 티로신이라는 물질이 산화되는 과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 시험예에서는 이 효소(시그마(미국))의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 보는 방법(Pomerantz S. H., The tyrosine hydoxylase activity of mammalian tyrosinase, J. Biochem., 24, 161-168(1956))을 응용해 미백효과로 판정하였다.

검은콩 추출물과 송이버섯 추출물 각각(원액, 10, 1, 0.1, 0.01의 증류수에 대한 부피/부피 퍼센트), 알부틴(1, 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001의 증류수에 대한 부피/부피 퍼센트)을 시료로 사용하여 티로시나제 활성 억제 효과를 조사하였다.

티로시나제에 대한 저해 활성은 시료 15μℓ를 마이크로플레이트(96 웰)에 넣고, 0.1M 인산 완충액(pH 6.86) 150μℓ, 1.5mM 엘-티로신 용액 25μℓ를 넣은 후, 2,380unit/mm 머쉬룸 티로시나제(0.05M 인산 완충액, pH 6.86) 7μℓ를 첨가하여 30℃에서 10분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트를 사용하여 490nm에서 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(퍼센트)은 다음 식에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 효소 활성 저해율 50퍼센트에 달하는 저해물질의 농도로 결정하였다(표 5).

저해율(퍼센트)={[(D-C)-(B-A)]/(D-C)}×100

A：저해제를 넣은 것의 반응전 흡광도,

B：저해제를 넣은 것의 반응후 흡광도,

C：저해제를 넣지 않은 것의 반응전 흡광도,

D：저해제를 넣지 않은 것의 반응후 흡광도.

티로시나제 활성억제작용시험 결과, 검은콩 추출물의 IC₅₀값은 0.5% 이하로 나타났다. 수치상으로 볼 때, 다른 물질에 비해 저해활성이 약한 것으로 나타났으나, 알부틴과 같이 순수 정제된 물질이 아니라 추출물임을 감안한다면 우수한 효과를 가지는 것으로 판단된다.

[시험예 5]

본 실험은 검은콩 추출물의 멜라닌 생성에 대한 미백효과를 보여준 것으로, 본 실험에 사용된 B16-F1 멜라노마 세포는 마우스에서 유래한 세포 균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다. 이 세포를 인공배양 중에 물질을 처리하여 멜라닌 추색 색소가 감소하는 정도를 비교평가하였다.

본 실험에 사용된 B16-F1 멜라노마 세포는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양받아 사용하였다.

Bl6-F1 멜라노마 세포의 멜라닌 생합성 저해도 판별은 다음과 같이 행하였다. B16-F1 멜라노마 세포를 5 ×10³cells/ml의 농도로 10% 소태아 혈청을 포함하는 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(Gibco, USA)에 현탁시켰다. 현탁세포(5ml)를 조직배양 플라스크에 넣은 후 검은콩 추출물 시료를 0.134% 첨가한 후, 7% 이산화탄소-95% 공기의 조건하에 37℃에서 배양하였다. 4일간 배양후 배양액의 색으로 멜라닌 생성 정도를 일차적으로 판별하고, 세포를 인산 완충액으로 씻은 후 트립신 처리하여 세포를 플라스크로부터 분리하였다. 세포를 튜브에 모은 후 인산 완충액으로 씻고, 원심분리하여 튜브 아래쪽에 침전된 멜라닌 생성양을 기존의 미백제로 알려져 있는 몇 개의 시료와 검은콩 추출물과의 멜라닌 색소 분비 억제 정도를 비교한 것이다. 평가방법은 세포 배양 중에 아무것도 처리하지 않은 것과 각 시료를 처리했을 때의 검은 멜라닌 색소 분비정도에 따라 색상이 변화되는 정도를 육안으로 관찰하여 상호비교평가하였다. 결과적으로, 검은콩 추출물이 멜라닌 색소 분비를 효과적으로 억제한다는 것을 확인할 수 있었다.

이와 같이 본 발명에 따른 액상의 추출물은 항 산화 효과 및 세포 증식효과가 뛰어난 바, 피부에 도포시 탁월한 피부색 개선효과 및 노화 방지효과를 갖는다. 또한 각종 피부 화장료에 적용이 가능하므로 각종의 화장료에 혼합하여 상품화가 가능하다.

Claims (6)

1. 화장품 제조용 용매 단독 또는 그 수용액에 건조된 검은콩을 5-80중량% 넣고 30일 이상 침지시켜 추출시킨 후, 이를 여과망으로 여과하고 다시 그 여과액을 여과지로 제균여과하여 얻은 검은콩 액상 추출물을 유효성분으로서 0.05 내지 30중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 액상 추출물과 글리세린을 정제수에 용해한 것을, 에탄올에 폴리피롤리돈, 올레일알콜, 폴리옥시에틸렌모노올레이트, 향료, 파라옥시안식향산메틸에스테르, 산화방지제 및 색소를 용해시킨 것과 혼합교반하여 얻어진 것을 특징으로 하는 화장수 형태의 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 액상 추출물, 디프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 트리에탄올아민 및 정제수의 혼합물을 가열용해시키고, 이를 세틸알콜, 스쿠알란, 바세린, 파라옥시안식향산에텔에스테르, 글리세린모노에스테아레이드, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 및 향료를 가열용해한 것과 혼합하여 유화시킨 후, 냉각하여 얻어진 것을 특징으로 하는 수/유중계 유액 형태의 피부 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 액상 추출물, 에탄올, 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트, 키툴로오즈, 히야론산나트륨, 비타민 E 아세테이트, 감초산나트륨, 파라옥시안식향산에틸에스테르 및 적량의 색소를 혼합하여 얻어진 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 화장품 제조용 용매는 50-95% 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 추출은 실온 내지 60℃에서 행해지는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.