본 발명은 석곡 추출물 또는 익지인 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이며, 상기 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001∼10 중량% 정도 사용하며, 바람직하게는 0.01∼5 중량% 정도 사용하는 것이 좋다.
또한 본 발명에서는 상기 추출물 이외에도 모과 추출물, 죽엽 추출물, 차전자 추출물, 천문동 추출물 및 홍화인 추출물 중 1종 이상을 더 함유하여 인플라메이징 개선, 피부 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
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본 발명에서 사용한 석곡 추출물은 난초과 동종에 속하는 금채석곡의 지상부 추출물로서 덴드로비움 노빌레(Dendrobium nobile)의 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에서 사용한 석곡은 난초과(orchidae)에 속하는 다년생초본으로 한국, 일본, 중국 등지에 자생한다. 한방에서는 뿌리를 제외한 식물체 전체를 약재로 쓰는데, 해열진통 작용이 있으며 백내장에 효과가 있고, 건위제강장제로 사용한다. 석곡에 함유된 성분은 덴드로빈(dendrobine), 뮤신(mucin) 및 전분(starch) 등을 들 수 있다.
본 발명에서 사용한 익지인 추출물은 생강과 동종에 속하는 익지 외피의 추출물로서 알피니아 옥시필라(Alpinia oxyphylla)의 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에서 사용한 익지인은 생강과(Zingiberaceae)에 속하는 다년생 초본으로, 구토를 다스리고, 유정, 유뇨 등에 효과가 있으며, 항알레르기 작용 및 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제작용 등이 보고되어 있으며, 정유성분으로 누트카톤(nootkatone), β-피닌(β-pinine), ρ-시멘(ρ-cymene), 터피넨-4-올(terpinen-4-ol), α-코파엔(α-copaene), β-셀리넨(β-selinene), β-카리오필렌(β-caryophyllene), α-후물렌(α-humulene), 누트카톨(nootkatol) 등의 트리터페노이드(triterpenoid), 신미성분으로서 야쿠치논(yakuchinone) A, B 등의 다이아릴헵타노이드(diarylheptanoid)를 함유하며, 기타 텍토크리신(tectochrysin), 크리신(chrysin), 이잘피닌(izalpinin), 3,5-다이하드록시-7,4'-다이메톡시플라본 등의 플라보노이드(flavonoid) 및 캄페스테롤(campesterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), β-시토스테롤(β-sitosterol) 등의 스테로이드도 함유하고 있다.
상기 모과는 장미과(Rosaceae)에 속하는 다년생 낙엽 활엽 관목으로, 주요 성분으로는 과실에 말산(malic acid), 타르타르산(tartaric acid) 및비타민 C가 들어 있고, 종자에는 시안화수소산(hydrocyanic acid)이 함유되어 있다고 알려져 있다. 기타 플라본(flavones), 탄닌(tannin) 및사포닌(saponin)(약 2%)이 함유되어 있으나 그 구조는 해명되어 있지 않고, 특유의 향기 성분도 소상히 밝혀져 있지 않다. 모과의 말산은 항균 및 조혈 효능을 지니는 것으로 보고되었으며, 기타 장관의 평활근을 이완시켜 하지의 경련을 억제하며 강한 이뇨작용도 지니는 것으로 알려졌다. 모과는 진해, 지통(止痛), 이수(利水), 요통(腰痛) 등에 쓰이는 처방에 적용되며, 진경(鎭痙), 격심한 구토나 설사를 수반하는 하퇴배복근의 경련, 하퇴 근무력, 요슬(腰膝) 운동마비 및 관절통에 다른 약과 섞어 투약되고 있다.본 발명에서 사용한 모과 추출물은 차에노멜레스 시넨시스 (Chaenomeles sinensis) 의 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에서 사용한 죽엽 추출물은 화본과 동종에 속하는 대나무 지상부의 추출물로서, 지상부오죽(Phyllostachys nigra), 죽순대(Phyllostachys pubescen), 솜대(Phyllostachys nigra var. henonis), 반죽(Phyllostachys nigra for. punctata), 관암죽(Phyllostachys comprossa), 왕대(Phyllostachys bambusoides), 해장죽(Arundinaria simonii), 고려조릿대(Sasa coreana), 섬조릿대(Sasa kurilensis), 제주조릿대(Sasa quelpaertensis), 조릿대(Sasa borealis), 갓대(Sasa borealis var. chiisanensis), 섬대(Sasa borealis var. gracilis), 이대(Pseudosasa japonica) 또는 자주이대(Pseudosasa japonica var. purpurascens)의 추출물이고, 해열 및 이뇨작용이 있고, 줄기와 잎에는 트리터페노이드계 화합물인 오룬도인(arundoin), 시린드린(cylindrin), 타락세롤(taraxerol), 프리델린(friedelin), 아미노산 및 지방산 등이 함유되어 있다.
그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에서 사용한 차전자 추출물은 질경이(Plantago asiatica)의 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
상기 차전자는 질경이과(Plantaginaceae)에 속하는 다년생 초본으로 어린잎은 식용한다. 한방에서는 뿌리채 뽑아 말려서 차전초(車前草)라 하고, 종자를 차전자(車前子)라는 약재로 사용하고, 한국, 일본, 사할린, 타이완, 중국, 시베리아, 동부 히말라야, 자바, 말레이시아 등지에 분포한다. 질경이 전초의 성분은 오쿠빈(aucubin), 플란타기닌(plantaginin), 호모플란타기닌(homoplantaginin)등의 배당체와 탄닌, 우르솔산(ursolic acid), 피토스테롤글리코시드(phytosterol glycosides)이고, 이들 스테롤류인 베타시토스테롤팔미테이트(β-sitosterol palmitate), 스티그마스테롤팔미테이트(stigmasterol palmitate) 등이 점액성 팽화물질의 주체이다. 차전자(Plantaginis Semen)에는 뮤실라제(mucilage(9%내외))로 플란타산(Plantasan), 플란타고뮤실라제 A(plantago mucilage A(L-arabinose, D-xylose, D-glucuronic acid, D-galacturonic acid))가 함유되어 있고, 이리도이드 배당체 (Iridoidal glycoside)인 오쿠빈 (aucubin), 게니피오시딕애씨드 (genipiosidic acid) 가 있으며, 플라본배당체 (flavone glycoside)로서 플란타고시드 (plantagoside), 기타 아세토시드(acetoside), 시린긴(syringin), 콜린(choline) 및 기타의 지방산 등이 들어 있다.
질경이는 "플란타기닌"이라는 배당체와 탄닌이 함유되어 있어서 이뇨제, 진해, 거담, 건위, 지사(止瀉), 해열, 소염, 강장제 등으로 쓰이고, 간 기능을 활성화하여 어지럼증, 두통에 효과가 있고, 폐열로 인한 해수에도 효과가 있다. 항균작용도 있어서 급만성 세균성 설사, 신장염, 방광염, 요도염의 치료에도 이용한다.
본 발명에서 사용한 천문동 추출물은 백합과 동종에 속하는 천문동(Asparagus cochinchinensis)의 덩이뿌리 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에 사용한 천문동은 백합과 (Liliaceae)에 속하는 다년생 초본으로, 바닷가 근처의 산지에서 자라는 덩굴성 식물이며, 한방에서는 가을에 뿌리를 채취, 진해해열거담강장이뇨 등의 약재로 쓴다. 한국·중국·일본·타이완 등지에 분포하며, β-시토스테롤(β-sitosterol), 점액질, 5-메틸프루프랄(5-methylfurfural), 단당류로 람노오스(rhamnose), 크실로오스(xylose), 글루코오스, 다당류로 올리고당(oligosaccharide) I-VII, 아스파라거스 사포닌-Asp-IV, V, VI, VII, α-카리오필렌(α-caryophyllene), 메틸프로토그라실린(methylprotogracilin), 슈도프로토디오신(pseudoprotodioscin) 및 아스파스고시드 VI(aspasgoside VI), VII 및 IV 등의 성분을 함유하고 있다.
본 발명에서 사용한 홍화인 추출물은 국화과 동종에 속하는 잇꽃(Carthamus tinctorius)의 외피를 포함한 종자의 추출물이고, 그 함유량은 전체 조성물에 대하여 0.001∼10 중량% 가 적절하며, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.01∼5 중량% 가 좋다.
본 발명에서 사용한 홍화인은 국화과(Compositae)에 속하는 이년생 초본의 종자로, 리놀레산(linoleic acid), 올레산(oleic acid) 등의 성분을 함유하고 있으며, 동맥경화증의 예방과 골다공증에 효과가 있다.
본 발명에서는 석곡 추출물 또는 익지인 추출물을 사용하고, 또는 여기에 모과 추출물, 죽엽 추출물, 차전자 추출물, 천문동 추출물, 홍화인 추출물 중 1종 이상을 더 첨가하여 염증으로 인한 노화촉진현상인 인플라메이징 현상을 개선하여 피부노화를 예방할 수 있으며, 주름 개선, 탄력 개선의 효과가 있으며, 자외선에 의한 미세염증발생을 제어하여 홍반, 피부괴사 등의 증상을 전반적으로 효과적으로 개선할 수 있다.
상기 석곡 추출물, 익지인 추출물, 모과 추출물, 죽엽 추출물, 차전자 추출물, 천문동 추출물 및 홍화인 추출물 중 1종 이상을 함유할 때, 이들의 사용량은 생체외(in vitro) 실험 및 생체내(in vivo) 실험을 근거로 조성물 총 중량에 대하여 0.001∼10 중량%, 바람직하게는 0.01∼5 중량%이다. 추출물 함량이 0.001 중량% 미만이면 활성 성분으로서 작용을 기대하기 어려우며, 10 중량%를 초과하면 제형 안정성에 문제가 생길 수 있다. 이러한 관점에서 0.01∼5 중량%이 더욱 바람직하다.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 인플라메이징 개선용, 피부염증 조절용, 피부 주름 개선용 및 피부 탄력 개선용 조성물로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 에센스 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명에서 사용한 용어 인플라메이징은 2000 년 이탈리아 볼로냐대학의 Dr.franceschi에 의해 제창된 가설로서, 보다 상세히 설명하면, 인체가 나이가 들어가면서 외부항원과 스트레스에 만성적으로 노출되면 대부분의 기관과 조직에 존재하는 대식세포와 이와 관련된 세포들이 지속적으로 활성화된다. 즉, 지속적인 외부인자에의 노출이 지속적인 전염증상태 (proinflammatory status) 를 일으키고 이것이 노화과정의 큰 특징으로 나타난다. 이런 현상을 인플라메이징(Inflammaging 또는 Inflamm-aging)이라는 용어로 정의되었고, 이것은 기존의 노화이론인 네트워크이론과 리모델링이론의 이론적인 확장이라고 할 수 있다(Exp. Gerontology 2000, 35:879-896). 한편 이 이론은 노화의 염증가설 (Inflammation hypothesis of aging) 이라는 주제로 세계적인 노화연구의 권위자인 텍사스대의 유병팔 교수진에 의해서도 검증되었다 (Ann N Y Acad Sci 2001, 928:327-335). 즉 인플라메이징은 노화가 진행되면서 인체에서는 서서히 염증반응(종양괴사인자알파(TNF-α), 인터루킨-1베타 (IL-1β)의 생성 증가)이 증가하고, 증가된 염증반응에 의해 조직이 파괴되는(예: 퇴행성 관절염) 노화현상이 촉진되는 전체적인 현상이라고 정의 내릴 수 있다.
또한 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있다.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 모과 추출물의 제조
건조된 모과 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃ 에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 2] 석곡 추출물의 제조
건조된 석곡 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 3] 익지인 추출물의 제조
건조된 익지인 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 4] 죽엽 추출물의 제조
건조된 죽엽 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 5] 차전자 추출물의 제조
건조된 차전자 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 6] 천문동 추출물의 제조
건조된 천문동 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[실시예 7] 홍화인 추출물의 제조
건조된 홍화인 500g에 중량(Kg) 대비 4배량의 70% 에탄올을 가한 후 80℃에서 2시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 이를 하루 동안 상온에서 방치하여 불순물을 침전시킨 다음, 여과지를 이용하여 2회 여과한 여액을 감압 증발기를 사용하여 완전히 증발시켜 농축하였다.
[시험예 1] 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효능 측정
신생아포피에서 분리한 인체 섬유아세포(계대4)를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선A를 15J/cm2로 조사한 후, 상기 실시예 1∼7의 추출물을 10ppm씩 포함한 배지로 교체하였다. 또한 노인(남성, 76세)에게서 분리한 인체 섬유아세포(계대4)를 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선 조사 없이 상기 실시예 1∼7의 추출물을 10ppm씩 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴블롯(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 그 결과로서, 신생아섬유아세포인 경우는 자외선 대조군을, 노인 섬유아세포인 경우는 자외선 비조사군을 100으로 하여 덴시토미터(densitometer)로 측정한 비교치를 하기 표 1에 나타내었다.
실시예(10ppm) |
COX-2 생합성(%) |
신생아세포 |
노인세포 |
실시예 1 |
18 |
39 |
실시예 2 |
19 |
42 |
실시예 3 |
15 |
34 |
실시예 4 |
20 |
41 |
실시예 5 |
18 |
37 |
실시예 6 |
20 |
45 |
실시예 7 |
22 |
48 |
대조군 |
100 |
100 |
상기 표 1로부터 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물은 신생아섬유아세포에서 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 감소시켰고, 노인 섬유아세포에서는 노화에 의해 자연스럽게 증가해 있는 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 감소시킴을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물이 COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2 (PGE2)에 의한 피부발적, 동통 및 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있었다.
[시험예 2] 자외선에 의한 프로스타글란딘 E2 (Prostaglandin E2, PGE2
)의 생합성 억제 효능 측정
각질형성세포주인 HaCaT 세포를 104 개의 농도로 96공 평판배양기에 배양하고, 자외선B를 30mJ/cm2로 조사한 후, 상기 실시예 1∼7의 추출물을 10ppm씩 포함한 배지로 교체하였다. 배양 24시간 후 상등액을 수확해서 (harvest) 효소면역분석 (ELISA) 방법을 사용하여 생성된 PGE2 의 양을 정량하였다. 그 결과로 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 비교치를 표 2에 나타내었다.
실시예(10ppm) |
PGE2 생합성(%) |
실시예 1 |
27 |
실시예 2 |
28 |
실시예 3 |
24 |
실시예 4 |
29 |
실시예 5 |
27 |
실시예 6 |
29 |
실시예 7 |
31 |
대조군 |
100 |
상기 표 2로부터 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물이 자외선에 의한 프로스타글란딘 E2 (PGE2)의 생합성을 감소시켜 이로 의한 피부발적, 동통, 분해를 방지할 수 있음을 알 수 있었다.
[시험예 3] 자외선에 의한 종양괴사인자알파 (TNF-α)의 생합성 억제 효능 측정
인체 각질형성세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 자외선B를 30mJ/cm2로 조사한 후, 상기 실시예 1∼7의 추출물을 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 6-24시간 후 세포를 수확해서 (harvest) ELISA (Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF-α)의 양을 정량하였다. 그 결과로 자외선 대조군을 100으로 한 비교치를 표 3에 나타내었다.
실시예(10ppm) |
TNF-α 생합성(%) |
실시예 1 |
35 |
실시예 2 |
33 |
실시예 3 |
32 |
실시예 4 |
37 |
실시예 5 |
34 |
실시예 6 |
30 |
실시예 7 |
39 |
대조군 |
100 |
상기 표 3으로부터, 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물이 자외선에 의한 종양괴사인자알파의 생합성을 감소시킴으로써, 자외선으로 인해 발생할 수 있는 피부 염증, 피부 기질물질의 감소, 탄력 저하 및 주름 형성 등을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있음을 알 수 있었다.
[시험예 4] 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정
신생아포피에서 분리한 인체 섬유아세포를 104 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 자외선A 를 15J/cm2 로 조사한 후, PGE2 에 대한 항체 및 TNF-α에 대한 항체를 1 ug/ml 농도로 가하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서(harvest) ELISA(AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 또한 전염증성 사이토카인인 TNF α 10ng/ml 및 PGE2 100uM 을 섬유아세포에 직접 처리하여 이로 인한 콜라게나제의 생합성이 유도되는지도 측정하였다. 그 결과로 아무 처리도 하지 않은 대조군을 100으로 한 비교치를 표 4에 나타내었다.
시험군 |
타입I 콜라게나제 생합성(%) |
항체 비처리군 |
TNF-α항체 처리군 |
PGE2 항체 처리군 |
TNF-α+ PGE2 항체처리군 |
자외선A 조사군 |
210 |
134 |
135 |
105 |
TNF-α처리군 |
250 |
- |
- |
- |
PGE2 처리군 |
180 |
- |
- |
- |
대조군 |
100 |
100 |
100 |
100 |
- : 시험미실시
상기 표 4로부터, 자외선A와 염증매개인자인 TNF-α 및 PGE2 처리시 타입 I 콜라게나제의 생합성이 증가됨을 확인할 수 있었으며, 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제의 증가는 PGE2 및 TNF-α에 대한 항체를 각각 또는 동시에 처리시 감소됨을 알 수 있다. TNF-α 와 PGE2의 작용은 이에 대한 항체 처리시 차단된다. 즉, 자외선A에 의해 염증매개인자인 COX-2, PGE2 및 TNF-α 가 증가하여 이로 인해 타입 I 콜라게나제가 증가하고, 이들 중간 염증매개인자의 차단시 타입 I 콜라게나제의 생합성이 감소됨을 알 수 있었다.
또한 신생아섬유아세포에 실시예 1∼7의 추출물을 처리할 경우 타입 I 콜라게나제의 생합성이 감소됨을 확인하였며, 이는 다시 염증매개인자인 PGE2, TNF-α 처리시 원래대로 회복됨을 확인하였다.
실험방법을 자세히 설명하면, 신생아포피에서 분리한 인체 섬유아세포를 104 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 자외선 A를 15J/cm2 로 조사한 후, 실시예 1∼7의 추출물 10ppm씩을 함유한 배지로 갈아준 후 TNF-α 10ng/ml 또는 프로스타글란딘 E2 10uM 씩을 가하였다. 배양 2일째 상등액을 수확해서(harvest) ELISA (AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과로 자외선 조사군을 100으로 한 비교치를 표 5에 나타내었다.
실시예 (10ppm) |
타입I 콜라게나제 생합성(%) |
자외선 A 조사군 |
자외선 A +TNF-α처리군 |
자외선 A + PGE2 처리군 |
실시예 1 |
42 |
88 |
92 |
실시예 2 |
43 |
86 |
93 |
실시예 3 |
45 |
87 |
92 |
실시예 4 |
53 |
89 |
90 |
실시예 5 |
45 |
86 |
91 |
실시예 6 |
52 |
89 |
90 |
실시예 7 |
58 |
91 |
92 |
대조군 |
100 |
100 |
100 |
상기 표 4 및 5로부터, 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물이 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 감소시킴을 알 수 있었고, 이는 염증매개인자의 생합성 감소에 기인함을 알 수 있었다.
[시험예 5] 노인 섬유아세포에서 염증매개인자 및 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제 효능 측정
75세 남성 노인 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후에 실시예 1∼7의 추출물 10ppm 씩을 함유한 배지로 갈아주었다. 24시간 후에 상등액을 수확해서 PGE2의 양을 ELISA(Cayman사)방법을 사용하여 정량하고, 48시간 후에 사이클로옥시게나제-2와 타입 I 콜라게나제의 양을 각각 웨스턴블랏과 ELISA(AP biotech RPN2610) 방법으로 측정하였다. 또한 노인 섬유아세포에 자외선A 15J/cm2, PGE2 10uM 및 TNF-α 10ng/ml을 처리하여 타입 I 콜라게나제의 발현을 관찰하였다. 그 결과로 아무처리도 하지 않은 대조군을 100으로 한 비교치를 표 6에 나타내었다.
실시예 (10ppm) |
COX-2 생합성 (%) |
PGE2 생합성 (%) |
타입I 콜라게나제 생합성(%) |
실시예 1 |
42 |
38 |
53 |
실시예 2 |
45 |
41 |
56 |
실시예 3 |
47 |
43 |
58 |
실시예 4 |
54 |
47 |
62 |
실시예 5 |
44 |
40 |
55 |
실시예 6 |
57 |
54 |
68 |
실시예 7 |
59 |
55 |
70 |
대조군 |
100 |
100 |
100 |
자외선A |
100 |
100 |
100 |
PGE2
|
100 |
- |
100 |
TNF-α |
100 |
100 |
100 |
- : 시험미실시
상기 표 6으로부터 노인 섬유아세포는 이미 노화에 의해 자연스럽게 염증매개인자들이 발현될 만큼 발현되어 있기 때문에 자외선, PGE2, TNF-α 등을 외부에서 가해주었을 때 특이한 발현의 변화를 보이지 않았다. 그러나 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물을 가해주었을 때 염증매개인자의 생합성을 감소시켜, 타입 I 콜라게나제의 생합성을 감소시켰으며, 이는 본 발명에 의한 추출물들이 노인에게서도 주름 및 탄력회복에 효과가 있음을 시사한다.
[시험예 6] 자외선 및 염증매개인자에 의한 콜라겐 분해 억제 효능 측정
인체 섬유아세포를 104개의 농도로 48공 평판배양기에 배양하고, 24시간 후 자외선A 15J/cm2 로 조사한 후 상기 실시예 1∼7의 추출물을 10ppm 씩 포함한 배지로 교체하였다. 또한 동시에 PGE2 100uM, TNF-α 10ng/ml 를 섬유아세포에 처리하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA (Takara MK101) 방법을 사용하여 분해되지 않고 남아있는 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과로 대조군을 100으로 하여 측정한 비교치를 표 7에 나타내었다.
실시예 (10ppm) |
프로콜라겐 양(%) |
실시예 1 |
98 |
실시예 2 |
97 |
실시예 3 |
92 |
실시예 4 |
91 |
실시예 5 |
95 |
실시예 6 |
90 |
실시예 7 |
85 |
PGE2
|
52 |
TNF-α |
50 |
자외선A |
50 |
대조군 |
100 |
상기 표 7로부터, 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 추출물이 자외선 및 자외선조사에 의해 생성된 염증매개인자인 PGE2, TNF-α에 의한 콜라겐의 분해를 효과적으로 제어할 수 있음을 알 수 있었다.
[시험예 7] 무모생쥐에서의 주름개선 효과
본 발명의 조성물에 의해서 주름개선에 대한 효과를 확인하기 위하여 하기 표 8의 조성비에 따라 외용제를 영양크림의 제형으로 각각 실시예 8∼15 로 제조하였다.
배합성분 |
실시예8 (%) |
실시예9 (%) |
실시예10 (%) |
실시예11 (%) |
실시예12 (%) |
실시예13 (%) |
실시예14 (%) |
실시예15 (%) |
비교예 (%) |
정제수 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
모과 추출물(실시예 1) |
0.1 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.0143 |
- |
석곡 추출물(실시예 2) |
- |
0.1 |
- |
- |
- |
- |
- |
0.0143 |
- |
익지인 추출물 (실시예 3) |
- |
- |
0.1 |
- |
- |
- |
- |
0.0143 |
- |
죽엽 추출물(실시예 4) |
- |
- |
- |
0.1 |
- |
- |
- |
0.0143 |
- |
차전자 추출물 (실시예 5) |
- |
- |
- |
- |
0.1 |
- |
- |
0.0143 |
- |
천문동 추출물 (실시예 6) |
- |
- |
- |
- |
- |
0.1 |
- |
0.0143 |
- |
홍화인 추출물 (실시예 7) |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.1 |
0.0143 |
- |
식물성 경화유 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
스테아린산 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
0.60 |
글리세롤 스테아레이트 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
스테아릴 알코올 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 &소디움 스테아로일 락틸에이트 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
아라키딜 베헤닐 알코올 & 아라키 딜글루코사이드 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
세틸아릴 알코올 & 세테아릴글 루코사이드 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
2.00 |
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤올레이트 & 프로필렌글리콜 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
1.50 |
카프릴릭/카르릭 트리글리세라이드 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
11.00 |
사이클로메디콘 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
6.00 |
방부제, 향 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
적량 |
트리에탄올 아민 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
상기 표 8의 비교예와 실시예 8∼15에 대하여 자외선에 대한 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 8주령 무모생쥐 80마리를 각각 비교예 및 실시예 8∼15의 9개 군에 대해 10마리씩 9개 조로 나누어 자외선을 3MED 씩 1주일에 5일 조사하면서, 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 미세주름측정기(SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 하기 도 1, 도 2 및 표 9에 나타내었다. 하기 표의 값은, 도포 8주 후의 각각의 파라미터 값을 임의의 단위로 나타낸 것이다.
8주 후 결과 |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
비교예 |
2.000 |
1.899 |
1.247 |
0.271 |
0.589 |
비교예(자외선) |
4.210 |
3.550 |
2.120 |
0.630 |
1.090 |
실시예 8 |
2.200 |
2.000 |
1.370 |
0.330 |
0.680 |
실시예 9 |
2.160 |
1.890 |
1.290 |
0.340 |
0.700 |
실시예 10 |
3.240 |
3.070 |
2.120 |
0.480 |
0.960 |
실시예 11 |
2.980 |
2.630 |
1.460 |
0.420 |
0.740 |
실시예 12 |
2.270 |
2.020 |
1.410 |
0.360 |
0.730 |
실시예 13 |
2.820 |
2.520 |
1.680 |
0.430 |
0.830 |
실시예 14 |
3.010 |
2.720 |
1.710 |
0.450 |
0.880 |
실시예 15 |
2.050 |
1.900 |
1.291 |
0.310 |
0.615 |
R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값
R2 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고 치
R3 : 주름 등고선을 임의로 5등분으로 나눈 후 각 등분내의 R1 값들의 평균
R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값
상기 도 1, 도 2 및 표 9를 통해 본 발명에 의한 실시예 8∼15의 외용제 조성물이 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었다. 특히 실시예 1 ~ 실시예 7이 동량 혼합되어 전체 0.1%를 차지하는 실시예 15의 경우 그 효과가 특히 아주 우수함을 알 수 있었다.
[시험예 8] 사람에서의 주름개선효과
상기 표 8의 비교예와 실시예 8∼15에 대하여 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 30대 여성 90명을 각각 비교예 및 실시예 8∼15의 8개 군에 대해 10명씩 9개조로 나누어, 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 미세주름측정기(SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 하기 표 10에 나타내었다. 하기 표의 값은, 도포 8주 후의 각각의 파라미터 값에서 도포 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 임의의 단위로 나타낸 것이다.
8주 후 결과 |
R1 |
R2 |
R3 |
R4 |
R5 |
비교예 |
0.221 |
0.1651 |
0.0873 |
0.0359 |
0.0501 |
실시예 8 |
-0.201 |
-0.155 |
-0.075 |
-0.03 |
-0.041 |
실시예 9 |
-0.205 |
-0.166 |
-0.083 |
-0.029 |
-0.039 |
실시예 10 |
-0.097 |
-0.048 |
0 |
-0.015 |
-0.013 |
실시예 11 |
-0.123 |
-0.092 |
-0.066 |
-0.021 |
-0.035 |
실시예 12 |
-0.194 |
-0.153 |
-0.071 |
-0.027 |
-0.036 |
실시예 13 |
-0.139 |
-0.103 |
-0.044 |
-0.02 |
-0.026 |
실시예 14 |
-0.12 |
-0.083 |
-0.041 |
-0.018 |
-0.021 |
실시예 15 |
-0.224 |
-0.162 |
-0.085 |
-0.031 |
-0.039 |
R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값
R2 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고 치
R3 : 주름 등고선을 임의로 5등분으로 나눈 후 각 등분내의 R1 값들의 평균
R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값
상기 표 10에서와 같이, 본 발명에 의한 실시예 8∼15의 외용제 조성물이 사람에게서 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었다. 특히 실시예 1 ~ 실시예 7이 동량 혼합되어 전체 0.1%를 차지하는 실시예 15의 경우 그 효과가 특히 아주 우수함을 알 수 있었다.
[시험예 9] 인체에서 피부 탄력 개선 측정
상기 표 8과 같이 제조한 영양크림의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 30세 이상의 건강한 여성 90명을 9개조로 나누고, 각 조에 상기 표 8의 비교예와 실시예 8∼15의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 11에 나타내었다. 표 11의 결과치는 Cutometer SEM 575의 ΔR8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽)) 값으로 기재하였는데, R8값은 피부 점탄성(viscoelasticity) 의 성질을 나타낸다. 이와 별도로 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다. 그 결과는 하기 표 12에 나타내었다.
실험제품 |
피부탄력효과 |
비교예 |
0.11 |
실시예 8 |
0.43 |
실시예 9 |
0.44 |
실시예 10 |
0.45 |
실시예 11 |
0.42 |
실시예 12 |
0.41 |
실시예 13 |
0.40 |
실시예 14 |
0.41 |
실시예 15 |
0.47 |
상기 표 11에 나타난 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 8∼15의 조성물을 도포한 군에서는 비교예를 도포한 군에 비해서 피부탄력성이 더 증가하였다.
한편, 하기 표 12와 같은 설문조사를 통해서도 본 발명에 의한 조성물인 실시예 8∼15를 도포한 경우 피부탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었다. 특히 실시예 1 ~ 실시예 7이 동량 혼합되어 전체 0.1%를 차지하는 실시예 15의 경우 탄력측정 결과와 설문조사에서 그 효과가 특히 아주 우수함을 알 수 있었다.
도포군 |
응답자 수 (인) |
매우 양호 |
양호 |
보통 |
미흡 |
비교예 |
1 |
3 |
3 |
3 |
실시예 8 |
3 |
5 |
2 |
0 |
실시예 9 |
3 |
6 |
1 |
0 |
실시예 10 |
3 |
5 |
2 |
0 |
실시예 11 |
3 |
5 |
2 |
0 |
실시예 12 |
3 |
6 |
1 |
0 |
실시예 13 |
3 |
4 |
3 |
0 |
실시예 14 |
3 |
5 |
2 |
0 |
실시예 15 |
4 |
5 |
1 |
0 |
이하, 상기의 시험예의 결과를 근거로 하여, 본 발명에 의한 모과 추출물, 석곡 추출물, 익지인 추출물, 죽엽 추출물, 차전자 추출물, 천문동 추출물, 홍화인 추출물 중 1종 이상을 함유함으로써, 자외선에 의한 염증매개인자의 생합성을 억제하는 기전으로, 조직을 분해하는 타입 I 콜라게나제의 생합성을 억제하여 피부 주름 및 탄력을 개선하는 여러 가지 제형의 화장료의 조성을 제조할 수 있다. 그러나 본 발명의 조성물이 하기의 예에만 한정되는 것은 아니다.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)
배합성분 |
중량% |
정제수 |
To 100 |
실시예 1 ∼7의 추출물 |
0.1 |
부틸렌글리콜 |
2.0 |
프로필렌글리콜 |
2.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.1 |
피이지-12 노닐페닐에테르 |
0.2 |
폴리솔베이트 80 |
0.4 |
에탄올 |
10.0 |
트리에탄올아민 |
0.1 |
방부제, 색소, 향료 |
적량 |
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)
배합성분 |
중량% |
정제수 |
To 100 |
실시예 1 ∼7의 추출물 |
0.1 |
밀납 |
4.0 |
폴리솔베이트60 |
1.5 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
1.5 |
유동파라핀 |
0.5 |
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 |
5.0 |
글리세린 |
3.0 |
부틸렌글리콜 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
3.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.1 |
트리에탄올아민 |
0.2 |
방부제, 색소, 향료 |
적량 |
[제형예 3] 영양크림
배합성분 |
중량% |
정제수 |
To 100 |
실시예 1 ∼7의 추출물 |
0.1 |
밀납 |
10.0 |
폴리솔베이트60 |
1.5 |
피이지 60 경화피마자유 |
2.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
0.5 |
유동파라핀 |
10.0 |
스쿠알란 |
5.0 |
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 |
5.0 |
글리세린 |
5.0 |
푸틸렌글리콜 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
3.0 |
트리에탄올아민 |
0.2 |
방부제, 색소, 향료 |
적량 |
[제형예 4] 마사지크림
배합성분 |
중량% |
정제수 |
To 100 |
실시예 1 ∼7의 추출물 |
0.1 |
밀납 |
10.0 |
폴리솔베이트60 |
1.5 |
피이지 60 경화피마자유 |
2.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
0.8 |
유동파라핀 |
40.0 |
스쿠알란 |
5.0 |
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 |
4.0 |
글리세린 |
5.0 |
부틸렌글리콜 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
3.0 |
트리에탄올아민 |
0.2 |
방부제, 색소, 향료 |
적량 |
[제형예 5] 팩
배합성분 |
중량% |
정제수 |
To 100 |
실시예 1 ∼7의 추출물 |
0.1 |
폴리비닐알콜 |
13.0 |
소듐카르복시메틸셀룰로오스 |
0.2 |
글리세린 |
5.0 |
알란토인 |
0.1 |
에탄올 |
6.0 |
핑이지-12 노닐페닐에테르 |
0.3 |
폴리솔베이트 60 |
0.3 |
방부제, 색소, 향료 |
적량 |