JP6151003B2

JP6151003B2 - カンカニクジュヨウから得られる抗糖尿病剤、ヒト又は動物用医薬および機能性食品

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Publication number: JP6151003B2
Application number: JP2012237309A
Authority: JP
Inventors: 修村岡; 森川　敏生; 敏生森川; 清文二宮
Original assignee: Diabetym Co Ltd; Kinki University
Current assignee: Diabetym Co Ltd; Kinki University
Priority date: 2012-10-26
Filing date: 2012-10-26
Publication date: 2017-06-21
Anticipated expiration: 2032-10-26
Also published as: JP2014084319A

Description

本発明は、ハマウツボ科寄生植物であるカンカニクジュヨウの肉質茎、該肉質茎の水もしくは低級脂肪族アルコール等による抽出液もしくは該抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、又は該抽出エキス等より単離される化合物を含む抗糖尿病剤、ヒト又は動物用医薬および機能性食品に関するものである。

ハマウツボ科（Ｏｒｏｂａｎｃｈａｃｅａｅ）植物であるカンカニクジュヨウ（学名：Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｈｒｅｎｋ）Ｒ．Ｗｉｇｈｔ）は、アフリカ北部、アラビア地域及び西アジアからパキスタンやインドにかけての地域に自生し、Ｓａｌｖａｄｏｒａ又はＣａｌｏｔｒｏｐｉｓ属植物の根部に寄生している寄生植物である。例えば、非特許文献１や非特許文献２に記載されているように、その全草はパキスタンにおいて下痢や腫れ物の治療に用いられており、又、中国においてはその肉質茎が不妊症やアルツハイマー病の治療に供されている。

本発明者も、カンカニクジュヨウの科学的解明研究の一環として、カンカニクジュヨウの含有成分の探索を行い、その抽出エキスや含有成分の血管拡張作用及び肝保護作用、および皮膚外用剤としての有効性について明らかにし、その結果を、特許文献１、特許文献２、特許文献３、非特許文献３及び非特許文献４で開示している。

特開２００７−１９１４１６号公報特開２００９−１９６９０５号公報特開２００９−２０９０６３号公報

ＫｏｂａｙａｓｈｉＨ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、Ｖｏｌ３５、ｐｐ３３０９−３３１４（１９８７）新彊中薬民族薬研究所編、新彊常用中草学栽培技術、新彊科学技術出版社、ｐｐ８４−８８（２００４）ＸｉｅＨ．，ｅｔａｌ．、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、Ｖｏｌ５４、ｐｐ６６９−６７５（２００６）ＹｏｓｈｉｋａｗａＭ．，ｅｔａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、Ｖｏｌ１４、ｐｐ７４６８−７４７５（２００６）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ５８，ｐ５７５（２０１０）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ５８，ｐ１４０３（２０１０）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ１８，ｐ１８８３（２０１０）

本発明は、上記のような症状の治療等に用いられ、かつ日本において薬用のみならず食用としても使用が可能なＣｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａを起原植物とするカンカニクジュヨウの肉質茎、該肉質茎より抽出された抽出液もしくは該抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、又は該抽出エキス等より単離される化合物を有効成分として含むことを特徴とする抗糖尿病剤、ヒト又は動物用医薬、及び機能性食品を提供することを課題とする。

本発明者は、カンカニクジュヨウの肉質茎、その抽出液もしくは抽出エキスや、それらの含有成分について、種々の生物活性の検討を鋭意行ったところ、カンカニクジュヨウの肉質茎、その抽出液、抽出エキスや、これらから単離される化合物の中のあるものは、
１．糖尿病患者において食後過血糖に関与する二糖類加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）及び／又は
２．糖尿病患者の合併症増悪に関与するアルドース還元酵素
を阻害することを見出した。即ち、カンカニクジュヨウの肉質茎、その抽出液もしくは抽出エキス、又はこれらから単離される化合物の中のあるものを含有させることにより、糖尿病の増悪、合併症の発症を抑制できることを見出し、本発明を完成した。

本発明は、その第１の態様として、カンカニクジュヨウの肉質茎、前記肉質茎を水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により抽出して得られる抽出液、又は前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキスを有効成分として含むことを特徴とする抗糖尿病剤（請求項１）を提供する。

この抗糖尿病剤は、二糖類の加水分解酵素を阻害する化合物を含むので、二糖類の加水分解酵素の阻害を機序とする抗糖尿病剤（請求項２）である。又この抗糖尿病剤は、アルドース還元酵素を阻害する化合物を含むので、アルドース還元酵素の阻害を機序とする抗糖尿病剤（請求項３）である。

又本発明は、その第２の態様として、
下記の構造式Ａで表される化合物：

、下記の構造式Ｂで表される化合物：

、下記の構造式Ｃで表される化合物：

、下記の構造式Ｄで表される化合物：

、下記の構造式Ｅで表される化合物：

、下記の構造式Ｆで表される化合物：

、下記の構造式Ｇで表される化合物：

、及び下記の構造式Ｈで表される化合物：

からなる群の中から選ばれる１又は２以上の化合物を有効成分として含み、二糖類の加水分解酵素の阻害を機序とすることを特徴とする抗糖尿病剤（請求項４）を提供する。

本発明者らは、前記構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ又はＨで表される化合物に、二糖類の加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）阻害活性を見いだし、これらの化合物中の少なくとも１種類を含ませることにより、二糖類の加水分解酵素の阻害を機序とする抗糖尿病作用を有する抗糖尿病剤が得られることを見出し、第２の態様の発明を完成した。

さらに本発明は、その第３の態様として、
前記構造式Ａで表される化合物、前記構造式Ｅで表される化合物、前記構造式Ｆで表される化合物、前記構造式Ｇで表される化合物、前記構造式Ｈで表される化合物、

下記の構造式Ｉで表される化合物：

、及び下記の構造式Ｊで表される化合物：

からなる群の中から選ばれる１又は２以上の化合物を有効成分として含み、アルドース還元酵素の阻害を機序とすることを特徴とする抗糖尿病剤（請求項５）を提供する。

本発明者らは、前記構造式Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物に、アルドース還元酵素阻害活性を見いだし、これらの化合物を少なくとも１種類含ませることにより、アルドース還元酵素の阻害を機序とする抗糖尿病作用を有する抗糖尿病剤が得られることを見出し、第３の態様の発明を完成した。

前記の構造式Ａ〜Ｊで表されるそれぞれの化合物には、以下に示す化合物名が命名されている。
構造式Ａの化合物：ツブロシドＡ（ＴｕｂｕｌｏｓｉｄｅＡ）
構造式Ｂの化合物：カンカノシドＫ_１およびＫ_２（ＫａｎｋａｎｏｓｉｄｅＫ_１およびＫ_２、ただし、カンカノシドＫ_１およびＫ_２は、＊で示した炭素の立体異性体）
構造式Ｃの化合物：カンカノシドＬ（ＫａｎｋａｎｏｓｉｄｅＬ）
構造式Ｄの化合物：ウィデマンニノシドＣ（ＷｉｅｄｅｍａｎｎｉｎｏｓｉｄｅＣ）
構造式Ｅの化合物：２’−アセチルアクテオシド（２’−Ａｃｅｔｙｌａｃｔｅｏｓｉｄｅ）
構造式Ｆの化合物：アクテオシド（Ａｃｔｅｏｓｉｄｅ）
構造式Ｇの化合物：イソアクテオシド（Ｉｓｏａｃｔｅｏｓｉｄｅ）
構造式Ｈの化合物：エキナコシド（Ｅｃｈｉｎａｃｏｓｉｄｅ）
構造式Ｉの化合物：カンプネオシドＩ（ＣａｍｐｎｅｏｓｉｄｅＩ）
構造式Ｊの化合物：シリンガリドＡ３’Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド（ＳｙｒｉｎｇａｌｉｄｅＡ３’ −Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）

本発明の第１および第２の態様の抗糖尿病剤は、ラット小腸またはヒト小腸の二糖類加水分解酵素の働きを阻害することから、食後過血糖の改善剤としての優れた生物活性を有する。又、本発明の第１および第３の態様の抗糖尿病剤は、ラットレンズに由来するアルドース還元酵素の働きを阻害することから、糖尿病の合併症（網膜症、神経障害）の発症を予防または遅延させることができ、優れた生物活性を有する。従って、第１、第２又は第３のいずれかの態様の抗糖尿病剤を含有させることにより、（すなわち、カンカニクジュヨウの肉質茎、その抽出液もしくは抽出エキス、又は前記構造式Ａ〜Ｊで表されるいずれかの化合物を含有させることにより）優れた抗糖尿病効果を示すヒト又は動物用医薬や機能性食品を得ることができる。

そこで、本発明は第４の態様として、第１、第２又は第３のいずれかの態様の抗糖尿病剤を含有することを特徴とするヒト又は動物用の医薬（請求項６）を提供する。

又、本発明は第５の態様として、第１、第２又は第３のいずれかの態様の抗糖尿病剤を含有することを特徴とする機能性食品（請求項７）を提供する。

本発明の第１および第２の態様の抗糖尿病剤は、二糖類加水分解酵素の働きを阻害することから、食後過血糖の改善剤としての優れた生物活性を有する。又本発明の第１および第３の態様の抗糖尿病剤は、アルドース還元酵素の働きを阻害することから、糖尿病の合併症（網膜症、神経障害）の発症を予防または遅延させることができ、優れた生物活性を有する。

本発明の第４の態様のヒト又は動物用の医薬や第５の態様の機能性食品は、本発明の抗糖尿病剤を含有するので、優れた抗糖尿病効果を示す。

次に、本発明を実施するための形態につき説明するが、本発明の範囲はこの実施の形態のみに限定されるものではない。

本発明の第１の態様及び第２の様態において、カンカニクジュヨウの肉質茎を用いる場合は、カンカニクジュヨウの肉質茎をそのまま用いることができるし、粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったもの、又は、乾燥などの調製を施したものを用いることもできる。

本発明の第１の態様及び第２の様態としては、カンカニクジュヨウの肉質茎を、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により抽出して得られる抽出液を用いることもできる。さらにその抽出液を濃縮した抽出エキスを用いることができる。

この抽出液は、カンカニクジュヨウの肉質茎をそのまま、水、低級脂肪族アルコール及び低級脂肪族アルコールの含水物より選ばれる抽出溶媒により、抽出して得ることもできる。しかし、肉質茎を、粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったものを用いて抽出する方法が、抽出効率の面で好ましい。

抽出溶媒として用いられるアルコールとしては、炭素数１〜４の低級アルコール類が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノール又はこれらの混液が挙げられる。抽出溶媒としては、好ましくはこれらのアルコール、又はこれらのアルコールに３０容量％までの水を含有する含水アルコールが用いられる。前記のアルコールの中でもメタノール又はエタノールが好ましい。これらの抽出溶媒は、抽出材料に対して、１〜５０倍（重量）程度、好ましくは１０〜３０倍程度用いられる。

抽出温度は、室温〜溶媒の沸点の間で任意に設定できるが、例えば５０℃〜抽出溶媒の沸点の温度で、振盪下もしくは非振盪下又は還流下に、前記の抽出材料、即ち、カンカニクジュヨウの肉質茎、又はそれを粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったもの等を、前記の抽出溶媒に浸漬することによって行うのが適当である。

好ましい抽出時間は、抽出温度や抽出の際の振盪の有無等により変動し、特に限定されない。例えば、抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。又、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分間〜数時間加熱還流するのが好ましい。なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、前記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば２〜５回程度繰り返すのが好ましい。

前記の抽出工程により得られた抽出液にはカンカニクジュヨウの肉質茎の含有成分が溶出されている。本発明の抗糖尿病剤には、このようにして得られた抽出液をそのまま加えてもよいが、前記抽出液を濃縮して抽出エキスにして抗糖尿病剤としてもよい。濃縮は、低温で減圧下に行うのが好ましい。なお、濃縮する前にろ過してろ液を濃縮してもよい。抽出エキスは、濃縮したままの状態で抗糖尿病剤として用いることができるが、又、濃縮は乾固するまで行ってもよく、粉末状又は凍結乾燥品等として用いてもよい。濃縮する方法、粉末状及び凍結乾燥品とする方法は、当該分野での公知の方法を用いることができる。

このようにして得られる抽出液又は抽出エキスを、精製処理に付し、含有される各成分に分離することができる。精製処理に付し各成分に分離することにより、前記構造式Ａ〜Ｊのいずれかで表される化合物が得られるが、前記のように、これらは、抗糖尿病作用を有する化合物であり、これらも抗糖尿病剤として用いることができる（本発明の第２の態様又は第３の様態）。

精製処理は、例えば、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法、溶媒による分配抽出等を単独又は組合わせて採用することができる。クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を挙げることができ、これらのいずれか又はそれらを組み合わせで行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宣選択することができる。

前記のように、カンカニクジュヨウの肉質茎、カンカニクジュヨウの肉質茎を水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により抽出して得られる抽出液、前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、及び構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ又はＨで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物は、二糖類加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）を阻害する。又、構造式Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物は、アルドース還元酵素を阻害する。従って、ともに糖尿病の病態の制御に寄与すると判断される。

さらに、この本発明の抗糖尿病剤は、医薬や食品に適用することができ、この抗糖尿病剤を含有させることにより優れた抗糖尿病効果を有する医薬や食品を製造することができる。

前記肉質茎、抽出液、抽出エキス、又は、構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物を含有させてヒト又は動物用医薬品を製造する場合は、そのままの状態で又は適当な媒体で希釈して、医薬品等の製造分野における公知の方法により製造することができ、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤又は液剤等の種々の形態にして使用することができる。

適当な媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント又はポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン）、錠剤用滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ）、崩壊剤（例えば馬鈴薯澱粉）又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等が挙げられる。

錠剤とする場合は、通常の製薬における周知の方法でコートしてもよい。液体製剤とする場合は、例えば水性又は油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形態であってもよい。又、使用前に水や他の適切な賦形剤と混合する乾燥製品として提供してもよい。

こうした液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂等の懸濁化剤、レシチン、ソルビタンモノオレエート、アラビアゴム等の乳化剤（食用脂を含んでもよい）、アーモンド油、分画ココヤシ油又はグリセリン、プロピレングリコールやエチレングリコールのような油性エステル等の非水性賦形剤、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル又はプロピル又はソルビン酸等の保存剤を含んでもよく、さらに所望により着色剤又は香料等を含んでもよい。

又、前記肉質茎、抽出液、抽出エキス、又は、前記構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物を含有させた食品（機能性食品も含む）を製造する場合は、それぞれを単独で又は２種以上の混合物として、食品又は機能性食品に含有させ、食品又は機能性食品に抗糖尿病作用を与えることができる。

ここで、機能性食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で、保健、健康維持・健康増進等を目的とした食品を意味する。食品又は機能性食品の形態としては、例えば、液体又は半固形、固形の製品、具体的には散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤又は液剤等のほか、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、前記の抽出物、抽出エキス、及び／又は前記化合物を混合又は塗布、噴霧などにより添加して、機能性食品とすることができる。

本発明の医薬又は食品における、前記肉質茎、抽出液、抽出エキス、又は、前記構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物の使用量は、濃縮、精製の程度、活性の強さ等、使用目的、対象疾患や自覚症状の程度、使用者の体重、年齢等によって適宣調整される。例えば、医薬として成人について使用する場合は、１回の投与毎に、抽出液又は抽出エキスでは、１ｍｇ〜２０ｇ程度の範囲で使用し、この範囲内で精製度や水分含量等に応じて調整することが適当な場合が多い。又、前記化合物を使用する場合は、１ｍｇ〜１ｇ程度が適当な場合が多い。

又、機能性食品として使用する場合は、食品の味や外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品１ｋｇに対して、前記肉質茎、抽出液、抽出エキス、又は、構造式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ又はＪで表される化合物からなる群の中から選ばれる化合物を、１ｍｇ〜２０ｇ程度の範囲で添加することが適当な場合が多い。

以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１
（１）カンカニクジュヨウメタノール抽出エキスの調製
乾燥したカンカニクジュヨウ（Ｃ．ｔｕｂｕｌｏｓａ）の肉質茎部を粉砕し、これに約１０倍量のメタノールを加え、加熱還流下３時間抽出した。抽出後、ひだ折りろ紙でろ過した後、抽出残渣に再度、前記とほぼ同量のメタノールを加え、３時間加熱還流し、同様にろ過作業を行った。合計３回の抽出を行い、その抽出液をあわせ、ロータリーエバポレーターを用いて、減圧下に溶媒を留去して、カンカニクジュヨウのメタノール抽出エキスを得た。

（２）メタノール抽出エキスの含有成分の単離
構造式Ａの化合物（ツブロシドＡ）、構造式Ｅの化合物（２’−アセチルアクテオシド）、構造式Ｆの化合物（アクテオシド）、構造式Ｇの化合物（イソアクテオシド）及び構造式Ｈの化合物（エキナコシド）は、特許文献１の実施例２の「メタノール抽出エキスの分離及び精製」に記載の方法、条件により単離した。又、構造式Ｂの化合物（カンカノシドＫ_１およびＫ_２）は、非特許文献５に記載の方法、条件により単離した。構造式Ｃの化合物（カンカノシドＬ）は、非特許文献６に記載の方法、条件により単離した。構造式Ｄの化合物（ウィデマンニノシドＣ）、構造式Ｉの化合物（カンプネオシドＩ）及び構造式Ｊの化合物（シリンガリドＡ３’−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド）は、非特許文献７に記載の方法、条件により単離した。

実施例２二糖類加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）阻害活性試験
実施例１で得られたカンカニクジュヨウのメタノール抽出エキス及び構造式Ａ〜Ｈのいずれかで表される化合物について、次に示す方法により二糖類加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）阻害活性試験を行い、酵素活性の阻害率を算出した。マルターゼ阻害活性についての結果を表１に、スクラーゼ阻害活性についての結果を表２に示す。

［試験方法］
基質としてスクロース（７４ｍＭ）またはマルトース（７４ｍＭ）溶液５０μＬに被験サンプル溶液２５μＬを加え、３７℃で５分間予備加温した。酵素液２５μＬを加えて３０分間反応させ、水４００μＬを加え、沸騰水浴中で５分間加熱し、酵素を失活させた。別に、各被験サンプルにつき酵素液を加えた後、直ちに水を加えて沸騰水浴中で５分間加熱し、酵素を失活させたものをブランクとした。生成したＤ−グルコースの量をグルコースオキシダーゼ法（グルコースＣＩＩテストワコー）により測定した。基質は０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解し、被験物質はＤＭＳＯに溶解した液をマレイン酸緩衝液に添加（ＤＭＳＯの終濃度２．５％）して用いた。対照群と比較して生成されたＤ−グルコース濃度から、酵素活性の阻害率を算出した。

酵素液の調製
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（体重約１５０〜３５０ｇ）の空腸から得られた刷子縁膜を粗酵素として用いた。刷子縁膜は、０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に懸濁し、上記の反応条件で、スクラーゼ阻害試験においては約５ｍｇ／ｄＬ，マルターゼ阻害試験においては約１０ｍｇ／ｄＬのＤ−グルコースが生成する濃度に希釈して用いた。

上記表１及び表２に示すように、カンカニクジュヨウ肉質茎から得られた、メタノール抽出エキスおよび構造式Ａ〜Ｈで表される化合物に、食後の血糖値の上昇に関わる二糖類加水分解酵素（スクラーゼ、マルターゼ）に対する阻害活性が見出された。

実施例３アルドース還元酵素阻害活性試験
実施例１で得られたカンカニクジュヨウのメタノール抽出エキス及び構造式Ａ又はＥ〜Ｊのいずれかで表される化合物について、次に示す方法によりアルドース還元酵素阻害活性試験を行った。その結果を表３及び表４に示す。

［試験方法］
Ｄｕｆｒａｎらの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｅｄ．３２，９９（１９８４）］を一部改変した実験を行った。酵素液としては、ウィスター系雄性ラット（体重約１５０〜３００ｇ）の２０匹分のレンズを１０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含むリン酸緩衝液（１３５ｍＭ、ｐＨ７．０）５０ｍＬ中でホモジネートした後、１０００００×ｇで３０分間遠心分離し、上清液を用いた。この酵素液は、−２０℃以下で凍結保存し、用時解凍し、リン酸緩衝液にて５〜２０倍に希釈して用いた。

反応液は、リン酸緩衝液（１３５ｍＭ、ｐＨ７．０）０．５ｍＬ中に、硫酸リチウム（１００ｍＭ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）（０．０３ｍＭ）、基質としてＤＬ−グリセルアルデヒド（１ｍＭ）、酵素液（０．１ｍＬ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した被験物を含む液（０．０２５ｍＬ）を含むように調整した。

反応は、ＮＡＤＰＨを上記濃度になるように反応液に加えることで開始した。反応液を３０℃に保った状態でＮＡＤＰＨを反応液に加えて、反応を開始させた。３０分後に０．５Ｎの塩酸０．１５ｍＬを加えて、反応を停止させた。次に、１０ｍＭのイミダゾールを含む６Ｎの水酸化ナトリウム溶液０．５ｍＬを加え、６０℃で１０分間加熱して、ＤＬ−グリセルアルデヒドの還元化物であるグリセロールとともに生成したＮＡＤＰを蛍光物質に変え、蛍光強度を測定した（励起波長３６０ｎｍ、測定波長４６０ｎｍ）。

上記表３および表４に示すように、カンカニクジュヨウ肉質茎から得られた、メタノール抽出エキスおよび構造式ＡおよびＥ〜Ｊで表される化合物に、糖尿病の合併症発症の律速酵素であるアルドース還元酵素に対する阻害活性が見出された。

Claims

下記の構造式Ａで表される化合物：

、下記の構造式Ｉで表される化合物：

及び、下記の構造式Ｊで表される化合物：

からなる群の中から選ばれる１又は２以上の化合物を有効成分として含むことを特徴とするアルドース還元酵素阻害剤。
下記の構造式Ｂで表される化合物：

、下記の構造式Ｃで表される化合物：

、下記の構造式Ｄで表される化合物：

及び、下記の構造式Ｉで表される化合物：

からなる群の中から選ばれる１又は２以上の化合物を有効成分として含むことを特徴とする抗糖尿病剤。
下記の構造式Ｂで表される化合物：

、下記の構造式Ｃで表される化合物：

及び、下記の構造式Ｄで表される化合物：

からなる群の中から選ばれる１又は２以上の化合物を有効成分として含むことを特徴とする医薬。
請求項２に記載の抗糖尿病剤を含有することを特徴とする抗糖尿病用機能性食品。