KR20020027492A

KR20020027492A - 콜레스테롤 저하제，2차 담즙산 생산 억제제 및 음식품

Info

Publication number: KR20020027492A
Application number: KR1020027000570A
Authority: KR
Inventors: 사와다하루지; 요시다야스토; 와다야스에; 오이시켄지; 이토마사히코; 모리와카에; 와타나베츠네카즈
Original assignee: 구와하라 쥰; 가부시키가이샤 야쿠루트 혼샤
Priority date: 1999-07-21
Filing date: 2000-07-19
Publication date: 2002-04-13
Also published as: US7754204B2; WO2001005412A1; KR100717742B1; US7101544B1; AU6020500A; EP1206939A1; AU774978B2; EP1206939B1; US20050244426A1; US7413740B2; CN1361696A; US20080260709A1; DE60040548D1; CN100356927C; EP1206939A4

Abstract

본 발명은 효모를 유효성분으로 하는 2차 담즙산 산생억제 및 콜레스테롤 저하제를 개시한다.

Description

콜레스테롤 저하제，2차 담즙산 생산 억제제 및 음식품 {CHOLESTEROL-LOWERING AGENTS, SECONDARY BILE ACID PRODUCTION INHIBITORS, AND FOOD AND DRINKS}

근래, 순환기 질환에 의한 사망율은 매년 증가하고 있으며, 심근경색, 뇌경색 등 동맥경화에 기인한 질환을 합하면, 성인의 사망원인중 제 1위를 차지하고 있다.

동맥경화의 원인으로서는 여러 가지의 것이 있으나, 혈장 지질, 특히 혈장 콜레스테롤치의 상승이 가장 중요한 위험 인자의 하나로 되어 있다.

혈장 콜레스테롤치의 상승 원인으로서는 우선 유전적인 질환이 있다. 이 경우, 위독한 환자에 대해서는 식사요법과 동시에 콜레스테롤 합성저해제, 니코몰(Nicomol), 클로피브레이트(Clofibrate), 이온교환수지, 단백 동화 스테로이드 등의 약제가 사용되고 있으나, 이들의 약제는 간독성, 위장장해, 발암성 등의 부작용이 있다.

혈장 콜레스테롤치 상승의 또 하나의 큰 원인으로서, 근래 달걀, 버터, 육류 등을 대량으로 섭취하는 식생활에 의한 지방의 과잉 섭취를 들 수 있으며, 이것은 젊은 연령층에서도 현저히 나타나고 있다. 식사성의 고콜레스테롤혈증의 경우, 통상 위독한 고콜레스테롤혈증에는 이르지 않으나, 젊은 연령기부터 혈관에 서서히 콜레스테롤이 축적하여 성인에 이르러 동맥경화를 일으키는 것이 문제이며, 고트리글리세라이드 혈증과 더불어, 심근경색이나 뇌경색을 초래할 위험성이 있다. 이러한 종류의 고지혈증에 대해서는 부작용이 있는 등 문제가 많은 약물요법보다도 지질 섭취량을 적정 범위로 제한한 식사요법이 중시된다. 그러나, 식사 제한은 정신적 고통을 수반함과 동시에 식생활의 즐거움을 빼앗기 때문에 엄격한 실시는 곤란하고, 효과에 한계가 있는 것이 많다.

혈장중에 과잉으로 존재하는 콜레스테롤은 혈관벽에 축적하여 동맥경화를 초래하나, 콜레스테롤이 간장에 들어간 후, 거기서 축적되지 않고, 담즙산으로 변환되든지 또는 그대로 형태로 장관에 배출되어 대변과 함께 체외에 배설되면, 체내 콜레스테롤의 푸울도 저하하여, 상기 기구에 의한 동맥경화는 예방된다. 그래서, 혈장 콜레스테롤치의 저하뿐만 아니라, 간장 콜레스테롤치의 저하작용을 함께 갖는 것이 기대되고 있다.

한편, 부작용이 적은 콜레스테롤 저하작용을 나타내는 미생물은 지금까지 여러 가지의 보고가 있으나, 효모에 관한 보고는 의외로 적다. 효모로 말하면, 옛부터 맥주효모가 알려져 있으나, 그의 지질대사 개선효과에 대해서는 크롬을 첨가한 맥주효모(1일당 9 g)를 8주간, 노인에게 투여한 결과, 혈청 콜레스테롤치의 저하를 확인한 보고[Ester G. Offenbacher and F. Xavier Pi-Sunyer, Beneficial effet fo Chromium-rich yeast on glucose tolerance and blood lipids in elderly subjects. Diabetes,29, 9l9, (l980)]가 있으나, 염화크롬과 5 g의 맥주효모를 10주간 노인에게 투여한 결과, 혈청 콜레스테롤치나 TG에 대하여 영향을 주지 않았다는 보고 [Caral J. Rinko, and F. Xavier Pi-Sunyer, The effects of inorganic chromium and brewer's yeast on glucose tolerance, plasma lipids, and plasma chromium in elderly subjects., Am. J. Clin. Nutr., 42, 454, (1985)]나 크롬을 첨가하지 않는 맥주효모를 사용한 대인시험에서는 혈청 콜레스테롤치의 저하 효과는 없었다는 보고 [Arne T. Hostmark, Einar Eilertsen and Ole Gronnerod, Plasma lipid and lipoprotein responses of rats to starch and sucrose diets with and without brewer's yeast., J. Nutri.,109, 1073, (1978)]이 있다. 또, 토끼의 먹이에 대두 단백을 혼합하여 투여하면 혈청 콜레스테롤치가 저하하나, 그의 대두 단백의 50%를 맥주효모로 치환하면 혈청 콜레스테롤치가 역으로 약간 상승했다는 보고[Jorge De Abreu and Nancy Millan, Effect of addition of brewer's yeast to soy protein and casein on plasma cholesterol levels of rabbits. Archivos Latinoameicanos de Nutricion.,44, 18, (1984)]도 있다.

이와 같이, 현재로서는 맥주효모(brewer's yeast)의 지질 대사 개선효과에관하여는 통일적인 견해를 얻을 수 없다.

한편, 다른 효모에서는 효모의 메탄올 추출물이 적색 효모(Sporobolomyces ruberrinus)와Saccharomyces uvarum에 있어서, 약간 콜레스테롤 부하 랫트의 혈청 콜레스테롤치 및 트리글리세라이드치를 감소시켰다는 보고(Shuji CHO, Hisao FUJII, and Jun Shiraiichi, Effect of polysaccharide produced Bacillus natto or alcohol extract of yeast on the lipid metabolism of rats, Bulletin of the Faculty of Home Life Science, Fukuoka Women's University, 16, 65, (1984))가 있으며, 또한, Saccharomyces cerebisiae의 배양상청이 마우스의 혈청 콜레스테롤을 저하시켰다고 하는 보고[Tadaaki Kishida, On the serum Cholesterol-Lowering Effect of Saccharomyces cerebisiae Liquid Culture. Journal of Japanese Society of Food and Nutrition, 26, 371, (1973)]가 있다.

그러나, 맥주효모 이외에 콜레스테롤 저하작용을 나타내는 효모의 보고는 아직도 적고, 또, 효모의 균체 그 자체, 또는 그의 균체구성 성분이 지질대사 개선효과 를 나타낸다는 보고는 없었다.

또한, 사람의 간장에 있어서 콜산(cholic acid) 또는 케노데옥시콜산(chenodeoxycholic acid)과 같은 1차 담즙산이 콜레스테롤로부터 합성되어 글리신 또는 타우린과 콘쥬게이트하여 글리신-콘쥬게이트, 또는 타우린-콘쥬게이트 담즙산으로 되고, 이것이 담관을 통하여 소화관에 분비된다. 담즙산은 그의 계면활성작용에 의해 음식품 중의 지질을 유화 분산시키고, 췌장액의 효소·리파제에 의한 분해와 흡수를 촉진하고, 회장에서 능동적으로 재흡수된다. 재흡수된담즙산은 문맥을 통하여 간장에 되돌아오고, 다시 소화관에 분비되어 장간 순환을 구성하고, 이 순환을 반복한다.

회장에서 흡수되지 않은 담즙산은 장내 세균에 의해 탈콘쥬게이트(decongugation)이나 7α-데히드록시화, 산화, 환원, 에피머화 등의 수식을 받아 2차 담즙산으로 변환된다. 이 과정에서 생긴 주요한 2차 담즙산은 데옥시콜산과 리토콜산(lithocholic acid)이며, 각각 1차 담즙산인 콜산과 케노데옥시콜산의 7α-데히드록시화 반응에 의해 생긴다. 2차 담즙산의 일부는 대장에서 수동적으로 흡수되어 간장으로 이행되어 1차 담즙산과 마찬가지로 장간 순환을 반복하나, 나머지 담즙산은 대변으로 배설된다.

근래, 대장관 강내의 장내세균에 의해 산생되는 데옥시콜산이나 리토콜산 등의 2차 담즙산은 대장암, 간암, 췌장암, 담관암 등의 발증에 깊이 관여하고 있는 것이 밝혀지고 있다. 일반적으로 발암의 과정은 화학발암제나 방사선, 바이러스 등에 의해 유전자에 돌연변이가 생기는 이니시에션과, 그런 다음, 프로모터에 장기간 폭로됨으로서 증식과 분화에 이상이 생기는 프로모션의 2 단계로 성립된다고 생각되고 있다. 지금까지, 데옥시 콜산이나 리토콜산 등의 2차담즙산은 후자의 과정에서 프로모터로서 작용하여 대장암, 간암, 췌장암, 담관암의 발증을 촉진하는 것이 보고되어 있다(Narisawa, T., et. al., J. Natl. Cancer Inst., 53, 1093-I097, l974, Tsuda, H., et. al., Gann, 75, 871-5, l984, Makino, T., et. al., J. Natl, Cancer Inst., 76, 967-75, 1986). 또한, 2차 담즙산의 발암 프로모터 활성은 1차 담즙산에 비하여 훨씬 강한 것도 나타내고 있다(Narisawa, T., et, al., J.Natl, Cancer Inst., 53, 1093-1097, 1974, Reddy, BS., et. al., Caner Res., 37, 3238-3242, 1977). 또한, 최근, 데옥시콜산에 관해서는, 암이외에도 담석증의 발증에 관계할 수 있는 것을 나타내고 있다(Marcus, SN., Heaton, KW., Gut, 29, 522-533, 1988).

이와 같이, 대장관 강내에서 장내세균에 의해 산생되는 데옥시콜산이나 리토콜산 등의 2차 담즙산은 강력한 발암 프로모터 활성을 가짐과 동시에 담석증의 원인도 될 수 있으므로 2차 담즙산의 산생을 억제함으로서 대장암, 간암, 췌장암, 담관암, 담석증 등의 질환을 예방 또는 치료하는 것이 가능하다.

지금까지, 페니실린계의 항생물질인 앰피실린(Low-Beer, TS., Nutter, S., Lancet, 2(8099), 1063-1065, 1978), 3α,12β-디히드록시-5β-콜란-24-N-메틸아민 (Roda, A., et. al., J. Pharm. Sci., 81, 237-240, 1992), 올리고당의 일종인 락투로오즈 (Magengast, FM., Eur. J. Clin, Invest., l8, 56-61, 1988) 또는 소맥당 (Lampe, JW., et, al., Gut, 34, 531-536, 1993)에 관하여는 효과는 약하지만, 2차 담즙산의 산생을 억제하는 것이 보고되어 있다.

앰피실린 및 3α,12β-디히드록시-5β-콜란-24-N-메틸아민은 대장관 강내에 서 7α-데히드록시화 반응을 촉매하는 세균을 배제함으로서 2차 담즙산의 산생을 억제하나, 장기간 복용할 때에는 내성균의 출현이나 부작용의 발현이 문제로 된다. 또, 항생물질을 이용하여 2차 담즙산의 산생에 관여하는 세균만을 특이적으로 배제하는 것은 사실상 불가능하고, 유산균이나 비피더스 균 등의 사람의 건강 유지에 중요한 역할을 하고 있는 장내 세균도 동시에 제거해 버리는 중대한 문제를 일으키는 결점이 있다.

한편, 락투로오즈나 소맥강은 주로 대장관의 pH를 저하시킴으로서 가장 적합한 pH가 중성 부근인 7α-데히드록시라제의 활성을 억제하고, 2차 담즙산의 산생량을 저하시키는 것으로 생각된다. 그러나, 이들 물질은 유효성의 면에서 아직도 충분하지 않고, 질병의 예방 및 치료에 기여할 수 있을 정도의 효과를 나타내지 않는다.

따라서, 본 발명의 목적은 부작용이 적고, 안전한 효모를 이용하여 혈중이나 간장의 콜레스테롤을 유효하게 저하할 수 있는 콜레스테롤 저하제를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 대장암, 간암, 췌장암, 담관암, 담석증 등의 질환의 예방 또는 치료에 유용하고, 안전성이 뛰어난 2차 담즙산 산생억제제를 제공하는 것이다.

본 발명은 혈중이나 간장의 콜레스테롤을 저하시키고, 동맥경화지수를 개선할 수 있는 콜레스테롤 저하제; 대장암, 간암, 췌장암, 담석증 등의 예방 및 치료에 유용한 2차 담즙산 산생 억제제 및 그의 음식품에의 이용에 관한 것이다.

도 1은 콜레스테롤 첨가식과 무첨가식 투여군의 혈장 콜레스테롤치를 나타내는 도이다.

[발명을 실시 하기 위한 최선의 형태]

본 발명의 콜레스테롤 저하제 또는 음식품에 이용하는 효모는 칸디다속, 이사첸키아속, 한세니아스포라속, 클로엑케라속, 클루이베로마이세스속, 피치아속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모이고, 이들은 1종이어도 또는 2종 이상 피치아속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모이고, 이들은 l종이어도 또는 2종이상을 혼합하여 이용하여도 좋다. 상기 효모는 생균, 가열 균체, 동결 건조물, 이들의 파쇄물, 이들의 구성물이어도 좋다.

상기의 속에 속하는 효모의 중, 바람직한 것으로서는, 예를 들면 칸디다 케피르, 이사첸키아 오리엔탈리스, 한세니아스포라 우바룸, 클로엑케라 아프리카나, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 피치아 파리노사, 톨루라스포라 델부루엑키를 들 수 있고, 이들중 가장 바람직한 효모는 다음의 효모이다:

칸디다 케피르(Candida kefyr) YIT 8237 (FERM BP-7214, 원기탁일 1999 년 7 월 l6일, 기탁기관 일본국 통산성 공업기술원 생명공학공업기술연구소, 우편 번호 305-8566 일본국 이바라키켄 츠쿠바시 히가시 1-1-3(이하 동일)), 한세니아스포라 우바룸(Hanseniaspora uvarum) YIT 8164 (FERM BP-72l2, 원기탁일 1999년 7월 l6일), 이사첸키아 오리엔탈리스(Issatchenkia orientalis) YIT 8266 (FERM BP-7215, 원기탁일 1999년 7월 16일), 클로엑케라 아프리카나(Kloeckera africana) YIT 8165 (FERM BP-7213, 원기탁일 1999년 7월 16일), 클루이베로마이세스 마르크시아누스(Kluveromyces marzianus) YIT 8292 (FERMBP-72l7, 원기탁일 1999년 7월 16일), 클루이베로마이세스 락티스(Kluveromyces lactis) YIT 8263 (FERM BP-72l6, 원기탁일 1999년 7월 16일), 피치아 파리노사(Pichia farinosa) YIT 8058 (FERM BP-72l0, 원기탁일 1999년 7월 l6일), 톨루라스포라 델부루엑키(Torulasporsdelbrueckii) YIT 8114 (FERM BP-72l1, 원기탁일 1999년 7월 l6일).

또한, 이들의 미생물은 식품(와인, 우유술, 치이즈) 제조에 사용되는 효모로서 옛날부터 알려져 있으며, 인체에 대하여 극히 안전한 균주이다.

상기 균주의 성상을 나타내면 표 1∼표 5와 같으며, 더 이스트[(The Yeast), 제 3판, N. J. W. Kreger-Van Rij, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, l984]에 기재된 동종 미생물의 성상과 거의 동일하다.

다음에 본 발명의 2차 담즙산 산생 억제제에 이용되는 효모에 관하여 설명한다.

2차 담즙산 산생 억제제에 이용되는 효모는 특히 한정되지 않으며, 또한 효모에는 효모를 배양하여 얻어진 생균체, 가열 균체, 동결 건조물, 그들의 파쇄물 및 그들의 구성물이 포함된다.

본 발명에서 사용하는 효모가 콜산 등의 7α-히드록시기를 탈리하는 반응을 저해하고, 2차 담즙산인 데옥시콜산 등의 생성을 저해한다고 하는 것은 지금까지 보고되어 있지 않다. 본 발명은 효모의 1차 담즙산이 2차 담즙산으로 변환하는 것을 억제 저해하는 작용을 이용한 것이며, 특히 콜산, 타우로콜산, 글리코콜산, 케노데옥시콜산 등의 1차 담즙산 흡착능 또는 아세트산, 프로피온산, 부티르산 등의 단쇄 지방산의 장내 농도 상승능이 우수한 효모는 7α-히드록시기 탈리반응을 저해하는 효과가 우수하여 바람직하다.

2차 담즙산 산생 억제제에 대해서는 효모 중, 바람직한 것으로서는 이사첸키아속, 클루이베로마이세스속, 한세니아스포라속, 사카로마이세스속, 히포치피아속, 칸디다속, 톨루라스포라속, 피치아속 및 지고사카로마이세스속에 속하는 효모를 들 수 있고, 이들은 1종 또는 2종 이상을 혼합하고 사용할 수 있다.

구체적으로는, 이사첸키아 오리엔탈리스, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 클루이베로마이세스 써모톨레란스, 한세니아스포라 우바룸, 사카로마이세스 세레비시에, 사카로마이세스 다이렌시스, 사카로마이세스 엑시구스, 사카로마이세스 유니스포라스, 사카로마이세스 바야나스, 히포치피아부르토니, 칸디다 케피르, 칸디다 엣첼시, 칸디다 제이라노이데스, 칸디다 솔라니, 칸디다 말토사, 칸디다 트로피칼리스, 칸디다 실린드라시에, 칸디다 유틸리스, 톨루라스포라 델부루엑키, 피치아 아노말라, 피치아 홀스티 및 지고사카로마이세스 록시가 바람직한 것으로서 들 수 있으며, 어둑이 이들중, 다음 효모가 최적이다.

이사첸키아 오리엔탈리스(Issachenkia orientalis) YIT 8266 (FERM BP-7215), 클루이베로마이세스 마르크시아누스(Kluyveromyces marxianus) YIT 8292(FERM BP-72li), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveomyces lactis) YIT 8263 (FERM BP-72l6), 클루이베로마이세스 써모톨레란스(Kluyveromyces thermotolerans) YIT 8294 (ATCC 20309), 한세니아스포라 우바룸(Hansenia uvarum) YIT 8164(FERM BP-7212), 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) YIT 8116 (ATCC 48554}, 사카로마이세스 다이렌시스(Saccharomyces dairensis) YIT 8191 (CBS 3007), 사카로마이세스 엑시구스 (Saccharomyces exiguus) YIT 8109(CBS 3019), 사카로마이세스 유니스포라스(Saccharomyces unisporas) YIT 8226 (FERM BP-7209, 원기탁일 1999년 3월 25일, 기탁기관 일본국 통산성 공업기술원 생명공학공업기술연구소, 우편번호 305-8566 일본국 이바라키켄 쯔쿠바시 히가시 1초메, 1반3고), 사카로마이세스 바야나스 (Saccharomyces bayanus) YIT 8128 (CBS 380), 히포피치아 부르토니(Hyphopichia burtonii) YIT 8299 (CBS 2352), 칸디다 케피르(Candida kefyr) YIT 8237 (FERM BP-7214) 칸디다 엣첼시 (Candida etchellsii) YIT 8278(ATCC 60119), 칸디다 제이라노이데스(Candida zeylanoides) YIT 8018 (IFO 0719), 칸디다 솔라니(Candida solani) YIT 8023 (CBS 1908), 칸디다말토사(Candida maltosa) YIT 8283 (ATCC 28140), 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis) YIT 8286 (CBS 94), 칸디다 실린드라시에(Candida cylindracea) YIT 8276 (ATCC 14830), 칸디다 유틸리스(Candida utilis) YIT 8204 (ATCC 9950), 톨루라스포라 델부루엑키(Tolulaspora delbruekii) YIT 8313 (JCM 2204) 및 YIT 8133 (IFO 1172), 피치아 아노말라(Pichia anomala) YIT 8298 (JCM 3587) 및 YIT 8297 (JCM 3583), 피치아 홀스티(Pichia holstii) YIT 8038 (ATCC 58048) 및 지고사카로마이세스 록시(Zygosaccharomyces rouxii) YIT 8129 (CBS 732).

또한, 이들 효모는 옛날부터 식품(와인, 치이즈)의 제조에 사용되어 왔으며, 인체에 대하여 극히 안전한 미생물이다. 또, 이들의 균체는 수 미크론의 입자이므로, 식감에 영향을 주는 20 미크론 이상의 입자에 비하여 훨씬 복용하기 쉬운 특징을 갖고 있다. 상기 효모의 성상으로서 이사첸키아 오리엔탈리스(Issatchenkia orientalis) YIT 8266 (FERM BP-7215)의 성상을 구체적으로 나타내면 표 1∼표 5와 같으며, "더 이스트 (The yeast), 제 3판 N. J. W. Kreger-Van Rij, Elsevier Science Publishers B. V, Amsterdam, I984)에 기재된 동종 효모의 성상과 동일하다.

표 6

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266

본 발명에 이용하는 효모는 통상의 방법, 예를 들면 효모 엑기스나 폴리펩톤을 함유하는 복합배지 또는 무기염을 주체로 하는 합성배지에서 배양함으로서 제조할 수 있다.

이와 같이 하여 얻어진 효모는 생균 또는 그의 동결 건조물 또는 가열처리 등을 수행한 사균체, 그들의 파쇄물, 더욱이 이들의 구성물으로서, 의약조성물 또는 음식품에 이용할 수 있다. 또한, 본 발명에 이용하는 효모는 시판의 것이어도 좋다.

상기 효모는 통상의 방법에 따라 약학적에 허용되는 담체와 함께 각종 제형의 의약 조성물로 할 수 있다. 예를 들면, 경구용 고형제제를 조제하는 경우에는, 상기 효모에 부형제, 필요에 따라, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미제, 교취제 등을 가한 후, 통상의 방법에 의해 정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다. 그와 같은 첨가제로서는 당해 분야에서 일반적으로 사용되는 것으로 좋고, 예를 들면, 부형제로서는 유당, 백설탕, 염화나트륨, 포도당, 전분, 탄산칼슘, 카오린, 미세 결정 셀루로오즈, 규산 등을 들 수 있고, 결합제로서는 물, 에탄올, 프로판올, 단미 시럽, 포도당액, 전분액, 젤라틴액, 카르복시메틸셀루로오즈, 히드록시프로필셀루로오즈, 히드록시프로필스타치, 메틸셀루로오즈, 에틸셀루로오즈, 인산칼슘, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있고, 붕괴제로서는 건조 전분, 알긴산나트륨, 한천분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 라우릴황산나트륨, 스테아린산모노글리세라이드, 유당 등을들 수 있고, 활택제로서는 정제 탈크, 스테아린산염, 붕사, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있고, 교미제로서는 백탕, 귤피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다.

경구용 액체제제를 조제하는 경우, 상기 효모에 교미제, 완충제, 안정화제, 교취제 등을 가하고, 통상의 방법에 따라 내복액제, 시럽제, 에릭실제 등을 제조할 수 있다. 이 경우 교미제로서는 상기에서 든 것으로 좋고, 완충제로서는 시트르산나트륨 등을 들 수 있고, 안정화제로서는 트라간트, 아라비아검, 젤라틴을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 음식품은 상기 효모를 각종 음식품에 첨가함으로서 제조할 수 있다.. 여기에서 바람직한 음식품으로서는 발효유, 과즙음료, 스프, 전병, 쿠키 등을 들 수 있다. 또한, 음식품에는 동물 사료도 포함된다.

상기의 각 제제중에 배합되어야 하는 효모의 양은 이를 적용해야 하는 환자의 증상에 따라 또는 그 제형 등에 따라 일정하지 않으나, 일반적으로 제제 중 1∼100중량%로 하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 제제 또는 음식품의 1일당 투여량은 환자의 증상, 체중, 연령, 성별 등에 따라 다르며, 일률적으로 결정할 수 없으나, 효모로서 통상 성인 1일당 약 10mg∼30g, 바람직하기로는 약 1∼5g으로 하면 좋고, 이를 1일 l회 또는 2∼4회 정도에 나누고 투여하는 것이 바람직하다.

실시예

다음에 실시예를 들어 본 발명을 더 상세히 설명하나, 본 발명은 이들에 하등 한정되는 것은 아니다. 또한,「%」는 「중량%」를 의미한다.

실시예 1

(a) 효모의 조제

포테이토덱스트로오즈 한천 스란트로 보존되어 있는 각종 효모의 각각의 1백금고리를 표 7에 나타내는 배지 100㎖를 포함하는 각각의 사까구찌 플라스코(500㎖)에 식균하고, 30℃에서 진탕 배양(120 spn)했다.

2일후에 10리터 발효조(실제 작용 용적 7리터)에 사까구찌 플라스크 2개분을 접종하고 30℃에서, 통기속도 0.5 vvm, 회전속도 250 rpm, pH 6.0 (5N의 수산화나트륨으로 자동제어)의 조건하에서 2일간, 통기 교반 배양했다.

배양종료후, 냉각 원심분리기를 사용하여 균체와 상청을 분리한 후, 균체를 증류수로 2번 세척했다. 이 세척 균체를 2리터의 삼각 플라스크에 넣고, 증류수 1리터를 가한 후, 115℃에서 10분간 오토클레이브에서 가열했다. 이 가열 균체를 그대로동결 건조했다.

표 7

전배양 및 본배양의 배지조성

(b) 시험 사료의 조제

(a)에서 제조한 효모를 이용하고, 하기 표 8의 조성의 사료를 통상의 방법에 따라 혼합하고 조제했다. 각 시험 사료도 콜레스테롤 0.5%, 콜산나트륨 0.25%를 포함하는 콜레스테롤 첨가식품으로 하고, 효모 함유 사료에는 효모 동결 건조균체 5%또는 10%를 첨가했다.

표 8

사료조성 (% 표시)

시험 방법 콜레스테롤 저하작용

① 시험 사료

실시예 1(a)에서 조제한 것을 사용했다.

② 동물 및 사육방법

a) 10% 효모 함유 사료 투여군

5주령의 wistar계 숫컷 랫트(일본 쿠레아 제)를 오리엔탈효모제 F-2 분말 사료로 7일간 예비 사육한 후, 1군 8마리의 군으로 하고, 표 8의 10%효모 함유 사료 를 7일간 투여했다. 랫트는 금속제 케이지에서 사육하고, 사료 및 물은 자유롭게 섭취시켰다.

b) 5% 효모함유 사료 투여군

5주령의 wistar계 숫컷 랫트(일본 쿠레아 제)를 오리엔탈효모제 F-2 분말 사료로 7일간 예비 사육한 후, 1군 8마리로 하고, 표 8의 5% 효모함유 사료를 14일간 투여했다. 랫트는 금속제 케이지로 개별 사육하고, 사료 투여양은 1일 15g의 제한식으로 하고, 물은 자유롭게 섭취시켰다.

③ 혈장 지질의 측정

a) 10%효모 함유 사료 투여군

투여개시로부터 7일째에 넴부탈 마취하(비절식)에서 복부 대동맥으로부터 캐뉼레 채혈하고, 혈장 콜레스테롤 및 혈장 HDL 농도를 측정했다. 총콜레스테롤 농도는 히타찌 7l70형 생화학 자동분석기를 사용하여 측정했다.

HDL 콜레스테롤 농도는 교와메딕스제 데타미나 HDL을 사용하여 HDL 성분 이외의 리포단백성분을 침강시킨 후, 히타찌 7170형 생화학 자동분석기를 사용하여 측정했다.

b) 5% 효모 함유 사료 투여군

투여개시로부터 7일째에 꼬리정맥에서 채혈하고, 혈장 콜레스테롤 및 혈장 HDL 농도를 측정했다. 총콜레스테롤 농도는 히타찌 7170형 생화학 자동분석기를 사용하여 측정했다.

HDL 콜레스테롤농도는 교와메딕스제 데터미나 HDL을 사용하여 HDL 성분 이외의 리포단백 성분을 침강시킨 후, 히타찌 7170형 생화학 자동분석기를 사용하여 측정했다.

④ 간장 지질의 측정

생리 식염수로 간장을 관류한 후, 채취한 간장을 동결건조했다. 지질의 추출은 Folch들의 방법에 따라, 클로로포름: 메탄올(2:1)로 행했다. 그런 다음, 클로로포름 하층을 농축 건고하고, 에탄올로 다시 희석하여 각종 간장 지질 성분의 측정에 제공했다. 간장 지질중 콜레스테롤량은 데터미나 TC 555를 이용하여 측정했다.

동물 시험 성적의 평가법

① 통계 수법

각 동물 시험의 결과는 Bartlett 법에 따라 분산의 균일성을 검정한 후, 등분산의 경우는 일차원 배치의 분산분석을 경유하여 Dunnett 형의 다중 비교검정을, 부 등분산의 경우 (Bartlett 법에 의해 유의 수준 5%에서 검정하고, 유의차가 얻어진 검정대상)은 Kruskal-Wallis의 검정을 경유하여 Dunnett형의 다중 비교검정을 행했다. Dunnett형의 다중 비교검정에서는 유의 수준을 5% 및 1%로 설정하고, 각 수준에서 검정을 행했다.

② 각 지질 성분의 저하율의 구하는 방법

<혈장중의 콜레스테롤 저하율>

혈장 콜레스테롤 저하율 100%란 콜레스테롤을 포함하지 않는 먹이를 투여한 보통 식군의 랫트의 혈장 콜레스테롤치와 동일 레벨까지 혈장 콜레스테롤치가 저하한 것을 나타낸다. 또한, 혈장 콜레스테롤 저하율 0%란 콜레스테롤 첨가식을 투여한 대조군의 랫트의 혈장 콜레스테롤치와 동일 레벨까지 혈장 콜레스테롤치가 상승한 것을 나타낸다.

③ 동맥경화지수(Atherosclerotic Index)

동맥경화지수(AI)는

AI=(VLDL 콜레스테롤치 ＋ LDL 콜레스테롤치)/HDL 콜레스테롤치로 표시되나, 혈장지질의 값에서 구체적으로 계산하는 경우에는 혈장총 콜레스테롤치와 혈장 HDL 콜레스테롤치를 이용하여 다음 식으로부터 구했다.

AI=(혈장 총콜레스테롤치－혈장 HDL콜레스테롤치)/혈장 HDL 콜레스테롤치

동맥경화지수의 개선율은 각 효모함유 사료투여군의 AI값과 콜레스테롤 첨가 식 투여군(대조군) 및 보통식 군의 AI값으로부터 산출했다. 여기에서 동맥경화지수 개선율 100%란 콜레스테롤 비첨가식 군의 AI값과 동일 값인 것을 나타낸다. 또, 동맥경화지수 개선율 0%란 콜레스테롤 첨가식 군(대조군)과 동일 AI값인 것을 나타낸다.

④ 체중측정

랫트의 체중은 입하시에 측정하고, 각 군사이에서 유의한 체중 차이가 나지않도록 군을 나누고, 예비 사육을 개시했다. 또한, 본 시험 개시시와 시험 종료시에 체중측정을 행했다.

상기의 시험 방법은 이하의 예비시험이나 실시예에 사용한다.

예비시험 :

채혈은 콜레스테롤 첨가식의 투여 개시후, 0일째, 5일째 및 8일째에 꼬리 정맥에서, 또한, 14일째에는 넴부탈 마취하에 복부 대동맥으로부터 행했다. 채취한혈액에서 혈장을 분리한 후, 각 지질성분을 효소법으로 측정했다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 콜레스테롤 투여군의 혈장 콜레스테롤치는 5일째에는 최대치 가까이까지 상승했다. 그 후, 14일째까지 약간 상승하지만, 거의 큰 변화는 없었다. 한편, 콜레스테롤 비첨가식 (콜레스테롤 첨가식에서 콜레스테롤과 콜산나트륨을 제외한 것) 투여군의 혈장 콜레스테롤치는 시험 기간중에도 상승하지 않고, 약간 서서히 감소하는 경향이 측정되었다.

표 9에 콜레스테롤 첨가식 투여 개시후 14일째의 혈장지질의 값을 나타낸다. 콜레스테롤 비첨가식군의 콜레스테롤치가 72.5 mg/㎗인 것에 반하여 첨가식 군의 그것은 325.3 mg/㎗이며, 약 4.5배 상승하여 있는 것을 알았다. 이에 반하여 혈장 HLD콜레스테롤치는 각각 45.9 mg/㎗에 대하여 31.4 mg/㎗로 유의하게 저하하고 있다.

표 9

혈장지질농도 (14일째)

**p<0.01

표 10에 콜레스테롤 첨가식 투여개시 후 14일째의 간장중의 지질함량을 나타냈다. 콜레스테롤첨가식 군의 콜레스테롤치는 비첨가식 군의 그것에 비하여 약 20배 높은 값을 나타내고 있다.

표 10

간장중의 지질함량(14일째)

**p<0.01

실시예 2

실시예 1에 나타낸 방법으로 자르 배양을 행하고, 각 200g의 동결건조균체(110℃에서 10분 가열 처리한 것)을 조제했다. 이를 콜레스테롤 첨가식에 각각 10% 혼합사료 (표 8의 10% 효모군)로 하고, 1군 8마리의 군으로 사육하고, 7일간, 자유롭게 섭취하도록 하였다.

표 11∼표 13에 고콜레스테롤식을 투여한 대조군의 혈장 콜레스테롤치에 비교하였을 때의 콜레스테롤 저하율 및 동맥경화지수의 개선율(%)을 나타냈다. 또한,어느 쪽의 군도 체중에 유의한 변화는 없었다.

표 11

혈장 콜레스테롤 저하율 및 동맥경화지수 개선율

표 12

혈장 콜레스테롤 저하율 및 동맥경화지수 개선율

표 13

혈장 콜레스테롤 저하율 및 동맥경화지수 개선율

실시예 3: 10% 효모 첨가식 투여시험

시험방법;

실시예 1(a)에 나타낸 방법으로 자르 배양하고, 각 200g의 동결건조균체를 조제했다. 이렇게 조제한 동결건조균체를 콜레스테롤 첨가식에 각각 10% 혼합(표 8의 10% 효모군)하고, 1군 8마리의 군으로 사육하고, 7일간, 자유롭게 섭취시켰다. 표 14에 혈장지질의 측정 결과를 나타낸다.

콜레스테롤을 첨가한 고지방식을 부여함으로서 대조군에서는 총콜레스테롤치가 증가하고, 동맥경화지수는 7.97∼9.62까지 상승했으나, 같은 고지방식이라도 본원 발명에 관한 효모균체를 10%첨가한 시험군에서는 상기 분석 항목의 모두에 있어서 수치의 상승이 현저히 억제되어 있음을 알 수 있다.

이와 같이, 클루이베로마이세스 마르크시아누스 YIT 8292, 클루이베로마이세스 락티스 YIT 8263, 한세니아스포라 우바룸 YIT 8164, 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266, 칸디다 케피르 YIT 8237, 피치아 파리노사 YIT 8058은 모두 극히 높은 혈장 콜레스테롤 저하율을 나타내고, 동맥경화지수를 개선했다.

실시예 4: 5%효모 첨가식 투여시험

5주령의 수컷 위스터 랫트를 이용하여 실시예 3과 동일한 시험을 했다. 다만, 시험군의 사료에 첨가하는 효모 동결건조 균체를 각각 5% 혼합(표 8의 5%효모군)하고, 1군 8마리의 별개로 사육하고, 14일간, 1일 15g의 제한식을 주었다.

혈장지질의 분석결과는 표 15에 나타난 바와 같으며, 고지방식을 줌으로써 대조군에서는 총콜레스테롤치, 동맥경화지수가 상승했으나, 동일 지방식이라도 5%의 효모균체를 첨가한 시험군에서는 상기 분석항목의 모두에 있어서 상승이 현저히 억제되었다.

표 16에 간장 지질의 측정 결과를 나타냈다. 간장 총콜레스테롤 양은 대조군에 비하여 어느 쪽의 시험군도 유의하게 저하되었다. 이와 같이, 본원 발명에 관한 효모는 그의 경구투여에 의해 혈장지질의 저하뿐만 아니라, 간장지질의 저하작용도 나타내는 우수한 항콜레스테롤 소재인 것을 알 수 있다.

표 16

^**P<0.01

실시예 5 담즙산 흡착능

시험방법;

콜산(CA), 타우로콜산(TCA), 글리콜콜산(GCA), 케노데옥시콜산(CDCA), 및 데옥시콜산(DCA)의 나트륨염(시그마사제)을 최종농도가 1 mM이 되도록 pH 6.7의 0.1 M 인산 완충액 또는 pH 7.5의 0.1 M 인산 완충액에 용해했다.

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결건조 균체 100 ㎎을 15㎖의 원심튜브에 취하고, 여기에 상기에서 제조한 담즙산 용액 3.5 ㎖를 가하고, 37℃에서 진탕(l20 spm)했다. 1시간후, 효모균체를 원심분리(12,000 rpm, 10분간)에 의해 침전시키고, 상청을 분취했다. 이 상청중의 담즙산을 엔자바일 II(다이이치카가쿠야쿠힝사제)로 정량하고, 하기 식으로부터 담즙산 흡착율을 구했다. 담즙산 흡착율이란 첨가한 전담즙산에 대한 효모에 흡착한 담즙산의 비율(%)이며, 효모와 담즙산의 흡착 강도를 나타낸다.

담즙산 흡착율(%)=[{첨가한 담즙산(nmol)-상청중의 담즙산(nmol)}

/첨가한 담즙산(nmol)] × 100

표 17에 담즙산 흡착율을 나타낸다. 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266은 콜산, 타우로콜산, 글리코콜산 및 케노데옥시콜산을 흡착하여 우수한 1차 담즙산 흡착능을 나타내었다. 또한, 효모와 콜산의 흡착율은 pH 6.7과 pH 7.2의 반응액에서 거의 동등의 값이었다. 이들 결과로부터 효모는 대장관 강내에서 1차 담즙산과 강하게 결합하고, 장내 세균에 의한 탈콘쥬게이트나 7α-데히드록시화 반응을 방해함으로서 2차 담즙산의 산생을 저해할 수 있음을 나타낸다.

또한, 2차 담즙산인 데옥시콜산과도 강하게 결합했다. 이것으로부터, 효모는 2차 담즙산의 산생을 억제함과 동시에 생성된 2차 담즙산을 흡착, 비동화함으로서 그의 독성을 경감시키는 작용도 가진다.

표 17

이사첸키아 오리엔탈리스의 담즙산 흡착율(%)

실시예 6

실시예 5와 동일한 방법으로 각종 효모의 담즙산 흡착율을 측정한 결과를 표 18에 나타낸다. 어느 쪽의 효모도 담즙산, 1차 담즙산의 케노데옥시콜산 및 2차 담즙산의 데옥시콜산이 양화한 흡착성을 나타내었다.

표 18

각종 효모의 담즙산 흡착율

실시예 7 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결건조 균체에 의한 2차 담즙산 산생억제

예비시험

5주령의 위스터계 숫컷 랫트(일본 쿠레아 제)를 오리엔틸 효모사제 F-2 분말 사료로 7일간 사육한 후, 1군 8마리씩 각군간에 체중 차이가 나지 않도록 군을 나누고, 표 19의 시험사료를 14일간 투여했다. 랫트는 금속제 케이지로 개별 사육하고, 사료 및 물은 자유롭게 섭취시켰다.

표 19

사료 조성[%]

14일간 사육후의 보통식군, 고담즙산 식군의 사이에서는 섭취양 및 체중 증가량에는 유의한 차이는 인식되지 않았다.

담즙산량

25 mg의 12∼14일째의 동결건조 분변을 스크류 캡 부착 시험관(15 ㎖)에 칭량하여 넣고, 0.15μmol의 내부표준물질(5-β-프레그난-3α,17α,20α-트리올)과 5 ㎖의 에탄올을 가하고, 70℃의 블록 히터에서 2시간 가열했다. 불용물을 원심분리(3000 rpm, 15분간)에 의해 침전시켰다. 상청을 다른 시험관에 옮기고, 질소가스 송 풍하에서 건조했다. 추출물을 0.5 ㎖의 메탄올에 용해한 후, 0.45㎛의 필터(일본 밀리포아사 제)를 통하여 불용물을 제거했다. 10㎕의 샘플을 HPLC 시스템(자스코사제)으로 아래의 조건으로 분리했다.

표 20

담즙산의 분리조건

______________________________________________________________________

A군: 아세토니트릴/메탄올/30mM 암모늄 아세테이트

(30:30:40) 혼액

B군:아세토니트릴/메탄올/30mM 암모늄 아세테이트

(20:20:60) 혼액

용출조건: 100% B액, 0% A액으로부터 직선적으로 그래디엔트를 거쳐 32분후에 0% B액, 100% A액으로 하였다. 그 후, 이 조성으로

13분간 용출하였다.

유속: 1.0 ㎖/분

컬럼 온도: 25℃

______________________________________________________________________

분리 컬럼을 통과한 용출액에 반응액(0.3 mM β-니코틴산아미드 아데닌 디뉴클레오티드(β-NAD⁺), 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산 및 0.05% 2-멜캅토에탄올을 함유하는 10mM 인산칼륨 완충액, pH 7.8)을 1.0㎖/분의 유속으로 혼합했다.이 혼액을 3α-히드록시 스테로이드 데히드로게나제를 충진한 효소 컬럼, Enzymepak (4.6 ㎜ I. d. × 35 ㎜, 자스코사제)에 보내고, 담즙산의 데히드로실화 반응에 수반하여 생기는 NADH(β-NAD'의 환원형)를 형광 검출기로 모니터링했다(여기 파장 345 ㎚, 발광 파장 470 ㎚).

각 담즙산은 표준품의 리텐션 타임으로부터 동정했다. 또한, 담즙산의 농도는 각 피크의 면적으로부터 구했다. 이 때, 내부표준물질의 피크면적으로부터 회수율을 보정했다.

측정결과를 표 21에 나타내나, 콜산을 투여함으로서 대장에 도달하는 1차 담즙산의 양이 증대하고, 2차 담즙산의 산생량이 항진하는 것이 밝혀져 2차 담즙산 산생 억제제의 효과를 감도 좋게 평가할 수 있음이 판명되었다.

표 21

각 담즙산의 분변 배설량(μmol/day)

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결건조균체에 의한 2차 담즙산 억제제

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결건조균체를 고담즙산식에 첨가하여 14일간 투여(5% 혼합투여)했다(표 22). 또한, 이 때, 에너지 값이 동등하게 되도록 카제인, 자당, 지질 및 셀루로오즈 양으로 조정했다. 효모균체의 투여는 시험기간중의 체중 증가양 및 섭이양에 거의 영향을 받지 않았다(표 23).

표 22

사료조성[%]

※ 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266

표 23

시험기간중의 섭식량 및 체중 증가량

(주) 스튜덴트 t-검정

n.s. 유의한 차 없음

표 24 및 25에 나타난 바와 같이, 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266을 투여 함으로서 2차 담즙산의 분변 배설양은 약 82%, 또 분변중의 2차 담즙산 농도는 약84% 저하했다. 이 경향은 특히, 데옥시콜산과 리토콜산에서 현저했다. 한편, 1차 담즙산의 대변 배설양 및 분변중 농도는 해당 균체의 투여에 의해 유의하게 상승했다.

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266은 1차 담즙산에서 2차 담즙산으로 변환을 강력하게 억제하는 작용을 갖고 있다.

표 24

각종 담즙산의 분변 배설량(μmol/day)

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

표 25

분변중의 담즙산의 조성[%]

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결건조 균체에 의하는 맹장내 pH 저하

0.5g의 14일째의 맹장 내용물을 4.5㎖의 정제수에 현탁하고, 0.5㎖의 10% 과염소산 수용액을 첨가하고 4℃에서 하룻밤 보존했다. 이 현탁액을 원심분리(9,000 rpm, 10분)하고, 상청을 분취한 후, 0.45㎛의 필터(일본 밀리포아사제)를 통과시킨 후, HPLC분석에 걸었다.

단쇄 지방산은 도아덴파고교샤(東亞電波工業社)제의 HPLC 시스템을 이용하고, 아래 조건에서 해석했다. 또한, pH 완충용액은 검출기의 직전에서 용리액에 혼합했다.

표 26

단쇄 지방산의 분석조건

______________________________________________________________________

컬럼: 쇼와덴코샤제의 컬럼 KC-811 Shodex(2개)

용출액(유량): 7% 아세토니트릴을 함유하는 15 mM 과영소산 용액

(1 ㎖/분)

컬럼온도: 42℃

pH 조정용액(유속):7% 아세토니트릴, 60 mM 트리스(히드록시메틸)아미노

메탄을 함유하는 15mM 과염소산 용액(1.0 ㎖/분)

검출기: 전도도 검출기(東亞電波工業社제)

셀 온도: 45℃

______________________________________________________________________

표 27

맹장내의 pH 및 단쇄지방산 함량

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

그 결과, 고담즙산식군은 pH 6.65, 총단쇄 지방산량 55.9 mM이였던 것에 대하여 효모 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266 첨가 고담즙산식군은 pH 6.46(유의수준 5%), 총 단쇄 지방산량은 85.6 mM(유의수준 1%)과 맹장내 pH의 저하가 보이며, 대장관 강내를 산성화하여 장내 세균의 7α-데히드록시게나제의 활성을 저하시켰다.

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의동결 건조 균체에 의한 콜레스테롤 대사억제

25 mg의 14일째의 분변을 스크류 캡 부착 시험관(15 ㎖)에 칭량하여 넣고, 0.1μmol의 내부표준물질(5β-콜레스탄)과 1N 수산화나트륨을 함유하는 90% 에탄올 용액 1㎖를 가하고, 80℃의 블록 히터에서 가열했다. 1시간 후에 0.5㎖의 증류수를 가하고, 중성 스테롤을 2.5㎖의 석유 에테르로 2회 추출했다. 추출액을 7.5 ㎖의 증류수로 세척한 후, 황산나트륨으로 탈수하고, 질소 가스 송풍하에서 건고했다. 추출한 중성 스테롤은 트리메틸실릴화한 후, 가스크로마토그래피를 이용하고, 표 28의 조건에서 측정했다.

표 28

크로마토그래피(GC) 분석조건

__________________________________________________________________

GC장치: Yokogawa-Hewlett-Packard제, 모델 5890

컬럼: SPB-1 FS에서 코드한 캐피러리 유리 컬럼(Supelco제)

0.32 mm i.d. × 30 m

컬럼온도: 250℃, 8분→270℃, 10℃/분→270℃, 15분

케리어(유속): He(0.8 ㎖/min)

인젝터: Spilit, T=230℃

검출기: FID, T=280℃

샘플 주입량: 1 ㎕

분석시간: 25분

_______________________________________________________________________

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 투여에 의해 콜레스테롤의 장내 대사 산물인 코프로스타놀이나 코프로스타논의 분변중의 농도가 유의에 저하했다(표 29).이들 콜레스테롤의 장내 대사산물에 관하여는, 대장암 등의 질환의 발증에 관계하고 있으므로(Suzuki, K., et. al., Cancer Lett., 33, 307∼316, 1986), 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266은 콜레스테롤 대사산물의 산생을 억제하고, 각종 질병을 예방, 치료할 수 있다.

표 29

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

실시예 8 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물에 의한 2차

담즙산 산생 억제제

균체내용물의 조제

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 동결 건조 균체를 0.1M의 인산완충액(pH 8.5)에 현탁하고, DYNO-MILL(Shinmaru Enterprises)를 이용하여 기계적으로 파쇄했다. 이 때, 0.45 ㎜ 직경의 글라스 비드를 마쇄제로 사용하고, 마쇄 조작은 현미경 관찰에 의해 95%이상의 균체가 파쇄될 때까지 반복했다. 균체 파쇄액을 9,000g에서 15분간 원심분리하여 상청중에 균체내용물을 분리했다. 이 균체내용물을 모아 동결건조했다.

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물에 의한 2차 담즙산 산생 억제

실시예 7과 같은 방법으로 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266에서 조제한 균체내용물의 2차 담즙산 산생억제 효과를 검증했다.

본 시험의 사료조성은 표 30에 나타냈다. 효모균체 내용물의 투여는 시험 기간중의 체중 증가량이나 섭취양에 거의 영향을 주지 않았다. (표 31).

표 30

사료조성[%]

표 31

시험기간중의 섭식량 및 체중 증가량

(주) 스튜덴트 t-검정

n.s. 유의한 차 없음

표 32 및 표 33에 나타난 바와 같이, 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물을 투여함으로서 2차 담즙산의 분변 배설양은 약 76%, 또는 분변중의 2차 담즙산농도는 약 70%저하했다.

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물은 동결 건조 균체와 마찬가지로 1차 담즙산에서 2차 담즙산으로 변환되는 것을 강력하게 억제하는 작용을 갖고 있다.

표 32

각종 담즙산의 분변 배설량(μmol/day)

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

n.s. 유의한 차 없음

표 33

분변중의 담즙산의 조성[%]

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

n.s. 유의한 차 없음

맹장내의 총 단쇄지방산량 및 pH는 고담즙산 식군이 54.0 mM, pH 6.65이었던 것에 반해, 효모균체내용물 첨가 고담즙산 식군에서는 68.3 mM(유의 수준 5%), pH 6.46(유의 수준 5%)이었다. 따라서, 효모균체내용물은 단쇄지방산량을 증대시킴으로서 대장관 강내를 산성화하고, 장내 세균의 7α-데히드록시게나제의 활성을 저하시키는 작용을 갖고 있었다.

표 34

맹장내의 pH 및 단쇄지방산함량

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

n.s. 유의한 차 없음

이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물의 투여에 의해 콜레스테롤의 장내 대사산물인 코프로스타놀이나 코프로스타논의 분변중 농도가 유의하게 저하하였다. 이것으로부터, 이사첸키아 오리엔탈리스 YIT 8266의 균체내용물은 동결 건조 균체와 마찬가지로 콜레스테롤 대사산물의 산생을 억제하는 것에 의해서도 각종 질병의 예방이나 치유에 기여할 수 있다.

표 35

분변중의 중성 폴레스테롤의 조성[%]

(주) 스튜덴트 t-검정

**유의 수준 5%

* 유의 수준 1%

실시예 9

상기 실시예로 사용한 각종 효모균체를 이용하여 다음 조성의 음식품을 제조했다.

1) 건강식품(정제)

다음 첨가물을 함유하는 조성물을 타정하여 정제로 했다.

표 36

건강 식품의 조성[%]

2) 건강음료

다음 처방에 따라 건강 음료를 제조했다.

표 37

건강 음료의 조성[%]

3) 과즙음료

다음 처방에 따라 과즙음료를 제조했다.

표 38

과즙음로의 조성[%]

4) 발효유

다음 처방에 따라 가열 효모균체를 함유하는 발효유를 제조했다.

10%의 탈지분유와 5%의 글루코오즈를 멸균하고, 락토바실루스속 세균을 식균하여 요구르트를 제조했다. 여기에 실시예 1에서 얻은 가열 효모균체를 0.1∼20%혼합하여 발효유를 제조했다.

5) 유주(乳酒)

다음 처방에 따라 유주를 제조했다.

10%의 탈지분유와 5%의 글루코오즈를 멸균하고, 락토바실루스속 세균을 식균함과 동시에 실시예 1에서 얻은 효모를 식균하고, 48 시간 37℃에서 정치 배양하여 유주를 제조했다.

본 발명자는 예의 연구한 결과, 하기에 나타낸 특정 속에 속하는 효모가 부작용이 적고, 혈중 및 간장중의 콜레스테롤을 유효하게 저하하는 작용을 가지는 것을 발견하였다. 또한, 효모가 1차 담즙산이 2차 담즙산으로 변환하는 것을 억제하는 작용을 가지는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은 칸디다속, 이사첸키아속, 한세니아스포라속, 클로엑케라속, 클루이베로마이세스속, 피치아속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모의 1종 또는2종 이상을 유효성분으로 함유하는 콜레스테롤 저하제 및 이를 함유하는 음식품을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 이들 특정의 효모의 콜레스테롤 저하제 및 콜레스테롤저하용 음식품을 제조하기 위한 사용을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 이들 특정의 효모를 투여하는 것을 특징으로 하는 콜레스테롤 저하를 위한 처치 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 효모를 유효성분으로 하는 2차 담즙산 산생 억제제 및 이를 함유하는 음식품을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 효모의 2차 담즙산 산생 억제제 및 2차 담즙산 산생 억제용 음식품을 위한 사용을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 효모를 투여하는 것을 특징으로 하는 2차 담즙산 산생 억제를 위한 처치방법을 제공하는 것이다.

상술의 효모의 균체 또는 그의 구성물로 이루어진 본 발명의 콜레스테롤 저하제는 현저한 혈장 콜레스테롤 저하작용, 간장 콜레스테롤 저하작용을 나타내고, 동맥경화 기타 콜레스테롤 출적이 원인이 되는 질환의 예방에 극히 유효한 것이다.

또한, 담즙산의 흡착 및 대장관 강내의 산성화 등을 통해 2차 담즙산의 산생을 강력하게 억제하고, 본 발명의 2차 담즙산 산생 억제제는 대장암, 간암, 췌장암, 담관암, 담석증 등의 예방 및 치료에 극히 유효한 것이다.

더욱이, 본원 발명에 이용하는 효모는 옛날부터 치이즈나 마유주, 와인 제조 등에 사용되어 온 것으로부터 명백한 바와 같이 병원성이 없는 안전한 효모이고, 그 의 균체 또는 구성물로 이루어진 본원 발명의 콜레스테롤 저하제도 랫트에 경구투여한 경우 8 g/kg의 투여량에서도 사망예는 없었고, 장기간 투여에서도 안전성에 문제가 없다.

따라서, 본 발명의 콜레스테롤 저하제 및 2차 담즙산 산생 억제제는 경구 투여하는 의약으로서 이용하는 외에, 식품에 혼합하여 일상적으로 섭취하여 동맥경화, 대장암, 간암, 췌장암, 담관암, 담석증 등의 예방과 건강증진에 역활하는 것에 적합한 극히 유효한 것이다.

Claims

칸디다속, 이사첸키아속, 한세니아스포라속, 클로엑케라속, 클루이베로마이세스속, 피치아속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모의 1종 또는 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 콜레스테롤 저하제.
칸디다 케피르, 이사첸키아 오리엔탈리스, 한세니아스포라 우바룸, 클로엑케라 아프리카나, 클루이베로`마이세스 마르시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 피치아 파리노사 및 톨루라스포라 델부루엑키에서 선택된 효모의 1종 또는 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 콜레스테롤 저하제.
청구항 1 또는 2 기재의 효모를 함유하는 것을 특징으로 하는 콜레스테롤 저하용 음식품.
효모를 유효성분으로 하는 2차 담즙산 산생 억제제.
제 4항에 있어서, 효모가 이사첸키아속, 클루이베로마이세스속, 한세니아스포라속, 사카로마이세스속, 히포치피아속, 칸디다속, 톨루라스포라속, 피치아속 및 지고사카로마이세스속에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 효모인 것을 특징으로 하는 2차 담즙산 산생 억제제.
제 4항에 있어서, 효모가 이사첸키아 오리엔탈리스, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 클루이베로마이세스 써모톨레란스, 한세니아스포라 우바룸, 사카로마이세스 세레비시에, 사카로마이세스 다이렌시스, 사카로마이세스 엑시구스, 사카로마이세스 유니스포러스, 사카로마이세스 바야나스, 히포피치아 부르토니, 칸디다 케피르, 칸디다 엣첼시, 칸디다 제이라노이데스, 칸디다 솔라니, 칸디다 말토사, 칸디다 트로피칼리스, 칸디다 실린드라시에, 칸디다 유틸리스, 톨루라스포라 델부루엑키, 피치아 아노말라, 피치아 홀스티, 및 지고사카로마이세스 록시에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 효모인 것을 특징으로 하는 2차 담즙산 산생 억제제.
제 4∼6항의 어느 한항에 기재된 효모를 함유하여서 되는 2차 담즙산 산생 억제용 음식품.
칸디다속, 이사첸키아속, 한세니아스포라속, 쿠 입 엑케라속, 클루이베로마이세스속, 피치안속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모의 1종 또는 2종 이상의 콜레스테롤 저하제 제조를 위한 사용.
칸디다 케피르, 이사첸키아 오리엔탈리스, 한세니아스포라 우바룸, 클로엑케라 아프리카나, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 피치아 파리노사 및 톨루라스포라 델부루엑키에서 선택된 효모의 1종 또는 2종 이상의 콜레스테롤 저하제 제조를 위한 사용.
청구항 1 또는 2 기재의 효모의 콜레스테롤 저하용 음식품 제조를 위한 사용.
효모의 2차 담즙산 산생 억제제 제조를 위한 사용.
효모가 이사첸키아속, 클루이베로마이세스속, 한세니아스포라속, 사카로마이세스속, 히포치피아속, 칸디다속, 톨루라스포라속, 피치아속 및 지고사카로마이세스속에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 효모인 청구항11 기재의 사용.
제 11항에 있어서, 효모가 이사첸키아 오리엔탈리스, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 클루이베로마이세스 써모톨레란스, 한세니아스포라 우바룸, 사카로마이세스 세레비시에, 사카로마이세스 다이렌시스, 사카로마이세스 엑시구스, 사카로마이세스 유니스포러스, 사카로마이세스 바야나스, 히포치피아 부르토니, 칸디다 케피르, 칸디다 엣첼시, 칸디다 제이라노이데스, 칸디다 솔라니, 칸디다 말토사, 칸디다 트로피칼리스, 칸디다 실린드라시에, 칸디다 유틸리스, 톨루라스포라 델부루엑키, 피치아 아노말라, 피치아 홀스티, 파치티코스포라 트랜스베렌시스 및 지고사카로마이세스 록시로부터 선택된 1종 또는 2종 이상의 효모인 사용.
제 11∼13의 어느 한항 기재의 효모의 2차 담즙산 산생 억제용 음식품의 제조를 위한 사용.
칸디다속, 이사첸키아속, 한세니아스포라속, 클로엑케라속, 클루이베로마이세스속, 피치아속 또는 톨루라스포라속에 속하는 효모의 1종 또는 2종 이상을 투여함을 특징으로 하는 콜레스테롤 저하를 위한 처치방법.
칸디다 케피르, 이사첸키아 오리엔탈리스, 한세니아스포라 우바룸, 클로엑케라 아프리카나, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 피치아 파리노사 및 톨루라스포라 델부루엑키로부터 선택된 효모의 1종 또는 2종 이상을 투여함을 특징으로 하는 콜레스테롤 저하를 위한 처치방법.
효모를 투여함을 특징으로 하는 2차 담즙산 산생억제를 위한 처치 방법.
제 17항에 있어서, 효모가 이사첸키아속, 클루이베로마이세스속, 한세니아스포라속, 사카로마이세스속, 히포치피아속, 칸디다속, 톨루라스포라속, 피치아속 및 지고사카로마이세스속에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 효모인 방법.
제 17항에 있어서, 효모가 이사첸키아 오리엔탈리스, 클루이베로마이세스 마르크시아누스, 클루이베로마이세스 락티스, 클루이베로마이세스 써모톨레란스, 한세니아스포라 우바룸, 사카로마이세스 세레비시에, 사카로마이세스 다이렌시스, 사카로마이세스 엑시구스, 사카로마이세스 유틸리스, 사카로마이세스 바야나스, 히포치피아 부르토니, 칸디다 케피르, 칸디다 엣첼시, 칸디다 제이라노이데스, 칸디다 솔라니, 칸디다 말토사, 칸디다 트로피칼리스, 칸디다 실린드라시에, 칸디다 유틸리스, 톨루라스포라 델부루엑키, 피치아 아노말라, 피치아 홀스티, 파치티코스포라 트랜스베렌시스 및 지고사카로마이세스 록시로부터 선택된 1종 또는 2종 이상의 효모인 방법.