JP4065360B2 - コレステロール低下剤及び飲食品 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血中や肝臓のコレステロールを低下させ、動脈硬化指数を改善し得るコレステロール低下剤及び飲食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、循環器疾患による死亡率は年々増加しており、心筋梗塞、脳梗塞など動脈硬化に起因した疾患を合わせると、成人の死亡原因中第一位を占めている。
動脈硬化の原因としては様々なものがあるが、血漿脂質、特に血漿コレステロール値の上昇が最も重要な危険因子の一つとされている。
血漿コレステロール値の上昇原因としては、まず遺伝的な疾患がある。この場合、重篤な患者に対しては食事療法と同時にコレステロール合成阻害剤、ニコモール、クロフィブレート、イオン交換樹脂、蛋白同化ステロイド等の薬剤が使用されているが、これらの薬剤は、肝毒性、胃腸障害、発ガン性等の副作用がある。
【０００３】
血漿コレステロール値上昇のもう一つの大きな原因として、近年の卵、バター、肉等を大量に摂取する食生活による脂肪の過剰摂取があげられており、これは、若年齢層にも顕著になりつつある。食事性の高コレステロール血症の場合、通常は重篤な高コレステロール血症には至らないが、若齢期より血管に徐々にコレステロールが蓄積し、成人にいたって動脈硬化を引き起こすことが問題であり、高トリグリセライド血症とあいまって、心筋梗塞や脳梗塞を招く危険性がある。この種の高脂血症に対しては、副作用があるなど問題の多い薬物療法よりも、脂質摂取量を適正範囲に制限した食事療法が重視される。しかしながら、食事制限は精神的苦痛を伴うと共に食生活の楽しみをうばうため厳格な実施は困難であり、効果には限界があることが多い。
【０００４】
血漿中に過剰に存在するコレステロールは血管壁に蓄積して動脈硬化を招くが、コレステロールが肝臓に取り込まれた後、そこに蓄積されることなく胆汁酸に変換されるかそのままの形で腸管に排出され、糞便と共に体外に排泄されるならば、体内コレステロールのプールも低下し、上記機構による動脈硬化は予防される。そこで、血漿コレステロール値の低下作用だけでなく、肝臓コレステロール値の低下作用を併せ持つものが期待されている。
【０００５】
一方、副作用が少なくコレステロール低下作用を示す微生物は、これまで種々の報告があるが、酵母に関する報告は意外に少ない。酵母といえば、古くからビール酵母が知られているが、その脂質代謝改善効果については、クロムを補添したビール酵母（１日当たり９ｇ）を８週間、老人に投与した結果、血清コレステロール値の低下を認めたとの報告〔Ester G. Offenbacher and F. Xavier Pi-Sunyer, Beneficial effect of chromium-rich yeast on glucose tolerance and blood lipids in elderly subjects. Diabetes, 29, 919,(1980)〕があるが、塩化クロムと５ｇのビール酵母を１０週間、老人に投与した結果、血清コレステロール値やＴＧに対して影響を与えなかったとの報告〔Caral J Rinko, and F. Xavier Pi-Sunyer, The effects of inorganic chromium and brewer's yeast on glucose tolerance, plasma lipids, and plasma chromium in elderly subjects., Am. J. Clin. Nutr., 42, 454,(1985)〕やクロムを補添していないビール酵母を使用した対人試験では血清コレステロール値の低下効果はなかったとの報告〔Arne T. Hostmark, Einar Eilertsen and Ole Gronnerod, Plasma lipid and lipoprotein responses of rats to starch and sucrose diets with and without brewer's yeast., J. Nutri., 109, 1073,(1978)〕がある。また、ウサギの餌に大豆蛋白を混ぜて投与すると血清コレステロール値が低下するが、その大豆蛋白の５０％をビール酵母で置換すると血清コレステロール値が逆に若干上昇したとの報告〔Jorge De Abreu and Nancy Millan, Effect of addition of brewer's yeast to soy protein and casein on plasma cholesterol levels of rabbits. Archivos Latinoamericanos de Nutricion., 44, 18,(1994)〕もある。
【０００６】
このように現在のところ、ビール酵母（brewer's yeast）の脂質代謝改善効果については統一的な見解が得られていない。
【０００７】
一方、他の酵母では、酵母のメタノール抽出物が、赤色酵母（Sporobolomyces ruberrinus）とSaccharomyces uvarumにおいて、わずかにコレステロール負荷ラットの血清コレステロール値及びトリグリセライド値を減少させたとの報告〔長 修司、藤井久雄、白石淳、納豆菌産生多糖類あるいは酵母のアルコール抽出物がラットの脂質代謝に及ぼす影響、福岡女子大学家政学部紀要、16, 65,(1984)〕があり、更にSaccharomyces cerebisiaeの培養上清がマウスの血清コレステロールを低下させたという報告〔岸田忠昭、Saccharomyces cerebisiae培養物の血清コレステロール低下作用について、栄養と食糧、26, 371,(1973)〕がある。
【０００８】
しかしながら、ビール酵母以外にコレステロール低下作用を示す酵母の報告は、いまだ少なくまた、酵母の菌体そのもの、或いはその菌体構成成分が脂質代謝改善効果を示したという報告はない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、副作用が少なく安全な酵母を用い、血中や肝臓のコレステロールを有効に低下し得るコレステロール低下剤及び飲食品を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情に鑑み本発明者は鋭意研究を行った結果、下記に示す特定の属に属する酵母が、副作用が少なく、血中及び肝臓中のコレステロールを有効に低下する作用を有することを見出し本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明はイサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ及びトルラスポラ・デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を有効成分して含有するコレステロール低下剤、並びにイサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、ハンセニアスポラ ウヴァラムＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、クロエッケラ アフリカーナＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナスＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチスＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）及びトルラスポラ デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を含有する飲食品を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のコレステロール低下剤又は飲食品に用いる酵母は、イサチェンキア属、ハンセニアスポラ属、クロエッケラ属、クルイベロマイセス属、ピチア属又はトルラスポラ属に属する酵母であり、これらは１種でも、２種以上を混合して用いてもよい。上記酵母は生菌であっても加熱菌体であってもよく、また加熱後凍結乾燥したものであってもよい。
【００１３】
上記の属に属する酵母のうち、好ましいものとしては、例えば、イサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ、トルラスポラ・デルブルエッキーが挙げられ、更にこれらのうち次の酵母が最適である。
【００１４】
ハンセニアスポラ ウヴァラム（Hanseniaspora uvarum）ＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、イサチェンキア オリエンタリス（Issatchenkia orientalis）ＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、クロエッケラ アフリカーナ（Kloeckera africana）ＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナス（Kluyveromyces marxianus）ＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチス（Kluyveromyces lactis）ＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサ（Pichia farinosa）ＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）、トルラスポラ デルブルエッキー（Torulaspora delbrueckii）ＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）。
【００１５】
なお、これらの微生物は食品（ワイン、乳酒、チーズ）の製造に使用される酵母として古くから知られており、人体に対して極めて安全な菌株である。
上記菌株の性状を示すと表１〜表５の通りであって、「ザ イースト（The yeast）、第３版 N. J. W. Kreger-Van Rij, Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam, 1984」に記載の同種微生物の性状とほぼ同様である。
【００１６】
【表１】
【００１７】
【表２】
【００１８】
【表３】
【００１９】
【表４】
【００２０】
【表５】
【００２１】
本発明に用いる酵母は、通常の方法、例えば酵母エキスやポリペプトンを含む複合培地又は無機塩を主体とする合成培地で培養することによって製造することができる。
【００２２】
このようにして得られた酵母は、生菌もしくはその凍結乾燥物、又は加熱処理等を施した死菌体、更にはそれらの破砕物として、医薬組成物又は飲食品に用いることができる。また、本発明に用いる酵母は、市販のものであってもよい。
【００２３】
上記酵母は、常法に従って薬学的に許容される担体とともに種々の剤型の医薬組成物とすることができる。例えば、経口用固形製剤を調製する場合には、上記酵母に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。そのよう添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、硅酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が例示できる。
【００２４】
経口用液体製剤を調製する場合は、上記酵母に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２５】
また、本発明の飲食品は、上記酵母を種々の飲食品に添加せしめることにより製造することができる。ここで好ましい飲食品としては、発酵乳、果汁飲料、スープ、せんべい、クッキー等が例示される。なお飲食品には動物の飼料も含まれる。
【００２６】
上記の各製剤中に配合されるべき酵母の量は、これを適用すべき患者の症状によりあるいはその剤型等により一定ではないが、一般に製剤中１〜１００重量％とするのが望ましい。また、上記製剤又は飲食品の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、酵母として通常成人１日あたり約１０mg〜３０ｇ、好ましくは約１〜５ｇとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に分け投与するのが好ましい。
【００２７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。なお、「％」は「重量％」を示す。
【００２８】
実施例１
（イ）酵母の調製
ポテトデキストロース寒天スラントで保存しているキャンジダ・ケフィア、イサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ及びトルラスポラ・デルブルエッキーのそれぞれの１白金耳を、表６に示す培地１００mlを含むそれぞれの坂口フラスコ（５００ml）に植菌し、３０℃で振とう培養（１２０spm）した。
２日後に１０リッター発酵槽（実働容積７Ｌ）に坂口フラスコ２本分を接種して３０℃にて、通気速度０．５vvm、回転速度２５０rpm、pH６．０（５Ｎの水酸化ナトリウムで自動制御）の条件下で２日間、通気攪拌培養した。
【００２９】
培養終了後、冷却遠心分離機を使用して菌体と上清を分けたのち、菌体を蒸留水で２度洗浄した。この洗浄菌体を２リッターの三角フラスコに入れ、蒸留水１リッターを加えた後、１１５℃にて１０分間オートクレーブで加熱した。この加熱菌体をそのまま凍結乾燥し、ラットの経口投与試料に供した。
【００３０】
【表６】
【００３１】
（ロ）試験飼料の調製
（イ）で製造した酵母を用い、下記表７の組成の飼料を常法により混合し調製した。各試験飼料ともコレステロール０．５％、コール酸ナトリウム０．２５％を含むコレステロール添加食とし、酵母含有飼料には酵母凍結乾燥菌体５％又は１０％を添加した。
【００３２】
【表７】
【００３３】
試験方法 コレステロール低下作用
▲１▼ 試験飼料
実施例１（ロ）で調製したものを用いた。
【００３４】
▲２▼ 動物及び飼育方法
ａ）１０％酵母含有飼料投与群
５週齢のWistar系雄ラット（日本クレア製）を、オリエンタル酵母製Ｆ−２粉末飼料で７日間予備飼育した後、１群８匹ずつ群分けし、表７の１０％酵母含有飼料を７日間投与した。ラットは金属製ケージで群飼いし、飼料及び水は自由に摂取させた。
【００３５】
ｂ）５％酵母含有飼料投与群
５週齢のWistar系雄ラット（日本クレア製）を、オリエンタル酵母製Ｆ−２粉末飼料で７日間予備飼育した後、１群８匹ずつ群分けし、表７の５％酵母含有飼料を１４日間投与した。ラットは金属製ケージで個別飼いし、飼料投与量は１日１５ｇの制限食とし、水は自由に摂取させた。
【００３６】
▲３▼ 血漿脂質の測定
ａ）１０％酵母含有飼料投与群
投与開始から７日目にネンブタール麻酔下（非絶食）で腹部大動脈よりカニューレ採血し、血漿コレステロール濃度及び血漿ＨＤＬ濃度を測定した。総コレステロール濃度は日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
ＨＤＬコレステロール濃度は協和メディックス製デタミナＨＤＬを使用してＨＤＬ成分以外のリポ蛋白成分を沈降させた後、日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
【００３７】
ｂ）５％酵母含有飼料投与群
投与開始から７日目に尾静脈から採血し、血漿コレステロール濃度及び血漿ＨＤＬ濃度を測定した。総コレステロール濃度は日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
ＨＤＬコレステロール濃度は協和メディックス製デタミナＨＤＬを使用してＨＤＬ成分以外のリポ蛋白成分を沈降させた後、日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
【００３８】
▲４▼ 肝臓脂質の測定
生理食塩水で肝臓を灌流した後、採取した肝臓を凍結乾燥した。脂質の抽出はFolch らの方法に従い、クロロホルム：メタノール（２：１）で行った。その後、クロロホルム下層を濃縮乾固し、エタノールで再度希釈して各種肝臓脂質成分の測定に供した。肝臓脂質のうちコレステロール量はデタミナＴＣ５５５を用いて測定した。
【００３９】
動物試験成績の評価法
▲１▼ 統計手法
各動物試験の結果は、Bartlett法によ分散の均一性を検定した後、等分散の場合は、一次元配置の分散分析を経てDunnett型の多重比較検定を、不等分散の場合（Bartlett法により有意水準５％で検定を行い、有意差が得られた検定対象）はKruskal-Wallisの検定を経てDunnett型の多重比較検定を行った。Dunnett型の多重比較検定では有意水準を５％及び１％に設定し、各水準で検定を行った。
【００４０】
▲２▼ 各脂質成分の低下率の求め方
＜血漿中のコレステロール低下率＞
血漿コレステロール低下率１００％とは、コレステロールを含まない餌を投与した普通食群のラットの血漿コレステロール値と同じレベルまで血漿コレステロール値が低下したことを示す。また、血漿コレステロール低下率０％とは、コレステロール添加食を投与した対照群のラットの血漿コレステロール値と同じレベルまで血漿コレステロール値が上昇したことを示す。
【００４１】
▲３▼ 動脈硬化指数（Atherosclerotic Index）
動脈硬化指数（ＡＩ）は、
【００４２】
【数１】
ＡＩ＝（ＶＬＤＬコレステロール値＋ＬＤＬコレステロール値）／ＨＤＬコレステロール値
【００４３】
で表されるが、血漿脂質の値から具体的に計算する場合には、血漿総コレステロール値と血漿ＨＤＬコレステロール値を用いて、次式から求めた。
【００４４】
【数２】
ＡＩ＝（血漿総コレステロール値−血漿ＨＤＬコレステロール値）／血漿ＨＤＬコレステロール値
【００４５】
動脈硬化指数の改善率は、各酵母含有飼料投与群のＡＩ値とコレステロール添加食投与群（対照群）及び普通食群のＡＩ値とから算出した。ここで動脈硬化指数改善率１００％とは、コレステロール非添加食群のＡＩ値と同じ値であることを示す。また、動脈硬化指数改善率０％とは、コレステロール添加食群（対照群）と同じＡＩ値であることを示す。
【００４６】
▲４▼ 体重測定
ラットの体重は入荷時に測定し、各群間で有意な体重差が出ないように群分けして、予備飼育を開始した。また、本試験開始時と試験終了時に体重測定を行った。
【００４７】
上記の試験方法は、以下の予備試験や実施例に使用する。
【００４８】
予備試験：
採血はコレステロール添加食の投与開始後、０日目、５日目及び８日目に尾静脈から、また、１４日目にはネンブタール麻酔下に腹部大動脈から行った。採取した血液から血漿を分離した後、各脂質成分を酵素法で測定した。
その結果、図１に示すように、コレステロール投与群の血漿コレステロール値は５日目には最大値近くまで上昇した。その後、１４日目まで若干の上昇が認められたものの、ほとんど大きな変化は認められなかった。一方、コレステロール非添加食（コレステロール添加食からコレステロールとコール酸ナトリウムを除いたもの）投与群の血漿コレステロール値は試験期間中も上昇せず、やや漸減する傾向が認められた。
【００４９】
表８に、コレステロール添加食投与開始後１４日目の血漿脂質の値を示した。コレステロール非添加食群のコレステロール値が７２．５mg／dlであるのに対して添加食群のそれは３２５．３mg／dlであり、約４．５倍上昇しているのがわかる。それに反して、血漿ＨＬＤコレステロール値はそれぞれ４５．９mg／dlに対して３１．４mg／dlと有意に低下している。
【００５０】
【表８】
【００５１】
表９に、コレステロール添加食投与開始後１４日目の肝臓中の脂質含量を示した。コレステロール添加食群のコレステロール値は非添加食群のそれに比べて約２０倍高い値を示している。
【００５２】
【表９】
【００５３】
実施例２
実施例１に示す方法でジャー培養を行い、各２００ｇの凍結乾燥菌体（１１０℃にて１０分加熱処理したもの）を調製した。これをコレステロール添加食にそれぞれ１０％混餌（表７の１０％酵母群）して、１群８匹の群飼いで、７日間、自由に摂餌させた。
表１０〜表１２に高コレステロール食を投与した対照群の血漿コレステロール値に比較したときのコレステロール低下率及び動脈硬化指数の改善率（％）を示した。なお、いずれの群も体重に有意な変化は認められなかった。
【００５４】
【表１０】
【００５５】
【表１１】
【００５６】
【表１２】
【００５７】
実施例３：１０％酵母添加食投与試験
試験方法；
実施例１（イ）に示す方法でジャー培養を行い、各２００ｇの凍結乾燥菌体を調製した。この調製した凍結乾燥菌体をコレステロール添加食にそれぞれ１０％混餌（表７の１０％酵母群）して、１群８匹の群飼いで、７日間、自由に摂取させた。表１３に血漿脂質の測定結果を示す。
【００５８】
【表１３】
【００５９】
コレステロールを添加した高脂肪食を与えることにより、対照群では総コレステロール値が増加し、動脈硬化指数は７．９７〜９．６２まで上昇したが、同じ高脂肪食でも本願発明にかかる酵母菌体を１０％添加した試験群では、上記分析項目のすべてにおいて数値の上昇が顕著に抑制されているのがわかる。このように、クルイベロマイセス マルキシアナス ＹＩＴ８２９２、クルイベロマイセス ラクチス ＹＩＴ８２６３、ハンセニアアスポラ ウヴァラム ＹＩＴ８１６４、イサチェンキア オリエンタリス ＹＩＴ８２６６、キャンジダ ケフィア ＹＩＴ８２３７、ピチア ファリノサ ＹＩＴ８０５８はいずれも極めて高い血漿コレステロール低下率を示し、動脈硬化指数を改善した。
【００６０】
実施例４：５％酵母添加食投与試験
５週齢の雄ウイスターラットを用いて実施例３と同様の試験を行った。ただし、試験群の飼料に添加する酵母凍結乾燥菌体をそれぞれ５％混餌（表７の５％酵母群）して、１群８匹の個別飼いで、１４日間、１日１５ｇの制限食を与えた。血漿脂質の分析結果は表１４に示す通りであって、高脂肪食を与えることにより対照群では総コレステロール値、動脈硬化指数が上昇したが、同じ高脂肪食でも５％の酵母菌体を添加した試験群では上記分析項目のすべてにおいて上昇が顕著に抑制された。
【００６１】
【表１４】
【００６２】
表１５に肝臓脂質の測定結果を示した。肝臓総コレステロール量は対照群に比べていずれの試験群も有意に低下した。このように、本願発明にかかる酵母は、その経口投与によって血漿脂質の低下作用だけでなく、肝臓脂質の低下作用も示す優れた抗コレステロール素材であることが分かる。
【００６３】
【表１５】
【００６４】
実施例５
実施例１で得た酵母菌体を使用し、下記の飲食物を製造した。
【００６５】
【表１６】
１）健康向け食品（錠剤）
次の添加物を含有する組成物を打錠し、錠剤とした。
【００６６】
【表１７】
２）健康向け飲料
次の処方により健康飲料を製造した。
【００６７】
【表１８】
３）果汁飲料
次の処方により健康飲料を製造した。
【００６８】
４）発酵乳
次の処方により加熱酵母菌体入り発酵乳を製造した。
１０％の脱脂粉乳と５％のグルコースを滅菌し、ラクトバチラス属細菌を植菌してヨーグルトを製造した。これに実施例１で得た加熱酵母菌体を０．１〜２０％混合し、発酵乳を製造した。
【００６９】
５）乳酒
次の処方により乳酒を製造した。
１０％の脱脂粉乳と５％のグルコースを滅菌し、ラクトバチラス属細菌を植菌すると同時に実施例１で得た酵母を植菌し、４８時間３７℃にて静置培養して乳酒を製造した。
【００７０】
【発明の効果】
上述の酵母の菌体又はその構成物からなる本願発明のコレステロール低下剤は顕著な血漿コレステロール低下作用、肝臓コレステロール低下作用を示し、動脈硬化その他コレステロール蓄積が原因の疾患の予防に極めて有効なものである。
【００７１】
しかも、本願発明に用いる酵母は古くからチーズや馬乳酒、ワイン製造等に使用されていることから明らかなように病原性のない安全な酵母であり、その菌体あるいは構成物からなる本願発明のコレステロール低下剤も、ラットに経口投与した場合８ｇ／kgの投与量でも死亡例は認められず、長期間投与しても安全性には問題がない。
従って、本発明のコレステロール低下剤は経口投与する医薬として利用するほか、食品に混合して日常的に摂取させ、動脈硬化予防と健康増進に役立たせるのにも適した極めて有利なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】コレステロール添加食と無添加食投与群の血漿コレステロール値を示す図である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、血中や肝臓のコレステロールを低下させ、動脈硬化指数を改善し得るコレステロール低下剤及び飲食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、循環器疾患による死亡率は年々増加しており、心筋梗塞、脳梗塞など動脈硬化に起因した疾患を合わせると、成人の死亡原因中第一位を占めている。
動脈硬化の原因としては様々なものがあるが、血漿脂質、特に血漿コレステロール値の上昇が最も重要な危険因子の一つとされている。
血漿コレステロール値の上昇原因としては、まず遺伝的な疾患がある。この場合、重篤な患者に対しては食事療法と同時にコレステロール合成阻害剤、ニコモール、クロフィブレート、イオン交換樹脂、蛋白同化ステロイド等の薬剤が使用されているが、これらの薬剤は、肝毒性、胃腸障害、発ガン性等の副作用がある。
【０００３】
血漿コレステロール値上昇のもう一つの大きな原因として、近年の卵、バター、肉等を大量に摂取する食生活による脂肪の過剰摂取があげられており、これは、若年齢層にも顕著になりつつある。食事性の高コレステロール血症の場合、通常は重篤な高コレステロール血症には至らないが、若齢期より血管に徐々にコレステロールが蓄積し、成人にいたって動脈硬化を引き起こすことが問題であり、高トリグリセライド血症とあいまって、心筋梗塞や脳梗塞を招く危険性がある。この種の高脂血症に対しては、副作用があるなど問題の多い薬物療法よりも、脂質摂取量を適正範囲に制限した食事療法が重視される。しかしながら、食事制限は精神的苦痛を伴うと共に食生活の楽しみをうばうため厳格な実施は困難であり、効果には限界があることが多い。
【０００４】
血漿中に過剰に存在するコレステロールは血管壁に蓄積して動脈硬化を招くが、コレステロールが肝臓に取り込まれた後、そこに蓄積されることなく胆汁酸に変換されるかそのままの形で腸管に排出され、糞便と共に体外に排泄されるならば、体内コレステロールのプールも低下し、上記機構による動脈硬化は予防される。そこで、血漿コレステロール値の低下作用だけでなく、肝臓コレステロール値の低下作用を併せ持つものが期待されている。
【０００５】
一方、副作用が少なくコレステロール低下作用を示す微生物は、これまで種々の報告があるが、酵母に関する報告は意外に少ない。酵母といえば、古くからビール酵母が知られているが、その脂質代謝改善効果については、クロムを補添したビール酵母（１日当たり９ｇ）を８週間、老人に投与した結果、血清コレステロール値の低下を認めたとの報告〔Ester G. Offenbacher and F. Xavier Pi-Sunyer, Beneficial effect of chromium-rich yeast on glucose tolerance and blood lipids in elderly subjects. Diabetes, 29, 919,(1980)〕があるが、塩化クロムと５ｇのビール酵母を１０週間、老人に投与した結果、血清コレステロール値やＴＧに対して影響を与えなかったとの報告〔Caral J Rinko, and F. Xavier Pi-Sunyer, The effects of inorganic chromium and brewer's yeast on glucose tolerance, plasma lipids, and plasma chromium in elderly subjects., Am. J. Clin. Nutr., 42, 454,(1985)〕やクロムを補添していないビール酵母を使用した対人試験では血清コレステロール値の低下効果はなかったとの報告〔Arne T. Hostmark, Einar Eilertsen and Ole Gronnerod, Plasma lipid and lipoprotein responses of rats to starch and sucrose diets with and without brewer's yeast., J. Nutri., 109, 1073,(1978)〕がある。また、ウサギの餌に大豆蛋白を混ぜて投与すると血清コレステロール値が低下するが、その大豆蛋白の５０％をビール酵母で置換すると血清コレステロール値が逆に若干上昇したとの報告〔Jorge De Abreu and Nancy Millan, Effect of addition of brewer's yeast to soy protein and casein on plasma cholesterol levels of rabbits. Archivos Latinoamericanos de Nutricion., 44, 18,(1994)〕もある。
【０００６】
このように現在のところ、ビール酵母（brewer's yeast）の脂質代謝改善効果については統一的な見解が得られていない。
【０００７】
一方、他の酵母では、酵母のメタノール抽出物が、赤色酵母（Sporobolomyces ruberrinus）とSaccharomyces uvarumにおいて、わずかにコレステロール負荷ラットの血清コレステロール値及びトリグリセライド値を減少させたとの報告〔長 修司、藤井久雄、白石淳、納豆菌産生多糖類あるいは酵母のアルコール抽出物がラットの脂質代謝に及ぼす影響、福岡女子大学家政学部紀要、16, 65,(1984)〕があり、更にSaccharomyces cerebisiaeの培養上清がマウスの血清コレステロールを低下させたという報告〔岸田忠昭、Saccharomyces cerebisiae培養物の血清コレステロール低下作用について、栄養と食糧、26, 371,(1973)〕がある。
【０００８】
しかしながら、ビール酵母以外にコレステロール低下作用を示す酵母の報告は、いまだ少なくまた、酵母の菌体そのもの、或いはその菌体構成成分が脂質代謝改善効果を示したという報告はない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、副作用が少なく安全な酵母を用い、血中や肝臓のコレステロールを有効に低下し得るコレステロール低下剤及び飲食品を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情に鑑み本発明者は鋭意研究を行った結果、下記に示す特定の属に属する酵母が、副作用が少なく、血中及び肝臓中のコレステロールを有効に低下する作用を有することを見出し本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明はイサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ及びトルラスポラ・デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を有効成分して含有するコレステロール低下剤、並びにイサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、ハンセニアスポラ ウヴァラムＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、クロエッケラ アフリカーナＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナスＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチスＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）及びトルラスポラ デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を含有する飲食品を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のコレステロール低下剤又は飲食品に用いる酵母は、イサチェンキア属、ハンセニアスポラ属、クロエッケラ属、クルイベロマイセス属、ピチア属又はトルラスポラ属に属する酵母であり、これらは１種でも、２種以上を混合して用いてもよい。上記酵母は生菌であっても加熱菌体であってもよく、また加熱後凍結乾燥したものであってもよい。
【００１３】
上記の属に属する酵母のうち、好ましいものとしては、例えば、イサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ、トルラスポラ・デルブルエッキーが挙げられ、更にこれらのうち次の酵母が最適である。
【００１４】
ハンセニアスポラ ウヴァラム（Hanseniaspora uvarum）ＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、イサチェンキア オリエンタリス（Issatchenkia orientalis）ＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、クロエッケラ アフリカーナ（Kloeckera africana）ＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナス（Kluyveromyces marxianus）ＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチス（Kluyveromyces lactis）ＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサ（Pichia farinosa）ＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）、トルラスポラ デルブルエッキー（Torulaspora delbrueckii）ＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）。
【００１５】
なお、これらの微生物は食品（ワイン、乳酒、チーズ）の製造に使用される酵母として古くから知られており、人体に対して極めて安全な菌株である。
上記菌株の性状を示すと表１〜表５の通りであって、「ザ イースト（The yeast）、第３版 N. J. W. Kreger-Van Rij, Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam, 1984」に記載の同種微生物の性状とほぼ同様である。
【００１６】
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
本発明に用いる酵母は、通常の方法、例えば酵母エキスやポリペプトンを含む複合培地又は無機塩を主体とする合成培地で培養することによって製造することができる。
【００２２】
このようにして得られた酵母は、生菌もしくはその凍結乾燥物、又は加熱処理等を施した死菌体、更にはそれらの破砕物として、医薬組成物又は飲食品に用いることができる。また、本発明に用いる酵母は、市販のものであってもよい。
【００２３】
上記酵母は、常法に従って薬学的に許容される担体とともに種々の剤型の医薬組成物とすることができる。例えば、経口用固形製剤を調製する場合には、上記酵母に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。そのよう添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、硅酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が例示できる。
【００２４】
経口用液体製剤を調製する場合は、上記酵母に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２５】
また、本発明の飲食品は、上記酵母を種々の飲食品に添加せしめることにより製造することができる。ここで好ましい飲食品としては、発酵乳、果汁飲料、スープ、せんべい、クッキー等が例示される。なお飲食品には動物の飼料も含まれる。
【００２６】
上記の各製剤中に配合されるべき酵母の量は、これを適用すべき患者の症状によりあるいはその剤型等により一定ではないが、一般に製剤中１〜１００重量％とするのが望ましい。また、上記製剤又は飲食品の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、酵母として通常成人１日あたり約１０mg〜３０ｇ、好ましくは約１〜５ｇとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に分け投与するのが好ましい。
【００２７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。なお、「％」は「重量％」を示す。
【００２８】
実施例１
（イ）酵母の調製
ポテトデキストロース寒天スラントで保存しているキャンジダ・ケフィア、イサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ及びトルラスポラ・デルブルエッキーのそれぞれの１白金耳を、表６に示す培地１００mlを含むそれぞれの坂口フラスコ（５００ml）に植菌し、３０℃で振とう培養（１２０spm）した。
２日後に１０リッター発酵槽（実働容積７Ｌ）に坂口フラスコ２本分を接種して３０℃にて、通気速度０．５vvm、回転速度２５０rpm、pH６．０（５Ｎの水酸化ナトリウムで自動制御）の条件下で２日間、通気攪拌培養した。
【００２９】
培養終了後、冷却遠心分離機を使用して菌体と上清を分けたのち、菌体を蒸留水で２度洗浄した。この洗浄菌体を２リッターの三角フラスコに入れ、蒸留水１リッターを加えた後、１１５℃にて１０分間オートクレーブで加熱した。この加熱菌体をそのまま凍結乾燥し、ラットの経口投与試料に供した。
【００３０】
【表６】
（ロ）試験飼料の調製
（イ）で製造した酵母を用い、下記表７の組成の飼料を常法により混合し調製した。各試験飼料ともコレステロール０．５％、コール酸ナトリウム０．２５％を含むコレステロール添加食とし、酵母含有飼料には酵母凍結乾燥菌体５％又は１０％を添加した。
【００３２】
【表７】
試験方法 コレステロール低下作用
▲１▼ 試験飼料
実施例１（ロ）で調製したものを用いた。
【００３４】
▲２▼ 動物及び飼育方法
ａ）１０％酵母含有飼料投与群
５週齢のWistar系雄ラット（日本クレア製）を、オリエンタル酵母製Ｆ−２粉末飼料で７日間予備飼育した後、１群８匹ずつ群分けし、表７の１０％酵母含有飼料を７日間投与した。ラットは金属製ケージで群飼いし、飼料及び水は自由に摂取させた。
【００３５】
ｂ）５％酵母含有飼料投与群
５週齢のWistar系雄ラット（日本クレア製）を、オリエンタル酵母製Ｆ−２粉末飼料で７日間予備飼育した後、１群８匹ずつ群分けし、表７の５％酵母含有飼料を１４日間投与した。ラットは金属製ケージで個別飼いし、飼料投与量は１日１５ｇの制限食とし、水は自由に摂取させた。
【００３６】
▲３▼ 血漿脂質の測定
ａ）１０％酵母含有飼料投与群
投与開始から７日目にネンブタール麻酔下（非絶食）で腹部大動脈よりカニューレ採血し、血漿コレステロール濃度及び血漿ＨＤＬ濃度を測定した。総コレステロール濃度は日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
ＨＤＬコレステロール濃度は協和メディックス製デタミナＨＤＬを使用してＨＤＬ成分以外のリポ蛋白成分を沈降させた後、日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
【００３７】
ｂ）５％酵母含有飼料投与群
投与開始から７日目に尾静脈から採血し、血漿コレステロール濃度及び血漿ＨＤＬ濃度を測定した。総コレステロール濃度は日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
ＨＤＬコレステロール濃度は協和メディックス製デタミナＨＤＬを使用してＨＤＬ成分以外のリポ蛋白成分を沈降させた後、日立７１７０型生化学自動分析機を使用して測定した。
【００３８】
▲４▼ 肝臓脂質の測定
生理食塩水で肝臓を灌流した後、採取した肝臓を凍結乾燥した。脂質の抽出はFolch らの方法に従い、クロロホルム：メタノール（２：１）で行った。その後、クロロホルム下層を濃縮乾固し、エタノールで再度希釈して各種肝臓脂質成分の測定に供した。肝臓脂質のうちコレステロール量はデタミナＴＣ５５５を用いて測定した。
【００３９】
動物試験成績の評価法
▲１▼ 統計手法
各動物試験の結果は、Bartlett法によ分散の均一性を検定した後、等分散の場合は、一次元配置の分散分析を経てDunnett型の多重比較検定を、不等分散の場合（Bartlett法により有意水準５％で検定を行い、有意差が得られた検定対象）はKruskal-Wallisの検定を経てDunnett型の多重比較検定を行った。Dunnett型の多重比較検定では有意水準を５％及び１％に設定し、各水準で検定を行った。
【００４０】
▲２▼ 各脂質成分の低下率の求め方
＜血漿中のコレステロール低下率＞
血漿コレステロール低下率１００％とは、コレステロールを含まない餌を投与した普通食群のラットの血漿コレステロール値と同じレベルまで血漿コレステロール値が低下したことを示す。また、血漿コレステロール低下率０％とは、コレステロール添加食を投与した対照群のラットの血漿コレステロール値と同じレベルまで血漿コレステロール値が上昇したことを示す。
【００４１】
▲３▼ 動脈硬化指数（Atherosclerotic Index）
動脈硬化指数（ＡＩ）は、
【００４２】
【数１】
ＡＩ＝（ＶＬＤＬコレステロール値＋ＬＤＬコレステロール値）／ＨＤＬコレステロール値
【００４３】
で表されるが、血漿脂質の値から具体的に計算する場合には、血漿総コレステロール値と血漿ＨＤＬコレステロール値を用いて、次式から求めた。
【００４４】
【数２】
ＡＩ＝（血漿総コレステロール値−血漿ＨＤＬコレステロール値）／血漿ＨＤＬコレステロール値
【００４５】
動脈硬化指数の改善率は、各酵母含有飼料投与群のＡＩ値とコレステロール添加食投与群（対照群）及び普通食群のＡＩ値とから算出した。ここで動脈硬化指数改善率１００％とは、コレステロール非添加食群のＡＩ値と同じ値であることを示す。また、動脈硬化指数改善率０％とは、コレステロール添加食群（対照群）と同じＡＩ値であることを示す。
【００４６】
▲４▼ 体重測定
ラットの体重は入荷時に測定し、各群間で有意な体重差が出ないように群分けして、予備飼育を開始した。また、本試験開始時と試験終了時に体重測定を行った。
【００４７】
上記の試験方法は、以下の予備試験や実施例に使用する。
【００４８】
予備試験：
採血はコレステロール添加食の投与開始後、０日目、５日目及び８日目に尾静脈から、また、１４日目にはネンブタール麻酔下に腹部大動脈から行った。採取した血液から血漿を分離した後、各脂質成分を酵素法で測定した。
その結果、図１に示すように、コレステロール投与群の血漿コレステロール値は５日目には最大値近くまで上昇した。その後、１４日目まで若干の上昇が認められたものの、ほとんど大きな変化は認められなかった。一方、コレステロール非添加食（コレステロール添加食からコレステロールとコール酸ナトリウムを除いたもの）投与群の血漿コレステロール値は試験期間中も上昇せず、やや漸減する傾向が認められた。
【００４９】
表８に、コレステロール添加食投与開始後１４日目の血漿脂質の値を示した。コレステロール非添加食群のコレステロール値が７２．５mg／dlであるのに対して添加食群のそれは３２５．３mg／dlであり、約４．５倍上昇しているのがわかる。それに反して、血漿ＨＬＤコレステロール値はそれぞれ４５．９mg／dlに対して３１．４mg／dlと有意に低下している。
【００５０】
【表８】
表９に、コレステロール添加食投与開始後１４日目の肝臓中の脂質含量を示した。コレステロール添加食群のコレステロール値は非添加食群のそれに比べて約２０倍高い値を示している。
【００５２】
【表９】
実施例２
実施例１に示す方法でジャー培養を行い、各２００ｇの凍結乾燥菌体（１１０℃にて１０分加熱処理したもの）を調製した。これをコレステロール添加食にそれぞれ１０％混餌（表７の１０％酵母群）して、１群８匹の群飼いで、７日間、自由に摂餌させた。
表１０〜表１２に高コレステロール食を投与した対照群の血漿コレステロール値に比較したときのコレステロール低下率及び動脈硬化指数の改善率（％）を示した。なお、いずれの群も体重に有意な変化は認められなかった。
【００５４】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
実施例３：１０％酵母添加食投与試験
試験方法；
実施例１（イ）に示す方法でジャー培養を行い、各２００ｇの凍結乾燥菌体を調製した。この調製した凍結乾燥菌体をコレステロール添加食にそれぞれ１０％混餌（表７の１０％酵母群）して、１群８匹の群飼いで、７日間、自由に摂取させた。表１３に血漿脂質の測定結果を示す。
【００５８】
【表１３】
コレステロールを添加した高脂肪食を与えることにより、対照群では総コレステロール値が増加し、動脈硬化指数は７．９７〜９．６２まで上昇したが、同じ高脂肪食でも本願発明にかかる酵母菌体を１０％添加した試験群では、上記分析項目のすべてにおいて数値の上昇が顕著に抑制されているのがわかる。このように、クルイベロマイセス マルキシアナス ＹＩＴ８２９２、クルイベロマイセス ラクチス ＹＩＴ８２６３、ハンセニアアスポラ ウヴァラム ＹＩＴ８１６４、イサチェンキア オリエンタリス ＹＩＴ８２６６、キャンジダ ケフィア ＹＩＴ８２３７、ピチア ファリノサ ＹＩＴ８０５８はいずれも極めて高い血漿コレステロール低下率を示し、動脈硬化指数を改善した。
【００６０】
実施例４：５％酵母添加食投与試験
５週齢の雄ウイスターラットを用いて実施例３と同様の試験を行った。ただし、試験群の飼料に添加する酵母凍結乾燥菌体をそれぞれ５％混餌（表７の５％酵母群）して、１群８匹の個別飼いで、１４日間、１日１５ｇの制限食を与えた。血漿脂質の分析結果は表１４に示す通りであって、高脂肪食を与えることにより対照群では総コレステロール値、動脈硬化指数が上昇したが、同じ高脂肪食でも５％の酵母菌体を添加した試験群では上記分析項目のすべてにおいて上昇が顕著に抑制された。
【００６１】
【表１４】
表１５に肝臓脂質の測定結果を示した。肝臓総コレステロール量は対照群に比べていずれの試験群も有意に低下した。このように、本願発明にかかる酵母は、その経口投与によって血漿脂質の低下作用だけでなく、肝臓脂質の低下作用も示す優れた抗コレステロール素材であることが分かる。
【００６３】
【表１５】
実施例５
実施例１で得た酵母菌体を使用し、下記の飲食物を製造した。
【００６５】
【表１６】
１）健康向け食品（錠剤）
次の添加物を含有する組成物を打錠し、錠剤とした。
【表１７】
２）健康向け飲料
次の処方により健康飲料を製造した。
【表１８】
３）果汁飲料
次の処方により健康飲料を製造した。
４）発酵乳
次の処方により加熱酵母菌体入り発酵乳を製造した。
１０％の脱脂粉乳と５％のグルコースを滅菌し、ラクトバチラス属細菌を植菌してヨーグルトを製造した。これに実施例１で得た加熱酵母菌体を０．１〜２０％混合し、発酵乳を製造した。
【００６９】
５）乳酒
次の処方により乳酒を製造した。
１０％の脱脂粉乳と５％のグルコースを滅菌し、ラクトバチラス属細菌を植菌すると同時に実施例１で得た酵母を植菌し、４８時間３７℃にて静置培養して乳酒を製造した。
【００７０】
【発明の効果】
上述の酵母の菌体又はその構成物からなる本願発明のコレステロール低下剤は顕著な血漿コレステロール低下作用、肝臓コレステロール低下作用を示し、動脈硬化その他コレステロール蓄積が原因の疾患の予防に極めて有効なものである。
【００７１】
しかも、本願発明に用いる酵母は古くからチーズや馬乳酒、ワイン製造等に使用されていることから明らかなように病原性のない安全な酵母であり、その菌体あるいは構成物からなる本願発明のコレステロール低下剤も、ラットに経口投与した場合８ｇ／kgの投与量でも死亡例は認められず、長期間投与しても安全性には問題がない。
従って、本発明のコレステロール低下剤は経口投与する医薬として利用するほか、食品に混合して日常的に摂取させ、動脈硬化予防と健康増進に役立たせるのにも適した極めて有利なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】コレステロール添加食と無添加食投与群の血漿コレステロール値を示す図である。
Claims (3)
- イサチェンキア・オリエンタリス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、クロエッケラ・アフリカーナ、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロマイセス・ラクチス、ピチア・ファリノサ及びトルラスポラ・デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を有効成分して含有するコレステロール低下剤。
- イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、ハンセニアスポラ ウヴァラムＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、クロエッケラ アフリカーナＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナスＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチスＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）及びトルラスポラ デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を有効成分して含有するコレステロール低下剤。
- イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８１号）、ハンセニアスポラ ウヴァラムＹＩＴ８１６４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７８号）、クロエッケラ アフリカーナＹＩＴ８１６５（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７９号）、クルイベロマイセス マルキシアナスＹＩＴ８２９２（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８３号）、クルイベロマイセス ラクチスＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４８２号）、ピチア ファリノサＹＩＴ８０５８（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７６号）及びトルラスポラ デルブルエッキーＹＩＴ８１１４（生命工学工業技術研究所菌寄第１７４７７号）から選ばれる酵母の１種又は２種以上を含有する飲食品。
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