KR20000056981A - 위염, 웨궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료를 위한 식품 - Google Patents

위염, 웨궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료를 위한 식품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 헬리코박터 필로리의 감염 및 생육을 억제하는 효과가 있는, 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료를 위한 식품에 관한 것으로서, 헬리코박터 필로리의 항체역가를 높여 이를 식품에 이용하고, 동시에 헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 나타내는 유산균을 이용하여 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료식품을 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 발명은 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 분리하여 항원으로 사용함으로써 헬리코박터 필로리의 항체역가를 높이고, 헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 나타내는 유산균인 락토코커스 sp. HY 49, 락토바실러스 카제이 HY 2782 및 비피도박테리아 롱검 HY 8001을 식품에 이용하여 헬리코박터 필로리의 감염 및 생육을 억제하며, 특히 본 발명의 항체와 헬리코박터 필로리 억제 유산균을 유효성분으로 함께 사용함으로써 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료효과를 더욱 증대시키는 것을 특징으로 한다.

Description

위염, 웨궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료를 위한 식품{FOOD FOR PREVENTING AND TREATING GASTRITIS, GASTRIC AND DUODENAL ULCERS}
본 발명은 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료를 위한 식품에 관한 것으로, 특히 헬리코박터 필로리의 감염 및 생육을 억제하는 효과가 있는 식품에 관한 것이다.
1983년 호주의 의사인 마샬과 워렌은 사람의 위에서 만곡형 간균을 분리 배양하는데 성공하고 이 균을 캄필로박터 필로리(Campylobacter pylori)로 명명하였으며, 이 균이 위궤양, 십이지장궤양과 같은 소화성궤양의 원인이라는 것을 증명하였다. 이후 이 균은 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori)로 개명되었고, 많은 논문에서 이 균이 위염, 위궤양, 십이지장궤양 환자의 위생검사에서 높은 비율로 검출되는 것으로 보고되고 있다.
헬리코박터 필로리의 감염은 식품 등과 함께 경구적으로 침입한 균이 위, 십이지장 점막에 부착함에 따라 시작되는데, 헬리코박터 필로리의 병독인자를 살펴보면 위내의 강산에서 생존하기 위해 분비하는 유레아제, 운동성을 유지하도록 하는 편모, 위 상피세포에 쉽게 부착하도록 도와주는 세포 표면의 외막단백질이 있다.
한편, 위염, 위궤양, 십이지장궤양의 치료제로는 현재 위산분비를 억제하는 H2 차단제가 주류를 이루고 있는데, 이와 같은 제제들은 일단 치료효과는 높지만 재발되는 비율이 매우 높고, 또한 재발율이 높다는 것은 이 질환의 특징이기도 하다. 재발율이 높은 이유로는 이러한 제제들이 헬리코박터 필로리에 직접적으로 작용하지 않고 위산분비를 억제하는 것을 주된 약리작용으로 하고 있으므로, 궤양의 원인인 헬리코박터 필로리 자체가 제거되지 않기 때문인 것으로 생각된다. 따라서, 근래에는 위염, 위궤양, 십이지장궤양의 원인인 헬리코박터 필로리에 직접적으로 작용하는 제제에 관해 많은 연구가 이루어지고 있다.
지금까지 헬리코박터 필로리에 대응하는 제제들의 개발 동향을 살펴보면, 헬리코박터 필로리에 직접적으로 항균작용을 나타내는 항생제의 개발과, 헬리코박터 필로리에 대한 백신의 개발 및 항체의 이용으로 크게 나누어 볼 수 있다. 이중 백신과 항체를 이용하는 방법은 예방적인 차원에서 적용할 수 있는 방법이며, 특히 항체를 이용하는 방법은 일상적으로 섭취하는 식품을 통해서도 적용이 가능한 방법이다. 항체를 이용하는 방법으로, 일본 특개평 4-275232는 헬리코박터 필로리 균체 파쇄액을 항원으로하여 난황으로 이행된 항체를 유효성분으로 사용하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방식품에 관해 개시하고 있다.
그러나, 헬리코박터 필로리의 균체 파쇄액을 그대로 항원으로 사용할 경우 이종 단백질이 많이 함유되어 있어 항체역가가 높지 않으므로 목적하는 충분한 효과를 얻기가 어렵고, 한편 헬리코박터 필로리에 대응하는 여러 가지 제제가 개발되어 왔으나 아직까지 유산균을 이용하여 헬리코박터 필로리를 억제하는 방법에 대해서는 사실상 개발된 것이 없는 실정이었다. 이에 본 연구자들은 헬리코박터 필로리의 항체역가를 높이는 동시에 인체에 유익한 유산균을 이용하여 일상적으로 섭취하는 식품을 통해 헬리코박터 필로리의 생육을 효과적으로 억제하고 감염을 예방할 수 있는 방법에 대해 연구하게 되었다.
본 발명은 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 분리하여 항원으로 사용함으로써 헬리코박터 필로리의 항체역가를 높이는 방법 및 이를 이용한 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 헬리코박터 필로리에 대해 억제효과를 나타내는 유산균을 분리하여 이용함으로써 일상적으로 섭취하는 식품을 통해 헬리코박터 필로리의 감염 및 생육을 억제하는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
나아가, 본 발명은 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 항원으로 사용하여 얻은 항체와 헬리코박터 필로리를 억제하는 유산균을 함께 유효성분으로 함유시켜 그 효과를 더욱 증대시킨 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
도 1은 식품의 함유성분에 따른 헬리코박터 필로리의 감염 예방율을 비교 도시한 그래프이며;
도 2는 식품의 함유성분에 따른 헬리코박터 필로리의 감염 치료율을 비교 도시한 그래프이다.
항체의 제조
헬리코박터 필로리는 세포 표면에 숙주세포에의 부착을 도와주는 성분이 있어 쉽게 부착하고, 유레아제를 분비하여 요소를 분해하며, 암모니아를 생성함으로써 극산성 환경을 알칼리로 전환하여 생존해 나간다. 따라서, 본 발명에서는 헬리코박터 필로리의 감염에 중요한 병독인자로 작용하는 편모, 유레아제, 외막단백질을 분리하여 항원으로 사용함으로써 헬리코박터 필로리의 균체 파쇄액을 그대로 항원으로 사용하는 방법에 비해 헬리코박터 필로리의 항체역가를 크게 향상시킨다.
본 발명에 따른 헬리코박터 필로리의 특이적 항체(이하 "항HP 항체"라 한다)는 헬리코박터 필로리의 편모, 유레아제, 외막단백질을 항원으로 해서 면역한 닭이 생산하는 알로부터 얻어지며, 면역에 사용하는 닭은 30-50주된 백색 레그혼(white leghorn)을 사용하고, 면역방법으로는 근육주사 또는 피하주사 방법을 이용한다. 항원으로 사용한 외막 단백질, 유레아제, 편모는 헬리코 박터 필로리 표준균주(Helicobacter pylori ATCC43504) 및 국내 환자에서 분리한 것을 사용하였으며, 면역증진제로는 종래의 프로인트 컴플리트(Freund, s complete), 인컴플리트 아주반트를 사용하지 않고 본 발명에서 제조한 아주반트를 사용하였으며, 적정량의 항원을 본 발명에서 제조한 아주반트와 함께 유화현탁한 후 충분한 항체가 얻어질 때까지 2주 간격으로 4회 면역하였다. 계란으로 이행된 특이적 항체값은 효소면역흡착법, 마이크로타이터법을 이용하여 측정하며, 1주 간격으로 면역한 후 상기한 두 방법에 의해 항체역가의 추이를 추적하여 항체역가가 충분히 상승한 단계의 계란을 채취하여 전란분말, 난황수용성단백분말 및 정제항체를 각각 제조한다. 항체의 분리는 일반적인 항체분리법을 이용하여 행할 수 있으며, 바람직하게는 본 발명에 따른 항체의 이용분야가 주로 식품분야임을 고려할 때 람다 카라기난을 사용하는 천연의 방법을 이용하도록 한다. 본 발명에 따른 항체는 면역후 계란에서 얻은 전란 또는 난황액을 카라기난 등을 이용하여 난황 리포단백을 제거한 다음 난황 수용성 단백을 분말화한 난황 수용성 단백분말로 제조하거나, 또는 난황 수용성 단백을 이온교환크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 어피니티크로마토그래피 등의 공지의 단백질 정제방법에 의해 정제한 정제 계란 항체로 제조한다.
본 발명에 따라 제조된 항체는 특정 병독인자를 항원으로 하여 생성된 것이므로 헬리코박터 필로리의 위, 십이지장 점막에의 부착을 억제할 수 있으며, 다양한 형태의 식품에 적용되어 위염, 위궤양 및 십이지장궤양의 예방식품으로 사용될 수 있다.
헬리코박터 필로리에 대해 억제효과를 나타내는 유산균의 분리
헬리코박터 필로리를 함유하는 브루셀라(brucella) 한천배지에서 유산균을 배양하여 헬리코박터 필로리에 대해 억제능력이 우수한 균주를 분리하여 사용한다. 유산균으로는 본 발명자들이 보관중인 균주와 일반적으로 이용가능한 균주를 사용하였으며, 배양결과 락토코커스 sp. HY 49 (Lactococcus sp. HY 49, 특허출원 제94-22715호, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10842호), 락토바실러스 카제이 HY 2782 (Lactobacillus casei HY 2782, 특허출원 제93-26829호, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10803호) 및 비피도박테리아 롱검 HY 8001 (Bifidobacteria longum HY 8001, 특허출원 제95-30301호, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10870호)이 헬리코박터 필로리에 대해 생육억제능력이 우수한 것으로 나타났다. 특히 락토코커스 sp. HY 49는 가장 억제능력이 우수한 것으로 판명되었다. 헬리코박터 필로리를 억제하는 상기 유산균들은 각각 단독으로 또는 혼합하여 식품에 사용될 수 있으며, 발효유, 음료, 조제분유, 아이스크림, 유제품 등의 다양한 식품에 적용되어 위염, 위궤양, 십이지장궤양의 예방 및 치료를 위해 이용될 수 있다.
본 발명에 따라 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 항원으로 하여 얻은 항체 및 헬리코박터 필로리를 억제하는 능력이 있는 유산균은 각각 식품에 함유되거나 또는 함께 식품에 함유되어 위염, 위궤양, 십이지장궤양의 예방 및 치료를 위해 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체와 유산균은 함께 사용될 경우 서로 유기적, 상승적으로 작용하여 개별적으로 사용하는 경우에 비해 헬리코박터 필로리에 대한 예방효과와 치료효과가 모두 크게 향상된다. 적용할 수 있는 식품으로는, 예를 들어 발효유, 아이스크림, 빵, 과자류, 조제분유, 커피 등의 분말음료, 마가린, 버터, 치즈 등의 유제품, 유아용 식품 등 일상적으로 먹는 식품을 포함한 다양한 식품에 모두 적용될 수 있으며, 또한 이러한 일반식 외에, 위 및 십이지장궤양 환자, 위 또는 십이지장 수술을 받은 환자, 위장장해를 수반하는 약물을 투여하는 환자 등의 병원식, 경구수액 등에도 이용될 수 있다.
이하, 다음의 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 다음의 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
항원의 준비
외막 단백질 항원
헬리코박터 필로리 임상분리주를 5% 우태아 혈청을 함유하는 브루셀라(Brucella) 배지에서 37℃, 2일간 배양하였다. 이 배양액을 4,000Xg에서 원심분리하여 균체를 회수한 후 인산완충생리식염수에 현탁시켰다. 초음파로 균체를 파쇄한 후 10,000Xg에서 20분간 원심분리하여 파쇄되지 않은 균체를 제거한 다음 회수한 상등액을 100,000Xg로 30분간 초원심분리하여 세포막을 침전시킨 후 증류수에 현탁시켜 항원으로 사용하였다.
유레아제 항원
헬리코박터 필로리를 배양한 후 집균한 현탁액을 초음파로 파쇄하고, 다음과 같은 공지의 기술을 이용하여 분리, 정제했다. 세균파쇄액을 DEAE-Sphacel 이온교환칼럼에 통과시키고 20mM 인산완충액(pH 6.8)으로 세척한 다음 용출은 1.0M 염화나트륨 직선 농도구배법으로 수행하였다. 280nm의 파장에서 각 분획의 흡광도를 측정하고 유레아제 검색법으로 확인된 효소분획을 모아서 동일한 완충용액으로 투석한 다음 한외여과막을 이용하여 농축하여 항원으로 사용하였다.
실시예 2
항HP 계란 항체의 제조
실시예 1에서 제조한 외막단백질 항원을 이용하여 면역을 실시하였다. 아주반트는 미네랄 오일의 일종인 드라케올(Drakeol)과 유화제를 혼합하여 사용하고, 유화제로는 스판 85(Span 85) 및 트윈 85 (Tween 85)를 54:46의 비율로 혼합하여 사용하였다. 드라케올, 유화제, 항원을 9 : 1 : 8의 비율로 혼합하여 유화시킨 후 충분한 항체가가 얻어질 때까지 40주된 백색 레그혼에 2주 간격으로 4회 근육주사하였다. 계란으로 이행된 특이적 항체가는 효소면역흡착법과 마이크로타이터법을 이용하여 아래와 같이 측정하였으며, 응집항체가의 추이를 추적하여 항체가가 충분히 상승한 단계의 계란을 채취하여 항체를 분리하여 전란분말, 난황수용성단백분말 및 정제항체를 각각 제조하였다. 항체의 분리는 람다 카라기난을 이용하여 난황 리포단백을 제거한 다음 난황 수용성 단백을 분말화한 난황 수용성 단백분말 또는 정제 계란 항체로 제조하였다.
항체가의 측정
난황중의 특이적 항체가는 마이크로타이터법과 효소면역흡착법에 의해 다음과 같이 응집항체가 및 항체역가를 측정하였다.
2주마다 모은 계란에서 난황을 분리하여 그 난황 1g과 람다 카라기난 수용액(0.15% w/v) 9㎖를 혼합하여 실온에서 30분간 방치후 10,000Xg, 10분간 원심분리를 하여 특이적 항체를 함유하는 난황수용성 단백분획을 얻어 시료액으로 하였다. 시료액을 인산완충액(PBS, pH 7.4)로 2n배 희석하여 검액으로 하였다.
응집항체가는 각 검액 50㎕와 균파쇄액 50㎕를 마이크로플레이트에 혼합한 후 37℃, 24시간 정치하여 응집의 유무를 조사하므로서 이루어진다. 응집항체가는 응집이 보여지는 샘플의 최대 희석배율의 역수로 나타내었다. 상기 응집항체가는 바람직하게는 1 : 500 이하로 함이 좋다.
항체역가는 효소면역흡착법에 의해 이루어지는 데, 효소면역흡착법에 의한 측정은 항원(10㎍/㎖)을 0.05 M 탄산염 완충액(carbonate buffer)에 혼합한 후 마이크로 플레이트에 100 ㎕씩 분주하여 고정화시키며, 이후 고정화된 항원에 건액 100 ㎕와 발색시약을 순서대로 반응시켜 항체의 역가를 측정하므로서 이루어진다. 측정된 반응값 중 최대희석배율이 대조군 반응값(흡광도 540nm의 0.3)의 2배 이상인 곳(흡광도 1.0 이상, 540nm 이상)을 항체의 최대역가로 설정하였다. 즉, 상기 희석배율은 희석배율이 높을 수록 항체역가가 좋으므로 바람직하게는 1 : 3000 이하로 하는 것이 좋다.
난황수용성 단백분말의 제조
응집항체가 640 이상인 계란에서 분리한 난황을 호모믹서로 균질화하나 다음 이 난황액에 4배량의 람다 카라기난 수용액(2㎎/㎖)를 혼합하였다. 이 액을 실온에서 30분간 방치한 뒤 원심분리(10,000Xg, 10분)하여 난황지질단백질을 침전으로 분리하였다. 상등액을 여과지로 여과한 후 분획분자량 30,000의 한외여과막을 이용하여 10배로 농축한 후 동결건조하여 헬리코박터 필로리에 대한 특이항체를 함유하는 난황 수용성 단백분말을 얻었다.
또한, 이렇게 얻은 난황 수용성 단백을 공지의 단백질 정제방법인 이온교환 크로마토그래피에 의해 정제하여 정제 계란 항체를 제조했다.
실시예 3
항원에 따른 항체가의 측정
헬리코박터 필로리의 균체 파쇄액을 그대로 항원으로 사용한 경우(시료 A)와 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 항원으로 사용한 경우(시료 B)의 항체가를 각각 비교 측정하였다. 시료 A(헬리코박터 필로리의 균체 파쇄액)는 660nm에서 흡광도를 4.0으로 조정한 것을 사용했고, 시료 B(특정 병독인자)는 유레아제 50㎍, 외막단백질 100㎍, 편모단백 100㎍을 혼합한 것을 동량의 아주반트와 혼합하여 사용하였으며, 시료 A와 B를 각각 산란계에 1㎖씩 주사했다.
시료 A를 사용하여 면역하였을 때와 시료 B를 사용하여 면역하였을 때의 난황으로 이행된 항체가를 실시예 2와 같은 방법으로 측정하였으며, 그 결과를 다음의 표 1에 나타내었다.
항원으로 균체 파쇄액을 사용한 경우와 특정병독인자를 분리하여 사용한 경우의 비교표.
면역 후의 주 항체 응집가 효소면역흡착법 항체역가
시료 A (균체파쇄액) 시료 B(외막단백질+유레아제+편모) 시료 A (균체 파쇄액) 시료 B(외막단백질+유레아제+편모)
0 〈 20 〈20 200 200
1 40 40 200 200
2 40 80 400 400
3 80 160 800 800
4 160 320 1600 1600
6 320 640 3200 3200
8 640 1280 3200 6400
10 640 1280 6400 12800
12 640 1280 12800 12800
14 320 640 6400 6400
균체 파쇄액을 그대로 항원으로 사용한 경우에 비해 특정 병독인자를 분리하여 항원으로 사용한 경우가 면역후 3주부터 항체 역가가 뚜렷하게 높게 나타났으며, 높은 항체역가가 3주 이상 지속되었다.
또한, 분리정제된 난황항체의 역가보존 및 물리적 안정성을 제공하기 위하여 보호제로 혈장단백질 1중량%와 설탕(Sucrose)을 10, 20, 30중량%로 함유시키고 그 물리적인 안정성을 확인하였다. 실험결과 난황에 첨가된 설탕의 함량은 10중량%가 가장 적당하고(바람직하게는 5-15 중량%), 난황이 pH 4-6, 온도 65 ℃ 이하에서 항체 역가의 변화가 없는 것으로 나왔으며 구체적인 결과를 표 2로 나타내었다.
보호제 함량에 따른 난황항체의 안정성
항체 역가(효소면역 흡착법)
보호제(%) pH 온도(pH 7)
2 4 6 〈65℃ 〉80℃
0 3200 6400 12800 12800 3200
10 6400 12800 12800 12800 6400
20 3200 3200 6400 6400 3200
30 1600 3200 6400 6400 3200
실시예 4
아주반트에 따른 항체가의 측정
프로인트 아주반트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 항HP 계란 항체를 제조하여 이를 비교예로 하였다. 실시예 2에서 제조한 항HP 계란 항체와 비교예의 응집항체가를 실시예 2와 같은 방법으로 비교 측정하였다. 측정 결과는 다음의 표 3과 같다.
면역증진제로 본 발명의 아주반트를 사용한 경우와 프로인트 아주반트를 사용한 경우의 비교표.
면역 주 항체응집가 효소면역 흡착법 항체역가
비교예(프로인트 아주반트) 실시예 2(본 발명의 아주반트) 비교예(프로인트 아주반트) 실시예 2(본 발명의 아주반트)
0 10 20 100 100
1 20 40 200 400
2 20 80 200 800
3 40 160 400 800
4 80 320 400 1600
6 160 640 800 3200
8 320 1280 800 3200
10 640 1280 1600 6400
12 640 1280 3200 6400
14 320 640 1600 3200
실시예 5
무틴에의 접착 저해 시험
헬리코박터 필로리에 대한 억제능을 무틴에의 접착 저해 시험으로 테스트하였다. 헬리코박터 필로리 배양액을 집균한 후 생리식염수로 현탁하여 1㎖당 3×104CFU로 하고, 0.2% 돼지 위점막 뮤신 용액으로 코팅된 24 웰 플레이트에 이 균액과 실시예 2에서 제조한 항HP 정제 계란 항체(1㎎/㎖) ; 균액과 시판의 계란 항체 1㎖ ; 그리고 대조군으로 항HP 정제 계란 항체 대신에 소혈청 알부민(BSA : 1㎎/㎖)을 각각 가했다.
시료 a : 균액 + 실시예 2에서 제조한 항HP 계란 항체(1㎎/㎖)
시료 b : 균액 + 시판의 계란 항체 1㎖
대조군 : 균액 + 소혈청 알부민(BSA : 1㎎/㎖)
1시간 배양한 후 인산완충액으로 세정하고 플레이트에 잔존하는 헬리코박터 필로리의 균수를 동균이 생산하는 유레아제를 측정하여 산정하였다. 유레아제의 활성은 단위시간에 생성하는 암모니아양을 인돌페놀법에 의해 파장 557nm의 흡광도를 이용하여 구했다. 결과는 다음의 표 4와 같다.
시료 잔존균수(%)
시료 a 10
시료 b 90
대조군 100
실시예 6
헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 가진 유산균의 분리
헬리코박터 필로리를, 5% 우태혈청을 함유한 브루셀라 한천배지에서 2일간 배양했다. 보관중인 여러 종류의 유산균 배양액을 0.45㎛ 필터로 여과한 후 여액을 헬리코박터 필로리가 함유된 상기 한천배지 위에 점적하여 동일 조건에서 배양하면서 억제환의 생성여부를 관찰하였다. 배양 결과, 여러 균주 중에 락토코커스 sp. HY 49 (Lactococcus sp. HY 49, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10842호), 락토바실러스 카제이 HY 2782 (Lactobacillus casei HY 2782, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10803호) 및 비피도박테리아 롱검 HY 8001 (Bifidobacteria longum HY 8001, 기탁기관 : 한국종균협회, 기탁번호 : KFCC 10870호)이 헬리코박터 필로리에 대해 우수한 생육억제능을 나타냈으며, 특히 락토코커스 sp. HY 49가 가장 우수한 억제능력을 나타내었다.
실시예 7
위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 식품의 제조
발효유에, 헬리코박터 필로리 생육억제능력이 있는 혼합 유산균주(락토코커스 sp. HY 49 + 락토바실러스 카제이 HY 2782 + 비피도박테리아 롱검 HY 8001)를 첨가하고, 온도와 효소분해에 의한 항체의 실활이 일어나지 않도록 실시예 2에서 제조한 항HP 계란 항체를 첨가하여 일반적인 발효유의 제조방법에 따라 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료효과가 있는 발효유를 제조하였다. 발효유의 조성은 다음의 표 5와 같다. 표에서도 알 수 있듯이 상기 예방식품은 그 성분 중에 난황액이 2 중량% 이하로 존재하고 있음이 바람직하다. 또한, 총 제품중량에는 난황함체함량이 0.25 중량% 미만으로 존재함이 바람직하다.
발효유의 조성
성분 함량(%)
원유 74
탈지분유 3
과즙 10
액상과당 3
함수결정포도당 4
고과당 2
난황액 1-2
정제수 2-3
계 100
실시예 8
식품의 함유성분에 따른 감염 예방율의 측정
시료
시료 1 : 발효유에 "항HP항체"만을 첨가
시료 2 : 발효유에 "HP 억제 유산균" 만을 첨가
시료 3 : 발효유에 "항HP항체"와 "HP 억제 유산균"을 모두 첨가
대조군 : 통상의 사료
발효유에 항HP항체만을 첨가하여 실시예 7과 동일한 방법으로 발효유를 제조하고(시료 1) ; 또한 발효유에 헬리코박터 필로리를 억제하는 혼합 유산균주(락토코커스 sp. HY49 + 락토바실러스 카제이 HY 2782 + 비피도박테리아 롱검 HY 8001)만을 첨가하여 실시예 7과 동일한 방법으로 발효유를 제조하고(시료 2) ; 이들과 함께 실시예 7에서 제조한 발효유(시료 3)를 시료로 준비하였다.
4주령된 마우스(BALB/c)를 10마리씩 4군으로 나누어 항HP항체만을 첨가한 것(시료 1)을 1주 동안 먹인 실험군(BALB/c, 10마리); 유산균만을 첨가한 것(시료 2)을 1주 동안 먹인 실험군(BALB/c, 10마리); 항HP항체와 유산균을 모두 첨가한 것 (시료 3)을 먹인 실험군(BALB/c, 10마리); 그리고 대조군으로 통상의 사료를 먹인 실험군에, 각각 존대를 이용하여 헬리코박터 필로리 배양액을 0.2㎖씩 쥐의 복부에 투여하여 감염을 시도했다. 감염 시도는 2일에 걸쳐 3회 실시한 다음 하루동안 기근상태로 두었다. 6주 후 쥐의 위를 절개하여 유레아제 활성을 측정하여 550nm에서 흡광도가 0.25 이상이면 감염된 것으로 판단하여 예방율을 측정하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 실험 결과, 헬리코박터 필로리 억제 유산균과 항HP항체를 모두 함유한 발효유(시료 3)를 먹인 실험군이 감염 예방율이 90%(9/10)로 다른 군에 비해 월등하게 높게 나타났다. 항HP항체만을 첨가한 발효유(시료 1)를 먹인 실험군은 감염 예방율이 40% (4/10)였고, 유산균만을 함유한 발효유(시료 2)를 먹인 실험군은 감염예방율이 50% (5/10)였으며, 대조군으로 사료를 먹인 실험군은 예방율이 10%(1/10)에 불과했다.
실시예 9
식품의 함유성분에 따른 감염 치료율의 측정
시료
시료 1 : 발효유에 "항HP항체"만을 첨가
시료 2 : 발효유에 "HP 억제 유산균"만을 첨가
시료 3 : 발효유에 "항HP항체"와 "HP억제 유산균"을 모두 첨가
대조군 : 통상의 사료
발효유에 항HP항체만을 첨가하여 실시예 7과 동일한 방법으로 발효유를 제조하고 (시료 1); 또한 발효유에 헬리코박터 필로리 억제 혼합 유산균주(락토코커스 sp. HY 49 + 락토바실러스 카제이 HY 2782 + 비피도박테리아 롱검 HY 8001)만을 첨가하여 실시예 7과 동일한 방법으로 발효유를 제조하여 (시료 2); 실시예 7에서 제조한 발효유(시료 3)와 함께 시료로 준비했다.
4주령된 마우스(BALB/c)에 실시예 8과 동일한 방법으로 헬리코박터 필로리를 감염시킨 후 마우스를 10마리씩 4군으로 나누어 제 1군에는 항HP항체만을 첨가한 것(시료 1)을 1주 동안 먹이고, 제 2군에는 유산균만을 첨가한 것(시료 2)을 1주 동안 먹이고, 제 3군에는 항HP항체와 유산균을 모두 첨가한 것(시료 3)을 1주 동안 먹이고, 제4군에는 대조군으로 통상의 사료를 먹였다. 실시예 8과 동일한 방법으로 쥐의 위를 절개하여 유레아제 활성을 측정하여 550nm에서 흡광도가 0.25 이상이면 감염된 것으로 판단하여 치료율을 측정하였으며, 그 결과는 도 2와 같다. 헬리코박터 필로리 억제 유산균과 항HP항체를 모두 함유한 발효유(시료 3)를 먹인 실험군이 치료율 70%(7/10)로 다른 실험군에 비해 치료율이 월등히 높게 나타났다.
항HP항체만을 첨가한 발효유(시료 1)를 먹인 실험군은 치료율이 20%(2/10)였고, 유산균만을 함유한 발효유(시료 2)를 먹인 실험군은 치료율이 40%(4/10)였으며, 대조군으로 통상의 사료를 투여한 실험군을 거의 치료율을 나타내지 않았다.
본 발명에 따르면, 헬리코박터 필로리의 특정 병독인자를 분리하여 항원으로 사용함으로써 균체 파쇄액을 그대로 항원으로 사용하는 경우에 비해 항체역가를 크게 향상시키고, 이 항체를 함유하는 식품을 통해 위염, 위궤양 및 십이지장궤양을 효과적으로 예방할 수 있게 된다. 또한, 본 발명에 따르면 헬리코박터 필로리에 대해 억제효과를 나타내는 유산균을 분리하여 식품에 함유시켜 일상적으로 섭취하는 발효유 등의 식품을 통해 헬리코박터 필로리의 감염을 효과적으로 예방하게 되며 뿐만 아니라 이미 감염된 헬리코박터 필로리의 생육을 억제하여 그 치료를 돕게 된다. 특히 본 발명은 본 발명의 항체와 헬리코박터 필로리 억제 유산균을 함께 식품의 유효성분으로 함유시켜 이들 성분이 서로 유기적, 상승적으로 작용하도록 함으로써 헬리코박터 필로리에 대한 예방 및 치료효과를 더욱 증대시킨다.

Claims (13)

  1. 헬리코박터 필로리의 병독인자인 편모, 유레아제 및 외막단백질을 분리하여, 이 분리된 병독인자를 항원으로 하여 면역한 닭이 생산하는 난황을 포함하고 있는 계란으로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 항HP항체를 유효성분으로 함유하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  2. 헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 나타내는 락토코커스 sp. HY 49, 락토바실러스 카제이 HY 2782 및 비피도박테리아 롱검 HY 8001을 각각 단독으로 또는 혼합하여 유효성분으로 함유하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  3. 항HP항체와 헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 나타내는 유산균을 함께 유효성분으로 함유하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품으로서,
    상기 항HP항체는 헬리코박터 필로리의 병독인자인 편모, 유레아제 및 외막단백질을 분리하여 이를 항원으로 하여 면역한 닭이 생산하는 난황을 포함하고 있는 계란으로부터 얻어진 것이며;
    상기 유산균은 헬리코박터 필로리에 대해 억제능을 나타내는 락토코커스 sp. HY 49, 락토바실러스 카제이 HY 2782 및 비피도박테리아 롱검 HY 8001 중 어느 한 균주 또는 이들의 혼합균주인 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 난황은 최대희석배율 1 : 3000 이상의 효소면역흡착법에 의한 항체역가를 갖춘 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 난황은 마이크로타이터법에 의한 응집항체가가 1 : 500 이하인 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 난황중의 항체량은 상기 식품 총중량의 0.25% 미만으로 함유되어 있음을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 난황 중의 항체의 역가보존 및 물리적 안정성을 위하여 보호제로 1 중량% 의 소혈장 단백질과 5-15 중량% 설탕(sucrose)이 함유되어 있음을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  8. 제 3항에 있어서, 상기 난황은 최대희석배율 1 : 3000 이하의 효소면역흡착법에 의한 항체역가를 갖춘 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  9. 제 3항에 있어서, 상기 난황은 마이크로타이터법에 의한 응집항체가가 1 : 500 이하인 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  10. 제 3항에 있어서, 상기 난황중의 항체량은 상기 식품 총중량의 0.25% 미만으로 함유되어 있음을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  11. 제 3항에 있어서, 상기 난황 중의 항체의 역가보존 및 물리적 안정성을 위하여 보호제로 1 중량% 의 소혈장 단백질과 5-15 중량% 설탕(sucrose)이 함유되어 있음을 특징으로 하는 위염, 위궤양 및 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  12. 제 3항에 있어서, 상기 식품은 발효유, 아이스크림, 빵, 과자, 조제분유, 음료, 마가린, 버터, 치즈, 유아용 식품과 같은 일상적으로 섭취하는 일반식인 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
  13. 제 3항에 있어서, 상기 식품은 위 및 십이지장궤양 환자, 위 또는 십이지장 수술을 받은 환자, 위장장해를 수반하는 약물을 투여하는 환자와 같은 환자의 병원식 또는 경구수액인 것을 특징으로 하는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방 및 치료식품.
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