KR100518263B1

KR100518263B1 - 락토코쿠스 락티스 ｎｋ24 (ｋｆｃｃ 11315) 생균을유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100518263B1
Application number: KR10-2002-0072758A
Authority: KR
Inventors: 백현동; 이나경; 최신양
Original assignee: 학교법인 한마학원
Priority date: 2002-11-21
Filing date: 2002-11-21
Publication date: 2005-10-04
Also published as: KR20040044300A

Abstract

본 발명은 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균주에 대해서 우수한 항균효과가 있는 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315) 생균을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 균에 대해 우수한 항균 효과가 있으므로 식품, 의약품 등의 용도로 사용될 수 있는 뛰어난 효과를 제공한다.

Description

락토코쿠스 락티스 ＮＫ24 (ＫＦＣＣ 11315) 생균을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 조성물 {Composition containing Lactococcus lactis NK24 (KFCC 11315) for stomach disorder}

본 발명은 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균주에 대해서 항균효과가 우수한 생균을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균주에 대해서 우수한 항균효과가 있는 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315) 생균을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

소득 수준이 향상되면서 소비자는 건강 지향적인 제품에 관심을 가지고 있으며, 기능성 식품에 대한 수요 역시 크게 증가되고 있다. 실제로 프로바이오틱 생균의 기능성과 효능을 이용한 식품개발은 기능성 식품의 중요한 분야로 인식되고 있으며 기능성 식품으로 프로바이오틱 생균을 이용하려는 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 프로바이오틱 생균제란 살아있는 미생물 균체를 섭취함으로써 미생물이 분비하는 효소, 유기산, 비타민 및 무독성 항균물질 등에 의한 장내 균총의 정상화는 물론 장질환 치료를 통해 신체기능 개선을 목적으로 생산된 제품을 말한다(Fuller, R. Probiotics in man and animals. J. Appl. Bacteriol. 66:365-37 (1989)). 이러한 프로바이오틱 생균제는 장내 균총의 안정화, 유해 세균의 정착 억제에 따른 부패산물 생성 감소 및 질병예방, 면역의 활성화, 간접적인 항암작용, 콜레스테롤 저하, 유당 불내증의 감소, 변비 억제 및 예방과 관련되어 기능성이 인정되어 있다(Goldin, B.R. and Borbach, S.L. Alterations in fecal microflora enzyme related to diet, age, lactobacillus supplements, and dimethylhydrazine. Cancer 40: 2421-2426 (1977); Gilliland, S.E. and Walker, D.K. Factors to consider when selecting a culture of Lactobacillus acidophilus as a dietary adjunct to produce a hypocholesterolemic effect in humans. J. Dairy Sci. 73: 905-911 (1990); Fuller, R. Probiotics in human medicine. Gut 32: 439-442 (1991); Hilton, E., Henry, D.I., Phyllis, A., Kenneth, F. and Michael, T.B. Ingestion of yoghurt containing Lactobacillus acidophilus as prophylaxis for candidal vaginitis. Ann. Int. Med. 116: 353-357 (1992); Shah, N. Lactobacillus acidophilus and lactose intolerance, a review. ASEAN Food J. 9: 47-54 (1994); Matsuzaki, T., Hashimoto, S. and Yokokura, T. Effects on antitumor activity and cytokine production in the thoracic cavity by intrapleural administration of Lactobacillus casei in tumor-bearing mice. Med. Microbiol. Immunol. Berl. 185: 157-161 (1996); Takiguchi, R., Mochizuki, E., Suzuki, Y., Nakajima, I. and Benno, Y. Lactobacillus acidophilus SBT 2062 and Bifidobacterium longum SBT 2928 on harmful intestinal bacteria. J. Int. Microbiol. 11: 11-17 (1997)).

상기와 같은 기능이 있는 프로바이오틱 생균제로 많이 이용되고 있는 세균은 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토코쿠스(Streptococcus)속, 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 엔테로코쿠스(Enterococcus)속, 클로스트리움 부티리쿰(Clostridium butyricum), 락토바실러스 스포로제네스(Lactobacillus sporogenes), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 바실러스 폴리퍼멘티쿠스(B. polyfermenticus) SCD 등이 있다.

한편, 프로바이오틱 생균제로서 사용되기 위해서는 안전성, 기능성(생존성, 정착성, 서식성, 항미생물제 생성능, 면역 촉진능, 안티제노톡식(antigenotoxic) 활성, 병원성 세균의 억제능), 기술성(관능적 특성, 안정성, 박테리오파지(bacteriophage) 저항성, 제조 과정 중의 생존성), 그리고 GRAS(Generally Recognized As Safe) 미생물로서 큰 장내 생존성 등의 특성이 요구된다.

헬리코박터 파이로리(H. pylori)균은 만성위염, 위궤양, 십이지장궤양, 위염 발생과 소화성 궤양의 원인균으로서 1982년 와렌(Warren)과 마샬(Marshall)에 의해 보고된 이래 균의 생리적 특성과 병원성 기작 등을 밝히기 위한 많은 연구가 진행되고 있다. 주로 위점막에서 서식하고 있는 헬리코박터 파이로리(H. pylori)균은 날아가는 갈매기 모양인 만곡형 그람음성 세균이며, 크기는 2∼7×0.4∼1.2 ㎛정도이다. 미호기성(microaerophilic)으로 최적 산소분압은 2∼8%이고, 10%의 CO₂조건하 37℃에서 배양할 수 있다. 강산성인 위내의 점막에 기생하는 세균이기 때문에 헬리코박터 파이로리(H. pylori)균이 산성에 잘 견디는 균일 것으로 기대하기 쉽지만, 이 균의 최적성장 pH는 7.0∼7.4이며, 이 범위를 벗어난 산성이나 알칼리성 조건에서는 발육하지 않는다(Hazell, S.L., Lee, A. and Hennessy, W. Campylobacter pyloridis and gastritis: Association to an environment of mucus as important factors in colonization of the gastric epithelium. J. Inf. Dis. 153: 658-663 (1986); Steer, H.W. Ultrastructure of cell migration through the gastric epithelium and its relationship to bacteria. J. Clin. Path. 28: 639-646 (1975)).

헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균의 가장 특징적인 생물학적 성상은 매우 강력한 운동성과 우레아제(urease) 효소 생산능이다. 메틸셀룰로스(Methylcellulose) 인공점액을 이용한 운동성 실험에서 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균은 대장균의 운동성이 저지되는 점도에 비해 20배 이상 높은 점도에서도 운동성을 나타낸다(Hazell, S.L. and Lee, A. Campylobacter pyloridis ureas, hydrogen ion back-diffusion and gastric ulcers. Lancet 1: 15-17 (1986)). 이러한 강력한 운동성 때문에 미꾸라지가 진흙 속을 자유로이 다니듯 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균은 살리실레이트(salicylate)나 에탄올(ethanol)같은 화학물 외에는 수소이온 같은 간단한 화합물도 침투하기가 어려운 점액층을 뚫고 들어갈 수도 있고 점액층내에서도 자유롭게 다니면서 위점막 상피세포의 접합부에 부착하여 살아갈 수 있는 것으로 추정된다. 운동성과 관련이 있는 세균 구조물은 편모이다. 이 세균은 단극 또는 양극성 편모가 하나씩 또는 5∼6개의 다발로 구성되어 있다. 특히 다른 세균편모에서는 관찰되지 않는 쉬쓰(sheath)와 터미널 벌브(terminal bulb)라는 독특한 구조물을 가지고 있는데, 이들에 대한 생물학적 성상에 관해서는 아직 밝혀져 있지 않다.

헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균의 또 다른 특성 중 하나는 우레아제(urease; urea aminohydrolase) 생산능이 강하다는 것이다(Lee. A. and Hazell, S.L. Campylobacter pylori in health and disease: An ecological perspective. Microb. Ecol. Health Dis. 1: 1-16 (1988)). 그 생산 능력은 프로테우스(Proteus) 균종의 생산능에 비해 100배 이상이며, 균체 단백질의 약 6% 정도가 우레아제(urease)로 알려져 있다. 우레아제(Urease)는 요소를 암모니아와 이산화탄소로 분해하는 효소이다. 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균은 위점막내에 낮은 농도로 존재하는 요소를 효과적으로 분해할 수 있으며, 이에 따라 생산되는 암모니아가 세균의 주위 환경을 중화시킴으로써 위내의 강염산에 의한 공격에 대해 대처할 수 있는 것으로 알려져 있다.

한편, 현재 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균의 치료법으로는 비스머쓰(bismuth)제제와 메트로니아졸(metronidazole)과 함께 아목시실린(amoxicillin) 또는 테트라사이클린(tetracycline)을 병용처리하는 일반적인 3중요법과 비스머쓰(bismuth)제제, 오메프라졸(omeprazole), 테트라사이클린(tetracycline)과 메트로니아졸(metronidazole)을 혼합한 4중요법 등이 헬리코박터 파이로리(H. pylori)에 우수한 치료효과를 나타낸다고 보고되어 있으나 항생제 투여에 의한 내성균주 출현 및 위 내에서의 약물의 침투성과 치료 후에 다시 성장이 억제되어 있던 균이 재증식하는 문제가 있다.

이에 대한 대안으로 헬리코박터 파이로리(H. pylori) 균에 대한 항균활성이 있는 여러 균주를 생균제 형태로 위장에 공급하여 헬리코박터 파이로리 균의 생육을 억제하는 노력이 이뤄지고 있으나, 일부 균들은 장내에서 암을 일으킬 수 있는 위험때문에 생균제로서 쉽게 사용할 수 없는 문제가 있고, 위장 내부의 강산성으로말미암아 내산성이 없는 균주들은 쉽게 사멸하여 효율적으로 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 균의 생육을 억제할 수 없는 문제가 있다.

이에 본 발명은 상기와 같은 문제점으로부터 안출된 것으로, 발암유발의 위험성도 없고, 위액 및 담즙산에 대한 내성이 높아 장내 생존력이 우수하여, 위암 발생 원인균으로 추정되는 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 균에 대해 항균활성이 이 높은 균주를 확보하고 이를 함유하는 생균제로서의 위장병 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 균주에 대해 항균효과가 있는 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 식품을 제공한다.

이하, 본 발명에 대해 더욱 상세히 설명한다.

프로바이오틱 생균으로서 가져야 할 특성 중 하나는 장내 생존력이 높아야 한다는 점이다. 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 젓갈에 분리된 균으로서 대조구에서의 10⁸cfu/ml 값에 대해 pH 2.5의 인공위액에서 10⁶cfu/ml의 생존율을 보이고, pH 4.0의 인공담즙산에서는 69.0%, pH 2.5에서는 74.5% 생존율을 보인다. 즉, 본 균주는 인공위액과 인공담즙산에 대해 높은 내성을 보인다.

한편, 섭취된 영양분은 위와 장을 통해 흡수되지 않거나 분해되지 않아서 장내에서 이상발효를 일으킬 수 있는데, 프로바이오틱 생균이 생산하는 유익한 효소는 이러한 가능성을 줄일 수 있다.

즉, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 알파-키모트립신(α-chymotrypsin), 베타-갈락토시다제(β-galactosidase) 등의 유익한 효소를 생산하고, 발암효소로 알려진 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)와 같은 효소를 생산하지 않았기 때문에 발암유발의 위험성이 없는 것이다.

또한, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 여러 항생물질 중 니신(nisin), 리팜피신(rifampicin)에 대해서는 저해를 받지 않고, 스트렙토마이신(Streptomycin)에 대해서는 20 ㎍/ml의 농도에서, 젠타마이신(Gentamycin)에 대해서는 10 ㎍/ml 이상의 농도에서 생육저해를 받는다.

그람양성균 중 냉동·냉장 제품에서 식중독균으로 주목받고 있는 리시테리아 모노씨토제네스(Listeria monocytogenes) ATCC 15313에 대한 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 생육저해 할로(halo)는 40.0 mm이상이고, 진공포장육, 우유 등에서 식중독을 일으키는 그람음성균인 이에르시니아 슈도투베르쿠로시스(Yersinia pseudotuberculosis) ATCC 6902, 이에르시니아 엔테로코리티카(Y. enterocolitica) ATCC 27729, 어패류에서 식중독원인균인 비브리오 파라하에모리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus) ATCC 17802 및 비브리오 불니피쿠스(V. vulnificus)에 대한 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 생육저해 할로(halo)는 40.0 mm 이상이다. 즉, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 부패세균과 병원성세균에 대해 비교적 넓은 항균효과를 나타낸 것이다.

위암 발생 원인균으로 추정되는 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948는 기능성 생균제 개발에 있어 중요한 균주인데, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 와 같이 배양하면 1시간 후 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948의 존재는 확인할 수 없고, 단지 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 균주의 증식만 확인할 수 있다. 따라서, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948에 대한 뚜렷한 항균 효과가 입증된 것이다.

이에 본 발명은 젓갈에서 분리된 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 생균제로서의 용도에 관한 것으로, 위액 및 담즙산에 대한 내성이 높아 장내 생존력이 우수하고, 기존 균주에 비해 병원성 균에 대한 항균활성이 높으며, 베타-갈락토시다제(β-galactosidase)를 생산하므로 유당불내증을 감소시킬 수 있는 효과가 있으므로 매우 유용하고, 이로 말미암아 기능성 젓갈 등의 개발에 사용될 수 있는 것이다.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실험예 및 실시예를 들어 더욱 상세히 설명하지만 본 발명의 권리범위가 하기 실험 및 실시 예에만 한정되는 것은 아니다.

실험예 1: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)에 의한 헬리코박터 파이로리( H. pylori )의 생육저해 조사

본 실험예에서는 프로바이오틱 생균의 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori)에 대한 항균 작용을 조사하였다. 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori)는 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948을 사용하였다. 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 균주와 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948 균주를 혼합배양하고, 인산완충용액으로 세척하였다. 이때, 균주는 1:1 부피비로 혼합하여 10 mL을 제조하고, 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948 균주의 배양조건인 37℃, 10% CO₂ 배양기에서 과습한 상태를 유지하면서 배양하였다. 한편, 대조구는 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948 10 mL을 단독배양하였다.

접종 후 1시간이 지났을 때, 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948의 존재는 확인할 수 없었고, 단지 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 균주의 증식만 확인할 수 있었다(도 1).

이상의 결과에 의해서, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948에 대한 뚜렷한 항균 효과가 입증된 것이다.

실험예 2: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)의 인공위액에 대한 내성 조사

본 실험예에서는 프로바이오틱 생균의 인공위액에 대한 내성을 조사하였다. 식품용 프로바이오틱 생균으로서 가져야 할 특성이 여러 가지가 있는데, 이 중에서 가장 중요한 특성 중 하나가 장내에서의 생존력이 높아야 한다는 점이다. 구강을 통하여 섭취되는 균은 위와 십이지장을 통해 생존하여 최종 목적 부위인 장에 도달하기 때문에 프로바이오틱 생균제로서의 기능을 발휘하기 위해서는 강산성의 위액을 통과하여야 한다.

인공위액은 'Kobayashi'의 방법(Kobayashi, Y., Tohyama, K. and Terashima, T. Tolerance of the multuple antibiotic resistant strain, L. casei PSR 3002, to artificial digestive fluids. Jpn. J. Microbiol. 29: 691-697 (1974))에 따라 1 N HCl을 사용하여 pH 4.0, 2.5로 조정한 'MRS broth' 에 1%(v/v) 펩신을 첨가하여 10 mL을 제조하여 사용하였다.

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 그 배양액을 'eppendorf tube'에 1 ml 넣은 후 원심분리(6,000 rpm, 10 min)한 후 균체 만을 회수하여 사용하였다.

회수된 균체는 인공위액에 첨가하여 37℃, 2시간동안 배양하여 총균수를 측정하였다. 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 대조구의 10⁸ cfu/ml의 값에 대해 pH 2.5에서 10⁶ cfu/ml의 생존율을 보였다.

락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315)의 인공 위액에서 생존율

대조구 (CFU/ml)	pH 4.0 (CFU/ml)	pH 2.5 (CFU/ml)
3.0×10⁸	2.0×10⁸(53.3%)	4.0×10⁶(1.3%)

실험예 3: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)의 인공 담즙산에 대한 내성 조사

본 실험예에서는 인공 담즙산에 대한 내성을 조사하였다. 섭취된 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315) 프로바이오틱 생균이 장에 도달하기 위해서 위를 거쳐 췌장과 십이지장을 통과하게 된다. 이 부위에서 분비되는 담즙액에 대한 내성 또한 프로바이오틱 생균이 가져야 할 중요한 특성이다.

인공담즙액은 멸균된 각각의 브로쓰(broth)에 멸균한 10%(w/v) 'oxgall' 용액을 1%(v/v) 첨가하여 10 mL을 제조하여 사용하였다. 인공위액을 거친 배양액 1 mL을 인공담즙액에 첨가하였다. 이후 37℃, 24시간 동안 배양하여 총균수를 측정하였다. 인공담즙에 대한 내성을 실험한 결과 pH 4.0에서는 69.0%, pH 2.5에서는 74.5% 생존율을 보였다.

따라서, 본 균주는 인공위액과 인공담즙산에 대해 내성이 있는 것이다.

락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315)의 인공 위액을 거친 후, 인공 담즙산에서의 생존율

pH 4.0		pH 2.0
대조구(CFU/ml)	담즙산(CFU/ml)	대조구(CFU/ml)	담즙산(CFU/ml)
3.9×10⁹	2.7×10⁹(69.0%)	2.5×10⁹	1.8×10⁹(74.5%)

실험예 4: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)의 효소활성 측정

본 실험예에서는 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 프로바이오틱 생균의 효소활성을 조사하였다. 프로바이오틱 생균이 가져야 할 특성 중에 이들 균이 생성하는 효소 또한 중요한 부분을 차지하고 있기 때문이다.

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 배양액 10 ml을 원심분리하여 균체만을 회수하여 멸균수로서 2회 반복하여 세척하고 멸균수 10 ml로 현탁하였다. 이 현탁액 100 μl를 API ZYM(BioMeriux Co.)에 접종하여 어두운 곳에 37℃, 4시간동안 배양하였다. 표현활성 증가와 용해를 돕기 위해 ZYM A, B시약을 각각의 큐플에 한 방울씩 떨어뜨린 후 밝은 곳에서 약 5분간 반응시킨 후 색깔의 변화를 관찰하여 효소활성을 측정하였다.

그 결과, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 알파-키모트립신(α-chymotrypsin), 베타-갈락토시다제(β-galctosidase) 등의 유익한 효소를 생산하였고, 발암효소로 알려진 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)와 같은 효소를 생산하지 않기 때문에 발암유발의 위험성이 없다는 것을 알 수 있었다.

API ZYM 키트에 의한 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 효소활성 측정

효소	락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)
대조구	0
Alkaline phosphatase	4
Esterase(C₄)	0
Esterase Lipase(C₈)	4
Lipase(C₁₄)	0
Leucine acrylamidase	5
Valine arylamidase	0
Crystine arylamidase	2
Trypsin	0
α-Chymotrypsin	3
Acid phosphate	5
Naphthol-AS-BI-phosphohydrolase	5
α-Galactosidase	0
β-Galactosidase	4
β-Glucuronidase	0
α-Glucosidase	2
β-Glucosidase	1
N-Acetyl-β-glucosaminidase	0
α-Mannosidase	0
β-Fucosidase	0
0; 0 nmol, 1; 5 nmol, 2; 10 nmol, 3; 20 nmol, 4; 30 nmol, 5; 40 nmol.

실험예 5: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)의 항생물질에 대한 내성 조사

본 실험예에서는 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 프로바이오틱 생균의 항생물질에 대한 내성을 조사하였다. 항생물질 내성을 측정하기 위해서 'paper disc' 방법을 사용하였다. 즉, 균주를 최적의 온도에서 12시간 배양하고, 각각의 'soft agar (0.7%)'에 배양액을 100 μl로 접종하여 아가 평판에 오버레이(overlay)하였다. 그 후 오버레이된 평판에서 표 4에 기재된 조건에 의하여 항생물질에 대한 내성 측정하였다.

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 항생물질에 대한 내성조사

항생물질 (㎍/ml)		락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)
Nisin	02550100	++++
Gentamycin	051020	++--
Rifampicin	051020	++++
Chloramphenicol	051020	+---
Roxithromycin	051020	+---
Streptomyin	051020	+++-
Erythromycin	051020	+---
+; growth, -; no growth.

그 결과, 니신(nisin), 리팜피신(rifampicin)에 대해서는 저해를 받지 않았고, 스트렙토마이신(Streptomycin)에 대해서는 20 ㎍/ml의 농도에서,젠타마이신(Gentamycin)에 대해서는 10 ㎍/ml 이상의 농도에서 생육저해를 받음을 확인하였다.

실험예 6: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)의 항균활성 조사

본 실험예에서는 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 프로바이오틱 생균의 항균활성을 측정하였다. 항균활성을 측정하기 위해 'modified deferred method'를 사용하였다. 즉, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 살균된 MRS broth 10 ml에 각각 한 백금이 접종하여 최적 배양온도에서 12시간 배양한 후 건조된 'MRS agar' 평판 표면에 배양액 5 μl을 스팟하고 37℃에서 24시간 배양하였다.

피검균주들은 최적배지와 최적온도에서 12시간 배양하였다. 이 배양액 100 ㎕를 각각 0.75% 'soft agar'에 접종하여 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)가 자란 평판에 오버레이(overlay)하고 최적온도에서 24시간 배양하여 활성을 측정하였다.

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 그람양성균 중 리스테리아 모노씨토제네스(Listeria monocytogenes) ATCC 15313에 대해 생육저해 할로(halo)로 40.0 mm이상을 나타내었고, 그람음성균인 이에르시니아 슈도투베르쿠로시스(Yersinia pseudotuberculosis) ATCC 6902, 이에르시니아 엔테로코리티카(Y. enterocolitica) ATCC 277929, 비브리오 파라하에모리티쿠스(V. parahaemolyticus) ATCC 17802 및 비브리오 불니피쿠스(V. vulnificus)에 대해서는 생육저해 할로로 40.0 mm이상을 나타내었다(표 5).

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)의 부패성 및 병원성균에 대한 항균활성

균주	저해환직경(Inhibition zoneDiameter)(mm)	균주	저해환직경(Inhibition zoneDiameter)(mm)
Gram positive bacteria		Escherichia coliKCCM 32396	18.5
Bacillus cereusATCC 11778	16.0	Escherichia coliJM 109	17.0
Bacillus cereus	17.0	Escherichia coliO157:H7	19.5
Bacillus pumilis	26.0	Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442	31.5
Bacillus subtilisIFO 12113	23.0	Pseudomonas fluorescens	12.0
Bacillus subtilisATCC 19433	24.0	Pseudomonas putida	>40.0
Clostridium perfringens ATCC 3624	32.0	Salmonella typhi	16.0
Enterococcus faecalisATCC 19433	6.5	Salmonella paratyphiA	21.5
Lactobacillus delbruekiiATCC 4797	24.5	Salmonella typhimurium	30.0
Listeria monocytogenesATCC 15313	>40.0	Salmonella enteritidis	16.0
Listeria ivanovii ATCC 19119	12.0	Shigella flexneri	20.0
Micrococcus flavusATCC 10240	>40.0	Shigella boydii	32.0
Pediococcus acidilacticiKCTC 1626	25.0	Shigella sonnei	21.5
Staphylococcus aureusATCC 25923	24.0	Sphingomonas paucimobilis	>40.0
Staphylococcus aureusKCCM 32959	34.0	Vibrio parahaemolyticusATCC 17802	>40.0
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228	21.0	Vibrio vulnificus	>40.0
Gram negative bacteria		Vibrio choleraO139	24.5
Chryseomonas luteola	0	Yersinia enterocoliticaATCC 27729	>40.0
Escherichia coliATCC 8739	20.0	Yersinia pseudotuberculosisATCC 6902	>40.0
Escherichia coliATCC 29522	17.5	Xanthomonas maltophila	17.0

따라서, 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)는 부패균과 병원성균에 대해 비교적 넓은 항균효과를 나타낸다고 할 수 있다.

위와 같은 결과에 의해 식중독 원인균에 의해 감염이 되었을 경우 장내에 상주하는 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 프로바이오틱 균주들에 의해 어느 정도 억제될 수 있을 것이라 판단되었다.

한편, 본 발명의 바람직한 실시예는 하기와 같다.

실시예 1: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)을 포함하는 위장병 예방 및 치료제의 제조

락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)이 함유된 위장약은 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)을 통상의 진공동결건조기에 투입하여 동결건조한다음 캡슐화시켜 제조하였다.

실시예 2: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)를 포함하는 건조효모가공식품의 제조

아포형태로 공급된 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 14 g을 맥주효모 80 g, 솔비톨 5 g, 해조칼슘 1 g에 첨가하여 건조효모가공식품을 제조하였다.

실시예 3: 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)를 포함하는 선식의 제조

찹쌀 15 g, 보리쌀 20 g, 멥쌀 15 g, 현미 10 g, 흰콩 5 g, 수수 1 g, 조 1 g, 밀 1 g, 메밀 1 g, 옥수수 5 g, 밤 1 g, 잣 1 g, 호두 1 g, 당근 1 g, 시금치 1 g, 마 1 g, 연자육 1 g, 홍화씨 1 g, 둥글레 1 g, 다시마 2 g, 해태 1 g, 뽕잎 3 g, 누에 3 g, 동충하초 3 g을 함유하는 조성물에 아포형태로 공급된 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 5 g을 첨가하여 선식을 제조하였다.

실시예 4: 위장병 예방 및 치료용 조성물의 일 예로, 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)를 함유한 꽁치젓갈의 제조

꽁치 약 78%(v/v)에 소금 약 22%(v/v) 정도의 비율로 상호 혼합하여 지하에 설치되는 저장탱크, 즉 발효탱크에 1 L 투입한 후 발효탱크의 온도를 약 14℃ 정도가 되도록 하여 약 5개월 정도 발효시킨 후, 발효된 꽁치젓갈에서 침출된 침출액 약 25%(v/v) 정도를 제거한 후 고형분 꽁치 덩어리를 약 0.1mm 정도의 입자크기로 분쇄하였다. 이어 여기에 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)를 꽁치젓갈 전체부피 대비 0.05%(v/v) 첨가하여 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 함유 기능성 꽁치젓갈을 제조하였다.

실시예 5: 위장병 예방 및 치료용 조성물의 일 예로, 락토코쿠스 락티스( L. lactis ) NK24 (KFCC 11315)를 함유한 멸치액젓의 제조

멸치 약 78%(v/v)에 소금 약 22%(v/v) 정도의 비율로 상호 혼합하여 발효탱크에 1 L 첨가한 후, 온도를 약 14℃ 정도가 되도록 하여 약 12개월 정도 발효시켜서 침출된 멸치액젓을 제조하였다. 이어 여기에 여기에 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)를 멸치액젓 전체부피 대비 0.05%(v/v) 첨가하여 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 함유 기능성 멸치액젓을 제조하였다.

이상 발명의 상세한 설명에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315) 생균이 함유된 조성물은 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 균에 대해 항균활성이 있을 뿐만 아니라, 위액 및 담즙산에 대한 내성이 높아 장내 생존력이 우수하고, 기존 균주에 비해 병원성 균에 대한 항균활성이 높으며, 베타-갈락토시다제(β-galactosidase)를 생산하므로 유당불내증을 감소시키는 우수한 효과가 있으므로 식품, 의약품 등의 용도로 사용될 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.

도 1은 락토코쿠스 락티스(L. lactis) NK24 (KFCC 11315)에 의한 헬리코박터 파이로리(H. pylori) KCTC 2948의 생육 저해를 보여주는 그래프이다.

Claims

락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) NK24 (KFCC 11315)를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 위장병 예방 및 치료용 조성물.