KR100785666B1 - 기능성 푸딩 및 그 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori)에 대한 면역항체(IgY)를 함유하는 난황액을 포함하여 위염, 위궤양, 십이지장궤양, 위암 등의 예방 및 치료에 효과적인 기능성 푸딩에 관한 것이다. 또한 본 발명은 푸딩 제조 공정 중 면역항체가 열에 의해 파괴되지 않고 그대로 유지될 수 있는 기능성 푸딩의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 푸딩은 헬리코박터 필로리로 인한 위장장애에 대한 인체의 면역력을 증강시켜 간단한 식품 섭취로 위 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있을 뿐만 아니라 계란 특유의 고소한 맛과 영양으로 맛, 풍미, 물성이 우수하다.
푸딩, 기능성 식품, 헬리코박터 필로리, 면역항체, 난황, 위장장애, 위염, 위궤양, 십이지장궤앙, 위암
Description
도 1은 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체를 함유하는 면역란으로부터 난황액을 분리한 후 살균하는 공정에 있어서, 63 ℃의 온도에서 살균 시간을 달리할 경우 시간에 따른 항체역가의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체를 함유하는 난황액을 포함하는 푸딩 혼합물의 교반 공정에서 65 ℃, 70 ℃, 75 ℃, 80 ℃로 온도를 달리하여 각각의 온도에서 시간에 따른 항체역가의 변화를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 기능성 푸딩 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori)에 대한 면역항체(IgY)를 함유하는 난황액을 포함하는 기능성 푸딩 및 그 제조방법에 관한 것이다.
헬리코박터 필로리는 1983 년 호주의 미생물학자인 마샬(Marchall)과 워렌(Warren)에 의하여 사람의 위에서 분리 동정된 운동성이 강한 미호기성 그람음성균으로 위점막 상피 세포간 접합부에서 서식하면서 만성 위염 및 소화성궤양 등 의 상부위장관 질환을 유발시키며, 심지어 위암의 발생과도 관계가 있는 발암인자로 1994 년에는 세계보건기구(WHO)에 의해 확실한 발암인자로 발혀져 세계적으로 주목을 받고 있는 병원균이다.
현재 헬리코박터 필로리의 박멸을 위해 항생제 요법이 시행되고 있으나, 단일 종류의 항생제로는 내성 등으로 인하여 소기의 치료효과를 얻기 어려운 실정이므로 세 가지 종류의 항생제 조합의 약제를 투여하고 처치 기간도 2 주 이상의 장기간 처방을 요하고 있다. 이에 과량의 항생제 투입에 의한 부작용도 배제하기 어려울 뿐만 아니라 고가의 항생제 투여에 따른 경제적 부담도 고려하지 않을 수 없는 형편으로 더욱이 치료를 하더라도 헬리코박터 필로리의 내성이나 재감염에 따른 궤양의 재발 가능성도 상당히 높다. 따라서 헬리코박터 필로리의 제균을 항생제에 의한 치료의 차원이 아닌 일상 생활에서 용이하며 지속적으로 제어할 수 있는 방법이 요구되는 실정이다.
최근 헬리코박터 필로리에 대한 항원을 산란계에 주사하여 이 항원으로부터 계란의 난황으로 이행된 항체를 유효성분으로 이용하는 연구가 활발히 진행되고 있다. 특히 면역글로불린 중 IgG만이 난황에 존재하는데, 이 항체를 난황(yolk)에서 유래되었다고 하여 IgY(immunoglobulin yolk)라고 하며, IgY 항체는 매우 우수한 폴리클로날(polyclonal) 항체로 알려져 있다.
일본공개특허공보 평4-275232호에는 헬리코박터 필로리 균체 파쇄액에서 얻어진 항원으로부터 생성된 면역 항체를 이용한 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방식품에 관하여 기재하고 있다. 이것은 헬리코박터 필로리의 제균을 항생제에 의한 치료의 차원이 아닌 일상 생활에서 용이하며 지속적으로 제어할 수 있는 방법을 제시하고 있다. 그러나 상기 기술은 식품의 제조 공정 중 헬리코박터 필로리 면역항체가 파괴되는 문제점이 있다.
따라서 식품 제조 공정 중 헬리코박터 필로리로 인한 위장장애에 효과적인 면역항체를 그대로 보존할 수 있고 일상 생활에서 용이하게 섭취할 수 있는 식품에 대한 연구가 필요한 실정이다.
따라서 본 발명은 헬리코박터 필로리로 인한 위염, 위궤양, 십이지장궤양, 위암 등의 위장장애를 일상 생활에서 용이하게 예방 및 치료할 수 있는 기능성 푸딩을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명의 다른 목적은 식품 제조 공정 중 열에 의한 면역항체의 파괴 또는 변성을 막아 헬리코박터 필로리로 인한 위 질환을 예방할 수 있는 기능성 푸딩의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 헬리코박터 필로리(Helicobacter pyrori)에 대한 면역항체(IgY)를 함유하는 난황액을 포함하는 위장장애를 예방 및 치료할 수 있는 기능성 푸딩을 제공한다.
또한 본 발명은 푸딩 혼합 수용액을 제조한 뒤, 이를 가열하고 살균하고 이 혼합물에 헬리코박터 필로리에 대한 항체(IgY)를 함유하는 난황액을 첨가하여 혼합하여 제조되는 위장장애를 예방 및 치료할 수 있는 기능성 푸딩의 제조방법을 제공 한다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명자들은 간단한 식품 섭취로 위장장애를 예방 및 치료할 수 있는 방법에 대해 연구하던 중, 헬리코박터 필로리에 대한 항체를 함유하는 난황액을 포함하는 푸딩을 제조함으로써 후식용, 어린이나 소화력이 약한 분들의 간식용, 또는 다이어트식품 등 간단한 식품 섭취로 헬리코박터 필로리로 인한 위장장애를 예방하고 치료할 수 있음을 확인하였고 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체(IgY)를 함유하는 난황액을 포함하는 위장장애를 예방 및 치료하기 위한 기능성 푸딩을 제공하는 것이다. 본 발명의 푸딩 중 난황액은 5 내지 10 중량%로 함유되는 것이 바람직하다.
상기 난황액은 헬리코박터 필로리 균체로부터 항원을 제조하는 단계; 상기 항원을 포함하는 백신을 산란계에 주사하여 헬리코박터 필로리 항체가 함유된 면역란을 제조하는 단계; 상기 면역란으로부터 난황과 난백을 분리하는 단계; 및 분리된 난황을 살균하는 단계를 거쳐 제조된다.
또한 상기 난황액은 계란으로부터 얻어진 것이 이용될 수 있다.
항원 제조시 사용되는 헬리코박터 필로리 균체는 기탁된 균주를 이용하거나 위암 환자로부터 분리하여 배양한 균주일 수 있다. 배양된 균체를 원심분리 등에 의하여 헬리코박터 필로리 항원을 얻을 수 있다.
얻어진 항원을 포함하는 백신을 산란계에 접종한 후 항 헬리코박터 필로리 항체 역가를 측정하여 항체 역가가 충분히 상승한 면역란을 수거한다. 백신 접종 시 적당한 면역증강제(adjuvant)를 함께 접종할 수도 있다. 항체 역가를 측정하는 방법으로는 ELISA와 같은 마이크로 타이터법이 이용될 수 있다.
상기 살균은 63 내지 65 ℃의 온도에서 실시하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 63 ℃에서 3 분간 2 회 실시하는 것이다. 상기 살균은 5 내지 10 분간 실시하는 것이 바람직하며, 이때 푸딩 내에 미생물의 수치가 정부 혀용 기준 수치를 넘지 않아 효과적이다. 살균이 10 분을 초과하여 실시할 경우에도 항체 역가의 변화는 없으나, 시간 지체에 따른 푸딩 제조상 문제점이 발생하게 된다.
상기 난황액은 본 발명의 위장장애를 예방 및 치료하기 위한 기능성 푸딩의 주요 원료로 전체적인 맛과 풍미가 우수한 동시에 조직감, 탄력성 등의 물성에 있어 우수한 효과가 있다.
본 발명의 푸딩은 어린이나 소화력이 약한 분들이 섭취하기에 용이하며, 다이어트식품으로도 좋기 때문에 간단한 식품 섭취만으로 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위암 등의 위 질환을 예방할 수 있는 우수한 효과가 있다.
상기와 같이 제조된 헬리코박터 필로리에 대한 면역 항체를 함유하는 난황액을 포함하는 본 발명의 위장장애를 예방 및 치료하기 위한 기능성 푸딩의 제조방법은 다음과 같다.
먼저 우유 성분 및 첨가제를 포함하는 푸딩 혼합 수용액을 제조한 뒤, 이 푸딩 혼합 수용액에 헬리코박터 필로리에 대한 항체(IgY)를 함유하는 난황액을 첨가한 후 저온에서 교반하고 균질화시켜 제조되는 기능성 푸딩을 제조한다.
상기 우유성분은 5 내지 10 중량%로 포함되고, 그 예로는 생크림, 탈지유 또 는 전유를 사용할 수 있으며, 이는 푸딩 혼합물의 성분을 우유로 수화시키거나 또는 푸딩 혼합물에 고체 우유를 첨가한 후 물을 가해 수화시킬 수 있다.
상기 푸딩 혼합 수용액에 함유되는 첨가제로는 감미제, 경화제, 유화제, 향미료, 색소 등이 있다.
상기 감미제는 10 내지 15 중량%로 포함되며, 푸딩 조성물을 달게 할 뿐만 아니라 부피를 증가시키는 역할을 하며, 설탕, 포도당, 전화당, 과당, 콘 시럽, 카라멜 시럽 등의 당류가 사용될 수 있다.
상기 경화제는 0.5 내지 2 중량%로 포함되며, 그 예로는 젤라틴, 크산탄, 한천, 푸르셀라탄, 로우커스트콩, 카라기난 등이 사용될 수 있다.
경화제는 다른 성분들과 혼합하여 첨가할 수도 있으며, 푸딩 혼합 수용액의 성분들이 균일하게 혼합될 수 있도록 100∼130 ℃에서 10 분 동안 가열하여 녹이고, 이를 60 ℃로 냉각한 후 별도로 첨가할 수도 있다.
상기 유화제는 2 내지 5 중량%로 포함되며, 폴리소르베이트 60, 레시틴, 모노 및 디글리세라이드, 소듐 스테아로일-2-락틸레이트 등이 사용될 수 있다.
또한 상기 향미료는 0.01 내지 0.5 중량%, 색소는 5 내지 10 중량%로 포함된다.
상기 푸딩 혼합 수용액과 난황액의 혼합물은 63 내지 65 ℃의 저온에서 5∼10 분 동안 교반하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 63 ℃에서 5∼10 분 동안 교반하는 것이다. 본 발명의 푸딩은 저온 처리 공정에 의해 제조되므로 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체나 유효 단백질이 파괴되는 것을 방지할 수 있다. 또한 난황액은 푸딩 혼합 수용액 전체 함량에 대하여 7 내지 9 중량%로 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 푸딩인 천연물질인 헬리코박터 필로리 면역항체를 함유하는 난황액을 첨가하여 제조함으로써 간단한 식품을 섭취하여 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위암 등의 위장장애를 예방할 수 있을 뿐만 아니라, 계란 특유의 고소한 맛과 영양으로 전체적인 맛, 풍미, 물성이 우수하다는 데 그 효용성이 크다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 항원체 제조
생명공학연구소 내 유전자은행에서 구입한 헬리코박터 필로리 43054를 5 % 말혈청이 첨가된 브루셀라(Brucella) 배지를 사용하여 37 ℃, 10 % CO2 의 조건에서 2 일 동안 배양하여 수집하였다.
상기에서 수집한 균체를 3,000 ×g에서 20 분간 원심분리하여 균체만 회수한 후 인산완충식염수에 현탁하였다. 현탁된 균체를 초음파로 파쇄하여 10,000 ×g에서 15 분 동안 원심분리한 후 파쇄되지 않은 균체는 제거하고 상청액만 취하여 다시 100,000 ×g으로 30 분 동안 초원심분리하여 침전시킨 후 인산완충식염수에 현탁하여 이를 항원체로 이용하였다.
실시예 2. 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체(IgY)를 함유한 난황액 준비
산란이 시작된 21 주령 산란계(Hy-Line Brown)의 다리 근육에 실시예 1에서 제조한 항원체와 Freund's complete adjuvant(Sigma chemical Co.)을 동량으로 혼합하여 유화한 조성물을 1 mL 씩 1 차 접종하였다. 그 후 충분한 항체가가 얻어질 때까지 2 주 간격으로 6 주간 총 3 회의 Booster injection을 실시하였다. 계란의 난황으로 이행된 헬리코박터 필로리 항체의 역가 추이를 측정하여 항체 역가가 충분히 상승한 단계의 면역란을 수거하여 할란기를 통해 난백과 난황을 분리하였다.
상기 분리된 난황을 균질시킨 후 63 ℃에서 3 분 동안 살균하여 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체를 함유한 난황액을 제조하였다.
실시예 3. 면역항체(IgY)의 분리
상기 실시예 2에서 채취한 난황액을 필터로 여과한 후 난황액 5 mL에 동량의 증류수 5 mL를 혼합하고, 0.15 %의 람다 카라기난 20 mL을 혼합하여 상온에서 30 분 동안 방치하였다. 상기 혼합액을 3,000 ×g, 15 분, 20 ℃의 조건으로 원심분리하여 상청액만 취하였다.
상기 상청액에 19 %의 황산나트륨을 첨가하여 완전히 녹인 후 상온에서 40 분간 방치하였다. 그 다음 10,000 ×g에서 15 분 동안 원심분리하여 얻어진 침전물을 인산완충용액으로 녹여 정제된 면역항체(IgY)를 수득하였다.
실시예 4. 항체역가 측정
상기 실시예 3에서 수득한 면역항체의 헬리코박터 필로리에 대한 항원반응 정도를 확인하기 위하여 마이크로 타이터법(ELISA)을 사용하여 항체역가를 측정하 였다.
헬리코박터 필로리 전체 세포 단백질(H. pylori whole cell protein)을 0.5 ㎍/mL로 희석하여 96 웰 플레이트(well plate)에 코팅하고 여기에 분리한 전체 면역항체를 100 ㎍/mL의 농도로 먼저 희석한 후 계속해서 2 배 희석(two-fold dilution)하여 각 웰에 넣었다. 항닭 염소(Goat anti-chicken) IgY-AP 컨쥬게이트로 발색하여 종말점(end point)을 결정한 후 항체 1 ㎎당 역가로 표시하였다.
실험결과 상기 실시예 3에서 제조된 난황액의 항체역가는 20,480 정도로 나타났다.
실시예 5∼11. 기능성 푸딩의 제조
실시예 5
탈지분유 5∼10 %, 생크림 2∼5 %, 바닐라 향 0.01∼0.025 %, 경화제 0.5∼2 %, 액상과당 10∼15 %, 카라멜 시럽 5∼10 %을 혼합하여 푸딩 혼합 수용액을 제조하였다. 여기에 실시예 2의 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체를 함유하는 난황을 63 ℃에서 각각 3 분, 6 분, 9 분, 12 분, 15 분, 30 분으로 시간을 달리하여 살균하고 이를 5∼10 중량%로 첨가하여 혼합하여 30 분간 교반하였다. 상기 혼합물에 100∼130 ℃에서 10 분 동안 가열하여 녹인 후 60 ℃로 냉각한 경화제를 첨가하였다.
상기 푸딩 혼합물을 63 ℃에서 5∼10 분 동안 교반하여 균질화시켜 본 발명의 헬리코박터 필로리에 대한 면역항체를 함유하는 난황액을 포함하는 위장장애 예방 및 치료용 기능성 푸딩을 제조하였다.
실시예 6
10 %의 설탕이 첨가된 난황을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
실시예 7
10 %의 NaCl이 첨가된 난황을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
상기 실시예 5 내지 7에서 헬리코박터 필로리에 대한 면역 항체를 함유하는 난황을 63 ℃의 온도에서 살균 시간을 달리할 경우 시간에 따른 항체역가의 변화를 상기 실시예 4의 마이크로 타이터법(ELISA)으로 측정하였다. 상기 실시예 4에서 측정한 난황액의 항체역가(20,480)와 비교하여 측정 결과를 도 1 및 하기 표 1에 나타내었다.
| 구분 | 항체 역가 (%) | ||||||
| 0 분 살균 | 3 분 살균 | 6 분 살균 | 9 분 살균 | 12 분 살균 | 15 분 살균 | 30 분 살균 | |
| 난황 (실시예 5) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 난황 + 당(10 %) (실시예 6) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 난황 + 염(10 %) (실시예 7) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
상기 표 1을 통하여, 본 발명의 기능성 푸딩에 함유되는 난황에 10 %의 당이나 염을 가하여도 헬리코박터 필로리에 대한 항체역가는 난황만을 첨가하였을 때와 변화가 없이 20,480로 유지됨을 확인할 수 있었다.
실시예 8
푸딩 혼합물을 65 ℃에서 각각 5 분, 10 분, 30 분으로 시간을 달리하여 교반하는 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
실시예 9
푸딩 혼합물을 70 ℃에서 각각 5 분, 10 분, 30 분으로 시간을 달리하여 교반하는 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
실시예 10
푸딩 혼합물을 75 ℃에서 각각 5 분, 10 분, 30 분으로 시간을 달리하여 교반하는 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
실시예 11
푸딩 혼합물을 80 ℃에서 각각 5 분, 10 분, 30 분으로 시간을 달리하여 교반하는 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 실시하여 기능성 푸딩을 제조하였다.
상기 실시예 8 내지 11에서 제조한 기능성 푸딩을 이용하여 푸딩 혼합물의 교반 온도와 시간에 따른 항체역가의 변화를 상기 실시예 4의 마이크로 타이터법(ELISA)으로 측정하였다. 상기 실시예 4에서 측정한 난황액의 항체역가(20,480)와 비교하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2를 통하여 65 ℃의 저온에서 교반한 실시예 8은 30 분 동안 교반하여도 항체역가가 상기 실시예 4에서 측정한 난황액의 항체역가(20,480)과 동일하게 나타났으나, 70 ℃, 75 ℃, 및 80 ℃에서 교반한 실시예 9 내지 11의 푸딩은 교반 시간이 길어질수록 항체역가가 저하됨을 알 수 있었다.
본 발명의 기능성 푸딩은 헬리코박터 필로리로 인한 위장장애에 대한 인체의 면역력을 증강시켜 위장장애를 효과적으로 예방 및 치료할 수 있을 뿐만 아니라 계란 특유의 고소한 맛과 영양으로 맛, 풍미, 물성이 우수하다.
또한 본 발명의 푸딩은 어린이나 소화력이 약한 분들이 섭취하기에 용이하며, 다이어트식품으로도 좋기 때문에 간단한 식품 섭취만으로 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위암 등의 위 질환을 예방할 수 있는 우수한 효과가 있다.
Claims (8)
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- 우유성분 및 첨가제를 포함하는 푸딩 혼합 수용액을 제조한 뒤, 이 푸딩 혼합 수용액에 헬리코박터 필로리에 대한 항체(IgY)를 함유하는 난황액을 푸딩의 총량을 기준으로 7 내지 9 중량%로 첨가한 후 63 내지 65℃에서 5~10 분 동안 교반하고 균질화시켜 제조되는 푸딩의 제조방법.
- 삭제
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- 제4항의 제조방법에 의하여 제조되고,헬리코박터 필로리(Helicobacter pyrori)에 대한 면역항체(IgY)를 함유한 난황액을 포함하는, 위장장애 개선용 푸딩.
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