JPH1180197A

JPH1180197A - ヘリコバクター・ピロリの抗菌と感染関連疾患の予防及び治療剤

Info

Publication number: JPH1180197A
Application number: JP9239531A
Authority: JP
Inventors: Hisanori Tani; 久典谷; Hifumi Oishi; 一二三大石
Original assignee: KYODO MILK IND; KYODO NYUGYO KK
Current assignee: KYODO MILK IND; KYODO NYUGYO KK
Priority date: 1997-09-04
Filing date: 1997-09-04
Publication date: 1999-03-26

Abstract

(57)【要約】【課題】ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pyl
ori)に対する抗菌作用及び抗ウレアーゼ作用を有し、ヘ
リコバクター・ピロリ感染関連疾患の予防剤及び治療剤
として利用可能であって、副作用がなく、耐性菌の出現
の心配がない薬物を提供すること。【解決手段】ヘリコバクター・ピロリで免疫された採
卵鳥類卵黄より得られる卵黄抗体を用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、鳥類卵黄特異抗
体、特に鶏卵黄特異抗体によるヘリコバクター・ピロリ
（Helicobacter pylori)の抗菌、抗ウレアーゼ作用並び
にヘリコバクター・ピロリによる胃潰瘍などのヘリコバ
クター・ピロリ感染関連疾患の予防及び治療に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヘリコバクター・ピロリ（以下「H.pylo
ri」と表す）は胃炎の原因となるバクテリアであるとと
もに、しばしば潰瘍や萎縮性胃炎の原因菌でもある。現
在、H.pyloriと関連がある消化性潰瘍の割合は、十二指
腸潰瘍では９２％、胃潰瘍では７０％と考えられている
（Marshall,B.J.:Am.J.Gastroenterol,89,s116・s128(19
94))。また、H.pylori感染は慢性胃炎の原因であり、そ
の持続により萎縮性胃炎に移行し、ひいては胃癌の危険
因子になると考えられている。H.pylori感染と胃癌との
関連は疫学的解析により検討され、胃癌発症におけるH.
pylori感染のオッズレシオは２．７７〜６．０と報告さ
れている(Parsonnet,J.et al.:N.Engl.J.Med.,325,1127
・1131(1991),Nomura,A.et al.:N.Engl.J.Med.,325,1132
・1136(1991),Foeman,D.et al.:Br.Med.J.,302,1302・130
5(1991))。このようなことから、H.pylori感染が認めら
れたときは、様々な薬剤を用いた除菌法が行なわれてい
る。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、H.pyloriは胃
内の過酷な環境下でも十分に生育している。それは、ウ
レアーゼ(Urease)によりアンモニアを産生し、自身の環
境下を中性に維持しているからである。従ってウレアー
ゼ活性を阻害するウレアーゼ阻害物質（Urease inhibit
or)によりH.pyloriは酸性の環境下となり死滅させるこ
とが出来る（長田久美子ら，：日本細菌学雑誌，５０
（４），９６１・９７０（１９９５））。また、現在除
菌に用いられている方法は感受性の高い化学療法剤又
は、それらを含む多剤併用療法である。しかし、これら
に対する耐性菌の出現など、新たな問題も出てきてお
り、これに変わる新たな除菌法又は、抗菌作用を示す物
質の開発が急がれている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
問題を解決して、H.pyloriに対する抗菌作用及び抗ウレ
アーゼ作用を有し、胃潰瘍などのH.pylori感染関連疾患
の予防及び治療に有効な物質を得るために鋭意研究を重
ねた。その結果、本発明者らは、H.pyloriで免疫された
採卵鳥類卵黄、特に鶏の卵黄より得られる抗体が優れた
H.pyloriに対する抗菌作用、抗ウレアーゼ作用及びH.py
lori感染関連疾患に有効であることを見い出した。本発
明はこの知見に基づいて確立したものである。

【０００５】すなわち、本発明は、H.pyloriで免疫され
た採卵鳥類卵黄より得られるH.pyloriに対する抗菌作用
及び抗ウレアーゼ作用を有する卵黄抗体を提供する。

【０００６】また、本発明は上記の卵黄抗体を含む全卵
黄抗体を有効成分として含有するH.pyloriに対する抗菌
剤を提供する。

【０００７】更に、本発明は上記の卵黄抗体を含む全卵
黄抗体を有効成分として含有するH.pylori感染関連疾患
の予防剤及び治療剤を提供する。

【０００８】更に加えて、本発明は上記の卵黄抗体を含
む卵黄又はその粉末を提供する。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明の卵黄抗体は、凍結乾燥し
たH.pylori菌体を常法に従って鶏、ウズラ、アヒル等の
採卵鳥に免疫処置し、該鳥から卵を集め、中井らの方法
に従って卵黄より抗体を精製することによって得ること
ができる。

【００１０】本発明の卵黄抗体をH.pyloriに対する抗菌
剤あるいはH.pylori感染関連疾患の予防剤及び治療剤と
して用いる場合は、錠剤、カプセル剤、その他の適当な
剤形によって経口投与するのが好ましい。用量は、使用
目的、年令、体重、症状等により異なるが、全卵黄抗体
の重量として１〜２ｍｇ／ｋｇ／日を１回もしくは数回
に分けて経口摂取することが好ましい。なお、本発明の
卵黄抗体を含有する薬剤を製造するに際しては、当該技
術分野において周知の手段を適宜組み合わせて用いるこ
とができる。

【００１１】また、本発明の卵黄抗体を含む卵黄又は粉
末をH.pyloriに対する抗菌剤あるいはH.pylori感染関連
疾患の予防剤及び治療剤として用いる場合は、そのまま
の形で、あるいは水、牛乳、ジュース等の飲物や他の食
品に適宜加えて経口摂取するのが好ましい。用量は、使
用目的、年令、体重、症状等により異なるが、体重６０
ｋｇの成人を基準にすると、卵黄の形で摂取する場合は
２５〜５０ｇ／日（すなわち、約４１７〜約８３３ｍｇ
／ｋｇ／日）、その粉末の形で摂取する場合は５〜２５
ｇ／日（すなわち、約８３〜約４１７ｍｇ／ｋｇ／日）
を１回もしくは数回に分けて摂取することが好ましい。
なお、本発明の卵黄抗体を含む卵黄を粉末化するには、
周知の乾燥手段を用いることができるが、凍結乾燥が望
ましい。

【００１２】

【実施例】以下に実施例によって本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定さ
れない。

【００１３】Ａ．鶏卵黄抗体の調製 H.pylori加熱死菌を抗原として、抗原：鉱物油：乳脂肪
球皮膜由来乳化蛋白質を１：１：０．５になるように混
合し、ホモゲナイザーで乳化した。この乳化物を粉末飼
料に０．０２％になるように添加し、２日間投与し、５
日間通常飼料を投与した。４週間からは、隔週で同様の
投与方法を行なった。得られた卵より、アキタらの方法
(Akita,M.E.and Nakai,S.:J.Food Sci.,57(3),629・634
(1992))に準じ、抗体を調製し、凍結乾燥した物を抗体
調製物として用いた。鶏は採卵鳥類の代表として用いた
だけのものであり、他のウズラ等いずれの採卵鳥を用い
ても良い。

【００１４】Ｂ．抗菌作用１．増殖抑制ブレインハートインフュージョン培地で、３７℃、２４
時間予備培養したH.pyloriを９６穴マイクロプレートの
各穴に菌体溶液を１５０μｌ注入し、各濃度の抗体溶液
を１５０μｌづつ添加した。５％ＣＯ₂、３７℃で２４
時間培養し、生育の状態を濁度（６６０ｎｍの吸光度）
で判定した。抗体無添加の濁度を１００とした時の各溶
液の濁度を抑制率で示した。

【００１５】２．凝集反応抗体溶液（１０ｍｇ／ｍｌ・ＰＢＳ）をＰＢＳで２ｎ倍
希釈を調製し、それぞれの１００μｌと抗原溶液１００
μｌをＵ字底マイクロプレートに入れ混合した後、室温
下で３時間又は、低温下で１６時間反応させた。

【００１６】Ｃ．ウレアーゼ阻害活性抗体溶液（１０ｍｇ／ｍｌ・ＴＢ（ｐＨ６．９））にH.
pyloriより調製した粗ウレアーゼ（２．５ｍｇ／ｍｌ・
ＴＢ（ｐＨ６．９））を１００μｌづつ混合した。そこ
に５００μｌの１０ｍＭＴＢ（ｐＨ６．９）、５０μ
ｌの０．１ＭUrea（１０ｍＭＴＢ（ｐＨ６．９）に溶
解）、２０μｌの１００μＭＨＰＴＳ（１−Hydroxyp
yrene−３，６，８−trisulfonic acid Trisodium Sal
t)及び、３ｍｌの蒸留水を加え、３７℃で、１２時間イ
ンキュベートした。その後、Ｅｘ４６０ｎｍ、Ｅｍ
５１５ｎｍの蛍光強度を測定した。

【００１７】Ｄ．H.pylori感染予防実験６週令、雄、スナネズミ(Mongolian gerbil/sea)を用い
て、１群７匹で行なった。Ａ、Ｂ及びＣ群はH.pylori感
染時に本抗体を１０ｍｇ同時投与した。その後、抗体を
餌に２０ｍｇ／日混合したＡ群、通常の餌を投与したＢ
群、飲水中に４００ｍｇ／日溶解し、自由摂取させたＣ
群の３群に分けて飼育した。Ｄ群はH.pylori感染のみを
行ない、その後抗体を餌に２０ｍｇ／日混合した。Ｅ群
はH.pylori感染のみを行ない、その後も通常の餌で飼育
した。開始時、２週間及び４週間目に採血を行ない血清
を分離し、総ＩｇをBIAcore（ファルマシア社製）で、
抗H.pylori ＩｇＧ抗体量をＥＬＩＳＡでそれぞれ測定
した。

【００１８】Ｅ．結果本抗体の抗菌作用の一つとして、増殖抑制を図１に示し
た。経口免疫で得られた本抗体は５μｇ／ｍｌの濃度以
上で抑制率は１００％を示し、ポジティブコントロール
の筋肉注射で得られた抗体とほぼ同等の結果を示した。
しかし、C.perfringensに対しては増殖抑制作用を示さ
なかった。凝集反応の結果を表１に示した。本抗体及
び、ポジティブコントロール抗体はともに２週間目から
凝集反応を認め、６週目以降はプラトーに達した。又、
C.perfringens や E.coliに対しては、両抗体とも凝集
反応は示さなかった。これは、経口免疫で得られた抗H.
pylori抗体がH.pyloriに対してポジティブコントロール
で得られた抗体と同等のものであることを示している。
又、C.perfringensやE.coliに反応を示さなかったこと
から、この抗体はH.pyloriに特異的に作用することが示
された。

【００１９】

【表１】

【００２０】ウレアーゼ阻害活性を表２に示した。経口
免疫にて得られた本抗体は、３週目よりウレアーゼ阻害
活性を示し、８週目にはH.pylori由来Ureaseに対して約
９０％の阻害率を示した。又、ポジティブコントロール
の筋肉注射で得られた抗体と同等の阻害率を示した。し
かし、ナタマメ由来ウレアーゼ（シグマ社製）に対して
は、両抗体とも阻害活性を示さなかった。又、非免疫鶏
由来卵黄抗体は、H.pylori及びナタマメ由来ウレアーゼ
に対して阻害活性を示さなかった。これらの結果から、
経口免疫で得られた本抗体はH.pylori由来ウレアーゼに
対して特異的にその活性を阻害し、その阻害率は筋肉注
射で得られたポジティブコントロールのそれと同等であ
ることが示された。

【００２１】

【表２】

【００２２】次にスナネズミを用いた動物実験の結果を
図２及び図３に示した。図２に示したように、抗体非投
与群のＥ群は２週目に１２５ＲＵと高く、４週目以降も
１４５ＲＵと高い値を示した。又、H.pylori感染時のみ
抗体を投与したＢ群では２週目では７５ＲＵと低い値を
示したが、４週目ではＥ群と同じ値にまで上昇した。
Ａ、Ｃ及び、Ｄ群はすべてＥ群に対して各週において低
い値を示した。又、抗体を飲水中に混合したＣ群が抗体
を餌に混合したＡ又はＤ群よりも各週において低い値を
示した。図３より、抗H.pylori ＩｇＧ抗体価は各週に
おいてＥ群が最も高く、次にＢ群であった。又、抗体を
飲水中に混合したＣ群が各週において最も低い値を示
し、次いで抗体を餌に混合したＡ又はＤ群であった。こ
の傾向は総ＩｇＧと同様であった。H.pylori感染により
血中の抗H.pylori抗体が上昇することが知られている
が、抗体を投与することによりその値は低値を示し、H.
pyloriの感染が本抗体により成立していないことが示さ
れた。

【００２３】

【発明の効果】上述のように、抗H.pylori鶏卵黄抗体
は、H.pyloriに対して抗菌作用を示し、又生体において
もその作用が保持されていたことからH.pylori感染関連
疾患の予防及び治療に本抗体が有効であることが明らか
となった。

【図面の簡単な説明】

【図１】抗ヘリコバクター・ピロリ卵黄抗体による抗菌
作用を示すグラフである。

【図２】ヘリコバクター・ピロリと反応する血清中総Ｉ
ｇの経時的変化を示すグラフである。

【図３】ヘリコバクター・ピロリに対する血清中抗ヘリ
コバクター・ピロリＩｇＧの経時的変化を示すグラフで
ある。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter
pylori)で免疫された採卵鳥類卵黄より得られるヘリコ
バクター・ピロリ（Helicobacter pylori)に対する抗菌
作用及び抗ウレアーゼ作用を有することを特徴とする卵
黄抗体。
【請求項２】請求項１に記載の卵黄抗体を含む全卵黄
抗体を有効成分として含有する抗菌剤。
【請求項３】請求項１に記載の卵黄抗体を含む全卵黄
抗体を有効成分として含有するヘリコバクター・ピロリ
（Helicobacter pylori)感染関連疾患の予防剤及び治療
剤。
【請求項４】請求項１に記載の卵黄抗体を含む卵黄又
はその粉末。