KR19990044609A - 디-판토산 및 디-판토텐산 또는 그의 염의 생성방법 - Google Patents
디-판토산 및 디-판토텐산 또는 그의 염의 생성방법Info
- Publication number
- KR19990044609A KR19990044609A KR1019980701859A KR19980701859A KR19990044609A KR 19990044609 A KR19990044609 A KR 19990044609A KR 1019980701859 A KR1019980701859 A KR 1019980701859A KR 19980701859 A KR19980701859 A KR 19980701859A KR 19990044609 A KR19990044609 A KR 19990044609A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- pantothenic acid
- acid
- gene region
- biosynthetic gene
- salt
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 title claims description 45
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 title claims description 45
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 33
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 127
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 40
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims abstract description 28
- OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N (R)-pantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 26
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 87
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 53
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 claims description 44
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 40
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 claims description 34
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 48
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 18
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 6
- 238000009833 condensation Methods 0.000 abstract 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- SERHXTVXHNVDKA-UHFFFAOYSA-N pantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)C1O SERHXTVXHNVDKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N (R)-pantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@@H]1O SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 6
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 5
- -1 pantothenic acid ester Chemical class 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SERHXTVXHNVDKA-SCSAIBSYSA-N (3s)-3-hydroxy-4,4-dimethyloxolan-2-one Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@H]1O SERHXTVXHNVDKA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 101150062179 II gene Proteins 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- JWAZRIHNYRIHIV-UHFFFAOYSA-N 2-naphthol Chemical compound C1=CC=CC2=CC(O)=CC=C21 JWAZRIHNYRIHIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 2
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- KLOHDWPABZXLGI-YWUHCJSESA-M ampicillin sodium Chemical compound [Na+].C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C([O-])=O)(C)C)=CC=CC=C1 KLOHDWPABZXLGI-YWUHCJSESA-M 0.000 description 2
- RRKTZKIUPZVBMF-IBTVXLQLSA-N brucine Chemical compound O([C@@H]1[C@H]([C@H]2C3)[C@@H]4N(C(C1)=O)C=1C=C(C(=CC=11)OC)OC)CC=C2CN2[C@@H]3[C@]41CC2 RRKTZKIUPZVBMF-IBTVXLQLSA-N 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- NMDWGEGFJUBKLB-YFKPBYRVSA-N (2S)-2-hydroxy-2-methyl-3-oxobutanoic acid Chemical compound CC(=O)[C@](C)(O)C(O)=O NMDWGEGFJUBKLB-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- YYLQUHNPNCGKJQ-NHYDCYSISA-N (3R)-3-hydroxy-L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)[C@@H](O)C(O)=O YYLQUHNPNCGKJQ-NHYDCYSISA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRTOQFBQOFIFEE-UHFFFAOYSA-N 2-dehydropantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)C1=O HRTOQFBQOFIFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- OQWSVCXXAYKEFF-UHFFFAOYSA-N Brucin Natural products COc1cc2N3C4C5C(CC3=O)OC=CC6CN7CCC4(C7CC56)c2cc1OC OQWSVCXXAYKEFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 102000013382 Gelatinases Human genes 0.000 description 1
- 108010026132 Gelatinases Proteins 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- FYCWLJLGIAUCCL-DMTCNVIQSA-N O-methyl-L-threonine Chemical compound CO[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O FYCWLJLGIAUCCL-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001931 ampicillin sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001449 anionic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950011260 betanaphthol Drugs 0.000 description 1
- RRKTZKIUPZVBMF-UHFFFAOYSA-N brucine Natural products C1=2C=C(OC)C(OC)=CC=2N(C(C2)=O)C3C(C4C5)C2OCC=C4CN2C5C31CC2 RRKTZKIUPZVBMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 101150020087 ilvG gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 229910001412 inorganic anion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000020094 liqueur Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- OTOIIPJYVQJATP-UHFFFAOYSA-N pantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940115458 pantolactone Drugs 0.000 description 1
- SIEVQTNTRMBCHO-UHFFFAOYSA-N pantolactone Natural products CC1(C)OC(=O)CC1O SIEVQTNTRMBCHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 235000020046 sherry Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
D-판토산 또는 D-판토텐산 합성능을 가진 미생물을 이용하여 D-판토산 또는 D-판토텐산의 생성 방법이 개시된다. 상기 방법에 따르면, (a) D-판토산은 글루코스와 같은 각종 탄소원으로 부터 생합성되어 배양 배지내에 축적되고, 또는 (b) 예를 들어, β-알라닌을 배양 배지에 첨가하므로써 β-알라닌을 미생물과 접촉시키므로써 생합성된 D-판토산과 β-알라닌의 축합을 유도하여 배지내에 D-판토텐산이 축적된다.
Description
D-판토텐산은 비타민으로서 유용하다. 선행의 D-판토텐산 생성방법들로는, (1) DL-판토락톤을 광학 분해시키고, 메탄올중 생성된 D-판토락톤을 β-알라닌 또는 그의 염과 화학적 축합시키는 것을 이루어지는 방법, (2) D-판토텐산 에스테르를 미생물 또는 효소로 가수분해시켜 D-판토텐산을 수득하거나, 또는 DL-판토텐산 에스테르의 D-이성질체만을 선택적 가수분해시켜 D-판토텐산을 수득하는 것으로 이루어진 방법 (JP-A 1-228487, JP-A 1-228488), (3) D-판토산칼륨, β-알라닌 및 ATP 를 트리스 완충액중 미생물의 휴지세포 또는 그의 효소와 접촉시키는 것으로 이루어지는 방법 [Journal of Biological Chemistry, Vol. 198, p.23 (1952), Abstract of Papers 176th American Chemical Society National Meeting, Division of Microbial and Biochemical Technology, Vol. 48 (1978), etc.], (4) DL-판토산 및 β-알라닌의 존재하에 특정 미생물을 배양시키고 D-판토산을 β-알라닌과 특이적으로 축합시키므로써 D-판토텐산을 수득하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-A 5-23191), 및 (5) β-알라닌의 존재하에서 특정 미생물을 배양시켜 D-판토텐산을 수득하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-A 6-261772) 가 포함된다.
D-판토산 및/또는 D-판토텐산을 생성하는 방법으로는, (6) 화학적으로 합성된 DL-판토락톤을 퀴닌 및 브루신과 같은 분해제로 광학 분해시키는 것으로 이루어진 방법, (7) DL-판토락톤중 L-판토락톤만을 특정 미생물로 분해시켜 D-판토락톤을 수득하는 것으로 이루어지는 방법, (8) DL-판토락톤중 L-판토락톤만을 특정 미생물로 산화시켜 케토판토락톤을 수득하고, 이어서 D-판토락톤으로 비대칭 환원시키는 것으로 이루어지는 방법 (JP-A 47-19745), (9) 화학적으로 합성된 케노판토락톤을 특정 미생물로 비대칭 환원시켜 D-판토락톤을 수득하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-B 61-14797), (10) DL-판토락톤중 L-판토락톤을 특정 미생물로 선택적으로 및 비대칭 가수분해시키므로써 D-판토락톤을 수득하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-A 57-152895 및 JP-A 62-294092), (11) DL-판토락톤중 D-판토락톤을 특정 미생물로 선택적으로 및 비대칭 가수분해시키므로써 D-판토산을 수득하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-B 3-65198), 및 (12) 특정 미생물을 배양하여 글루코스로 부터 D-판토산을 생합성하는 것으로 이루어지는 방법 (JP-A 6-261772) 이 포함된다.
D-판토텐산 (이후, 그의 염을 포함) 의 산업적 생산에 있어서, 상기 방법 (1) 은 주요 원료인 DL-판토락톤을 합성하는 복잡한 단계를 필요로 할 뿐 아니라, 복잡하고 어려운 광학 분해 단계들을 포함한다. 상기 방법 (2) 는 불이익하게 DL-판토락톤으로 부터 D-판토텐산 에스테르 또는 DL-판토텐산 에스테르의 생성 단계를 필요로 한다. 상기 방법 (3) 은 불이익하게 값비싼 ATP 및 트리스 완충액을 이용하고, 이는 값비싼 출발물질 D-판토산으로 부터 극소량의 판토텐산만이 생성되기 때문에 비실용적인 방법이다. 상기 방법 (4) 는 다른 방법들 보다는 더 단순하지만, DL-판토산을 생성 및 라세미화하는 단계들을 필요로 한다. 상기 방법 (5) 는 방법 (4) 보다는 더 단순하다. 그러나, 판토텐산 생합성 경로의 윗쪽에 위치하는 발린 생합성 경로의 활성이 배양의 후기 단계에서 사라지고, 판토텐산 생성은 발린의 고갈로 중단된다. 그러므로, 생성이 제한된다.
D-판토산 및/또는 D-판토락톤의 생성 방법 대부분은 복잡한 단계들을 통해 합성되어야 하는 출발 물질 DL-판토락톤을 사용하는 불리함이 있다. 또한, 상기 방법 (6) 은 값비싼 분해제를 불리하게 사용하고 D-판토락톤을 회수하는데 있어서 어려움이 있다. 상기 방법 (7) 은 DL-판토락톤의 절반이 손실되기 때문에 불리하다. 상기 방법 (8), (9), (10) 및 (11) 은 사용되는 미생물의 특성 및 판토락톤 또는 판토산의 특성 때문에 배양 용액중에서 100 % 광학적 수율로 D-이성질체만을 생성하는데 큰 어려움이 있다. 더구나, 상기 방법 (6), (10) 및 (11) 은 남아있는 L-이성질체를 회수 및 재활용하기 위한 부가적인 복잡한 단계들을 요구한다. 상기 방법 (12) 에서 D-판토산 생성은 상기 판토텐산 생성 방법 (5) 에서와 같이 발린 생합성의 활성에 의존한다.
발명의 요약
본 발명자들은 D-판토텐산의 생성을 위한 산업적으로 유리하고 효율적인 방법을 얻기위해 집중적으로 연구하여 왔다. 그 결과로써, β-알라닌을 함유하는 배양 배지중에서 미생물을 배양시켜 D-판토텐산을 생성하는 것으로 이루어지는 방법으로, 측쇄 아미노산 생합성을 위한 유전자를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 박테리아 균주가 배양 배지에서 D-판토텐산 또는 D-판토산 (및/또는 D-판토락톤) 을 고농도로 생성할 수 있는 것이 밝혀졌다. 플라스미드의 도입은 배양 초기 단계에서 발린 생합성 활성을 향상시키고 중기 및 말기 단계중에 향상된 활성을 유지시킨다. 상기 판토텐산 생성은 더 오래도록 지속되고, 생성물의 최종 축적이 증가된다.
본 발명은 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 배양하여 배지중에 D-판토산 또는 그의 염을 생성 축적시키고, D-판토산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어진 D-판토산 또는 그의 염의 생성 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 β-알라닌의 존재하에서 배양시켜 D-판토텐산 또는 그의 염을 배지중에서 생성 축적시키고, D-판토텐산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어진 D-판토텐산 또는 그의 염의 생성 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 배양하여 배지중에 D-판토산 또는 그의 염을 생성 축전시키고, D-판토산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어진 D-판토산 또는 그의 염의 생성 방법을 제공한다.
본 발명은 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 β-알라닌의 존재하에 배양하여 D-판토텐산 또는 그의 염을 배지중에 생성 축적시키고, D-판토텐산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어진 D-판토텐산 또는 그의 염의 생성 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 (a) 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드, 또는 (b) 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 제공하는데, 이는 β-알라닌의 존재하에서 판토산을 생성하거나 또는 판토텐산을 생성할 수 있다.
바람직하게는, 미생물은 에쉐리키아 콜리 (Escherichia coli) FV 5069/pFV202 (FERM BP-5227) 이다.
더욱이, 본 발명은 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드를 제공한다.
바람직하게는, 플라스미드는 pFV202 이다.
본 발명에 있어서, 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분은 바람직하게는 ilvGM 유전자이다.
본 발명은 상기 방법 (5) 및 (12) 에서 문제시되고 있는 발린 생성을 증가시켜 더 높은 농도의 판토텐산을 축적할 수 있다.
본 발명은 D-판토산 및/또는 D-판토텐산, 또는 그의 염의 신규한 제조방법에 관한 것이다. 판토텐산은 비타민으로서 유용하고, D-판토산은 판토텐산 또는 CoA 생성을 위한 중요한 중간체로서 유용하다.
도 1 은 pFV202 가 삽입된 4.7 kb DNA 단편의 개열 지도이다.
본 발명에 있어서, D-판토산, D-판토텐산 및 β-알라닌은 그의 염의 형태일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "D-판토산", "D-판토텐산" 및 "β-알라닌" 은 그의 염 뿐아니라 그의 유리 형태를 포함한다. D-판토산, D-판토텐산 및 β-알라닌의 염의 예로는 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염이 포함된다. 각 경우에 있어서, 칼슘염, 나트륨염 또는 칼륨염이 바람직하다.
본 발명자들은 에쉐리키아 속 등에 속하는 미생물로의 직접 발효에 의해서 다당류와 같은 탄소원으로 부터 D-판토산을 생성하는 효율적이고 경제적인 방법을 개발하기 위해 연구하여왔다. 그 결과로써, 다량의 D-판토산을 생성할 수 있는 박테리아 균주가 DNA 재조합 방법으로 처리된 미생물에 속하며, 그의 판토텐산 생합성 경로 뿐 아니라 상류에 위치하는 그들의 발린 생합성 경로를 향상시키는 것이 밝혀졌다. 다량의 D-판토텐산이 탄소원을 함유하는 배양 배지중 상기 미생물과 β-알라닌을 접촉시키므로써 생성될 수 있다는 것이 또한 밝혀졌다. 즉, 본 발명의 D-판토산 또는 D-판토텐산을 생성하는 방법은 미생물의 D-판토산 또는 D-판토텐산 합성능을 이용한다. 그에 의해, (a) D-판토산은 글루코스와 같은 각종 탄소원으로 부터 생합성되어 배양 배지중에 축적되거나, 또는 (b) 예를 들어, β-알라닌을 배양 배지에 첨가하므로써 β-알라닌을 미생물과 접촉시켜 생합성된 D-판토산과 β-알라닌을 축합시키므로써 배지중 D-판토텐산이 축적된다. 그러므로, 본 발명의 방법은 판토텐산 생합성 경로 뿐 아니라 그의 상류에 위치하는 발린 생합성 경로의 활성을 DNA 재조합 방법에 의해 향상시키므로써 더욱 더 높은 농도의 D-판토산 및 D-판토텐산을 생성할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 미생물은 β-알라닌의 존재하에 D-판토텐산을 생성할 수 있는 미생물, 및 D-판토산을 생성할 수 있는 미생물을 포함한다. 실제 사용을 위해서, 미생물은, 시트로박터 (Citrobacter), 쉬젤라 (Shigella), 클레브시엘라 (Klebsiella), 엔테로박터 (Enterobacter), 살모넬라 (Salmonella) 및 에쉐리키아 (Escherichia) 속에 속하는 미생물과 같은, 엔테로박테리아시에 (Enterobacteriaceae) 과에 속하는 미생물이 바람직하다. 미생물의 가장 바람직한 예로는, 문헌 [List of Cultures, 8th ed., 1988 (Institute for Fermentation, Osaka, Japan)] 에 기재된 에쉐리키아 콜리의 공지된 균주 (예를 들어, 에쉐리키아 콜리 IFO 3547) 와 같은, 에쉐리키아 속에 속하는 박테리아 균주 및 그로부터 유래된 균주가 포함된다. 유래된 균주의 예로는, 에쉐리키아 콜리 IFO 3547 에 살리실산 내성, α-케토이소발레산 내성, α-케노부티르산 내성, β-히드록시아스파르트산 내성 및 o-메틸트레오닌 내성을 부여하므로써 수득된 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069, 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069 를 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부를 함유하는 플라스미드 pFV 202 로 형질전환시키므로써 수득된 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227) 이 포함된다.
측쇄 아미노산 생합성 유전자를 함유하는 유전자 단편은, 예를 들어, 문헌 [H. Saito 및 K. Miura, Biochem. Biophys. Acta] 에 기재된 공지된 방법 또는 그의 변현된 방법에 의해서 제조될 수 있다. 예를 들어, 크로모좀 DNA 를 공여 세포로 부터 추출한 다음, 제한효소 HindIII 로 개열한다. 이어서, 상기 수득된 크로모좀 DNA 단편을 벡터 DNA 에 삽입시킨다. 본 발명에 사용되는 벡터 DNA 는 숙주 세포내에서 성장할 수 있는 벡터 DNA 들로 부터 적절하게 선택된다. 숙주 세포내에서 성장할 수 있는 벡터 DNA 로는, 예를 들어, pSC101 (Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 70, 3240 (1973)), 및 pUC18 (Gene, 33, 103 (1985)) 이 포함된다. 상기 벡터 DNA 들은 특정하게 국한되지 않으며, 새로이 단리 또는 합성된 것들이 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 한 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [T. Maniatis et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Todai Shuppankai (1982)] 에 기재된 방법 등 또는 그의 변형된 방법들에 의해서 유잔자 단편을 상기 플라스미드 벡터에 삽입시킬 수 있다. 유전자 단편이 삽입된 플라스미드는 문헌 [J. Mol. Biol., 53, 159 (1972)] 에 기재된 공지의 형질전환 방법 등 또는 그의 변형된 방법에 의해서 숙주 세포로 도입될 수 있다. 숙주 세포의 예로는 에쉐리키아 콜리 균주 JM109 (J. Mol. Biol., 166 (1983)) 와 같은 공지된 박테리아 균주가 포함된다.
측쇄 아미노산 생합성 유전자를 함유하는 플라스미드가 도입된 균주는, 예를 들어, 탐침으로써 에쉐리키아 콜리 균주 K-12 의 아세토히드록시산 합성효소 유전자 서열의 일부분을 사용하는, 콜로니 혼성화 방법 등에 의해서 형질전환된 균주로 부터 선택될 수 있다. 상기 수득된 측쇄 아미노산 생합성 유전자를 함유하는 플라스미드 DNA 는 그의 숙주 균주로 부터 추출되어 다른 숙주 세포로 도입될 수 있다. 이와는 달리, 측쇄 아미노산 생합성 유전자를 함유하는 DNA 단편은 추출된 플라스미드 DNA 로 부터 제조된 다음 다른 벡터에 결찰될 수 있다.
상기 수득된 형질전환된 균주의 예로는 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227, IFO 15857) 가 포함된다. pFV 202 는 에쉐리키아 콜리 균주 FV 525 로 부터 유래된 판토텐산 생합성 유전자 및 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069 로 부터 유래된 측쇄 아미노산 생합성 유전자 (아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 유전자) 를 함유하는 플라스미드이다. 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227) 은 pFV 202 를 에쉐리키아 콜리 균주 FV 5069 로 도입하므로써 수득된 균주이다. 사용된 IFO 번호는 기관 [Institute for Fermentation, Osaka (IFO) (17-5 Juso-hanmachi 2-chome, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Japan)] 에 대한 기탁번호이고, 사용된 FERM BP 번호는 부다페스트 조약하에 국제기탁기관 [National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology (NIBH) (1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan)] 에 대한 기탁번호이다. 특히 에쉐리키아 콜리 FV 5069/pFV 202 는 1995 년 9 월 7 일 부터 부다페스트 조약하에 기탁번호 FERM BP-5227 로 NIBH 에 기탁되어 있다.
상기 수득된 박테리아 균주는 진탕 배양법 (예를 들어, 회전식 진탕기상에서 진탕 배양), 정지 배양법 및 통기 진탕 배양법과 같은 통상적인 방법들에 의해 지속적으로 또는 간헐적으로 배양될 수 있다. 사용되는 배양 배지는 사용되는 미생물이 성장할 수 있는 통상적인 제형을 가질 수 있다. 탄소원은 탄수화물, 오일 및 지방, 지방산, 유기산 및 알콜과 같은 동화성 탄소원으로 부터 적절하게 선택될 수 있으며, 단독으로 또는 혼합물로서 사용된다. 질소원으로는, 예를 들어, 펩톤, 콩가루, 솜가루, 콘 스팁 리큐어, 효모 추출물, 육류 추출물, 맥아 추출물 및 요소와 같은 유기 질소원, 및 암모늄 술페이트, 암모늄 클로라이드, 암모늄 니트레이트 및 암모늄 포스페이트와 같은 무기 질소원이 포함된다. 질소원은 단독으로 또는 그의 혼합물로서 사용될 수 있다. 포타슘 디히드로포스페이트 또는 디포타슘 히드로겐포스페이트가 인의 원으로서 사용되는 것이 유리하다. 배지는 성장에 필요한 금속염 (예를 들어, 황산마그네슘), 필수적인 성장 인자 또는 탄소원, 질소원 및 인의 원과 더불어 아미노산 및 비타민과 같은 성장-촉진 물질을 함유할 수 있다. 배양중 pH 를 조절하기 위해서, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 암모니아, 탄산칼슘 등과 같은 염기성 물질을 적절하게 첨가할 수 있다. 발포 방지제의 첨가는 또한 발포를 조절하는데 효과적이다. 상기 물질은 배양중 적절하게 첨가될 수 있다. 통기 조건을 유지시키기 위해서, 산소가 풍부한 통기를 수행하는 것이 효과적이다. 배양 온도는 통상적으로 15 ℃ ∼ 45 ℃, 바람직하게는 25 ℃ ∼ 40 ℃ 이다. 배양을 판토텐산 및/또는 판토산의 최대 축적량에 도달할 때 까지 지속한다. 통상적으로, 6 시간 내지 120 시간의 배양 시간이 본 목적을 달성할 수 있다. 본 발명에 따른 D-판토텐산의 생성에 있어서, 박테리아 균주의 배양전에 또는 배양중 적합한 단계에서 원료 물질을 첨가하거나, 또는 원료물질을 가공된 박테리아 세포에 첨가하므로써 원료 물질 β-알라닌을 박테리아 세포와 접촉시킬 수 있다. 가공된 박테리아 세포는 박테리아를 배양시켜 수득된 배양액의 린스된 박테리아 세포, 아세톤-건조된 박테리아 세포, 폴리아크릴아미드 겔 또는 k-카라게난으로 고정화된 박테리아 세포 등을 의미한다. 원료 물질은 물과 같은 적합한 용매중의 용액 또는 현탁액으로써 또는 분말로써 한번에 또는 적합한 시간에 걸쳐 지속적으로 또는 간헐적으로 첨가될 수 있다.
배지에 첨가되는 β-알라닌의 농도는 미생물의 생산성에 따라 다양하다. 경제적인 관점으로 부터, β-알라닌의 농도는 바람직하게는 0.1 ∼ 6 w/v%, 보다 바람직하게는 0.5 ∼ 4 w/v% 이다.
D-판토텐산 또는 그의 염은 통상적인 방법에 의해서 상기 배양액 또는 반응 혼합물로 부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 배양액으로 부터 박테리아 세포를 제거한 후, 잔류물에 대해 이온-교환 크로마토그래피, 활성탄, 합성 흡착제 등으로의 흡착법, 농축법 및 결정화와 같은 공지된 단리 방법을 수행하여 D-판토텐산 또는 그의 염을 단리시킨다. 상기 방법들은 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. JP-B 40-2330 에 따른 결정화는, 용이하게 여과 가능한 결정을 고수율로 생성할 수 있기 때문에 산업적으로 유리하다. 상기 결정화 방법에 따르면, 판토텐산 칼슘의 몰 당 4 몰의 메탄올 및 1 몰의 물을 함유하는 용매화된 수화물 (판토텐산 칼슘·4 MeOH·1H2O) 이 침전된 결정으로서 수득된다. 생성된 결정을 건조시켜 결정중 메탄올 및 물을 제거하므로써 판토텐산 칼슘을 수득한다 (M. Inagaki et al., Chem. Pharm. Bull., 24, 3097-3102 (1976)).
예를 들어, D-판토텐산 칼슘은 하기와 같이 배양액으로 부터 단리될 수 있다. 박테리아 세포가 제거된 배양액을 양이온-교환 수지로 패킹한 컬럼 (예를 들어, Diaion PK-216 (H-형), PK-228 (H-형); Mitsubishi Chemical Corporation 사제) 을 통과시켜 양이온을 제거한 다음, 음이온-교환 수지가 패킹된 컬럼 (예를 들어, PA-412 (OH-형), WA-30 (OH-형); Mitsubishi Chemical Corporation 사제) 을 통과시켜 무기성 음이온 및 판토텐산 보다 더 강한 산성을 갖는 유기산을 제거한다. 수산화칼슘을 유리 판토텐산을 함유하는 용리액 (pH: 약 2.6) 에 첨가하여 pH 를 약 5.0 으로 조절한 다음, 혼합물을 판토텐산 농도 약 25 w/v% 로 농축시킨다. 이어서, 수산화칼슘을 농축물에 첨가하여 pH 를 약 7.0 으로 조절하고, 활성탄 (예를 들어, Shirasagi A, Takeda Chemical Industries, Ltd. 사제) 을 첨가하여 탈색시킨다. 활성탄을 여과시켜 제거한 후, 여액을 약 45 % ∼ 55 % (w/w) 의 판토텐산 칼슘의 농도로 농축시킨다. 이어서, 적정량의 메탄올을 첨가하여 용액중 물함량을 5 % ∼ 15 % 로 조절한다. 이어서, 용액을 약 2 ℃ 로 냉각시키고, 종자 결정을 첨가하여 판토텐산 칼슘의 용매화 수화물의 결정을 침전시킨다. 결정을 수합하여 건조시켜 고순도의 D-판토텐산을 고수율로 수득한다.
하기 실시예는 더욱이 본 발명을 상세하게 설명하지만 그에 국한되는 것으로 추정되지는 않는다.
D-판토텐산은 고성능 액체 크로마토그래피 (컬럼: Shimadzu SCR101H (7.9 mm I.D. × 30 cm); 이동상: 0.008N 황산; 유속: 0.8 ml/분; 확인: 시차 굴절계) 및/또는 미생물 정량법 (시험 박테리아: 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum) IFO 3070; 배지: 시판되는 판토텐산 정량용 배지 (DIFCO 사제)) 에 의해 측정된다. 배양액중 발린을 고성능 액체 크로마토그래피 (컬럼: Mitsubishi Chemical Corporation MCI GEL CRS 10W (4.6 mm I.D. × 5 cm); 이동상: 1mM-CuSO4/CH3CN = 7/1; 유속: 0.7 ml/분; 확인: UV 측광기) 로 측정한다.
실시예 1
(1) 크로모좀 DNA 의 제조
에쉐리키아 콜리 FV5069 를 L 배지 (1 리터) (박토트립톤 10 %, 효모 추출물 0.5 %, 염화나트륨 0.5 %) 에 접종하여 37 ℃ 에서 하룻밤동안 배양시킨다. 생성된 박테리아 세포로 부터, 크로모좀 DNA (최종 수율: 3.3 mg) 가 페놀을 사용하는 사이또 (Saito et al.) 방법 [Biochem. Biophys. Acta., 72, 619 (1963)] 으로 수득된다.
(2) 벡터 플라스미드 pUC18 로 크로모좀 DNA 의 삽입
상기 (1) 에서 수득된 크로모좀 DNA (10 μg) 및 pUC18 (Nippon Gene 사제) 각각을 제한효소 HindIII (Nippon Gene 사제) 로 개열시키고, 생성된 DNA 단편들을 혼합시킨 다음 T4 파아지로 부터 유래된 DNA 리가제 (Nippon Gene 사제) 로 결찰시킨다.
(3) 크로모좀 DNA 단편이 삽입된 플라스미드 DNA 의 선별
에쉐리키아 콜리 균주 JM109 에 상기 (2) 에서 수득된 각종 플라스미드의 혼합물을 감응세포 방법에 의해 형질전환시킨다. 이어서, 상기 형질전환체를 함유하는 현탁액을 앰피실린 나트륨염 (50 μg/ml), IPTG (0.5 mM) 및 X-gal (100 μg/ml) 을 함유하는 L 아가 플레이트 배지상에 스프레드하여 37 ℃ 에서 하룻밤동안 배양시킨다. 생성된 콜로니중, 크로모좀 DNA 단편을 함유하는 플라스미드 DNA 를 갖는 형질전환체로써 백색 콜로니를 선택한다.
(4) 탐침의 제조
로더 (Rother et al.) 에 의해 확인된 약 600 bp 서열의E. coli균주 K-12 ilvG 유전자 (아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 큰 서브유니트 유전자, Nucleic Acids Research, 2137, 15 (1987)) 를 PCR 방법으로 증폭시킨다. 증폭된 유전자를 랜덤 프라임 방법에 의해32P 로 표지하여, 탐침으로 사용한다.
(5) 아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 유전자의 클로닝
상기 (3) 에서 수득된 백색 콜로니가 획선되어 있는, 앰피실린 나트륨 (50 μg/ml) 을 함유하는 L 아가 플레이트 배지상에 나일론 막을 위치시키고, 37 ℃ 에서 하룻밤동안 배양시킨다. 막을 알칼리로 처리하여 중성화시키고, 80 ℃ 에서 2 시간 동안 구워 막위에 세포내 DNA 를 고정시킨다. 상기 (4) 의 탐침을 이용하여, 막을 혼성화시켜 다른 것 보다 뚜렷하게 더 강한 시그날을 방출하는 콜로니의 한 균주를 수득한다.
(6) 써던 혼성화법에 의한 확인
플라스미드 (10 μg) 를 상기 콜로니로 부터 추출하여, HindIII 로 개열시킨 다음 전기영동시킨다. 삽입된 단편을 써던 혼성화법으로 분석한다. 결과는, 상기 단편이 4.7 kb 길이이고 (K-12 의 아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 유전자를 함유하는 HindIII 단편이 또한 4.7 kb 길이이다), 상기 (4) 에서 수득된 탐침으로 강하게 혼성화된다는 것을 보여준다.
(7) 발편 플라스미드의 구축
상기 4.7 kb 삽입 단편을 플라스미드 벡터 pMW 118 의 HindIII 위치에 삽입시킨 후, 2.5 kb 인 에쉐리키아 콜리 FV525 의 판토텐산 생합성 유전자를 EcoRI 위치에 삽입시킨다. 생성된 플라스미드를 pFV202 로 명명한다. 판토텐산-생성 균주 FV5069 를 상기 플라스미드로 형질전환시키고, 생성된 형질전환체를 FV5069/pFV202 로 명명한다. 상기 형질전환체의 아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 활성을 판토텐산 생합성 유전자만이 삽입된 pFV31 로 형질전환된 FV5069/pFV31 의 활성, 및 형질전환되지 않은 모 (숙주) 균주 FV5069 의 활성과 비교한다.
(8) 형질전환체의 아세토히드록시산 합성효소 활성의 측정
시험 박테리아를 생성 배지 (A) 에서 약 48 시간 동안 배양시키고, 초음파에 의해 박테리아로 부터 용해질을 제조한다. 용해질을 20,000 rpm 으로 1 시간 동안 원심분리하여 상층액을 수득한다. 잭슨 (Jackson et al.) 방법 [Methods Enzymol. 1988] 에 따라, 생성된 아세토락트산을 조 효소용액으로써 상층액을 사용하여 아세토인으로 전환시킨다. 생성된 아세토인을 2-나프톨로 발색시켜 530 nm 의 파장으로 정량한다.
결과를 표 1 에 나타낸다.
표 1 에 나타낸 바와 같이, pFV202 로 삽입된 4.7 kb HindIII 단편은 아세토히드록시산 합성효소 이소자임 II 를 코드하는 ilvGM 유전자를 함유한다.
| 박테리아 균주 | 고유 활성 (μmol/분.mil) |
| FV5069 | 38.2 |
| FV5069/pFV31 | 35.7 |
| FV5069/pFV202 | 108.9 |
(9) ilvGM 을 함유하는 4.7 kb 단편의 개열지도
pFV202 로 삽입된 4.7 kb DNA 단편은 하나의 PstI 부위, 하나의 SalI 부위 및 하나의 PvuII 부위를 포함한다. 도 1 은 상기 단편의 개열지도를 나타낸다.
실시예 2
표 2 에 나타낸 조성을 갖는 액체 배지를 오토클레이브내에서 121 ℃ 로 15 분간 가열하여 멸균시키고, 200 ml 에를렌메이어 플라스크로 20 ml 분량으로 분주한다. 상기 실시예 1 의 (7) 의 사면 배지로 부터 수득된 에쉐리키아 콜리 균주 FV5069/pFV202 (FERM BP-5227) 및 균주 FV5069/pFV31 (FERM BP-4395) 각각의 백금 루우프 하나 분량을 배지에 접종하고, 220 rpm 인 회전식 진탕기상에서 30 ℃ 에서 20 시간 동안 배양시킨다. 종자 배양액 (1 ml) 을 표 2 에 나타낸 조성을 갖는 배지 (20 ml) 로 옮겨, 200 ml 주름잡힌 에를렌메이어 플라스크내에서 38 ℃ 로 72 시간 동안 배양시킨다. 배양중에, 표 3 에 나타낸 각종 물질을 첨가한다. 표 4 는 배양 말기에 생성된 판토텐산 (PaA) 의 양 및 발린 (Val) 의 양을 나타낸다.
| 배지 조성 : |
| 종자 배지 :CSL 0.5 %(NH4)2SO40.5 %MgSO4·7H2O 0.001 %KH2PO40.01 %K2HPO40.01 %티아민 히드로클로라이드 2 μg/ml글루코스 5 %CaCO32 %pH 7.0 |
| 주요 배지 :CSL 2 %(NH4)2SO41.25 %MgSO4·7H2O 0.002 %KH2PO40.01 %β-알라닌 1 %티아민 히드로클로라이드 0.5 μg/ml글루코스 9 %CaCO34 %pH 7.0 |
| 배양 시간 | 글루코스 | 티아민 히드로클로라이드 | (NH4)2SO4 | β-알라닌 |
| 17 시간 | 6 % | 0.5 μg/ml | 0.75 % | 1 % |
| 24 시간 | 6 % | 0.5 μg/ml | 0.5 % | |
| 41 시간 | 4 % | 0.5 μg/ml | 0.5 % | |
| 50 시간 | 5 % | 0.5 μg/ml |
| 배양 시간 | FV5069/pFV31 | FV5069/pFV202 | ||
| PaA | Val | PaA | Val | |
| 24 시간 | 38.7 g/L | 2.1 g/L | 29.9 g/L | 5.2 g/L |
| 48 시간 | 52.2 g/L | 1.1 g/L | 60.1 g/L | 2.7 g/L |
| 72 시간 | 51.8 g/L | 0.9 g/L | 66.0 g/L | 1/3 g/L |
상기 기재된 바와 같이, 본 발명의 방법은 판토산 및 판토텐산의 생합성 경로의 상류에 위치하는 발린 생합성 경로의 활성을 향상시켜 발린 생산성을 증가시킬 수 있고, 더 높은 농도의 판토산 및 판토텐산을 생성할 수 있다. 그러므로, 본 발명의 방법은 산업적으로 유리하며 효율적인 방법이다.
Claims (10)
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 배양하여 배지내에 D-판토산 또는 그의 염을 생성 축적시키고, D-판토산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어지는, D-판토산 또는 그의 염의 생성 방법.
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 β-알라닌의 존재하에서 배양하여 배지내에 D-판토텐산 또는 그의 염을 생성 축적시키고, D-판토텐산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어지는, D-판토텐산 또는 그의 염의 생성 방법.
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 배양하여 배지내에 D-판토산 또는 그의 염을 생성 축적시키고, D-판토산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어지는, D-판토산 또는 그의 염의 생성 방법.
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드로 형질전환된 미생물을 β-알라닌의 존재하에서 배양하여 배지내에 D-판토텐산 또는 그의 염을 생성 축적시키고, D-판토텐산 또는 그의 염을 수합하는 것으로 이루어지는, D-판토텐산 또는 그의 염의 생성 방법.
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 (a) 및 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드 (b) 로 형질전환되고, β-알라닌의 존재하에서 판토산을 생성하거나 또는 판토텐산을 생성할 수 있는 미생물.
- 제 5 항에 있어서, 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을이 ilvGM 유전자인 미생물.
- 제 5 항에 있어서, 에쉐리키아 콜리 FV 5069/pFV202 (FERM-BP 5227) 인 미생물.
- 판토텐산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분 및 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을 갖는 DNA 를 함유하는 플라스미드.
- 제 8 항에 있어서, 측쇄 아미노산 생합성 유전자 영역 또는 그의 일부분을이 ilvGM 유전자인 플라스미드.
- 제 8 항에 있어서, pFV202 인 플라스미드.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23506595 | 1995-09-13 | ||
| JP95-235065 | 1995-09-13 | ||
| PCT/JP1996/002585 WO1997010340A1 (en) | 1995-09-13 | 1996-09-11 | Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR19990044609A true KR19990044609A (ko) | 1999-06-25 |
| KR100421088B1 KR100421088B1 (ko) | 2004-06-04 |
Family
ID=16980558
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR19980701859A KR100421088B1 (ko) | 1995-09-13 | 1996-09-11 | 디-판토산및디-판토텐산또는그의염의생성방법 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5932457A (ko) |
| EP (1) | EP0859848B1 (ko) |
| KR (1) | KR100421088B1 (ko) |
| CN (1) | CN1142997C (ko) |
| AT (1) | ATE264392T1 (ko) |
| AU (1) | AU6943696A (ko) |
| DE (1) | DE69632199T2 (ko) |
| DK (1) | DK0859848T3 (ko) |
| SK (1) | SK30598A3 (ko) |
| WO (1) | WO1997010340A1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010029688A (ko) * | 1999-05-05 | 2001-04-06 | 데구사-휠스 악티엔게젤샤프트 | Ｄ-판토텐산 및/또는 이의 염을 함유하는 가축사료 첨가물및 이의 제조 방법 |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19855314A1 (de) * | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentiven Herstellung von D-Pantothensäure unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| DE19855313A1 (de) | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure durch Verstärkung des panD-Gens in Mikroorganismen |
| AU1798300A (en) | 1998-12-25 | 2000-07-31 | Fuji Chemical Industries, Ltd. | Method for producing calcium pantothenate |
| CA2385497A1 (en) | 1999-09-21 | 2001-03-29 | Basf Aktiengesellschaft | Methods and microorganisms for production of panto-compounds |
| US8232081B2 (en) * | 1999-09-21 | 2012-07-31 | Basf Se | Methods and microorganisms for production of panto-compounds |
| DE10021515A1 (de) * | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Degussa | Verfahren zur Herstellung von Erdalkalisalzen der D-Pantothensäure |
| DE10032349A1 (de) * | 2000-07-04 | 2002-01-17 | Degussa | Rieselfähige D-Pantothensäure und/oder deren Salze enthaltende Futtermittel-Additive und Verfahren zu deren Herstellung |
| RU2003111457A (ru) * | 2000-09-20 | 2004-12-10 | БАСФ Акциенгезельшафт (DE) | Кормовая добавка для животных, содержащая d-пантотеновую кислоту и/или ее соли, улучшенный способ ее получения и применение |
| AU2002246094A1 (en) | 2001-02-21 | 2002-09-04 | Basf Aktiengesellschaft | Method for producing D-pantothenic acid and/or salts thereof as an additive for animal feed |
| PL364087A1 (en) * | 2001-02-21 | 2004-12-13 | Basf Aktiengesellschaft | Method for the production of d-pantothenic acid and/or salts thereof as adjunct for animal feedstuffs |
| DE10108225A1 (de) | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| DE10112100A1 (de) * | 2001-03-14 | 2002-09-19 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| US6623944B2 (en) | 2001-03-14 | 2003-09-23 | Degussa Ag | Process for preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
| DE10132178A1 (de) | 2001-07-03 | 2003-01-23 | Degussa | Verfahren zur fermantativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| AU2002316940A1 (en) | 2001-07-07 | 2003-01-29 | Degussa Ag | Process for the preparation of d-pantothenic acid and/or salts thereof |
| AU2003251792A1 (en) | 2002-07-03 | 2004-01-23 | Basf Aktiengesellschaft | Microorganisms and processes for enhanced production of pantothenate |
| CN101448950B (zh) | 2006-05-16 | 2014-02-12 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于生产泛醇的工艺 |
| CN109705065B (zh) * | 2018-12-29 | 2022-10-14 | 上海应用技术大学 | 一种不对称催化合成d-(-)-泛解酸内酯的方法 |
| KR102389327B1 (ko) * | 2020-07-01 | 2022-04-20 | 씨제이제일제당 (주) | 3-메틸-2-옥소뷰타노에이트 하이드록시 메틸트랜스퍼라아제의 활성이 강화된 미생물, 및 이의 용도 |
| CN112592290B (zh) * | 2020-12-14 | 2023-08-11 | 广安摩珈生物科技有限公司 | 泛酸钙粗品纯化方法 |
| CN115595314A (zh) * | 2022-03-07 | 2023-01-13 | 中国科学院微生物研究所（Cn） | 表达天冬氨酸脱氢酶的工程菌及发酵生产维生素b5的方法 |
| KR20240115475A (ko) * | 2023-01-19 | 2024-07-26 | 씨제이제일제당 (주) | 고순도의 d-판토텐산 염을 높은 수율로 얻는 방법 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2748418B2 (ja) * | 1988-08-03 | 1998-05-06 | 味の素株式会社 | 組換えｄｎａ、該組換えｄｎａを有する微生物 |
| EP0493060A3 (en) * | 1990-12-25 | 1993-04-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production method of d-pantothenic acid and plasmids and microorganisms thereof |
| JP3710497B2 (ja) * | 1992-09-25 | 2005-10-26 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 |
-
1996
- 1996-09-11 EP EP96930354A patent/EP0859848B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-11 AT AT96930354T patent/ATE264392T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-09-11 DK DK96930354T patent/DK0859848T3/da active
- 1996-09-11 AU AU69436/96A patent/AU6943696A/en not_active Abandoned
- 1996-09-11 US US08/750,983 patent/US5932457A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-09-11 SK SK305-98A patent/SK30598A3/sk unknown
- 1996-09-11 CN CNB961981849A patent/CN1142997C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-09-11 KR KR19980701859A patent/KR100421088B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-09-11 DE DE69632199T patent/DE69632199T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-11 WO PCT/JP1996/002585 patent/WO1997010340A1/en active IP Right Grant
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010029688A (ko) * | 1999-05-05 | 2001-04-06 | 데구사-휠스 악티엔게젤샤프트 | Ｄ-판토텐산 및/또는 이의 염을 함유하는 가축사료 첨가물및 이의 제조 방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0859848A1 (en) | 1998-08-26 |
| KR100421088B1 (ko) | 2004-06-04 |
| WO1997010340A1 (en) | 1997-03-20 |
| AU6943696A (en) | 1997-04-01 |
| US5932457A (en) | 1999-08-03 |
| SK30598A3 (en) | 1999-01-11 |
| ATE264392T1 (de) | 2004-04-15 |
| CN1142997C (zh) | 2004-03-24 |
| DE69632199D1 (de) | 2004-05-19 |
| CN1201491A (zh) | 1998-12-09 |
| DE69632199T2 (de) | 2005-04-21 |
| DK0859848T3 (da) | 2004-08-09 |
| EP0859848B1 (en) | 2004-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100421088B1 (ko) | 디-판토산및디-판토텐산또는그의염의생성방법 | |
| KR100282278B1 (ko) | D-판토산 및 d-판토텐산의 제조방법 | |
| JP3109884B2 (ja) | Ｄ−パントテン酸の製造法 | |
| US7118898B1 (en) | Rhodococcus bacterium, nitrilase gene, nitrylhydratase gene and amidase gene from Rhondococcus bacterium, and process for producing carboxylic acids by using them | |
| RU2053300C1 (ru) | Штамм бактерий rhodococcus rhodochrous - продуцент нитрилгидратазы | |
| US6365381B2 (en) | Method for producing optically active compound | |
| US5374542A (en) | Process for producing 4-hydroxy-L-proline | |
| Yamamoto et al. | Purification and characterization of glutamine synthetase of Pseudomonas taetrolens Y-30: an enzyme usable for production of theanine by coupling with the alcoholic fermentation system of baker’s yeast | |
| US7098020B2 (en) | DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein, and method of producing optically active amino acid | |
| JP4300289B2 (ja) | 加水分解又は脱水縮合酵素、及び当該酵素の生産方法、並びに当該酵素を用いたアミドの合成方法 | |
| JP2840134B2 (ja) | 新規なアミノアシラーゼおよびその製造方法 | |
| JP4020991B2 (ja) | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 | |
| US5153123A (en) | Method for producing l-threonine, and plasmid and microorganism employed in the same | |
| Kato et al. | Enzymatic synthesis of l-β-chloroalanine using amino acid dehydrogenase | |
| CZ2000153A3 (cs) | Mikroorganismy rodu Amycolatopsis nebo Actinomadura, enzymy z nich získané a způsob výroby amidů | |
| MXPA00000440A (es) | Procedimiento para la preparacion de amidas | |
| JPS6143998B2 (ko) | ||
| JP5096911B2 (ja) | ５−置換ヒダントインラセマーゼ、これをコードするｄｎａ、組換えｄｎａ、形質転換された細胞、および、光学活性ｎ−カルバミルアミノ酸または光学活性アミノ酸の製造方法 | |
| US20010044141A1 (en) | Novel Rhodococcus bacterium, nitrilase gene, nitryl hydratase gene and amidase gene from Rhodococcus bacterium, and process for producing carboxylic acids using them | |
| JP3437879B2 (ja) | 細菌の培養法 | |
| JP4627039B2 (ja) | アミダーゼ活性を有するポリペプチド及びその遺伝子 | |
| FR2763599A1 (fr) | Procede de production d'acide l-aspartique |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0105 | International application |
Patent event date: 19980312 Patent event code: PA01051R01D Comment text: International Patent Application |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| A201 | Request for examination | ||
| PA0201 | Request for examination |
Patent event code: PA02012R01D Patent event date: 20010716 Comment text: Request for Examination of Application |
|
| N234 | Change of applicant [patent]: notification of change of applicant and registration of full transfer of right | ||
| PN2301 | Change of applicant |
Patent event date: 20010730 Comment text: Notification of Change of Applicant and Registration of Full Transfer of Right Patent event code: PN23012R02D |
|
| N234 | Change of applicant [patent]: notification of change of applicant and registration of full transfer of right | ||
| PN2301 | Change of applicant |
Patent event date: 20010905 Comment text: Notification of Change of Applicant and Registration of Full Transfer of Right Patent event code: PN23012R02D |
|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20030901 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20040106 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20040220 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20040220 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee | ||
| PC1903 | Unpaid annual fee |
Termination category: Default of registration fee Termination date: 20080110 |