SK30598A3 - Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof - Google Patents
Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof Download PDFInfo
- Publication number
- SK30598A3 SK30598A3 SK305-98A SK30598A SK30598A3 SK 30598 A3 SK30598 A3 SK 30598A3 SK 30598 A SK30598 A SK 30598A SK 30598 A3 SK30598 A3 SK 30598A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- acid
- pantothenic acid
- gene
- sphere
- pantoic
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo kyseliny D-pantoténovej, využíva schopnosť špecifického mikroorganizmu syntetizovať kyselinu D-pantoovú alebo kyselinu D-pantoténovú. Podľa tohto spôsobu je kyselina D-pantoová biosyntetizovaná z rozličných uhlíkových zdrojov, výhodne z glukózy, a akumuluje sa v kultivačnom médiu, alebo sa do kultivačného média pridáva β-alanín, ktorý kondenzuje biosyntetizovaná kyselinu D-pantoovú na kyselinu D-pantoténovú, ktorá sa potom akumuluje v médiu.
?(/ V
Spôsob výroby kyseliny D-pantoovej a kyseliny D-pantoténovej alebo ich soli
Oblasť vynálezu
Vynález sa týka nového spôsobu výroby kyseliny D-pantoovej a/alebo kyseliny D-pantoténovej alebo ich soli.
Kyselina pantoténová je užitočná D-pantoová je užitočná ako dôležitý kyseliny pantoténovej alebo CoA.
ako vitamín a kyselina sprostredkovateľ na výrobu
Doterajší stav techniky
Kyselina D-pantoténová je užitočná ako vitamín. Predchádzajúce procesy tvorby výroby kyseliny D-pantoténovej zahŕňajú (1) spôsob, ktorý zahŕňa opticky sa rozkladajúci DL-pantolaktón a chemickú kondenzáciu vzniknutého D-pantolaktónu s β-alanínom alebo ich solí v metanole, (2) spôsob, ktorý zahŕňa hydrolýzu esteru kyseliny D-pantoténovej s mikroorganizmom alebo enzýmom na získanie kyseliny D-pantoténovej, alebo selektívnu hydrolýzu len D-izoméru esteru kyseliny DL-pantoténovej na získanie kyseliny D-pantoténovej (JP-A 1-228487, JP-A 1-228488), (3) spôsob, ktorý zahŕňa kontaktovanie draselnej soli kyseliny D-pantoovej, β-alanínu a ATP so zvyšnými bunkami mikroorganizmu alebo enzýmu v trojitom pufri (Journal of Biological Chemistry, Vol.198, p.23 (1952), Abstracts of Papers 176th American Chemical Society National Meeting, Division of Microbial and Biochemical Technology, Vol.48 (1978), atď.), (4) spôsob, ktorý zahŕňa pestovanie špecifických mikroorganizmov za prítomnosti kyseliny DL-pantoovej a β-alanínu na získanie kyseliny D-pantoténovej (JP-A 5-23191) a (5) spôsob, ktorý zahŕňa pestovanie špecifických mikroorganizmov za prítomnosti β-alanínu na získanie kyseliny D-pantoténovej (JP-A 6-261772).
Spôsoby výroby kyseliny D-pantoovej a/alebo D-pantolaktónu zahŕňajú (6) spôsob, ktorý zahŕňa opticky sa rozkladajúci chemicky syntetizovaný DL-pantolaktón s rozlišovacím prostriedkom, ako je chinín a brucín, (7) spôsob, mikroorganizmom na získanie (10) spôsob, ktorý zahŕňa hydrolýzu L-pantolaktónu mikroorganizmom na získanie
JP-A 62-294092) , a asymetrickú so špecifickým mikroorganizmom (JP-B 3-65198), a (12) spôsob, na (11) spôsob, hydrolýzu včítane jej soli) komplikované kroky na ktorý zahŕňa rozkladanie len L-pantolaktónu v DL-pantolaktóne so špecifickým mikroorganizmom na získanie len D-pantolaktónu, (8) spôsob, ktorý zahŕňa oxidáciu len L-pantolaktónu v DL-pantolaktóne so špecifickým mikroorganizmom na získanie ketopantolaktónu, ktorý je potom asymetricky redukovaný na D-pantolaktón (JP-A 47-19745), (9) spôsob, ktorý zahŕňa asymetrické redukovanie chemicky syntetizovaného ketopantolaktónu so špecifickým
D-pantolaktónu (JP-B 61-14797), selektívnu a asymetrickú v DL-pantolaktóne so špecifickým D-pantolaktónu (JP-A 57-152895 a ktorý zahŕňa selektívnu
D-pantolaktónu v DL-pantolaktóne na získanie kyseliny D-pantoovej ktorý zahŕňa pestovanie špecifického mikroorganizmu biosyntézu kyseliny D-pantoovej z glukózy (JP-A 6-261772).
V priemyselnej výrobe kyseliny D-pantoténovej (ďalej spomenutý spôsob (1) nevyžaduje len syntézu hlavnej suroviny DL-pantolaktónu, ale obsahuje aj komplikované a náročné kroky optického rozkladu. Spomenutý spôsob (2) nevýhodne potrebuje krok na výrobu esteru kyseliny D-pantoténovej alebo esteru kyseliny DL-pantoténovej z DL-pantolaktónu. Spomenutý spôsob (3) nevýhodne používa drahú ATP a trojitý pufer, pričom ide o nepraktický spôsob, lebo produkuje len minimálne množstvo kyseliny pantoténovej z drahého počiatočného materiálu - kyseliny D-pantoovej. Spomenutý spôsob (4) je jednoduchší ako ostatné spôsoby, ale požaduje kroky na produkciu kyseliny DL-pantoovej a racemizáciu. Spomenutý spôsob (5) je jednoduchší ako spomenutý spôsob (4). Avšak činnosť valínovej biosyntetickej cesty, nachádzajúcej sa proti prúdu biosyntetickej cesty kyseliny pantoténovej, zmizne v neskorom štádiu pestovania a kroky produkcie kyseliny pantoténovej sa zastavia s vyčerpaním valínu. Produkcia je týmto obmedzená.
Väčšina spôsobov výroby kyseliny D-pantoovej a/alebo D-pantolaktónu nevýhodne používa ako počiatočný materiál DL-pantolaktón, ktorý musí byť syntetizovaný komplikovanými krokmi. Okrem toho spomenutý spôsob (6) nevýhodne používa drahý rozlišovací prostriedok a spôsobuje ťažkosti pri regenerovaní
D-pantolaktónu. Spomenutý spôsob (7) je nevýhodný, lebo polovica DL-pantolaktónu sa stratí. Spomenuté spôsoby (8), (9), (10) a (11) majú velké problémy s produkciou len D-izoméru v 100% optickom výťažku v živnom roztoku kvôli vlastnostiam mikroorganizmu, ktorý sa používa, a vlastnostiam pantolaktónu alebo kyseliny pantoovej. Okrem toho, spomenuté spôsoby (6), (10) a (11) vyžadujú dodatočné komplikované kroky na získanie a recyklovanie zostávajúceho L-izoméru. Produkcia kyseliny D-pantoovej v spomenutom spôsobe (12) závisí od aktivity valínovej biosyntézy, ako pri spomenutom procese výroby kyseliny pantoténovej (5).
Podstata vynálezu
Súčasní vynálezcovia intenzívne študovali, aby získali priemyselne výhodný a účinný spôsob na výrobu kyseliny D-pantoténovej. Ako výsledok, v spôsobe, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu v pestovacom médiu obsahujúcom β-alanín na výrobu kyseliny D-pantoténovej, bolo zistené, že bakteriálny kmeň transformovaný plazmidom, ktorý obsahuje gén na rozvetvujúcu sa aminokyselinovú biosyntézu, môže vyrábať kyselinu D-pantoténovú alebo kyselinu D-pantoovú (a/alebo D-pantolaktón) v pestovacom médiu vo vyšších koncentráciách. Zavedenie plazmidu zvyšuje činnosť valínovej biosyntézy v skorom štádiu pestovania a udržiava zvýšenú aktivitu počas stredných a neskorých štádií. Výroba kyseliny pantoténovej takto pokračuje dlhšie a konečná akumulácia produktu je zvýšená.
Tento vynález poskytuje spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génové sféry biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo ich časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoovej alebo jej soli v médiu a zbieranie kyseliny D-pantoovej alebo jej soli.
Tento vynález taktiež poskytuje spôsob výroby kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, za prítomnosti β-alanínu na výrobu a akumuláciu kyseliny
D-pantoténovej alebo jej soli v médiu a zbieranie kyseliny
D-pantoténovej alebo jej soli.
Tento vynález ďalej poskytuje spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť a plazmid obsahujúci DNA, ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoovej alebo jej soli v médiu a zbieranie kyseliny D-pantoovej alebo jej soli.
Tento vynález ďalej poskytuje spôsob výroby kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť a plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, za prítomnosti β-alanínu na výrobu a akumuláciu kyseliny D-jpantoténovej alebo jej soli v médiu a zbieranie kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli.
Okrem toho tento vynález poskytuje mikroorganizmus, ktorý je transformovaný (a) plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, alebo (b) plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, a ktorý môže vyrábať kyselinu pantoovú alebo vyrábať kyselinu pantoténovú za prítomnosti β-alanínu.
Mikroorganizmom je prednostne Escherichia coli FV 5069/pFV202 (FERM BP-5227).
Okrem toho tento vynález poskytuje plazmid obsahujúci DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo j ej časť.
Plazmidom je prednostne pFV202.
V tomto vynáleze rozvetvenou génovou sférou aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časťou je; prednostne ilvGM gén.
Tento vynález môže zvýšiť výrobu valínu, ktorá je problematická v spomenutom spôsobe (5) a (12), a tým akumulovať vyššie koncentrácie kyseliny pantoténovej.
Prehľad obrázkov na výkrese
Obr.l znázorňuje reštrikčnú mapu 4.7 kb fragmentu DNA, do ktorého bolo vložené pFV 202.
Príklady uskutočnenia vynálezu
V tomto vynáleze kyselina D-pantoová, kyselina D-pantoténová a β-alanín môžu byť vo formách ich solí. Termíny kyselina D-pantoová, kyselina D-pantoténová a β-alanín, používané v tomto vynáleze, obsahujú ich soli, ako aj ich voľné formy. Príklady solí kyseliny D-pantoténovej, kyseliny D-pantoovej a β-alanínu obsahujú soli s alkalickými kovmi a kovmi alkalických zemín. V každom prípade sa uprednostňujú vápenatá soľ, sodná soľ alebo draselná soľ.
Súčasní vynálezcovia študovali vývoj výhodného a ekonomického spôsobu výroby kyseliny D-pantoovej z uhlíkových zdrojov, ako sú sacharidy, s mikroorganizmom, ktorý patrí druhu výsledok bolo objavené, že bakteriálny vyrábať väčšie množstvo kyseliny D-pantoovej, je zahrnutý v mikroorganizmoch, ktoré sú spracované rekombinančnou DNA technikou s cieľom zvýšiť nielen ich cestu biosyntézy kyseliny pantoténovej, ale aj ich cestu valínovej biosyntézy, ktorá je umiestnená proti prúdu. Ďalej bolo zistené, že veľké množstvo môže vyrobiť v pestovacom uhlíkové zdroje. To znamená, že spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo kyseliny D-pantoténovej tohto vynálezu využíva schopnosť organizmu syntetizovať kyselinu D-pantoovú alebo kyselinu D-pantoténovú. Tým je (a) kyselina D-pantoová priamou fermentáciou Escherichia, atď. Ako kmeň, ktorý je schopný kyseliny D-pantoténovej sa mikroorganizmu s β-alanínom kontaktom takého médiu obsahujúcom biosyntetizovaná z rozličných uhlíkových zdrojov, ako je glukóza, na jej akumulovanie v pestovacom médiu, alebo (b) β-alanín je kontaktovaný s mikroorganizmom, napríklad pridaním β-alanínu do pestovacieho média, aby zapríčinil kondenzáciu biosyntetizovanej kyseliny D-pantoovej s β-alanínom, s cieľom akumulovať kyselinu D-pantoténovú v médiu. Takto môže spôsob tohto vynálezu vyrábať viac vyšších koncentrácií kyseliny D-pantoovej a kyseliny D-pantoténovej zvyšovaním činnosti nielen cesty biosyntézy kyseliny D-pantoténovej, ale aj cesty valínovej biosyntézy, ktorá je umiestnená proti jej prúdu, rekombinačnou DNA technikou.
Mikroorganizmy používané v tomto vynáleze zahŕňajú mikroorganizmy, ktoré môžu vyrábať kyselinu D-pantoténovú za prítomnosti β-alanínu, a mikroorganizmy, ktoré môžu vyrábať kyselinu D-pantoovú. Na praktické použitie mikroorganizmami sú prednostne mikroorganizmy patriace do rodiny Enterobacteriaceae. ako sú mikroorganizmy patriace do druhu Citrobacter. Shigella. Klebsiella, Enterobacter, Salmonella a Escherichia. Preferovanejšie príklady mikroorganizmov zahŕňajú bakteriálne kmene patriace do druhu Escherichia. ako známe kmene Escherichia coli, spomenuté v List of Cultures, 8th ed., 1988 (Inštitúte for Fermentation, Osaka, Japan) (napr. Escherichia coli IFO 3547) a kmene z nich odvodené. Príklady odvodených kmeňov zahŕňajú kmeň Escherichia coli FV 5069 získaný poskytnutím Escherichia coli IFO 3547 s odolnosťou kyseliny salicylovej, odolnosťou kyseliny α-ketoizovalérovej, odolnosťou kyseliny β-hydroxyasparágovej a odolnosťou o-metyltreonínu, kmeň Escherichia coli FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227) získaný transformovaním kmeňa Escherichia coli FV 5069 plazmidom pFV 202, obsahujúcim génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť.
Génový fragment obsahujúci rozvetvený gén aminokyselinovej biosyntézy sa môže pripraviť známymi spôsobmi opísanými napríklad v H. Saito a K. Miura, Biochim. Biophys. Acta, alebo ich modifikovanými spôsobmi. Napríklad chromozómová DNA je odvodená z donorových buniek a potom rozštiepená reštrikčným enzýmom HindlII. Fragment takto získanej chromozómovej DNA je potom vložený do vektora DNA. Vektor DNA, ktorý je použitý v tomto vynáleze, je vhodne vybraný z vektora DNA, ktorý môže rásť v hosťujúcich bunkách. Vektor DNA, ktorý môže rásť v hosťujúcich bunkách, obsahuje napríklad pSCIOl (Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 70, 3240 (1973)) a pUC18 (Gene, 33, 103 (1985)). Tieto vektory DNA nie sú špecificky obmedzené a tie, ktoré sú nanovo izolované alebo syntetizované, sa môžu použiť, pokiaľ môžu dosiahnuť cieľ tohto vynálezu. Génový fragment môže byť vložený do týchto plazmidových vektorov známymi spôsobmi opísanými napríklad v T. Maniatis et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Todai Shuppankai (1982)), atď., alebo ich modifikovanými spôsobmi. Plazmid, do ktorého bol vložený génový fragment, sa môže zaviesť do hosťujúcich buniek známymi transformačnými spôsobmi opísanými napríklad v J. Mol. Biol., 53, 159 (1972), atď., alebo ich modifikovanými spôsobmi. Príklady hosťujúcich buniek zahŕňajú známe bakteriálne kmene, ako kmeň Escherichia coli JM109 (J. Mol. Biol., 166 (1983).
Kmeň, do ktorého je zavedený plazmid obsahujúci rozvetvený gén aminokyselinovej biosyntézy, môže byť vybraný z transformovaných kmeňov napríklad technikou hybridizácie kolón atď., používajúc časť génovej postupnosti syntázy acetohydroxykyseliny kmeňa E.coli K-12 ako sondu. Takto získaný plazmid DNA, obsahujúci rozvetvený gén aminokyselinovej biosyntézy, môže byť vybraný z jeho hosťujúceho kmeňa a zavedený do iných hosťujúcich buniek. Fragment DNA, obsahujúci rozvetvený gén aminokyselinovej biosyntézy, môže byť alternatívne pripravený z vybraného plazmidu DNA a potom pripojený k iným vektorom.
Príklady takto získaných transformovaných kmeňov obsahujú kmeň Escherichia coli FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227, IFO 15857). pFV 202 je plazmid obsahujúci gén biosyntézy kyseliny pantoténovej odvodený z kmeňa Escherichia coli FV 5069 (izozým II gén syntázy acetohydroxykyseliny). Kmeň Escherichia coli FV 525 a rozvetvený gén aminokyselinovej biosyntézy odvodený z kmeňa Escherichia coli FV 5069 (izozým II gén syntázy acetohydroxykyseliny). Kmeň Escherichia coli FV 5069/pFV 202 (FERM BP-5227) je kmeň získaný zavedením pFV 202 do kmeňa Escherichia coli FV 5069. IFO čísla, používané v tomto vynáleze, sú prístupové čísla pre Inštitúte for Fermentation, Osaka (IFO) (17-5 Juso-honmachi 2-chome, Yôdôgawa-ku, Osaka-shi, Japan) a očíslované FERM BP, používané v tomto vynáleze, sú prístupové čísla pre National Inštitúte of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology (NIBH) (1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan) pod Budapest Treaty. Osobitne Escherichia coll FV 5069/pFV 202 bola vložená v NIBH pod prístupovým číslom FERM BP-5227 pod Budapest Treaty od 7.9.1995.
Takto získané kmene baktérií môžu byť pestované buď postupne alebo s odstupom konvenčnými metódami, ako potriasacie pestovanie (napríklad potriasacie pestovanie v rotačnom šejkri), stojatým pestovaním a prevzdušneným a potriasacím pestovaním. Pestovacie médium, ktoré sa používa, môže mať konvenčnú formuláciu, v ktorej používaný mikroorganizmus môže rásť. Uhlíkové zdroje môžu byť primerane vybraté z prispôsobujúcich sa uhlíkových zdrojov, ako sú karbohydráty, oleje a tuky, mastné kyseliny, organické kyseliny a alkoholy, ktoré sa používajú samostatne, alebo ako ich zmes. Dusíkové zdroje zahŕňajú napríklad organické dusíkové zdroje, ako peptón, múku zo sójových bôbov, bavlnenú múku, kukuričný extrakt, kvasnicový extrakt, mäsový extrakt, sladový extrakt a močovinu a anorganické dusíkové zdroje, ako síran amónny, chlorid amónny, dusičnan amónny a fosforečnan amónny. Tieto dusíkové zdroje sa môžu používať samostatne alebo ako ich zmesi. Je výhodné, ak sa dihydrofosforečnan draselný alebo hydrofosforečnan dvojdraselný používa ako fosforečný zdroj. Médium môže obsahovať kovové soli potrebné pre rast (napríklad síran horečnatý), základné faktory rastu alebo substancie podporujúce rast, ako aminokyseliny okrem uhlíkových zdrojov aj dusíkové zdroje zdroje. Na kontrolovanie pH počas pestovania sa dodať základné substancie, ako hydroxid sodný, hydroxid draselný, amoniak, uhličitan vápenatý, atď. Dodanie odpeňovacieho prostriedku je tiež účinné na kontrolovanie penenia. Tieto substancie sa môžu vhodne dodať počas pestovania. Na udržanie aerobných podmienok je účinné uskutočňovať vetranie obohatené kyslíkom. Teplota pestovania je normálne od 15 °C do 45 °C, prednostne od 25 °C do 40 °C. V pestovaní sa pokračuje pokiaľ sa nedosiahne maximálna akumulácia kyseliny pantoténovej a/alebo kyseliny pantoovej. Normálne sa tento cieľ môže a vitamíny, a fosforečné môžu vhodne dosiahnuť periódou pestovania od 6 hodín do 120 hodín. Vo výrobe kyseliny D-pantoténovej podlá tohto vynálezu, surovina β-alanín sa môže kontaktovať s bakteriálnymi bunkami dodaním suroviny pred pestovaním bakteriálnych kmeňov, alebo vo vhodnom štádiu počas pestovania, alebo pridaním suroviny spracovaným bakteriálnym bunkám. Spracované bakteriálne bunky znamenajú opláchnuté bakteriálne bunky pestovania získané pestovaním baktérií, acetónom vysušené bakteriálne bunky, bakteriálne bunky imobilizované polyakrylamidovým gélom alebo k-karagénanom, atď. Suroviny sa môžu pridať v jednej dávke, alebo počas vhodnej periódy postupne alebo v časových intervaloch, ako roztok alebo suspenzia, vo vhodnom rozpúšťadle, ako je voda alebo prášok.
Koncentrácia β-alanínu, ktorý je pridaný do média, kolíše podlá produktivity mikroorganizmov. Z ekonomického pohľadu je koncentrácia β-alanínu prednostne od 0.1 do 6 w/v%, alebo aešte lepšie od 0.5 do 4 w/v%.
Kyselina D-pantoténová alebo jej sol môžu byť izolované zo spomenutého pestovania alebo reakčnej zmesi konvenčnými metódami. Napríklad po odstránení bakteriálnych buniek z pestovania, sa na zvyšok použije známa izolačná technika, ako napríklad iónomeničová chromatografia, adsorpcia aktivovaného dreveného uhlia, syntetických adsorbentov, atď., koncentrácia a kryštalizácia na izolovanie kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli. Tieto techniky môžu byť použité samostatne alebo v kombinácii. Kryštalizácia podľa JP-B 40-2330 je priemyselne výhodná, lebo môže vyrábať jednoducho filtrovateľné kryštály s veľkým výnosom. Podľa tejto kryštalizačnej metódy rozpustený hydrát obsahujúci 4 moly metanolu a 1 mol vody na mol pantotenátu vápenatého (pantotenát vápenatý * 4 MeOH * IH2O) sa získa ako zrazené kryštály. Sušenie výsledných kryštálov odstraňuje metanol a vodu z kryštálov na získanie pantotenátu vápenatého (M. Inagaki et al., Chem. Pharm. Bull., 24, 3097-3102 (1976)).
Napríklad D-pantotenát vápenatý môže: byť izolovaný z pestovania, ako je ďalej opísané. Pestovanie, z ktorého boli bakteriálne bunky premiestnené, prechádza cez stĺpec obalený v katexovej živici (napríklad Diaion PK-216 (H-forma), PK-228 (H-forma), vyrobenej v Mitsubishi Chemical Corporation) na premiestnenie katiónov a potom prechádza cez stĺpec obalený v anexovej živici (napríklad PA-412 (OH-forma), VA-30 (OH-forma), vyrobenej v Mitsubishi Chemical Corporation) na premiestnenie anorganických aniónov a organických kyselín, ktoré majú väčšiu kyslosť ako kyselina pantoténová. Hydroxid vápenatý je pridaný do eluátu (pH okolo 2.6), ktorý obsahuje volnú kyselinu pantoténovú na prispôsobenie pH na okolo 5.0 a potom je zmes koncentrovaná na koncentráciu kyseliny pantoténovej okolo 25 w/v%. Potom je hydroxid vápenatý pridaný do koncentrátu na prispôsobenie pH na okolo 7.0 a aktivované hnedé uhlie (napríklad Shirasagi A vyrobené v Takeda Chemical Industries, Ltd.) je pridané na odfarbenie. Po tom, čo sa aktivované hnedé uhlie presunie filtráciou, filtrát sa koncentruje na koncentráciu pantotenátu vápenatého, s okolo 45 % do 55 % (w/w). Následne sa primerané množstvo metanolu pridá na prispôsobenie vodného obsahu v roztoku na 5 % až 15 %. Potom sa roztok ochladí na okolo 2 °C a zárodočné kryštály sa pridajú do zrazených kryštálov rozpusteného hydrátu pantotenátu vápenatého. Kryštály sa zbierajú a sušia na získanie velmi čistej kyseliny D-pantoténovej vo velkom výnose.
Príklady:
Nasledujúce príklady ďalej detailne ilustrujú tento vynález, ale neslúžia na obmedzenie jeho oblasti použitia.
Kyselina D-pantoténová bola determinovaná vysokým výkonom kvapalinovej chromatografie (stĺpec : Shimadzu SCR101H (7.9 mm I.D. * 30 cm), pohyblivá fáza :0.008N kyselina sírová, rýchlosť toku: 0.8 ml/min, objavenie : diferenčný refraktometer) a/alebo bioskúškou (testovacia baktéria : Lactobacillus plantarum IFO 3070, médium : komerčne prístupné médium na kvantifikovanie kyseliny pantoténovej (vyrobené v DIFCO)). Valin v pestovaní bol určený vysokým výkonom kvapalinovej chromatografie (stĺpec : Mitsubishi Chemical Corporation MCI GEL CRS 10V (4.6 mm I.D.* cm), pohyblivá fáza : lmM-CuSO^/CH^CN = 7/1, rýchlosť toku :
0.7 ml/min, objavenie : UV fotometer).
Príklad 1 (1) Príprava chromozómovej DNA
Escherichia coli FV5069 bola naočkovaná do L média (1 liter) ( baktotryptón 10 %, kvasnicový extrakt 0.5 %, chlorid sodný 0.5 %) a inkubované na teplote 37 °C cez noc. Z výsledných bakteriálnych buniek bola získaná chromozómová DNA (konečný výnos : 3.3 mg) metódou od Saito et al. (Biochim. Biophys. Acta., 72, 619, (1963)) používajúc fenol.
(2) Vkladanie chromozómovej DNA do vektorového plazmidu pUC18
Každá chromozómová DNA (10 gg), získaná v spomenutom (1) a pUC18 (vyrobené v Nippon Gene), bola rozštiepená reštrikčným enzýmom HindlII (vyrobený v Nippon Gene) a výsledné DNA fragmenty boli zmixované a spojené s DNA ligázou odvodenou z T4 fázy (Nippon Gene).
(3) Výber plazmidu DNA, do ktorého bol vložený fragment chromozómovej DNA
Kmeň Escherichia coli JM109 bol transformovaný zmesou rozličných plazmidov získaných v spomenutom (2) kompetentnou bunkovou metódou. Potom suspenzia obsahujúca tento transformant bola nanesená na L agarové doskové médium obsahujúce ampicilínovú sodnú soľ (50 gg/ml), gg/ml) a inkubované na teplote výsledných kolón boli vybrané ako s plazmidom DNA, obsahujúce fragment chromozómovej DNA.
(4) Príprava sond
Okolo 600 bp postupnosti kmeňa Escherichia coli K-12 ilvG gén určený v Rother et al. (gén veľkej podjednotky izozýmu II syntázy acetohydroxykyseliny, Nucleic Acids Research, 2137, 15 (1987)) bol rozšírený PCR metódou. Rozšírené gény boli označené q n s P náhodne vybraným základným spôsobom a používané ako sondy.
(5) Klonovanie izozýmu II génu syntázy acetohydroxykyseliny
Nylonová mambrána bola umiestnená na L agarovom doskovom médiu obsahujúcom ampicillin sodium (50 gg/ml), opatrenom bielou kolónou získanou v spomenutom (3) a inkubovanom na 37 °C cez
IPTG (0.5 mM) a X-gal (100 37 °C cez noc. Spomedzi transformanty biele kolóny noc. Membrána neutrálizovaná vnútrobunkovej bola spracovaná hydroxidom alkalického kovu, a pečená na 80 °C 2 hodiny, na zafixovanie DNA na membráne. Používaním sondy v spomenutom (4) bola membrána predmetom hybridizácie na získanie jedného kmeňa kolóny vydávajúcej očividne silnejší signál ako ostatné.
(6) Potvrdenie južnou hybridizáciou
Plazmid (10 gg) bol vybratý zo spomenutej kolóny, rozštiepený s HindlII a podrobený elektroforéze. Vložený fragment bol analyzovaný južnou hybridizáciou. Výsledky ukázali, že tento fragment bol 4.7 kb dlhý ( fragment HindlII obsahujúci izozým II gén syntázy acetohydroxykyseliny K-12 je tiež 4.7 kb dlhý) a silno hybridizovaný sondami získanými v spomenutom (4).
(7) Konštrukcia expresívneho plazmidu
Po tom, čo spomenutý 4.7 kb vložený fragment bol vložený do polohy HindlII plazmidového vektora pMV 118, 2.5 kb Escherichia coli FV525 gén biosyntézy kyseliny pantoténovej bol vložený do EcoRI polohy. Výsledný plazmid bol označený ako pFV202. Kmeň FV5069 vyrábajúci kyselinu pantoténovú bol transformovaný týmto plazmidom a výsledný transformant bol označený FV5069/pFV202. Činnosť izozýmu II syntázy acetohydroxykyseliny tohto transformantu bola porovnaná s FV5069/pFV31 transformovaným s pFV31, do ktorého bol vložený len gén biosyntézy kyseliny pantoténovej a s materským (hosťujúcim) kmeňom FV5069, ktorý nebol transformovaný.
(8) Určenie činnosti transformantu syntázy acetohydroxykyseliny
Testovacie baktérie boli inkubované vo výrobnom médiu (A) na okolo 48 hodín a lyzát bol pripravený z baktérii sonikáciou. Lyzát bol odstredený na 20,000 otáčok za minútu počas 1 hodiny na získanie supernatantu. Podľa metódy Jackson et al. (Methods Enzymol. 1988), výsledná kyselina acetomliečna bola konvertovaná na acetoín používajúci supernatant ako surový enzýmový roztok. Výsledný acetoín bol zafarbený 2-naftolom a kvántifikovaný na vlnovej dĺžke 530 nm.
Výsledky sú znázornené v tabuľke 1.
Ako je vidno z tabuľky 1, 4.7 kb HindlII fragment vložený do pFV202 obsahuje ilvGM gén, ktorý zakóduje izozým II syntázy acetohydroxykyseliny.
Tabuľka 1
| Bakteriálny kmeň | Špecifická aktivita (pmol/min.mil) |
| FV5069 | 38.2 |
| FV5069/pFV31 | 35.7 |
| FV5069/pFV202 | 108.9 |
(9) Reštrikčná mapa 4.7 kb fragmentu obsahujúceho ilvGM
4.7 kb DNA fragment vložený do pFV202 obsahuje jednu PstI polohu, jednu Sali polohu a jednu PvuII polohu. Obr.1 znázorňuje reštrikčnú mapu fragmentu.
Príklad 2
Kvapalinové médium, ktorého zloženie je znázornené v tabuľke 2, bolo sterilizované ohriatím na teplotu 121 °C na 15 minút v autokláve a rozdelené na 20 ml porcie do 200 ml Erlenmeyerových fliaš. V médiu bolo jedno platinové očko každého kmeňa Escherichia coli FV5069/pFV2Ô2 (FERM BP-5227) a kmeň FV5069/pFV31 (FERM BP-4395), získané zo skloneného média v spomenutom (7) Príkladu 1, naočkované a inkubované na 30 °C počas 20 hodín v rotačnom šejkri na 220 otáčok za min. Inokulačná kultúra (1 ml) bola prenesená do média (20 ml), ktoré má zloženie znázornené v tabulke 2, a inkubovaná s trasením pri 38 °C počas 72 hodín v 200 ml ryhovanej Erlenmeyerovej fľaši. Počas inkubácie boli pridané rozličné substancie, ako je znázornené v tabulke 3. Tabulka 4 znázorňuje množstvo vyprodukovanej kyseliny pantoténovej (PaA) a množstvo valínu (Val) na konci pestovania.
Tabuľka 2
Zloženie média :
semenné médium :
| CSL | 0.5 % |
| (nh4)2so4 | 0.5 % |
| MgSO4*7H2O | 0.001 % |
| kh2po4 | 0.01 % |
| k2hpo4 | 0.01 % |
| tiamín hydrochlorid | 2 pg/ml |
| glukóza | 5 % |
| CaC03 | 2 % |
| PH | 7.0 |
| Hlavné médium : | |
| CSL | 2 % |
| (nh4)2so4 | 1.25 % |
| MgSO4*7H2O | 0.00 2% |
| kh2po4 | 0.01 % |
| β-alanín | 1 % |
| tiamín hydrochlorid | 0.5 pg/ml |
| glukóza | 9 % |
| CaCOj | 4 % |
pH 7.0
Tabuľka 3
Pridanie rozličných substancií
| Čas | i pestovania | glukóza | tiamín hydrochlorid | (NH4)2SO4 | β-alanín |
| 17 | hodín | 6 % | 0.5 pg/ml | 1 % | |
| 24 | hodín | 6 % | 0.5 pg/ml | 0.75 % | 0.5 % |
| 41 | hodín | 4 % | 0.5 pg/ml | 0.5 % | |
| 50 | hodín | 5 % | 0.5 pg/ml |
Tabuľka 4
Výsledky pestovania
Čas pestovania FV5069/pFV31 FV5069/pFV202
| PaA | Val | PaA | Val | |
| 24 hodín | 38.7 g/L | 2.1 g/L | 29.9 g/L | 5.2 g/L |
| 48 hodín | 52.5 g/L | 1.1 g/L | 60.1 g/L | 2.7 g/L |
| 72 hodín | 51.8 g/L | 0-9 g/L | 66.0 g/L | 1.3 g/L |
Ako je opísané vyššie, proces tohto vynálezu môže zvýšiť činnosť cesty valínovej biosyntézy umiestnenej proti prúdu ciest biosyntézy kyseliny pantoovej a kyseliny pantoténovej, aby sa zvýšila valínová produktivita a môže vyrobiť vyššie koncentrácie kyseliny pantoovej a kyseliny pantoténovej. Takto je spôsob tohto vynálezu priemyselne výhodný a efektívny.
(/
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (10)
1. Spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoovej alebo jej soli v médiu, a na zbieranie kyseliny D-pantoovej alebo jej soli.
i '*
2. Spôsob výroby kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli,
W >
ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, za prítomnosti β-alanínu na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli v médiu, a zbieranie kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli .
3. Spôsob výroby kyseliny D-pantoovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného
4 plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a plazmid obsahujúci DNA, * ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy, alebo jej časť, na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoovej alebo jej soli v médiu, a zbieranie kyseliny D-pantoovej alebo jej soli.
4. Spôsob výroby kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli, ktorý zahŕňa pestovanie mikroorganizmu transformovaného plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a plazmid obsahujúci DNA, ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť za prítomnosti β-alanínu, na výrobu a akumuláciu kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli v médiu, a zbieranie kyseliny D-pantoténovej alebo jej soli.
k
5. Mikroorganizmus, ktorý jé transformovaný (a) plazmidom obsahujúcim DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, alebo (b) plazmid obsahujúci DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a plazmid obsahujci DNA, ktorá má rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť, a ktorý môže vyrábať kyselinu pantoovú alebo vyrábať kyselinu pantoténovú za prítomnosti β-alanínu.
6. Mikroorganizmus podlá nároku 5, kde rozvetvená génová sféra aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť je ilvGM gén.
<1 4
7. Mikroorganizmom je podľa nároku 5 Escherichia coli FV •Ť “ ” 5069/pFV202 (FERM-BP 5227).
8. Plazmid obsahujúci DNA, ktorá má génovú sféru biosyntézy kyseliny pantoténovej alebo jej časť, a rozvetvenú génovú sféru aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť.
9. Plazmid podľa nároku 8, kde rozvetvená génová sféra aminokyselinovej biosyntézy alebo jej časť je ilvGM gén.
10. Plazmid podľa nároku 8, ktorým je pFV202.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23506595 | 1995-09-13 | ||
| PCT/JP1996/002585 WO1997010340A1 (en) | 1995-09-13 | 1996-09-11 | Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK30598A3 true SK30598A3 (en) | 1999-01-11 |
Family
ID=16980558
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK305-98A SK30598A3 (en) | 1995-09-13 | 1996-09-11 | Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5932457A (sk) |
| EP (1) | EP0859848B1 (sk) |
| KR (1) | KR100421088B1 (sk) |
| CN (1) | CN1142997C (sk) |
| AT (1) | ATE264392T1 (sk) |
| AU (1) | AU6943696A (sk) |
| DE (1) | DE69632199T2 (sk) |
| DK (1) | DK0859848T3 (sk) |
| SK (1) | SK30598A3 (sk) |
| WO (1) | WO1997010340A1 (sk) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19855313A1 (de) | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure durch Verstärkung des panD-Gens in Mikroorganismen |
| DE19855314A1 (de) * | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentiven Herstellung von D-Pantothensäure unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| BR9917116A (pt) | 1998-12-25 | 2001-11-20 | Fuji Chemical Ind Ltd | Método de preparação de pantotenato de cálcio |
| PT1050219E (pt) * | 1999-05-05 | 2003-04-30 | Degussa | Aditivos alimentares para animais contendo acido d-pantotenico e/ou seus sais e processo para a sua preparacao |
| PL356566A1 (en) | 1999-09-21 | 2004-06-28 | Basf Aktiengesellschaft | Methods and microorganisms for production of panto-compounds |
| US8232081B2 (en) * | 1999-09-21 | 2012-07-31 | Basf Se | Methods and microorganisms for production of panto-compounds |
| DE10021515A1 (de) * | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Degussa | Verfahren zur Herstellung von Erdalkalisalzen der D-Pantothensäure |
| DE10032349A1 (de) | 2000-07-04 | 2002-01-17 | Degussa | Rieselfähige D-Pantothensäure und/oder deren Salze enthaltende Futtermittel-Additive und Verfahren zu deren Herstellung |
| MXPA03002345A (es) * | 2000-09-20 | 2003-06-30 | Basf Ag | Suplemento alimenticio para animales que contiene acido d-pantotenico y/o sus sales, metodo mejorado para la produccion del mismo, y su uso. |
| DE10108225A1 (de) | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| IL157495A0 (en) * | 2001-02-21 | 2004-03-28 | Basf Ag | Method for the production of d-panthothenic acid and/or salts thereof as adjunct for animal feedstuffs |
| BR0207473A (pt) * | 2001-02-21 | 2004-04-06 | Basf Ag | Processo para preparar ácido d-pantotênico e/ou seus sais, e, composição para uso como aditivo de alimento para animal e/ou suplemento de alimento para animal |
| US6623944B2 (en) | 2001-03-14 | 2003-09-23 | Degussa Ag | Process for preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
| DE10112100A1 (de) * | 2001-03-14 | 2002-09-19 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| DE10132178A1 (de) | 2001-07-03 | 2003-01-23 | Degussa | Verfahren zur fermantativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| EP1404840A2 (en) | 2001-07-07 | 2004-04-07 | Degussa AG | Process for the preparation of d-pantothenic acid and/or salts thereof |
| CN1788089A (zh) | 2002-07-03 | 2006-06-14 | 巴斯福股份公司 | 用于提高泛酸产量的微生物和方法 |
| CN101448950B (zh) | 2006-05-16 | 2014-02-12 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于生产泛醇的工艺 |
| CN109705065B (zh) * | 2018-12-29 | 2022-10-14 | 上海应用技术大学 | 一种不对称催化合成d-(-)-泛解酸内酯的方法 |
| KR102389327B1 (ko) * | 2020-07-01 | 2022-04-20 | 씨제이제일제당 (주) | 3-메틸-2-옥소뷰타노에이트 하이드록시 메틸트랜스퍼라아제의 활성이 강화된 미생물, 및 이의 용도 |
| CN112592290B (zh) * | 2020-12-14 | 2023-08-11 | 广安摩珈生物科技有限公司 | 泛酸钙粗品纯化方法 |
| CN115595314A (zh) * | 2022-03-07 | 2023-01-13 | 中国科学院微生物研究所（Cn） | 表达天冬氨酸脱氢酶的工程菌及发酵生产维生素b5的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2748418B2 (ja) * | 1988-08-03 | 1998-05-06 | 味の素株式会社 | 組換えｄｎａ、該組換えｄｎａを有する微生物 |
| EP0493060A3 (en) * | 1990-12-25 | 1993-04-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production method of d-pantothenic acid and plasmids and microorganisms thereof |
| JP3710497B2 (ja) * | 1992-09-25 | 2005-10-26 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 |
-
1996
- 1996-09-11 KR KR19980701859A patent/KR100421088B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-09-11 AT AT96930354T patent/ATE264392T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-09-11 WO PCT/JP1996/002585 patent/WO1997010340A1/en active IP Right Grant
- 1996-09-11 DK DK96930354T patent/DK0859848T3/da active
- 1996-09-11 DE DE69632199T patent/DE69632199T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-11 CN CNB961981849A patent/CN1142997C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-09-11 EP EP96930354A patent/EP0859848B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-11 US US08/750,983 patent/US5932457A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-09-11 AU AU69436/96A patent/AU6943696A/en not_active Abandoned
- 1996-09-11 SK SK305-98A patent/SK30598A3/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0859848B1 (en) | 2004-04-14 |
| CN1201491A (zh) | 1998-12-09 |
| DK0859848T3 (da) | 2004-08-09 |
| CN1142997C (zh) | 2004-03-24 |
| US5932457A (en) | 1999-08-03 |
| KR19990044609A (ko) | 1999-06-25 |
| KR100421088B1 (ko) | 2004-06-04 |
| AU6943696A (en) | 1997-04-01 |
| WO1997010340A1 (en) | 1997-03-20 |
| ATE264392T1 (de) | 2004-04-15 |
| EP0859848A1 (en) | 1998-08-26 |
| DE69632199D1 (de) | 2004-05-19 |
| DE69632199T2 (de) | 2005-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK30598A3 (en) | Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof | |
| KR100282278B1 (ko) | D-판토산 및 d-판토텐산의 제조방법 | |
| EP0530803B1 (en) | Process for producing L-threonine | |
| CN101688176B (zh) | 具有羧基的酸性物质的生产方法 | |
| JP3109884B2 (ja) | Ｄ−パントテン酸の製造法 | |
| US8728771B2 (en) | L-succinylaminoacylase and process for producing L-amino acid using it | |
| CN112195143B (zh) | 一种用于发酵法生产d-泛酸的菌株及发酵法生产d-泛酸的方法 | |
| US6365381B2 (en) | Method for producing optically active compound | |
| SK163999A3 (en) | Method for the fermentative production of d-pantothenic acid using enterobacteriaceae strains | |
| NL8303978A (nl) | Enzymatische synthese van l-serine. | |
| RU2288265C2 (ru) | Способ получения l-треонина | |
| US20080311631A1 (en) | Biosynthetic Production of 4-Amino 4-Deoxychorismate (Adc) and [3R,4R]-4-Amino-3-Hydroxycyclohexa-1,5-Diene-1-Carboxylic Acid (3,4-Cha) | |
| US5374542A (en) | Process for producing 4-hydroxy-L-proline | |
| JP4020991B2 (ja) | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 | |
| KR20120098235A (ko) | 비천연 아미노산 생산 균주 및 이를 이용한 비천연 아미노산의 제조 방법 | |
| KR20020033750A (ko) | Ｌ-리신 생산용 돌연변이 박테리아 균주 | |
| JP5096911B2 (ja) | ５−置換ヒダントインラセマーゼ、これをコードするｄｎａ、組換えｄｎａ、形質転換された細胞、および、光学活性ｎ−カルバミルアミノ酸または光学活性アミノ酸の製造方法 | |
| JPH03266995A (ja) | ４―ヒドロキシ―ｌ―プロリンの製造法 |