KR102378095B1 - 특수 착색용 공정 기록 슬라이드 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 특수 착색용 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 관한 것이다. 본 발명 특히 헤마톡실린 및 에오신, 소변, 및 파피노콜라우(Papinocolaou) 착색용 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 착색 공정의 품질 제어가 기록되고 및 헤마톡실린 반응성이 객관적으로 측정되도록 조직 절편 또는 느슨한 세포를 갖는 공존의 착색 성능 타깃을 포함하는 특수 착색용 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 관한 것이다. 착색 성능은 착색된 결과의 공정 QC 및 디지털 영상을 지원하기 위해 공존의 조직 절편 또는 느슨한 세포와 영구적으로 연관된다.
Description
본 발명은 특수 착색용 공정 기록 슬라이드에 관한 것이다. 본 발명 특히 헤마톡실린 및 에오신, 소변, 및 파피노콜라우(Papinocolaou) 착색용 공정 기록 슬라이드에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 착색 공정의 품질 제어가 기록되고 및 헤마톡실린 반응성이 객관적으로 측정되도록 조직 절편 또는 느슨한 세포를 갖는 공존의 착색 성능 타깃을 포함하는 특수 착색용 공정 기록 슬라이드에 관한 것이다. 착색 성능은 착색된 결과의 공정 품질관리(QC) 및 디지털 영상을 지원하기 위해 공존의 조직 절편 또는 느슨한 세포와 영구적으로 연관된다.
헤마톡실린 및 에오신(H & E) 착색은 조직병리학에서 가장 통상적인 착색 기법이다. 이 착색은 임상 표본에서의 핵 및 세포질 봉입체의 시연에 사용되는 2개의 염료인, 헤마톡실린 및 에오신의 조합을 사용한다.
착색 방법은 알루미늄 이온 및 헤마테인(헤마톡실린의 산화 생성물)으로 형성된 복합체인 헤말륨의 적용을 포함한다. 헤말륨은 세포핵(및 케라토얄린 과립과 석회화 물질과 같은 몇 가지 다른 물질)을 청색으로 착색한다. 핵 착색은 적색, 분홍색 및 주황색의 다양한 색조로 호산구성 구조(eosinophilic structure)를 착색하는 에오신 Y의 수성 또는 알코올 용액으로 대조 착색(counterstaining)된다.
일반적으로, 헤말륨에 의한 핵의 착색은 DNA로의 염료-금속 복합체의 결합으로 인해 발생하지만, 핵 착색은 조직 절편으로부터 DNA를 추출한 이후에 얻을 수 있다. 이 메커니즘은 티오닌이나 톨루이딘 블루와 같은 염기성(양이온) 염료에 의한 핵 착색과는 다르다. 염기성 염료에 의한 착색은 헤말륨보다 산도가 낮은 용액에서만 발생하지만, 핵산의 이전(prior) 화학적 추출 또는 효소 추출에 의해 방지된다. 알루미늄과 헤마테인을 함께 유지하고 있는 것과 유사한 배위 결합이 헤말륨 복합체를 DNA 및 핵 크로마틴에서 단백질의 카르복실기에 결합한다는 증거가 있다.
호산구성 구조는 일반적으로 세포내 또는 세포외 단백질로 구성된다. 르위(Lewy)체 및 맬로리(Mallory)체가 호산구성 구조의 예이다. 세포질의 대부분은 호산구성이다. 적혈구는 강렬한 적색으로 착색된다.
이 구조는 호염기구성 및 호산구성(이 용어는 염료에 대한 세포 성분의 친화력에 기초한다)이라고 하는 산성 또는 염기성일 필요는 없다. 다른 색채, 예를 들면, 황색 및 갈색이 시료 내에 존재할 수 있는데, 이는 고유 안료, 예를 들면, 멜라닌에 의해 발생된다. 일부 구조는 착색이 잘 되지 않는다. 기저층은, 가시적일 필요가 있다면, PAS 착색 또는 은(silver) 착색으로 착색되어야 한다. 세망섬유도 은 착색을 필요로 한다. 또한, 소수성 구조는 투명한 상태를 유지하는 경향이 있으며, 보통 지방, 예를 들면, 지방세포, 뉴런 축 주위의 미엘린, 및 골기체막(Golgi apparatus memebrane)이 풍부하다.
자궁경부암 검사를 수행하기 위해 팝 스미어 테스트(Pap smear test, 자궁내막검사)가 연령에 따라 다양한 간격으로 여성에게 시행된다. 세계 대부분의 지역에서 50세 이상의 여성의 빈도는 매년 증가한다.
팝 스미어 테스트는 사용된 염료의 조성 및 타이빙, 비율, 및 타이밍 면에서 완전히 표준화 되어 있지 않다. 팝(Pap) 착색은 세 가지 용액에 혼합되는 다섯 가지의 염료를 포함한다. 세가지 용액은: 핵 착색제, 제1 대조 착색제(counterstain) 및 제2 대조 착색제이다.
따라서, 본 발명의 목적은 조직 시료 또는 느슨한 세포를 갖는 공존의 타깃을 포함하는 시스템을 제공하는 것이다. 바람직하게는, 상술한 타깃은 슬라이드에 공유 결합성으로 결합되고 착색 분자를 공유 결합성으로 포집하는 화학 분자라는 속성을 갖는다. 본 발명은 슬라이드 접착제에 공유 결합성으로 결합되고 착색 분자를 공유 결합성으로 포집하는 공존의 타깃을 갖는 공정 기록 슬라이드를 제공하는 것에 의해 상술한 문제에 대한 효과적인 해결 수단을 제공한다.
일반적으로, 본 발명의 일 양태에서, H&E 및 팝 착색의 일부로서 사용되는 단일 착색제에 대해 각각 반응성이며 슬라이드, 바람직하게는 슬라이드의 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 무기 타깃의 어레이를 갖는 공정 기록 슬라이드가 개시되며; 여기에서, 착색제는 제1 어레이의 타깃으로서 헤마톡실린 + 매염제(mordant), 에오신 Y, 제2 어레이의 타깃으로서 오렌지 G, 인텅스텐산, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 및 선택적으로 비스마크 브라운 또는 하나 내지 일곱 가지의 특수 착색제이고; 교미 무기 타깃(mating inorganic targets)은 슬라이드의 접착제 코팅과 공유 결합성으로 결합하도록 대향(opposing) 하이드록실을 갖는 H&E 착색제 및 한 그룹의 특수 착색제과의 독특한 결합을 지원한다.
본 발명의 다른 양태에서, 슬라이드는 처리에 대해 조직 절편 또는 느슨한 세포를 고정하도록 접착제 코팅(상술한 바와 같이)을 포함한다. 본원에 사용되는 가장 통상적인 접착제 슬라이드는 아미노-실레인으로 코팅되며, 대부분의 유리 슬라이드 제조자에서 생산된다. 아민기는 85℃에 안정적인 하이드록실 말단기에 공유 결합을 제공할 것이다.
본 발명의 다른 양태에서, 교미 무기 타깃(mating inorganic targets)은: 4-하이드록시벤젠술폰산나트륨, 하이드로퀴논, 이소부탄올, 페놀술폰산, p-톨루엔 술포클로라이드, 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 혼합물이다.
본 발명의 또 다른 양태는, 헤마톡실린 타깃은 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 둘 또는 셋 이상의 구배 밀도 혼합물이고, 바람직하게는, 구배 밀도는 1 내지 1000:1의 단계적 희석 증분을 포함하며, 보다 바람직하게는, 구배 또는 시리즈 희석은 -20 log (희석) 프로파일을 따른다. 설명: -20log (희석)은 dBd와 동일한 의미를 갖는데, 이는 로그 곡선인 것을 선형 기울기로 변경하여, 타깃의 동적 범위 전체에 걸쳐 선형 작용이 됨에 따라, 희석 및 처리 반응이 쉽게 영향을 미치도록 한다. -20log (희석) 및 dBd이라는 용어는 모두 수정 용어가 용이하게 적용될 수 있도록 데이터를 선형화하기 위해 반-대수(semi-logarithmic) 기준으로 희석을 설명하는 것을 지칭한다. (희석)이라는 용어는 희석 X를 지칭하며, 여기에서, X는 1:1 내지 1,000:1과 동일한 [1..1000]이다. dBd라는 용어는 희석의 데시벨 또는 희석 강도로서 정의될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 특수 착색 타깃은, 4-하이드록시벤젠설폰산나트륨, 하이드로퀴논, 이소부탄올, 페놀설폰산, p-톨루엔 설포닐클로라이드, 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 혼합물, 및 슬라이드의 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 하이드록실 말단기를 사용하는 것들을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 다른 양태에서, H&E 타깃은 포집된 디지털 이미지에서의 품질 제어 및 색채 보정을 위한 에오신 Y 및 헤마테인 + 매염제 착색 시약 모두의 상태로 접근하는 데에 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에서, 공정 기록 슬라이드는 각각 팝 스미어 착색의 일부로서 사용되는 단일 착색제에 대하여 반응성이며 슬라이드의 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 무기 타깃의 어레이를 포함한다.
본 발명의 다른 양태가 첨부된 도면 및 후술하는 설명에 개시된다.
첨부된 도면은 본 발명에 대한 추가적인 이해를 제공하기 위해 포함되고, 본 발명의 일부에 포함되고, 본 발명의 일부를 구성하며, 발명의 설명과 함께, 본 발명의 원리를 설명하는 역할을 한다. 도면에서,
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 H&E 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다. 도면은 제 위치에 있는 선택적 슬라이드 라벨을 갖는 슬라이드를 도시한다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 H&E 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 2A는 제조된 H&E 슬라이드를 도시한다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 두껍게 채색된 2개의 긴 축 막대가 타깃 도트의 영역을 넘어 연장된다. 막대는 라벨 프린터가 스택의 바닥으로부터 슬라이드를 분배하는 방법을 설명하기 위해 최근에 추가된 것이다. 막대는 슬라이드의 스택이 슬라이드 코팅을 손상시키지 않고, 보다 중요하게는 파라핀 차폐 코팅 및 파라핀 아래의 타깃 도트를 손상시키지 않는 것을 보장한다.
도 2B는 환자 조직 절편이 적용된 H&E 슬라이드를 도시한다. 이 경우, 3개의 순차 반복 절편이 있지만, 통상적으로 MOHS 수술에서 피부 암의 절개를 평가할 때와 같이 이러한 절편은 더 이격될 수 있다. 회색 텍스트는 단지 파라핀 영역이 어떤 것인지를 식별하기 위한 것이지만, 실제 슬라이드에 존재하지 않는다.
도 2C는 착색 이후의 H&E 슬라이드를 도시한다. 타깃 및 조직 절편 모두는 이제 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 수동적 스미어 모드에서의 팝 스미어 착색을 위한 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 3A은 제조된 PAP-M 슬라이드를 도시한다. PAP-M은 수동으로 적용된 팝 스미어용 슬라이드 유형 식별자이다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 두껍게 채색된 2개의 긴 축 막대가 타깃 도트의 영역을 넘어 연장된다. 막대는 라벨 프린터가 스택의 바닥으로부터 슬라이드를 분배하는 방법을 설명하기 위해 최근에 추가된 것이다. 막대는 슬라이드의 스택이 슬라이드 코팅을 손상시키지 않고, 보다 중요하게는 파라핀 차폐 코팅 및 파라핀 아래의 타깃 도트를 손상시키지 않는 것을 보장한다.
도 3B는 점액 및 파편과 함께 느슨한 세포의 환자 시료를 갖는 PAP-M 슬라이드를 도시한다. 세포는 대체로 투명하므로, 침착물은 슬라이드 상의 약간 투명한 헤이즈로서만 보일 것이다.
도 3C은 착색 이후의 PAP-M 슬라이드를 도시한다. 타깃 및 수동적 팝 스미어 모두는 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 시료의 자동화된 처리가 점액 및 적혈구를 제거하여 세정 시료를 소수성 링에 넣는 팝 스미어 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 4A는 제조된 PAP-A 슬라이드를 도시한다. PAP-A는 자동화된 점액 세정 팝 스미어의 슬라이드 유형 식별자이다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 이 슬라이드는 '세정' 팝 시료가 침착되는 소수성 배리어 링을 포함한다. 배리어 링은 시료를 유지하며 라벨 프린터가 링에서의 코팅 및 파라핀이 덮인 제어 타깃을 손상시키는 것을 방지하는 역할을 한다.
도 4B는 소수성 배리어 링 내의 느슨한 세포의 '세정' 환자 시료를 갖는 PAP-A 슬라이드를 도시한다. 세포는 대체로 투명하므로, 침착물은 슬라이드 상의 약간 투명한 헤이즈로서만 보일 것이다.
도 4C는 착색 이후의 PAP-A 슬라이드를 도시한다. 배리어 링 내의 타깃 및 느슨한 세포는 모두 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 5는 파라핀이 침착물의 에지에서 밀봉을 확보하는 방법을 도시한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 H&E 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다. 도면은 제 위치에 있는 선택적 슬라이드 라벨을 갖는 슬라이드를 도시한다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 H&E 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 2A는 제조된 H&E 슬라이드를 도시한다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 두껍게 채색된 2개의 긴 축 막대가 타깃 도트의 영역을 넘어 연장된다. 막대는 라벨 프린터가 스택의 바닥으로부터 슬라이드를 분배하는 방법을 설명하기 위해 최근에 추가된 것이다. 막대는 슬라이드의 스택이 슬라이드 코팅을 손상시키지 않고, 보다 중요하게는 파라핀 차폐 코팅 및 파라핀 아래의 타깃 도트를 손상시키지 않는 것을 보장한다.
도 2B는 환자 조직 절편이 적용된 H&E 슬라이드를 도시한다. 이 경우, 3개의 순차 반복 절편이 있지만, 통상적으로 MOHS 수술에서 피부 암의 절개를 평가할 때와 같이 이러한 절편은 더 이격될 수 있다. 회색 텍스트는 단지 파라핀 영역이 어떤 것인지를 식별하기 위한 것이지만, 실제 슬라이드에 존재하지 않는다.
도 2C는 착색 이후의 H&E 슬라이드를 도시한다. 타깃 및 조직 절편 모두는 이제 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 수동적 스미어 모드에서의 팝 스미어 착색을 위한 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 3A은 제조된 PAP-M 슬라이드를 도시한다. PAP-M은 수동으로 적용된 팝 스미어용 슬라이드 유형 식별자이다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 두껍게 채색된 2개의 긴 축 막대가 타깃 도트의 영역을 넘어 연장된다. 막대는 라벨 프린터가 스택의 바닥으로부터 슬라이드를 분배하는 방법을 설명하기 위해 최근에 추가된 것이다. 막대는 슬라이드의 스택이 슬라이드 코팅을 손상시키지 않고, 보다 중요하게는 파라핀 차폐 코팅 및 파라핀 아래의 타깃 도트를 손상시키지 않는 것을 보장한다.
도 3B는 점액 및 파편과 함께 느슨한 세포의 환자 시료를 갖는 PAP-M 슬라이드를 도시한다. 세포는 대체로 투명하므로, 침착물은 슬라이드 상의 약간 투명한 헤이즈로서만 보일 것이다.
도 3C은 착색 이후의 PAP-M 슬라이드를 도시한다. 타깃 및 수동적 팝 스미어 모두는 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 시료의 자동화된 처리가 점액 및 적혈구를 제거하여 세정 시료를 소수성 링에 넣는 팝 스미어 착색용 공정 기록 슬라이드의 구조를 도시한다.
도 4A는 제조된 PAP-A 슬라이드를 도시한다. PAP-A는 자동화된 점액 세정 팝 스미어의 슬라이드 유형 식별자이다. 슬라이드는 채색된 라벨 영역에 블랭크 영역을 갖는 로트(lot) 코드 번호를 통해 최소 ID를 갖고 있다. 이 슬라이드는 '세정' 팝 시료가 침착되는 소수성 배리어 링을 포함한다. 배리어 링은 시료를 유지하며 라벨 프린터가 링에서의 코팅 및 파라핀이 덮인 제어 타깃을 손상시키는 것을 방지하는 역할을 한다.
도 4B는 소수성 배리어 링 내의 느슨한 세포의 '세정' 환자 시료를 갖는 PAP-A 슬라이드를 도시한다. 세포는 대체로 투명하므로, 침착물은 슬라이드 상의 약간 투명한 헤이즈로서만 보일 것이다.
도 4C는 착색 이후의 PAP-A 슬라이드를 도시한다. 배리어 링 내의 타깃 및 느슨한 세포는 모두 가시적이며 해석을 위한 준비가 되어 있다.
도 5는 파라핀이 침착물의 에지에서 밀봉을 확보하는 방법을 도시한다.
본 발명은 본 개시의 일부를 구성하는 첨부된 도면과 연관되어 후술하는 본 발명의 상세한 설명을 참조하면 보다 쉽게 이해될 수 있다. 본 발명은 본원에 설명되고/되거나 도시된 구체적인 장치, 방법, 조건 또는 파라미터에 한정되지 않으며 본원에 사용된 용어는 예시적인 것일 뿐 청구된 발명을 한정하고자 하는 것이 아니라는 점이 이해될 것이다. 또한, 첨부된 청구범위를 포함하는 명세서에서 사용되는 것과 같이, 'a', 'an', 및 'the'의 단수 형식인 복수형을 포함하며, 특정 수치에 대한 참조는 그 내용이 명확하게 달리 언급하지 않는 한 적어도 그 특정 값을 포함한다. 이러한 범위가 다른 실시예에서 표현될 때, 본원에서는 '약' 또는 '대략적인' 다른 특정 값으로 범위가 표현될 수 있다. 또한, 달리 표시되지 않는 한, 본원에 명시된 치수 및 재료 특징은 한정적이기 보다는 예시적인 것이고, 적합한 실용성의 시료 실시예를 보다 잘 이해하기 위한 것이며, 명시된 값을 벗어나는 변동도 특정의 적용에 따라 본 발명의 범위 내에 있을 수 있다는 것이 이해될 것이다.
본 발명은 그 적용에 있어서, 후술하는 설명에 제시되거나 후술하는 설명에 예시되거나 도면에 도시된 구성의 세부 사항 및 부품의 배치에 한정되지 않는다. 본 발명은 다른 실시예를 가능하게 하며, 다양한 방식으로 실행되거나 실시될 수 있다. 또한, 설명을 목적으로 본원에 사용되는 어구와 용어는 "including", "comprising", "having", "containing", "involving", 및 그 변형 형태 및 추가적인 항목의 사용을 제한하는 것으로 간주되면 안된다.
이제 본 발명의 바람직한 실시예가 상세하게 참조될 것이며, 본 발명의 예는 첨부된 도면에 도시된다. 가능한 경우, 동일한 참조 번호가 동일하거나 유사한 부품을 나타내는 데에 도면과 설명에서 사용된다.
발명의 이해를 용이하게 하기 위해 본 발명에 사용된 일부의 용어의 정의를 참조할 수 있다.
"무기 타깃"은 검출에 사용되는 착색제에 결합될 수 있는 타깃이나 물질을 나타내는 데에 사용된다. 이 착색제는 알시안 블루(Alcian Blue), 비엘쇼스키 실버 스테인(Bielschowsky Silver Stain), 비스마르크 브라운(Bismarck Brown), 그램 스테인(Gram Stain), 크레실 바이올렛(Cresyl Violet), 폰타나 메송(Fontana Masson), 고단 및 스위트의 실버 스테이닝(Gordan and Sweet's Silver Staining), 라이트 그린(Light Green) SF 또는 패스트 그린(Fast Green) FCF, 그로콧의 메타나민 실버 방법(Grocott's Methanamine Silver Method), 홀의 빌리루빈 스테인(Hall's Bilirubin Stain), 룩솔 패스트 블루 머시커민(Luxol Fast Blue Mucicarmine), 뮬러-머리 콜로이드얼 아이언(Muller-Mowry Colloidal Iron), 뉴메틸렌 블루(New Methylene Blue), 뉴클리어 패스트 레드(Nuclear Fast Red), 오일 레드(Oil Red) O, 오렌지(Orange) G, 디아스타제 소화제 함유 PAS(PAS with Diastase Digestion), PAS(Periodic Acid Schiff), 텅스토인산(Phosphotungstic acid), 프록시리우스 레드(Picro Sirius Red), 프러시아 블루 리액션(Prussian Blue Reaction), 톨루이딘 블루 아시디드파이드(Toluidine Blue Acidified), 트리크롬-고모리의 원스텝(Trichrome-Gomori's One-Step), 트리크롬 메송(Trichrome-Masson's), 베르호프 반 게즌(Verhoff-Van Geison), 본 코사(Von Kossa), 위거트의 레소르신 푸친(Weigert's Resorcin Fuchsin), 제일 넬슨(Zeil-Neelsen)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
타깃은, 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 혼합물, 4-하이드록시벤젠술폰산나트륨, 하이드로퀴논, 이소부탄올, 페놀술폰산, p-톨루엔 술포클로라이드, 및 슬라이드의 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 하이드록실 말단기를 사용하는 것들을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
"무기 침착물"은 착색 공정 이후에 착색 입자의 축적양을 나타내는 데에 사용된다. 일부 실시예에서, 무기 침착물은 착색제이다.
천연 흑색이라고도 하는 "헤마톡실린(haematoxylin)" 또는 "헤마톡실린(hematoxylin)"은 통나무목(Haematoxylum campechianum)의 심재(heartwood)로부터 추출된 화합물이다. 헤마톡실린 및 에오신은 함께 헤마톡실린 및 에오신 착색제를 구성하며, 이는 조직학에서 가장 통상적으로 사용되는 착색제 중 하나이다.
"에오신"은 H&E(헤마톡실린 및 에오신) 착색에서 헤마톡실린에 대한 대조 착색제로서 가장 많이 사용된다. H&E 착색은 조직학에서 가장 통상적으로 사용되는 기법이다. 헤마톡실린 및 에오신으로 착색된 조직은 분홍-황색으로 착색된 세포질과 청색 또는 보라색 중 하나로 어둡게 착색된 핵을 나타낸다.
헤마톡실린 및 에오신(H&E) 착색은 무수한 생물학적 시료를 처리하여, 면역 조직 화학(IHC) 처리의 제1 관점, 완료된 결과로서 H&E를 지원하거나, 특수 착색제로 완료된 결과를 제공하는 데에 사용된다.
"파니콜라우(Papanicolaou) 착색제"(또한, 팝 착색제)는 다양한 신체 분비물의 세포 병리적 평가를 위한 다파장(multichromatic) 착색 기법이다. 가장 통상적인 사용은 부인과(gynecological) 스미어(팝 스미어)에 대한 것이다. 다른 적용은, 가래(sputum), 칫솔질, 세안, 소변, 뇌척수액, 복부액, 늑막(pleural)액, 활막(synovial)액, 정액, 미세 니들 흡인 물질, 종양 접촉 시료, 및 느슨한 세포를 포함하는 다른 물질을 포함한다.
자궁경부암 검사를 수행하기 위해 팝 스미어 테스트(Pap smear test, 자궁내막검사)가 연령에 따라 다양한 간격으로 여성에게 시행된다. 세계 대부분의 지역에서 50세 이상의 여성의 빈도는 매년 증가한다. 특히, 이 경우 팝 스미어 검사는 외측 편평 자궁 세포가 내측 자궁 경관(glandular endocervical) 세포와 만나는 자궁 경관의 외측 개구에서 여성의 자궁으로부터 긁어 낸 편평 세포에 대해 전암(pre-cancer) 또는 자궁경부암을 알리게 되는 비정상적인 성장을 검사하는 데에 사용된다.
팝 스미어 테스트는 사용된 염료의 조성 및 타이빙, 비율, 및 타이밍 면에서 완전히 표준화되어 있지 않다. 팝(Pap) 착색은 세 가지 용액에 혼합되는 다섯 가지의 염료를 포함한다. 세가지 용액은: 핵 착색제, 제1 대조 착색제(counterstain) 및 제2 대조 착색제이다.
■ 매염된(mordanted) 헤마톡실린 혼합물인 핵 착색제는 세포 핵을 착색하는 데에 사용된다.
■ 인텅스텐산 및 오렌지 G의 혼합물인 제1 대조 착색제, 오렌지 그린
■ 제2 대조 착색제는 에오신 Y, 라이트 그린 SF(또는 패스트 그린 FCF), 및 비스마크 브라운의 혼합물인 에오신 아즈레(azure)이다.
따라서, 본 발명의 목적은 조직 시료 또는 느슨한 세포를 갖는 공존의 타깃을 포함하는 시스템을 제공하는 것이다. 따라서, 상술한 타깃은 슬라이드의 접착제에 공유 결합성으로 결합되고 후속하여 착색 분자를 공유 결합성으로 포집하는 화학 분자라는 속성을 가져야 한다.
본 발명의 일 실시예에서, 공정 기록 슬라이드는 착색된 생물학적 물질과 공존하는 상이한 무기 착색 특정 타깃의 혼합을 포함한다. 이 타깃은 각 착색 성분의 효능 및 알려진 노화 거동을 갖는 착색제에 대한 구배 밀도 어레이를 나타낸다. 상술한 타깃은 착색 성분 중 하나와 고유하게 반응하여야 한다. 반응성 부위 농도가 잘 제어되지 않아 반복적이지 않으므로, 생물학적 물질을 사용하는 것은 실용적이지 않다.
본 발명의 다른 실시예에서, 공정 기록 슬라이드는 타깃 및 조직 절편 또는 느슨한 세포를 포집하기 위해 다양한 반응성 화학 물질을 사용하는 접착제로 코팅된다. 이 특수 착색제용으로 개발된 타깃 용액에서, 슬라이드 코팅으로의 공유 결합을 지원하는 데에 하이드록실 말단기를 모두 사용한다. 가장 통상적인 접착제 코팅 슬라이드는 대부분의 현미경 슬라이드 제조자로부터 사용 가능한 아미노-실레인 코팅이다. 아민 말단기는 85℃를 통해 안정적으로 유지되는 하이드록실로의 공유 결합을 형성할 것이다. 그러나, 본 발명은 상이한 접착제 슬라이드 코팅 화학 물질과 일치하기 위해 필요한 경우 타깃 상의 다른 말단기의 사용 또는 중간 커플러의 사용을 제한하지 않는다.
공정 기록 슬라이드 상의 H&E의 구현예를 도시하는 도 1을 참조할 수 있다. 일 실시예에서 이중 마킹 구성의 H&E 슬라이드에 대한 공존의 타깃의 기본적인 구조가 도 1에 도시된다.
일 실시예에서, 공정 기록 슬라이드는 로트 번호로 라벨 영역의 바로 아래를 마킹하고 선택적으로 슬라이드 유형으로 슬라이드의 라벨을 마킹하는 일반적인 구조를 따른다. 사용자가 2-d 바 코드 및 텍스트 정보를 적용하기 위해 전체 내지 대부분의 라벨 영역이 남겨져 있어야 한다. 슬라이드 유형은 PRS-H&Exx이며, 여기에서, xx는 제2 열에 적용되는 "특수 착색" 세트를 정의한다. xx가 존재하지 않는다면, 제2 라인의 타깃이 없다. 조직 절편 복제의 영역을 최대화하기 위해 타깃은 라벨 단부 근처에서 인쇄된다. 도 2A 내지 도 2C는 IHC 슬라이드의 사용의 순서를 도시한다. 알 수 있듯이, 타이틀은 선택적이며 로트 코드와 함께 내재될 수 있기 때문에 타이틀은 제거되었다.
다른 실시예에서, 슬라이드의 기본 버전은 하나의 에오신 Y과, 흑색 및 백색 타깃에 의해 단부에서 경계를 이루는 헤마톡실린에 대한 구배 밀도 어레이로 구성되는 타깃 시리즈를 포함한다. 흑색 및 백색 타깃은 디지털 영상에 대한 동적 범위를 설정하는 데에 사용된다. 다른 타깃은 대체로 투명이기 때문에, 흑색 및 백색 단부 타깃은 타깃이 슬라이드에 위치된 곳을 사용자가 알 수 있도록 할 수 있어, 조직 절편이 타깃의 상부에 적용되지 않도록 한다. 이는 슬라이드 블랭크 상으로 동결된 조직 절편을 전달할 때 큰 가치가 있다.
이제, 팝 스미어 착색용 슬라이드를 도시하는 도 3 및 도 4를 참조할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 팝 스미어용 공정 기록 슬라이드는 2개의 구성인: 도 3의 수동적 스미어 및 도 4의 자동화된 세정 점액으로 구현된다. 도면은 두 버전에 대해 표시된다.
다른 실시예에서, 두 슬라이드는 로트 번호로 라벨 영역의 바로 아래를 마킹하고 선택적으로 슬라이드 유형으로 슬라이드의 라벨을 마킹하는 일반적인 공정 기록 슬라이드 구조를 따른다. 사용자가 2-d 바 코드 및 텍스트 정보를 적용하기 위해 전체 내지 대부분의 라벨 영역이 남겨져 있어야 한다.
다른 실시예에서, 착색 시약 타깃은 2개의 그룹으로 되는데: 상부 열은 헤마톡실린의 구배 밀도 어레이 + 흑색 및 백색 기준 타깃에 의해 경계를 이루는 매염성 반응성 타깃을 포함한다. 하부 열은 비스마크 브라운의 단일 타깃, 인텅스텐산의 2개의 상이한 밀도 타깃, 녹색 착색제의 2개의 상이한 밀도 타깃, 오렌지 G의 단일 타깃, 에오신 Y의 단일 타깃을 포함한다. 환자 팝 스미어는 슬라이드 상의 활성 영역의 중간에 적용된다. 자동화된 접착제-팝 슬라이드 버전은 슬라이드 메이커로부터의 세정 세포 슬러리가 퍼지는 것을 방지하도록 소수성 배리어 링을 사용한다. 코팅의 친수성 거동은 세포가 링의 벽을 따라 적층되지 않는 것을 보장한다. 딥-앤-덩크 조(dip-n-dunk bath) 및 모세관 간극 착색 처리 모두가 이들 슬라이드에 의해 지지될 수 있다.
다른 실시예에서, 각 착색제는 아래에 설명되며, 느슨한 세포 및 조직 절편과의 결합하기 위한 모드가 설명된다. 독자적으로 착색제를 포집하는 화학적 구조가 설명된다.
본 개시는 후술하는 실시예를 더 포함한다.
1. 각각 단일 착색제에 대해 반응성이며 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 무기 타깃의 어레이를 포함하는 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 있어서,
(a) 선택적으로, 라벨 공간 바로 아래에서의 로트 코드 번호 마킹;
(b) 공존의 타깃의 영역;
(c) 조직 절편 또는 느슨한 세포의 적용 영역을 포함하고,
선택적으로, 한 세트의 특수 착색제는 슬라이드 유형 마킹 또는 로트 코드 마킹에 따라 슬라이드에 적용되는, 접착제 코팅 현미경 슬라이드.
2. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 무기 타깃은 알시안 블루(Alcian Blue), 비엘쇼스키 실버 스테인(Bielschowsky Silver Stain), 비스마르크 브라운(Bismarck Brown), 그램 스테인(Gram Stain), 크레실 바이올렛(Cresyl Violet), 폰타나 메송(Fontana Masson), 고단 및 스위트의 실버 스테이닝(Gordan and Sweet's Silver Staining), 라이트 그린(Light Green) SF 또는 패스트 그린(Fast Green) FCF, 그로콧의 메타나민 실버 방법(Grocott's Methanamine Silver Method), 홀의 빌리루빈 스테인(Hall's Bilirubin Stain), 룩솔 패스트 블루 머시커민(Luxol Fast Blue Mucicarmine), 뮬러-머리 콜로이드얼 아이언(Muller-Mowry Colloidal Iron), 뉴메틸렌 블루(New Methylene Blue), 뉴클리어 패스트 레드(Nuclear Fast Red), 오일 레드(Oil Red) O, 오렌지(Orange) G, 디아스타제 소화제 함유 PAS(PAS with Diastase Digestion), PAS(Periodic Acid Schiff), 텅스토인산(Phosphotungstic acid), 프록시리우스 레드(Picro Sirius Red), 프러시아 블루 리액션(Prussian Blue Reaction), 톨루이딘 블루 아시디드파이드(Toluidine Blue Acidified), 트리크롬-고모리의 원스텝(Trichrome-Gomori's One-Step), 트리크롬 메송(Trichrome-Masson's), 베르호프 반 게즌(Verhoff-Van Geison), 본 코사(Von Kossa), 위거트의 레소르신 푸친(Weigert's Resorcin Fuchsin), 제일 넬슨(Zeil-Neelsen)으로부터 선택된 특수 착색제와 고유하게 반응하도록 선택되는, 접착제 코팅 슬라이드.
3. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 슬라이드의 라벨 부분의 슬라이드 유형 마킹은 헤마톡실린 및 에오신, 파피노콜라우(Papinocolaou), 또는 소변 착색을 위해 생체재료 시료를 처리하도록 특정 세트의 특수 착색제를 선택할 수 있는, 접착제 코팅 슬라이드.
4. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 헤마톡실린, 인텅스텐산, 오렌지 G, 에오신 Y, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 비스마크 브라운으로 독자적으로 결합하도록 공존의 반응성 타깃이 선택되는, 접착제 코팅 슬라이드.
5. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 조직 절편 복제용 영역을 최대화하도록 라벨 단부의 근처에 공존의 타깃이 인쇄되는, 접착제 코팅 슬라이드.
6. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 접착제 코팅 현미경 슬라이드는 세정 세포 슬러리가 퍼지는 것을 방지하도록 친수성 배리어 링을 선택적으로 포함할 수 있는, 접착제 코팅 슬라이드.
7. 실시예 1에 따른 접착제 코팅 슬라이드에 있어서, 딥 앤 덩크(dip and dunk) 및 모세관 간극 착색 처리가 이들 슬라이드에 의해 지원될 수 있는, 접착제 코팅 슬라이드.
차폐 코팅
일반적으로 파라핀 왁스는 석유, 석탄 또는 오일 셰일에서 유래된 흰색 또는 무색 무색의 연질 고체로, 20 내지 40개의 탄소 원자를 포함하는 탄화수소 분자의 혼합물로 구성된다. 상온에서 고체 상태로 약 37 ℃(99 ℉) 초과에서 녹기 시작하며, 비등점은 >370 ℃(698 ℉)이다. 파라핀 왁스의 통상적인 응용은 윤활, 전기 절연, 그리고 양초를 포함하는 데; 염색된 파라핀 왁스는 크레용으로 만들어질 수 있다. 그것은 때때로 파라핀이라고 불리는 등유나 다른 석유 제품과는 구별된다.
병리학 실험실에서는, 파라핀 왁스는 얇은 조직 시료를 절개하기 전에 조직을 함침시키는 데에 사용된다. 알코올의 상승 강도(75% 내지 절대)를 통해 조직으로부터 수분이 제거되며, 조직은 자일렌과 같은 유기 용매 또는 자일롤과 같은 지방족 대체물 중 하나로 정리된다. 그런 다음, 조직은 파라핀 왁스 내에 몇 시간 동안 위치된 다음, 냉각 및 고체화를 위해 왁스와 함께 주형에 세팅되며, 그런 다음, 절편이 마이크로톰에서 절단된다.
조직 부분을 파라핀에 포매하는 것은 장기간 동안 조직 절편을 보존하기 위한 일상적인 관행이다. 그러나, 현미경 슬라이드의 선택된 영역에 얇은 코팅층으로서 파라핀을 적용한 것은 보고되지 않았다.
조직 블록 및 조직 블록으로부터 절단된 절편에는 조직 세포 구조의 수분 함량을 완전히 대체하는 파라핀이 주입된다. 파라핀은 본질적으로 박테리아와 균류의 성장을 지원하지 않기 때문에, 내장된 생체재료의 장기적인 안정성을 보장한다.
무기 착색제의 화학 구조와 독자적으로 반응하는 타깃도 산화 및 공기중 물질과의 반응에 취약하다. 이러한 착색 반응제 타깃은 헤마톡실린, 어신 및 대부분의 특수 착색제 그룹을 포함한다. 이들 착색제의 타깃은 하나의 착색제와 특이하게 반응하도록 설계된다. 생물학적인 타깃은 대부분 그러한 특이성을 제공하지 않지만 화학적 구조는 이를 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명은 타깃 및 무기 침착물(예, 착색제)을 선택적으로 코팅하여 임의의 종류의 현미경 슬라이드에서의 임의의 열화로부터 이들을 보호하는 방법을 제공함으로써 해결 수단을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에서, 파라핀은 용매와 혼합되어 실온에서 물질 상태를 고체에서 액체로 변화시킨다. 혼합물은 파라플라스트 엑스트라(Paraplast X-tra) 또는 자일렌 동등물 또는 그린 자일렌 대체물: 지방족 용매, 예를 들면, 자일롤을 사용하여 점도를 저감하고 증착 후 응고 속도를 줄인다. 다른 실시예에서, 용매는 톨루엔, 도료 시너, 테레빈유(turpentine) 또는 아세톤과 등유의 50:50 혼합물로부터 선택될 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.
다른 실시예에서, 포화점이 관찰(고체가 형성)될 때까지 액체가 서서히 지방족 용매를 첨가할 때까지, 고체 파라핀 용융 온도 초과인 75℃ 내에서 고체 파라핀이 용융된다. 혼합물을 45℃까지 냉각하고, 완전히 투명할 때까지 서서히 지방족을 더 추가한다.
다른 실시예에서, 적용된 항체, 이차 착색 시약, 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 이전에 적용된 특수 착색 반응성 침착물과 반응하는 특수 착색 물질을 독자적으로 포집하는 특수 착색 반응성 말단기로 무기 타깃 위에 상술한 파라핀 코팅이 적용된다.
다른 실시예에서, 스프레이, 잉크젯 침착, 전사 인쇄(패드 인쇄 등), 스크린 인쇄 및 증착을 포함하지만 이에 한정되지 않는 접착제 코팅 현미경 슬라이드에 파라핀 층이 침착될 수 있다. 모든 침착 방법에서, 착색 공정의 파라핀 제거 단계 중 모든 파라핀(차폐 및 조직 절편 내장)이 용해되고 운반될 수 있도록, 파라핀 층은 5 μm 미만의 두께를 가져야 한다. 침착 공정/방법과는 무관하게 파라핀의 기준은 다음과 같다.
● 얇은 층, 바람직하게는, 약 5 마이크론 미만의 두께이고,
● 용융 온도가 60℃ 미만, 바람직하게는 56℃ 미만이고, 자일렌 또는 자일롤(지방족 대체물) 용매로의 노출로 용융되고,
● 내장 파라핀과 유사한 주위 온도 경도를 갖는다.
다른 실시예에서, 파라핀 물질을 내장하는 조직 블록은 써모 피셔(Thermo Fisher)의 티슈프렙 & 티슈프렙(TissuePrep & TissuePrep) 2, 용융 온도 56℃, 레이카(Leica) 의 파라플라스트 & 파라플라스트 플러스(Paraplast & Paraplast plus), 용융 온도 56℃, 레이카(Leica)의 파라플라스트 엑스트라(Paraplast X-tra), 용융 온도 50 내지 54℃를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 파라플라스트 엑스트라(Paraplast x-tra)는 구체적으로 무기 타깃의 산화 열화를 줄이기 위해 페놀 항산화제인 부틸화 하이드록시톨루엔을 포함한다.
다른 실시예에서, 각각은 용융 온도, 경도 및 점도를 설정하기 위한 정제된 파라핀, 합성 중합체 및 다른 물질의 혼합물이다. 파라핀 내에는 미생물의 성장이 지원되지 않는다.
다른 실시예에서, 특수 착색제는 알시안 블루(Alcian Blue), 아날린 블루 오렌지 G 용액(Analine Blue - Orange G Solution), 아잔 스테인(Azan Stain), 비엘쇼스키 실버 스테인(Bielschowsky silver stain), 브로우 앤 벤 그램 스테인(Brow & Benn - Gramm Stain), 크레실 바이올렛(Cresyl Violet), DAB, 폰타나 메송(Fontana Masson), 고단 및 스위트의 실버 스테이닝(Gordon and Sweet's silver staining), 그로콧의 메타나민 실버 방법(Grocett's Methanamine silver method), 홀의 빌리루빈 스테인(Hall's Bilirubin stain), 존스 메타나민 실버 방법(Jones Methanamine silver method), 룩솔 패스트 블루(Luxol Fast Blue), 룩솔 패스트 블루 크레실 바이올렛(Luxol Fast Blue -- Cresyl Violet), 머시카민(메이어의 방법)(Mucicarmine (Mayer's Method)), 뮬러 머리 콜로이드 철(Muller-Mowry colloidal Iron), 오렌지 G(Orange G), 뉴클리어 패스트 레드(Nuclear Fast Red), 디아스타제 소화제 함유 PAS(PAS with Diastase Digestion), PAS(Periodic Acid Schiff), 인텅스텐산(Phosphotungstic Acid), 헤마톡실린(Haematoxylin), 피크로 시리우스 레드(Picro Sirius Red), 톨루이딘 블루 아시디드파이드(Toluidine Blue Acidified), 트리크롬 고모리스의 원 스텝(Trichrome -- Gomoris One-Step), 트리 크롬 메송(Trichrome -- Masson's), 빅토리아 블루(Victoria Blue), 본 코사(Von Kossa), 위거트의 레소르신 푸친(Weigert's Resorcin Fuchsin), 위거트의 아이언 헤마톡실린(Weigert's Iron Haematoxylin), 젤 넬슨 방법(Zell -- Neelsen Method)을 포함할 수 있지만 이에 한정되지 않는다.
다른 실시예에서, 타깃은 흑색 및 백색과 같은 색채 침착물로부터 선택될 수 있지만, 이에 한정되지 않으며, 임의의 안료 색채를 포함할 수 있다.
다른 실시예에서, 상술한 파라핀 코팅이 적용될 수 있는 슬라이드는 유리, 플라스틱 또는 임의의 중합체 물질로부터 선택될 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 다른 실시예에서, 파라핀은 정화되어 물을 포함하지 않을 수 있다.
다른 실시예에서, 파라핀 입자를 용융하고/하거나 침착물 및 침작물을 둘러싸는 슬라이드 표면을 밀봉하는 일체식 표면 코팅으로 혼합하기 위해, 결과적인 현미경 슬라이드가 사후 가열될 수 있다.
또 다른 실시예에서, 파라핀이 침착된 후, 결과적인 현미경 슬라이드의 열은, 파라핀으로부터 용매를 강제로 내보내어, 이를 경화 상태로 되돌리는 것을 보장한다. 이 과정은 바람직하게는 적외광을 사용하여, 슬라이드의 파라핀 측에서 수행되어야 한다. 파라핀을 위로부터 아래에서 녹이면, 용매가 위로 상승되어 농축액 없이 파라핀으로부터 증발하는 것을 보장한다. 그 결과는 도 5에 도시되며, 이는 용융 파라핀이 침착물의 에지에서 양호한 밀봉을 확보하는 방법을 나타낸다.
영상 기준 타깃
타깃 어레이 이외에도, 흑색 및 백색 영상 기준 타깃이 인쇄된다.
착색된 생체재료를 포함하는 현미경 슬라이드의 디지털 영상은 착색된 물질에 대해 예비 검사(prescreening) 및 잠재적으로 완전한 진단 판단을 수행하기 위해 진화하고 있다. 일반적으로 영상 시스템은 디지털 이미지가 백색 또는 흑색 경계에서 압축되지 않도록 조명 수준을 조정해야 한다. 종래의 해결 수단은 라벨이 위치될 것으로 예상되는 곳에 흑색 및 백색 타깃을 배치하는 것이다. 근본적인 가정은 백색 및 흑색 타깃이 슬라이드가 존재할 수 있는 극단을 나타낸다는 것이다. 그러나, 그렇게 함으로써, 조직 절편의 착색에 의해 실현될 수 있는 것보다 흑색이 훨씬 더 검고 백색이 훨씬 더 희기 때문에 디지털 척도에는 압축이 발생한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에서, 환자 조직 절편 또는 느슨한 세포 침착물과 공존하는 제어 및 기준 타깃 표준을 포함하는 현미경 슬라이드가 개시된다. 기준 타깃 및 조직 절편은 조직 포집 및 착색된 슬라이드 커버 미끄러짐 사이의 처리 경험을 기록한다.
본 발명의 다른 실시예에서, 현미경 슬라이드 타깃 어레이 중, 공존의 흑색 및 백색 기준 타깃이 있다. 흑색 및 백색 기준 타깃은 다른 타깃 및 조직 절편과 동일하게 시약 및 처리로의 노출을 경험하였다.
본 발명의 다른 실시예에서, 기준 타깃, 즉, 흑색 및 백색 타깃 모두는 슬라이드를 처리하는 데에 사용되는 임의의 시약에 대해 반응성이 없는 인쇄된 도료 침착물이다. 이상적인 상황에서 백색 타깃은 완벽한 백색이 될 것이다. 그러나, 흑색으로부터 백색까지의 중간을 초과하는 착색된 생체재료는 유용성이 거의 없다. 따라서, 백색은 완벽한 백색으로부터 5 내지 10% 떨어져 있을 수 있고 여전히 유용한 값을 갖는다. 바람직한 실시예에서, 태양광에 노출되지 않을 때, 백색은 시간의 경과에 따라 안정된 산화 금속 또는 설페이트 조성이다. 보다 바람직한 실시예에서, 백색은 알루미늄과 산화 티타늄이다.
다른 실시예에서, 흑색 및 백색 타깃은 공칭 365 nm에서 직접적인 UV light 노출에 의해 촉매화되는 안하이드리드계 에폭시 도료 베이스를 기초로 한다. 안하이드리드 촉매는 메틸테트라하이드로프탈릭 안하이드라이드 및 디페닐리오도늄 헥사플루로아르세네이트로 구성된다. 개시된 UV 외에, 안하이드리드는 에폭시를 가교하도록 촉매화하는 기능을 하기 위해 열의 추가를 필요로 한다. 바람직한 UV 개시 안하이드리드 및 그 부속물이 열거되어 있지만, 안하이드리드 생산 회사를 검색할 때 발견될 수 있는 다른 해결 수단이 있다. 이러한 도료/잉크는 필요에 따라 구성할 수 있지만, 일반적으로 사용 중인 인쇄 방법에 대해 최적화된 구입 성분이다. 도료/잉크의 가공은 안료 입자와 에폭시 바인더 사이에서 양호한 습윤을 달성하는 데에 있어서의 어려움을 해결해야 한다. 안하이드리드계 도료(점도가 낮을 때 잉크라고도 함)는 지속 기간 중 가용 시간(pot life)이 수 개월이 될 수 있으므로 종종 안하이드리드가 에폭시와 혼합되도록 한다. 점도를 낮추는 것은 인쇄 산업에 속하는 자에게 알려진 지식이며, 제제(formulation)는 적용된 에폭시 혼합물의 표면 및 사용된 인쇄 방법에 따라 달라진다. 열로 촉발된 안하이드리드-에폭시 도료/잉크가 통상적으로 사용되지만, 반응을 개시하는 데에 필요한 열은 도료/잉크와 공존할 수 있는 생체재료(단백질, 펩타이드 및 화학 타깃)를 잠재적으로 손상시킬 수 있다.
다른 실시예에서, 무수물 촉매는 다르게 비특이적 착색을 지원할 수 있는 아미노-실란계 촉매에 의해 발견된 미반응 아민을 제거한다. 자유 아민 말단기는 생체재료 및 특수 착색제의 일부 모두를 포집할 수 있고 포집할 것이다. 구체적으로, 이는 슬라이드 처리 시약, 특히, 착색 시약에 의한 백색 타깃의 원하지 않는 착색의 문제를 해결한다. 도료/잉크의 표면 상의 자유 아민 말단기로서, 일차 항체 및 이차 착색 시약을 모두 포집하여 착색된다. 그러므로, 슬라이드 상에 통합된 백색 타깃을 갖는 가치를 배제한다.
다른 실시예에서, 흑색 안료는 2 마이크론 직경 미만의 탄소 먼지를 사용하는 한편, 백색은 알루미늄, 티타늄 산화물, 또는 바륨설페이트 비드(bead)를 사용한다. 바륨설페이트는 본원에서 바람직한 백색 안료이다.
다른 실시예에서, 바람직한 에폭시 잉크/도료 제제는 계면활성제를 모두 피하여, 잉크/도료가 슬라이드가 경험할 수 있는 착색 및 시약의 범위에 대해 반응하는 것을 방지한다.
다른 실시예에서, 타깃의 인쇄는 패드 스탬프 또는 시린지로 수행될 수 있다. 또 다른 실시예, 시린지는 타깃 침착의 특징 크기 제어를 더 잘 지지하므로 바람직하다.
다른 실시예에서, 상술한 백색 타깃은 안하이드리드 촉매화 에폭시 내의 금속 산화물 또는 설페이트 안료로 구성된다. 다른 실시예에서, 상술한 흑색 타깃은 UV로 개시되는 안하이드리드 촉매화 에폭시 내의 탄소 안료로 구성된다. 다른 실시예에서, 안하이드리드 촉매는 직접적인 UV 광 노출에 의해 UV 개시된다. UV로 개시되는 안하이드리드 촉매를 사용하는 일차적인 장점은, 안하이드리드-에폭시 반응을 개시하는 열이 생체재료(단백질, 펩타이드 및 화학 타깃)가 손상 없이 견딜 수 있는 열을 초과한다는 것이다. 더 중요한 것은 착색 시약과 반응할 수 있는 임의의 자유 아민을 제거하는 것이다.
헤마톡실린
헤마톡실린은 그 자체로 염료는 아니며, 생체재료에 결합되지 않을 것이다. 그러나, 약산인 매염제와 다른 물질이 혼합되면, 타깃 부위로의 공유 결합을 형성하는 염료가 형성된다. 매염제의 선택은 어떤 조직 요소에 염료가 결합될 것인지에 영향을 미친다. 팝 스미어에 대해, 헤마톡실린은 세포 핵을 착색하는 데에 사용된다. 따라서, 세포 핵을 착색시키는 매염제의 선택은 알루미늄, 철, 텅스텐이며, 보통 알루미늄이 선택된다. 헤마테인은 아래에 도시된 바와 같은 산화된 헤마톡실린이다.
헤마테인 말단기에 대한 알루미늄 매염제의 수정은 아래와 같이 발생한다.
DNA에서 인산계 유닛에 대한 헤마테인 + 매염제의 결합이 아래에 도시된다.
합성 폴리인산은 DNA 가닥을 대체하여 헤마테인 + 매염제 염료를 포집하기 위한 독특한 타깃 부위를 형성할 수 있다. 그러나, 제제를 완료하기 위해, 타깃 농도가 타깃 부위의 구배 밀도 어레이에 대하여 조절될 수 있도록 염료에 대하여 비반응성인 유사한 중합체가 필요하다. 폴리인산염은 약한 염기이다. 그러나, 중합체는 O-말단기로의 수소 원자의 공여(donation)를 필요로 하는 폴리인산으로 변환되어야 한다. 이는 탈리기로서 H2O를 생성하는 과산화수소, HOHO를 사용하여 수행될 수 있다.
폴리인산염+HOHO(과산화수소) >>
폴리인산
폴리인산 부위의 밀도를 제어하여 구배 밀도 어레이를 형성하는 것이 목표이다. 이를 달성하기 위해, 서브스트레이트 접착제에 대한 공유 결합을 실현할 수 있도록, 폴리인산은 다른 하이드록실 중합체와 혼합되어야 한다. 해결 수단은 폴리비닐알코올, PVA 또는 유사한 중합체를 사용하는 것이다.
헤마톡실린의 타깃의 구배 밀도 어레이를 제공하는 것은 다른 물질 및 매염된 헤마테인 염료로의 변환을 포함하는 헤마톡실린의 유기적 기원에서 비롯된다. 헤마톡실린 타깃과 공존의 조직의 색채와 색 밀도에 영향을 미치는 요인은 다음과 같다.
특히, 반응조 내에서 처리가 수행되는 경우, 매염된 헤마테인 염료의 농도는 시간에 따라 달라진다. 린스액이 적용되어 반응조를 희석시킨다. 시약의 움직임이 없다면, 반응조는 슬라이드가 도달하는 반응조의 깊이가 증가할수록 커지는 구배 밀도를 형성한다. 반응조의 대부분을 차지하는 물에 비하여 염료의 분자량이 크기 때문에 침전이 발생한다.
1. 헤마톡실린을 헤마테인으로 변환하는 산화 과정은 시간 경과에 따라 불규칙성이 지속되어, 제거되어야 하는 염료 강도 및 침전 염료가 저감된다.
2. 헤마톡실린의 산화는 몇 가지 산화 유도체를 만들 수 있다: 모노, 디-, 트라이-, 펜타-, 테트로-헤마테인. 각 알루미늄 매염제 헤마테인은 산화 유도체의 기능으로서 상이한 색채를 갖는다: 디- 및 트라이-는 보라색에서 청색으로, 테트로-는 갈색으로, 펜토-는 투명하다. 다른 매염제도 비슷한 방식으로 색채 기준을 전환할 것이다.
3. 헤마테인 보존액의 호기성 산화는 또한 열화의 원인이 될 수 있다.
상이한 반응 부위 밀도의 타깃 시리즈가 사용되면, 헤마테인 + 매염제 염료 상태 및 유형의 식별이 용이해진다. 구배 시리즈는 포화 범위에서 중간 범위로 진행하게 된다. 그러므로, 착색 농도가 약화되고/되거나 산화가 감소함에 따라, 헤마테인, 포화된 타깃이 포화로부터 나와, 염료 농도가 평가되도록 한다.
텅스토인산
인텅스텐산(TPA)은 H3PW12O40의 화학식을 갖는 헤테로 다중산이다. 아래에 도시된 바와 같이, 단일 인산 분자 주위의 텅스텐산 케이지로서 더 잘 설명될 수 있다.
인텅스텐산만으로, 발린 및 루신 아미노산에서 발생하는 것과 같이, 한 쌍의 인접한 CH3 말단기를 통하여, 생채재료를 결합한다. 인텅스텐산은 이러한 물질로부터 염료의 음이온을 대체하여 섬유소와 콜라겐을 결합하여, 이를 선택적으로 탈색시킨다.
인텅스텐산 내의 2개의 인접한 텅스텐산기는 2개의 CH3 말단기와 반응하여 다음을 형성한다.
R'-CH(CH3)2 + -W=O3-O3=W- >> R'-CH[(CH=W=O2]2 + 2H2O
무기 타깃은 이소부탄올(이소부틸 알코올) HOCH2CH(CH3)2이 되며, 하이드록실은 접착제 코팅에 결합된다.
오렌지 G
오렌지 G는 보통 디소듐염을 갖는 합성 아조 염료이다. 팝 착색을 위해, 오렌지 G가 케라틴을 착색하는 데에 사용된다. 가래에 존재하는 편평 세포 암종을 케라틴화하는 작은 세포를 착색하는 것이 원래의 기능이었다.
타깃은 -SO3Na 및 -OH 말단기를 갖는 벤젠 고리이어야 한다. 이것은 NaCl과 혼합된 4-하이드록시술폰산에 의해 구성되거나 변환된 형태로 구매되어야 한다.
제품은: 4-하이드록시벤젠술폰산 나트륨이 된다.
타깃 말단기 R(C6H4)SO4Na가 오렌지 G 착색제 상에서 -RSO4Na와 반응하면, 반응은 아래와 같이 된다:
H가 Na인 것을 제외하고, 폐기물은 백색 분말로서 침전되는 Na2SO4, 황산 나트륨이 된다.
에오신 Y
에오신 Y은 에오신의 일 형태이다. 세포 내의 세포질을 강조하기 위해 보통 산성 적색 착색제로서 사용된다. 팝 스미어에서, 에오신 Y는 표피 상피(superficial epithelial) 편평 세포, 핵소체, 섬모 및 적혈구를 착색시킨다. 에오신 Y는 아래의 3개의 알려진 말단기에 결합된다.
■ 페놀기
■ 카르복실기
■ 금속 산화물
응용을 위해, 다른 특수 착색제 없이 에오신과 독자적으로 반응하는 타깃을 사용하는 것이 중요하다. 페놀기는 유일한 실행 가능한 선택이다.
다른 팝 타깃과 일치되도록, 페놀은 다음과 같이 발생하는 것과 반대되는 하이드록실 말단기를 가져야 한다.
(하이드로퀴논, or 1,4-벤젠디올, or 4-하이드록시페놀)
라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF
라이트 그린 SF는 녹색 트리아릴메탄 염료인 한편, 패스트 그린 FCF는 해녹색(sea green) 트리아릴메탄 염료이다. 염료는 케라틴화된 편평 세포 이외의 세포의 세포질을 착색시킨다. 구조는 매우 유사하여 단일 타깃이 녹색 염료를 모두 지지하도록 한다.
Light Green SF: 라이트 그린 SF
Fast Green SF: 패스트 그린 FCF
녹색 착색제는 모두 타깃 부위 상의 -R(C6H4)SO3H 말단기를 모색한다. 이는 페놀술폰산HO(C6H4)SO3H에 의해 실현된다.
비스마크 브라운
비스마크 브라운은 산성 뮤신을 착색시키는 데에 사용되는 디아조 염료이다.
착색제 상의 -NH2 말단기에 결합하는 것이 관건이다. 해결 수단은 다음과 같은 경우에 토실 결합(Tosyl coupling) 반응을 사용하는 것이다.
해결책은 다음과 같다.
토실 활성제는 슬라이드 접착제의 하이드록실 말단기에 적용된 p-톨루엔 술포클로라이드이다.
R'--C(CH2)2OH + Cl(S=O2)C6H4CH3 >> R'---CH2O(S=O2)C6H4CH3 + HCl
착색제의 -NH2 말단기가 제공되면, 활성제가 해제되고 아민이 포집된다.
R'--CH2O(S=O2)C6H4CH3 + R"--NH2 >> -R'--CH2NH-R" + HO(S=O2)C6H4CH3.
일 실시예에서, 제2 열의 착색 타깃은, 선택될 경우, 특수 타깃제를 지원한다. 이러한 타깃은 무기물이며, 특정 착색제를 독자적으로 특정하며, 공유 결합으로 특정 착색제를 포집한다. 이 특수 착색 반응성 타깃은 알시안 블루(Alcian Blue), 비엘쇼스키 실버 스테인(Bielschowsky Silver Stain), 비스마르크 브라운(Bismarck Brown), 그램 스테인(Gram Stain), 크레실 바이올렛(Cresyl Violet), 폰타나 메송(Fontana Masson), 고단 및 스위트의 실버 스테이닝(Gordan and Sweet's Silver Staining), 라이트 그린(Light Green) SF 또는 패스트 그린(Fast Green) FCF, 그로콧의 메타나민 실버 방법(Grocott's Methanamine Silver Method), 홀의 빌리루빈 스테인(Hall's Bilirubin Stain), 룩솔 패스트 블루 머시커민(Luxol Fast Blue Mucicarmine), 뮬러-머리 콜로이드얼 아이언(Muller-Mowry Colloidal Iron), 뉴메틸렌 블루(New Methylene Blue), 뉴클리어 패스트 레드(Nuclear Fast Red), 오일 레드(Oil Red) O, 오렌지(Orange) G, 디아스타제 소화제 함유 PAS(PAS with Diastase Digestion), PAS(Periodic Acid Schiff), 텅스토인산(Phosphotungstic acid), 프록시리우스 레드(Picro Sirius Red), 프러시아 블루 리액션(Prussian Blue Reaction), 톨루이딘 블루 아시디드파이드(Toluidine Blue Acidified), 트리크롬-고모리의 원스텝(Trichrome-Gomori's One-Step), 트리크롬 메송(Trichrome-Masson's), 베르호프 반 게즌(Verhoff-Van Geison), 본 코사(Von Kossa), 위거트의 레소르신 푸친(Weigert's Resorcin Fuchsin), 제일 넬슨(Zeil-Neelsen)으로부터 선택될 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.
다른 실시예에서, 접착제 코팅 현미경 슬라이드와의 H&E 착색을 위한 바람직한 용액은 다음과 같다.
PRS-H&E의 기본 버전은 H&E 타깃만을 지원한다. 타깃은 헤마테인 + 매염제 및 에오신 Y과 독자적으로 반응하도록 설계된다. 그러나, 헤마테인용 매염제가 인텅스텐산이면, 추가적인 타깃 부위가 인텅스텐산에 대해서만 필요할 것이다.
헤마테인 + 매염제
최소 5개의 요소, dBd 프로파일을 따르는 구배 밀도 어레이를 형성하는 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 혼합물
에오신 Y
하이드로퀴논
이러한 무기 타깃 화학 물질은 가능한 용액일 뿐만 아니라 H&E 착색 순서 중 각각에서 단지 하나의 착색제와 특이하게 반응하게 되는 타깃 시리즈의 생존 능력을 나타낸다. 화학에 능통한 자는 동일한 결과를 달성하기 위해 대체적인 타깃 제제를 개발할 수 있지만, 본 발명의 범위 또는 성과를 변경하지 않는다.
실시예
［실시예 1］ 각 착색 타깃 또는 구배 밀도 타깃 세트의 검사
H&E(도 2), PAP-M(도 3), PAP-A(도 4) 슬라이드가 제작되었으며, 헤마톡실린 및 에오신 착색 검사용 타깃의 동일한 상부 라인을 공유한다. 두 팝 슬라이드의 제2 라인은 인텅스텐산, 오렌지 G, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 및 비스마크 브라운용 타깃을 포함한다. PAP-A가 3개의 슬라이드 모두의 타깃을 포함하므로, PAP-A 슬라이드가 양호하게 기능하여 3개의 슬라이드 유형의 요소를 모두 검사할 수 있는 것을 알 수 있었다. 검사는 착색이 거동하는 방법에 따라 네 그룹으로 나뉘었다.
> 검사 A: 오렌지 G, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 비스마르크 브라운에 대한 착색 존재의 이진(binary) 검사. 검사는 슬라이드를 열거된 착색제 중 하나에 단순히 노출시켜 정확한 포집 타깃이 착색되는 한편 타깃의 밸런스가 착색되지 않는 것을 확인한다.
> 검사 B: 에오신 Y의 pH 기반 검사. 검사는 에오신 Y의 pH를 4.5, 5.5, 및 6.5로 강제한다. 낮은 pH 조건과 높은 pH 조건 모두 매우 나쁘게 착색되어야 하는 한편, 중간 범위 pH 타깃은 정확하게 착색되어야 한다.
> 검사 C: 헤마톡실린의 농도 기반 검사. 검사는 높이 27 mm의 ID 단지(jar) 내에서 50ml의 양으로 바로 만든 농도로 시작한다. 슬라이드가 착색되고, 농축액은 액체를 통해 공기 방울을 발생시키면서 30분 동안 침전하여 산화를 강제하였다. 검사는 4 시간 동안 계속된다.
> 검사 D: 인텅스텐산의 pH의 효과 pH가 8.5에서 7로 떨어짐에 따라 착색 성능이 변화한다.
검사 A 결과: 높이 27mm ID 단지 내에서 50ml 양의 표준 농도 혼합물이 각 착색을 위해 만들어졌다. 각 착색은 복제를 보여주기 위해 3번 검사되었다. 모든 슬라이드는 정확한 타깃이 착색되고 다른 타깃이 착색되지 않은 것을 나타냈다.
검사 B 결과: 5-슬라이드 저장 튜브가 구입된 사용 준비된 신선한 에오신 Y으로 충전되었다. 그 용기는 약 20ml의 시약을 보유한다. 검사는 쌍으로 수행되었다: 정상 및 낮은 pH 이후의 정상 및 높은 pH 공칭 pH는 필요에 따라 붕소 수화물과 붕산과의 조절을 통해 4.5로 설정되었다. 검사 사이클당 3개의 슬라이드가 제작되었다. 정상적인 기준 슬라이드에 따라 pH가 3.5로 낮춰졌고 새 슬라이드가 착색되었다. 정상 기준 착색 이후, pH가 5.5로 상승하였고 새로운 슬라이드가 착색되었다. 예상대로 착색 밀도는 각 슬라이드 세트에 대해 1%로 나타났고 pH 변화로 50% 가까이 떨어졌다.
검사 C 결과: 헤마톡실린이 메이어의 헤말륨 용액으로 구입되었다. 타깃은 모두 포화 상태에서 시작되었고 시간 경과에 따라 시약의 산화가 계속되면서 구배 척도가 나타났다. 검사는 거동을 보여주기 위해 열화를 가속하였다. 4 시간이 경과한 시간에, 100% 타깃이 50% 초과만큼 저하되었다.
검사 D 결과: 인텅스텐산은 높이 27mm ID 단지에 표준 50ml 양으로 혼합되었고 HCl로 8.5로 pH가 조절되었다. 슬라이드가 착색되었고, pH가 0.5 pH만큼 떨어졌다. 검사 사이클은 pH가 7이 될 때까지 반복되었다. 예상대로, 목표물은 모두 pH 8.5에서 포화되었다. pH가 7까지 떨어졌을 때, 구배 밀도 척도가 가시적이었고, 100% 타깃은 약 30%의 색 밀도를 상실했다.
본 출원은 각각 "Process Record Slide for Hematoxylin and Eosin Staining", "Process Record Slide for Pap Smears", "Shield Coating for Protein Deposits of a Microscope Slide" 및 "IHC Imaging Baseline Reference"을 발명의 명칭으로 하여 2017년 6월 15일자로 출원된 미국 가출원 번호 US62/520,334, US62/520,341, 및 US62/520,169그리고 US62/520,178의 우선권을 주장하며, 각각의 개시가 전체로서 본원에 참조로 원용된다.
Claims (24)
- (a) 착색 및 후속 검사를 위하여 조직 절편 또는 느슨한 세포로 구성된 샘플을 적용하기 위한 검출 영역; 및
(b) 각각 단일 착색제에 대해 반응성인 하나 이상의 타깃의 적용을 위한 제어 영역을 포함하는 슬라이드로서,
상기 제어 영역은 상기 슬라이드 상에 직접적으로 영상 기준 로딩 도트를 더 포함하고, 상기 영상 기준 로딩 도트는 흑색 기준 타깃과 백색 기준 타깃을 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 타깃은 알시안 블루(Alcian Blue), 비엘쇼스키 실버 스테인(Bielschowsky Silver Stain), 비스마르크 브라운(Bismarck Brown), 그램 스테인(Gram Stain), 크레실 바이올렛(Cresyl Violet), 폰타나 메송(Fontana Masson), 고단 및 스위트의 실버 스테이닝(Gordan and Sweet's Silver Staining), 라이트 그린(Light Green) SF 또는 패스트 그린(Fast Green) FCF, 그로콧의 메타나민 실버 방법(Grocott's Methanamine Silver Method), 홀의 빌리루빈 스테인(Hall's Bilirubin Stain), 룩솔 패스트 블루 머시커민(Luxol Fast Blue Mucicarmine), 뮬러-머리 콜로이드얼 아이언(Muller-Mowry Colloidal Iron), 뉴메틸렌 블루(New Methylene Blue), 뉴클리어 패스트 레드(Nuclear Fast Red), 오일 레드(Oil Red) O, 오렌지(Orange) G, 디아스타제 소화제 함유 PAS(PAS with Diastase Digestion), PAS(Periodic Acid Schiff), 텅스토인산(Phosphotungstic acid), 프록시리우스 레드(Picro Sirius Red), 프러시아 블루 리액션(Prussian Blue Reaction), 톨루이딘 블루 아시디드파이드(Toluidine Blue Acidified), 트리크롬-고모리의 원스텝(Trichrome-Gomori's One-Step), 트리크롬 메송(Trichrome-Masson's), 베르호프 반 게즌(Verhoff-Van Geison), 본 코사(Von Kossa), 위거트의 레소르신 푸친(Weigert's Resorcin Fuchsin), 제일 넬슨(Zeil-Neelsen)으로 구성되는 군으로부터 선택된 착색제에 독자적으로 결합하도록 선택되는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
타깃은, 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 혼합물, 4-하이드록시벤젠술폰산나트륨, 하이드로퀴논, 이소부탄올, 페놀술폰산, p-톨루엔 술포클로라이드, 및 슬라이드의 접착제 코팅에 공유 결합성으로 결합되는 하이드록실 말단기를 사용하는 것들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
각각 H&E 착색의 일부로서 사용되는 단일 착색제 대해 반응성인 둘 이상의 타깃의 적어도 하나의 어레이를 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 4 항에 있어서,
상기 H&E 착색은 폴리인산 및 폴리비닐알코올의 둘 이상의 구배 밀도 혼합물인 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 팝 스미어 착색의 일부로서 사용되는 단일 착색제에 각각 반응성인 둘 이상의 타깃의 적어도 하나의 어레이를 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 6 항에 있어서,
팝 스미어 착색의 일부로서 사용되는 상기 착색제는: 오렌지 G, 인텅스텐산, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 및 선택적으로 비스마크 브라운을 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 6 항에 있어서,
팝 스미어 착색의 일부로서 사용되는 착색제에 결합되는 상기 타깃은 4-하이드록시벤젠술폰산 나트륨, 이소부탄올, 페놀술폰산 및 p-톨루엔 술포클로라이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 상기 슬라이드를 상기 타깃에 결합시키는 접착제로 코팅되고, 상기 접착제는 공유 결합성으로 유리에 부착되고, 아민, 아미드, 카르복실 및 하이드록실로 구성되는 군으로부터 선택되는 반응성 말단기와 공형(conformal)을 이루는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 흑색 기준 타깃은 탄소 먼지로부터 선택되고, 상기 백색 기준 타깃은 티타늄 산화물, 알루미늄 산화물, 알루미늄 설페이트, 또는 바륨 설페이트로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 상기 슬라이드의 라벨 공간 아래에 적용되는 로트 코드 번호를 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 라벨 공간 또는 상기 슬라이드 상의 어느 곳에 적용되는 마킹 라벨을 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 세정 세포 슬러리가 퍼지는 것을 방지하도록 친수성 배리어 링을 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 딥 앤 덩크(dip and dunk), 모세관 간극, 및 착색 처리 시 유사한 기능을 수행하는 다른 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 1 항에 있어서,
상기 슬라이드는 상기 슬라이드 상의 무기 타깃 또는 무기 침착물을 위한 파라핀 코팅으로 더 커버되고,
파라핀 차폐 코팅은,
(a) 고체 파라핀이 액체 파라핀으로 용융될 때까지 60 내지 75℃의 범위의 온도로 고체 파라핀을 용융하는 단계;
(b) 포화 혼합물이 얻어질 때까지 단계 (a)에서 얻어진 상기 액체 파라핀에 용매를 추가하는 단계;
(c) 단계 (b)에서 얻어진 상기 혼합물을 30 및 33℃ 사이의 온도로 냉각한 후, 투명한 파라핀 액체가 얻어질 때까지 용매를 서서히 추가하는 단계;
(d) 현미경 슬라이드 위에 상기 파라핀 차폐 코팅을 형성하도록 상기 현미경 슬라이드 상의 상기 무기 타깃 또는 무기 침착물 위에 단계 (c)의 결과인 상기 투명 파라핀 액체의 층을 도포하는 단계; 및
(e) 적외선 열을 가하여 상기 파라핀 차폐 코팅으로부터 상기 용매를 증발시켜 파라핀을 경화 및 고체 상태로 복귀시키는 단계;에 의해 상기 현미경 슬라이드 상에 코팅되며,
상기 고체 파라핀은 정화되고 수분이 없고; 또는 상기 고체 파라핀은 50 내지 60℃의 용융 온도를 갖고; 또는 상기 파라핀은 용융 온도가 56℃인 써모 피셔(Thermo Fisher)의 티슈프렙 & 티슈프렙(TissuePrep & TissuePrep) 2, 용융 온도가 56℃인 레이카(Leica)의 파라플라스트 & 파라플라스트 플러스(Paraplast & Paraplast plus), 및 용융 온도가 50 내지 54℃인 레이카(Leica)의 파라플라스트 엑스트라(Paraplast X-tra)로부터 선택되고; 또는 상기 용매는 자일렌, 지방족 자일렌 대체물, 톨루엔, 도료 시너, 테레빈유, 아세톤 및 등유의 50:50 혼합물, 또는 상기 열거된 용매의 혼합물로부터 선택되고; 또는 단계 (d)의 층은 1 및 5 마이크론 사이의 두께를 갖는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - 제 15 항에 있어서,
상기 파라핀 차폐 코팅은 상기 현미경 슬라이드 상의 상기 무기 타깃 및/또는 무기 침착물을 산화 및/또는 미생물 공격으로부터 보호하고, 무기물을 산화 및/또는 공기 중 전달된 산성 및 염기성 물질을 야기하는 반응으로부터 보호하는 데에 사용되고; 또는 상기 파라핀 차폐 코팅은 상기 현미경 슬라이드 상의 상기 무기 타깃 및/또는 무기 침착물의 보존 기간을 증가시키는 데에 사용되는 것을 특징으로 하는 슬라이드. - b. 슬라이드의 조직 절편 또는 느슨한 세포의 적용을 위한 영역에 상기 조직 절편 또는 느슨한 세포로 이루어진 샘플을 적용하는 단계;
c. 하나 이상의 착색제를 상기 샘플 및 착색제에 결합할 수 있는 타깃에 적용하는 단계;
d. 표적 구배에 기초하여 착색된 조직 또는 세포의 색 밀도를 정량적으로 결정하고/하거나, 타깃의 착색 결과에 기초하여 조직 또는 세포에 대한 착색 과정을 평가하는 단계로 이루어지고,
선택적으로, 파라핀 코팅이 슬라이드 상의 타깃에 선택적으로 적용되고 조직 절편/느슨한 세포도 파라핀에 포매되면,
a. 파라핀에 포매된 조직 절편 또는 느슨한 세포 및 파라핀 차폐 코팅으로부터 파라핀을 제거하는 단계는
상기 단계 (b) 이전에 수행되는 것을 특징으로 하는 제 1 항의 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 17 항에 있어서,
단계 (a)에서 파라핀의 제거는 65 내지 75℃ 범위의 온도에서 3-10분 동안 파라핀을 가온하여 파라핀의 반액화 상태를 얻은 후, 완충 용액에서 재수화될 때까지 유기 용매 시리즈로 액화함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 18 항에 있어서,
상기 유기 용매는 자일렌 또는 자일롤, 무수 에탄올, 95% 에탄올, 70% 에탄올, 50% 에탄올과 같은 지방족 용매로 시작하는 일련의 용매 및 각각 명목상 3분의 노출 시간을 갖는 염계 완충 용액으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 19 항에 있어서,
상기 착색은 헤마톡실린-에오신 착색(H&E 착색), 팝 스미어 착색 또는 둘 모두인 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 19 항에 있어서,
H&E 착색을 위한 착색제에 결합하는 타깃은 하이드로 퀴논 및 폴리 인산 및 폴리 비닐 알콜의 혼합물이고,
팝 스미어 착색에 사용되는 상기 착색제는: 오렌지 G, 인텅스텐산, 라이트 그린 SF 또는 패스트 그린 FCF, 및 선택적으로 비스마크 브라운을 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 21 항에 있어서,
팝 스미어 착색을 위한 착색제에 대해 결합하는 타깃은 4-하이드록시 벤젠술폰산나트륨, 이소부탄올, 페놀술폰산 및 p-톨루엔 설포클로라이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 22 항에 있어서,
팝 스미어 착색을 위한 착색제에 결합하는 타깃은 슬라이드 상의 H&E 착색을 위한 착색제에 결합하는 타깃과 공존하는 것을 특징으로 하는 슬라이드로 착색하는 방법. - 제 1 항에 따른 슬라이드를 포함하거나, 제 17 항의 방법을 수행하기 위한 키트.
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