CN111811910A - 一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒及其染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素‑伊红试剂盒，该试剂盒包括由以下组分构成：二甲苯、无水乙醇、Von kossa银染液、海波溶液、苏木素染色液、伊红染色液、苏木素分化液、苏木素返蓝液；一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素‑伊红试剂盒的染色方法，包括如下步骤构成，S1:脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素‑伊红(HE)试剂盒及其染色方法通过技术优化将钙盐染色和HE染色相结合，应用于各种组织钙盐沉积和病变情况的判断，与单纯石蜡切片钙盐染色，HE染色相比，结果对比明显，染色清晰，易于判断。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药应用领域，尤其是涉及一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒及其染色方法。
背景技术
钙质是人体不可缺少的一大营养素，一旦缺乏，可能因为骨骼不坚固出现骨折等问题。临床上与之相似的一种病症被称为钙质沉着。钙质沉着症是不溶性钙盐沉积于组织所产生的疾病。分为特发性、转移性和营养不良性。特发性钙质沉着症多原因不明，转移性钙质沉着症继发于钙磷代谢障碍性疾病，如甲状旁腺功能亢进、多发性骨髓瘤、肾功能不全使磷酸盐潴留等。营养不良性钙质沉着症多继发于皮肤或组织损伤。现临床上大多慢性病会伴随血管钙质沉积。使用石蜡切片进行钙盐染色(Von kossa银法)检测钙质沉积是目前最简单，直接，有效的方法。苏木精-伊红(HE)染色是组织学、胚胎学、病理学和科研中最基本、使用最广泛的技术方法。是区分和辨别正常组织和病变组织最简单、快捷和直接的方法。由于临床上获取样本后，必须制作多张冰冻切片，石蜡切片等进行各种染色，已备观察结果。由于临床获得样本较少，且个体差异较大，对样本取材要求较高，若染色结果不理想，需要进行重复染色，造成样本量不足做更多染色检测。
为此，提出一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒及其染色方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒及其染色方法，该试剂盒染色过程简单快捷，可以用于同一张切片上染色显示钙盐沉积及病变情况，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染HE可减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间短，稳定性高，实验结果对比明显，所呈现的结果信息远远高于传统单染，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒，该试剂盒包括由以下组分构成：二甲苯、无水乙醇、Von kossa银染液、海波溶液、苏木素染色液、伊红染色液、苏木素分化液、苏木素返蓝液。
一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒的染色方法，包括如下步骤构成：
S1:脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2:切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3:切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4:苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5:苏木素分化液分化30sec，观察分化效果，流水稍冲洗；
S6:苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7:镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min；
S8:95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ，中性树胶封片。
优选的，所述S8中二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min。
优选的，所述S1至S8过程中，切片水洗及染色时，染色所需溶液要完全没过切片整体。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.一张切片显示多种信息，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法通过技术优化将钙盐染色和HE染色相结合，应用于各种组织钙盐沉积和病变情况的判断，与单纯石蜡切片钙盐染色，HE染色相比，结果对比明显，染色清晰，易于判断。
2.结果稳定，易推广，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间缩短，稳定性高，实验结果直观可靠，所提供的信息量高于传统单独染色。
3.扩大了石蜡切片应用范围，节省资源和时间，本发明的石蜡切片钙盐染色(Vonkossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法同时具备判断钙盐沉积情况和病变情况，节约材料和制样及观察时间。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的血管组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色一图；
图2为本发明的血管组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色二图；
图3为本发明的皮肤组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色一图；
图4为本发明的皮肤组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色二图；
图5为本发明实施例一中的正常血管组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色图；
图6为本发明实施例二中的病变血管组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色图；
图7为本发明实施例三中的正常皮肤组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色图；
图8为本发明实施例四中的病变皮肤组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)染色图。
具体实施方式
下面将结和本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1至图8，本发明提供四种实施例：
实施例一：
正常血管组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)
多聚甲醛固定，石蜡包埋正常血管组织，石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)步骤如下：
S1.脱蜡至水：采用常规方法制备正常血管组织石蜡切片，依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2.切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3.切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4.苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5.苏木素分化液分化30sec(观察分化效果)，流水稍冲洗；
S6.苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7.镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min；
S8.95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min，中性树胶封片。
正常血管组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)结果如图5所示，组织结构清晰，无黑色沉淀，说明无钙盐沉积。
实施例二：
病变血管组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)
多聚甲醛固定，石蜡包埋病变血管组织，石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)步骤如下：
S1.脱蜡至水：采用常规方法制备病变血管组织石蜡切片，依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2.切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3.切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4.苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5.苏木素分化液分化30sec(观察分化效果)，流水稍冲洗；
S6.苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7.镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min；
S8.95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min，中性树胶封片。
病变血管组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)结果如图6所示，组织结构清晰，血管增生，有大量黑色沉淀，说明有钙盐沉积。
实施例三：
正常皮肤组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)
多聚甲醛固定，石蜡包埋正常皮肤组织，石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)步骤如下：
S1.脱蜡至水：采用常规方法制备正常皮肤组织石蜡切片，依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2.切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3.切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4.苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5.苏木素分化液分化30sec(观察分化效果)，流水稍冲洗；
S6.苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7.镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min；
S8.95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min，中性树胶封片。
正常皮肤组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)结果如图7所示，组织结构清晰，无黑色沉淀，说明无钙盐沉积。
实施例四：
病变皮肤组织钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)
多聚甲醛固定，石蜡包埋病变皮肤组织，石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)步骤如下：
S1.脱蜡至水：采用常规方法制备病变皮肤组织石蜡切片，依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2.切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3.切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4.苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5.苏木素分化液分化30sec(观察分化效果)，流水稍冲洗；
S6.苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7.镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min。
S8.95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min，中性树胶封片。
病变皮肤组织石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)结果如图8所示，组织结构清晰，伴随大量炎症浸润，有大量黑色沉淀，说明有钙盐沉积。
有益效果：
1.一张切片显示多种信息，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法通过技术优化将钙盐染色和HE染色相结合，应用于各种组织钙盐沉积和病变情况的判断，与单纯石蜡切片钙盐染色，HE染色相比，结果对比明显，染色清晰，易于判断。
2.结果稳定，易推广，本发明的石蜡切片钙盐染色(Von kossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间缩短，稳定性高，实验结果直观可靠，所提供的信息量高于传统单独染色。
3.扩大了石蜡切片应用范围，节省资源和时间，本发明的石蜡切片钙盐染色(Vonkossa银法)套染苏木素-伊红(HE)试剂盒及其染色方法同时具备判断钙盐沉积情况和病变情况，节约材料和制样及观察时间。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (4)
1.一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括由以下组分构成：二甲苯、无水乙醇、Von kossa银染液、海波溶液、苏木素染色液、伊红染色液、苏木素分化液、苏木素返蓝液。
2.根据权利要求1所述的一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒的染色方法，其特征在于，包括如下步骤构成：
S1:脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min、二甲苯Ⅱ15min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、85％酒精5min、75％酒精5min、蒸馏水洗；
S2:切片入Von Kossa银溶液，强光照射30min，蒸馏水洗1min；
S3:切片入海波溶液处理2min，蒸馏水洗1min；
S4:苏木素染色3-5min，流水稍冲洗；
S5:苏木素分化液分化30sec，观察分化效果，流水稍冲洗；
S6:苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗；
S7:镜检着色满意后入伊红染色液染色3-5min；
S8:95％酒精Ⅰ5min、95％酒精Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ，中性树胶封片。
3.根据权利要求2所述的一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒的染色方法，其特征在于：所述S8中二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ10min。
4.根据权利要求2所述的一种石蜡切片钙盐染色套染苏木素-伊红试剂盒的染色方法，其特征在于：所述S1至S8过程中，切片水洗及染色时，染色所需溶液要完全没过切片整体。
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