JP7345340B2 - 角質中のセラミドの測定方法 - Google Patents
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Description
項1. 透明基材と、前記透明基材上に積層された接着性層とを含む角質採取具を用いて付着採取させた角質検体を、前記角質採取具に付着した状態で偏光顕微鏡観察に供し、偏光顕微鏡像の白光を測定する工程を含む、角質中のセラミドの測定方法。
項2. 前記接着性層がエラストマーを含む、項1に記載の角質中のセラミドの測定方法。
項3. 前記接着性層中の構成樹脂が、実質的に合成ゴム及び/又は天然ゴムからなる、項1又は2に記載の角質中のセラミドの測定方法。
項4. 前記透明基材が、合成樹脂のキャスト基材又は無機基材である、項1~3のいずれかに記載の角質中のセラミドの測定方法。
項5. 前記透明基材の材料が、セルロースエステル及び熱可塑性ポリウレタンからなる群より選択される、項1~3のいずれかに記載の角質中のセラミドの測定方法。
項6. 透明基材と、前記透明基材上に積層された接着性層とを含み、偏光顕微鏡下で角質中のセラミドを測定するために用いられる、角質採取具。
項7. 前記接着性層がエラストマーを含む、項6に記載の角質採取具。
項8. 前記接着性層中の構成樹脂が、実質的に合成ゴム及び/又は天然ゴムからなる、項6又は7に記載の角質採取具。
項9. 前記透明基材が、合成樹脂のキャスト基材又は無機基材である、項6~8のいずれかに記載の角質採取具。
項10. 前記透明基材の材料が、セルロースエステル及び熱可塑性ポリウレタンからなる群より選択される、項6~8のいずれかに記載の角質採取具。
項11. 項1~4のいずれかに記載のセラミドの測定方法を行う工程と、
得られたセラミド測定結果に基づいて、顧客の肌状態に応じた化粧品を選択する工程とを含む、化粧品の選択方法。
本発明の角質中のセラミドの測定方法は、所定の角質採取具を用いて付着採取させた角質検体を、角質採取具に付着した状態で偏光顕微鏡観察に供し、偏光顕微鏡像の白光を測定する工程を含むことを特徴とする。以下、本発明の角質中のセラミドの測定方法について詳述する。
角質採取具は、透明基材と、前記透明基材上に積層された接着性層とを含む。透明基材は接着性層を保持し、接着性層は表面に角質を付着させることで、生体表皮からの角質採取を可能にする。角質採取具は、透明基材及び接着性層以外に、他の層が積層されていてもよい。また、透明基材及び接着性層は、それぞれ単層であってもよいし、複層であってもよい。
角質の採取法としては、角質採取具の接着性層に角質を付着させることができれば、どのような方法であってもよい。通常、角質採取具の接着性層を皮膚表面に貼って剥がすことで、角質を容易に剥がす(ストリッピング)ことができる。このようにして、角質検体を付着採取することができる。
本発明の角質中のセラミドの測定方法においては、採取した角質中のセラミドを抽出単離することを行わず、角質採取具に付着した状態で直接、偏光顕微鏡観察に供する。生体内のセラミドはラメラ構造を有しているため、偏光顕微鏡像において、角質中のセラミドは白光シグナルを呈する。このため、白光シグナルを測定することで、角質中のセラミドを測定することができる。このように、本発明では、採取した角質から測定対象成分を抽出単離することなく、さらに、測定対象成分に対する反応試薬もシグナル試薬も用いないため、極めて簡便な測定が可能である。
セラミドに由来する白光シグナル強度は、実際のセラミド含有量と良好に相関している。従って、白光シグナル強度の多寡に基づいて、角質中のセラミドを定量することができる。セラミドの定量を行うために、偏光顕微鏡像において、白光シグナルの数量化を行うことができる。
255]Lk)をセラミド含有量の相対値として得る方法が挙げられる。この場合、閾値法等で画像処理して白色シグナル部分を抽出選択し、抽出選択された白色シグナル部分のピクセルにおける輝度を積算することができる。白色強度が高いほど、積算値が高くなるため、このようにして得られるセラミド含有量の相対値は、実際のセラミド含有量と相関する。
mountと記載する場合がある。)を、セラミド含有量の相対値として得る方法も挙げられる。白色強度が高いほど、輝度が高いピクセルが多く存在することで積算値が高くなるため、このようにして得られるセラミド含有量の相対値は、実際のセラミド含有量と相関する。
本発明の角質中のセラミドの測定方法が適用される場合としては、皮膚の状態を評価する場合であれば特に限定されない。例えば、外用組成物の開発において皮膚への有効性評価を行う場合、化粧品の販売において顧客の肌状態に応じた商品の提案を行う場合、皮膚科の問診において外用医薬品を処方する場合、美容外科又はエステティックサロンのカウンセリングにおいて施術計画を立案する場合等が挙げられる。
上述の角質中のセラミドの測定方法は、皮膚の状態(具体的には角質に含まれるセラミドの多寡)を直接的に且つ簡便に測定できるため、化粧品の適用対象に対し、その肌の状態に応じた化粧品を選択する方法に使用することができる。つまり、本発明は、上記のセラミドの測定方法を行う工程と、得られたセラミド測定結果に基づいて、顧客の肌状態に応じた化粧品を選択する工程とを含む、化粧品の選択方法も提供する。
(角質採取具の作製)
透明基材片面に、表1に記載する組成の接着性組成物を厚さ0.5mmとなるように塗布し、3時間乾燥させ、接着性層を得た。スライドガラス上で接着性層が占める面積は、15.9cm2であった。なお、実施例1及び2で用いた透明基材は武藤化学社製スターフロストスライドグラス水縁磨ホワイト5116(厚さ1.0mm)であり、実施例3で用いた透明基材は名村大成堂社製トリアセチルセルロース(A4サイズ、厚さ0.1mm)であり、実施例4で用いた透明基材は大倉工業社製熱可塑性ポリウレタンSNY97(厚さ0.08mm)である。また、実施例1で用いた接着性組成物はコニシ(株)製ボンドGクリヤーであり、実施例2、3、4で用いた接着性組成物はマルニ工業(株)製ゴムノリである。このようにして作製された角質採取具の接着面を両腕上腕部の皮膚表面に1回貼り付けてストリッピングすることにより、角質を採取した。
角質が付着採取される前の角質採取具の、透明基材と接着性層との積層部分におけるリタデーションを、WPA-200(フォトニックラティス社製複屈折計測装置、384×288ピクセル)を用いて測定した。具体的には、角質採取具の上記積層部分の面方向のリタデーションイメージングを、25℃で、523、543、及び575nmの波長にて行い、四方末端から少なくとも0.5cm内側に位置する1cm2の範囲内のリタデーション面分布における、リタデーションの平均値MR525nm、MR543nm、MR575nmを求め、更に、平均値MR525nm、MR543nm、MR575nmの平均値を、採取具のリタデーションとして得た。結果を表1に示す。なお、表1中、「≦1」は、リタデーションの平均値が1以下であり、測定誤差を鑑みるとほぼ0とみなすことができることを示す。
×:セラミド由来の偏光と区別が困難となる程度に角質採取具自体から障害となる偏光が観察された。
△:角質採取具自体から偏光は若干確認されたが、障害となる程度ではなかった。
○:角質採取具自体から偏光がほとんど確認されなかった。
角質が付着採取された角質採取具を、オリンパス(株)製BX53-Pを用い、直行ニコル(偏光板)条件下、シャッタースピード100ms、ISO200にて撮影し、偏光顕微鏡像2を得た。得られた偏光顕微鏡像2(角質採取具及びそれに付着採取した角質の像)について、以下の基準で透光性の判定を行った。結果を表1に示す。
×:偏光観察が困難となる程度に角質採取具による遮光の程度が大きい。
△:角質採取具による遮光は若干確認されたが、偏光観察の障害となる程度ではなかった。
○:透光性が良好で容易に偏光観察できた。
(検量線の作成)
まず、実施例2の角質採取具を用いて、被験者17名それぞれの両腕上腕部の皮膚表面から角質を試験例1と同様にストリッピングし、1名の片腕当たり5サンプルの角質検体を採取した。各サンプルを試験例1と同様の条件で観察し、偏光顕微鏡像(拡大倍率100倍)を得た、得られた偏光顕微鏡像を、画像処理ソフトウェアImage Jを用いて処理した。処理の方法としては以下の(i)及び(ii)の2パターン行った。
k)を、セラミド含有量の相対値として得た。被験者1名の片腕から採取した5サンプルごとに、得られたセラミド含有量の相対値を総計した。このようにして得られたセラミド相対値を、セラミド相対値1と記載する。
)を、セラミド含有量の相対値として得た。被験者1名の片腕から採取した5サンプルごとに、得られたセラミド含有量の相対値を総計した。このようにして得られたセラミド相対値を、セラミド相対値2と記載する。
流速: 1mL/min
移動相: A:0.1v/v%酢酸 B:メタノール
B比率:80v/v%(0~20分)、100v/v%(20~40分)
80v/v%(40~50分)
カラム温度:40℃
波長: 励起:335nm 蛍光:440nm
注入量: 5μL
内部標準: C16スフィンゴシン(スフィンゴイド塩基)10μM
検量線作成に用いた被験者とは別の被験者a~cから、それぞれ、両腕上腕部の皮膚表面から角質を試験例1と同様にストリッピングし、1名の片腕当たり5サンプルの角質検体を採取した。採取した角質について、上述と同様にしてセラミド相対値1及びセラミド相対値2を算出し、それぞれ、図1及び図2の検量線に基づいて、HPLC測定した場合に想定されるセラミド量を導出した。さらに、採取した角質について、上述と同様にしてセラミド含有量をHPLCで定量し、実際のセラミド定量値も得た。結果を表2及び表3に示す。
Claims (11)
- 透明基材と、前記透明基材上に積層された接着性層とを含む角質採取具を用いて付着採取させた角質検体を、前記角質採取具に付着した状態で偏光顕微鏡観察に供し、偏光顕微鏡像の白光を測定する工程を含む、角質中のセラミドの測定方法。
- 前記接着性層がエラストマーを含む、請求項1に記載の角質中のセラミドの測定方法。
- 前記接着性層中の構成樹脂が、合成ゴム及び/又は天然ゴムのみである、または合成ゴム及び/又は天然ゴムと合成ゴム及び天然ゴム以外の他の樹脂とを含み、合成ゴム及び天然ゴム以外の他の樹脂の含有量は、合成ゴム及び天然ゴムの合計量100重量部に対して1重量部以下である、請求項1又は2に記載の角質中のセラミドの測定方法。
- 前記透明基材が、合成樹脂のキャスト基材又は無機基材である、請求項1~3のいずれかに記載の角質中のセラミドの測定方法。
- 前記透明基材の材料が、セルロースエステル及び熱可塑性ポリウレタンからなる群より選択される、請求項1~3のいずれかに記載の角質中のセラミドの測定方法。
- 透明基材と、前記透明基材上に積層された接着性層とを含み、前記透明基材及び前記接着性層が積層されている部分のリタデーションが20nm以下であり、偏光顕微鏡下で角質中のセラミドを測定するために用いられる、角質採取具。
- 前記接着性層がエラストマーを含む、請求項6に記載の角質採取具。
- 前記接着性層中の構成樹脂が、合成ゴム及び/又は天然ゴムのみである、または合成ゴム及び/又は天然ゴムと合成ゴム及び天然ゴム以外の他の樹脂とを含み、合成ゴム及び天然ゴム以外の他の樹脂の含有量は、合成ゴム及び天然ゴムの合計量100重量部に対して1重量部以下である、請求項6又は7に記載の角質採取具。
- 前記透明基材が、合成樹脂のキャスト基材又は無機基材である、請求項6~8のいずれかに記載の角質採取具。
- 前記透明基材の材料が、セルロースエステル及び熱可塑性ポリウレタンからなる群より選択される、請求項6~8のいずれかに記載の角質採取具。
- 請求項1~4のいずれかに記載のセラミドの測定方法を行う工程と、
得られたセラミド測定結果に基づいて、顧客の肌状態に応じた化粧品を選択する工程とを含む、化粧品の選択方法。
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