KR101948347B1

KR101948347B1 - 비스(플루오로알킬)-1,4-벤조디아제피논 화합물

Info

Publication number: KR101948347B1
Application number: KR1020137027347A
Authority: KR
Inventors: 클로드 퀘스넬; 숭훈 김; 프랜시스 리; 아쉬비니쿠마르 가바이
Original assignee: 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date: 2011-03-22
Filing date: 2012-03-22
Publication date: 2019-02-14
Also published as: AR085471A1; US8629136B2; CO6771446A2; PL2688873T3; DK2688873T3; JP5873923B2; US20120245151A1; ES2534080T3; AU2012230904A1; JP2014511840A; TN2013000372A1; SI2688873T1; SMT201500091B; CA2830902C; BR112013024059B1; SG193555A1; TWI530489B; TW201309656A; CL2013002690A1; UY33961A

Abstract

화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물이 개시되어 있다.
<화학식 I>

상기 식에서, R₁은 CH₂CF₃ 또는 CH₂CH₂CF₃이고; R₂는 CH₂CF₃, CH₂CH₂CF₃ 또는 CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₃은 H 또는 CH₃이고; 각각의 R_a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 NHCH₂CH₂OCH₃이고; z는 0, 1 또는 2이다. Notch 수용체를 억제하는 이러한 화합물 및 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물을 사용하는 방법이 또한 개시되어 있다. 이들 화합물은 다양한 치료 분야에서의 질환 또는 장애, 예컨대 암의 치료, 예방 또는 진행 지연에 유용하다.

Description

비스(플루오로알킬)-1,4-벤조디아제피논 화합물 {BIS(FLUOROALKYL)-1,4-BENZODIAZEPINONE COMPOUNDS}

본 발명은 일반적으로 Notch 억제제로서 유용한 벤조디아제피논 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 Notch 경로와 관련된 상태, 예컨대 암 및 다른 증식성 질환의 치료에 유용한 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

Notch 신호전달은 다양한 세포 과정, 예컨대 세포 운명 결정, 분화, 증식, 아폽토시스 및 혈관신생에 연관되어 있다. (문헌 [Bray, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 7:678-689 (2006); Fortini, Developmental Cell 16:633-647 (2009)]). Notch 단백질은 단일-통과 이종이량체 막횡단 분자이다. Notch 패밀리는 DSL 패밀리로부터의 리간드 (Delta-유사 1, 3, 4 및 Jagged 1 및 2)에 결합하면 활성화되는 4종의 수용체, NOTCH 1-4를 포함한다.

NOTCH의 활성화 및 성숙은 감마 세크레타제, 프레세닐린 1 또는 프레세닐린 2를 함유하는 다중단백질 복합체, 니카스트린, APH1 및 PEN2에 의해 매개되는 단백질분해적 절단 단계를 포함하는 일련의 프로세싱 단계를 필요로 한다. 일단 NOTCH가 절단되면, NOTCH 세포내 도메인 (NICD)이 막으로부터 방출된다. 방출된 NICD는 핵으로 전위되며, 여기서 그것이 CSL 패밀리 구성원 (RBPSUH, "헤어리스의 억제인자", 및 LAG1)과 함께 전사 활성화제로서 작용한다. NOTCH 표적 유전자는 HES 패밀리 구성원, 예컨대 HES-1을 포함한다. HES-1은 유전자, 예컨대 HERP1 (HEY2로도 공지됨), HERP2 (HEY1로도 공지됨) 및 HATH1 (ATOH1로도 공지됨)의 전사 리프레서로서 작용한다.

Notch 경로의 이상 활성화는 종양발생에 기여한다. Notch 신호전달의 활성화는 다양한 고형 종양, 예를 들어 난소암, 췌장암 뿐만 아니라 유방암 및 혈액 종양, 예컨대 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종의 발병기전에 연관되어 있다. 다양한 고형 종양 및 혈액 종양의 치료에 있어서 Notch 억제의 역할 및 그의 유용성은 문헌 [Miele, L. et al., Current Cancer Drug Targets, 6:313-323 (2006); Bolos, V. et al., Endocrine Reviews, 28:339-363 (2007); Shih, I.-M. et al., Cancer Research, 67:1879-1882 (2007); Yamaguchi, N. et al., Cancer Research, 68:1881-1888 (2008); Miele, L., Expert Review Anticancer Therapy, 8:1197-1201 (2008); Purow, B., Current Pharmaceutical Biotechnology, 10:154-160 (2009); Nefedova, Y. et al., Drug Resistance Updates, 11:210-218 (2008); Dufraine, J. et al., Oncogene, 27:5132-5137 (2008); 및 Jun, H.T. et al., Drug Development Research, 69:319-328 (2008)]에 기재되어 있다.

Notch 억제제로서 유용하고, 유효한 약물 노출 수준을 제공하기에 충분한 대사 안정성을 갖는 화합물에 대한 필요가 남아있다. 또한, 환자에게 경구로 또는 정맥내로 투여될 수 있는 Notch 억제제로서 유용한 화합물에 대한 필요가 남아있다.

미국 특허 번호 7,053,084 B1은 신경계 장애, 예컨대 알츠하이머병을 치료하는데 유용한 숙시노일아미노 벤조디아제핀 화합물을 개시한다. 참고문헌은 이들 숙시노일아미노 벤조디아제핀 화합물이 아밀로이드 단백질의 신경계 침착물의 형성과 연관된 감마 세크레타제 활성 및 아밀로이드 전구체 단백질의 프로세싱을 억제한다는 것을 개시한다. 참고문헌은 증식성 질환, 예컨대 암의 치료에서 이들 화합물의 용도를 개시하지는 않는다.

본 출원인은 Notch 억제제로서 활성을 가지고 있고 정맥내 또는 경구 투여시 유효한 약물 노출 수준을 제공하기에 충분한 대사 안정성을 갖는 강력한 화합물을 발견하였다. 이들 화합물은 이들의 약물성에 중요한 바람직한 안정성, 생체이용률, 치료 지수 및 독성 값을 갖는 제약으로서 유용한 것으로 제공된다.

본 발명은 Notch 신호전달 경로의 선택적 억제제로서 유용한 비스(플루오로알킬)-1,4-벤조디아제피논 화합물 및 그의 전구약물을 제공함으로써 상기 필요성을 충족시킨다.

본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체; 및 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 전구약물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 포유동물 환자에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, Notch 수용체의 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제조하기 위한 방법 및 중간체를 제공한다.

본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물의 용도를 제공한다.

화학식 I의 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 조성물은 다양한 Notch 수용체-관련 상태를 치료하거나 예방하거나 치유하는데 사용될 수 있는 Notch 억제제이다. 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물은 다양한 치료 분야에서의 질환 또는 장애, 예컨대 암의 치료, 예방 또는 진행 지연에 유용하다.

본 발명의 이들 및 다른 특징은 개시내용이 계속됨에 따라 확장된 형태로 설명될 것이다.

본 발명은 하기 기재된 첨부 도면을 참조하여 예시된다.
도 1은 실시예 1의 화합물의 N-1 형태의 실험 (대략 25℃에서) 및 모의 (대략 25℃에서) PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å)을 나타낸다.
도 2는 실시예 1의 화합물의 A-2 형태의 실험 (대략 25℃에서) 및 모의 (대략 25℃에서) PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å)을 나타낸다.
도 3은 실시예 1의 화합물의 EA-3 형태의 실험 (대략 25℃에서) 및 모의 (대략 25℃에서) PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å)을 나타낸다.
도 4는 실시예 1의 화합물의 THF-2 형태의 실험 (대략 25℃에서) 및 모의 (대략 -50℃에서) PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å)을 나타낸다.
도 5는 실시예 2의 화합물의 M2-1 형태의 실험 (대략 25℃에서) 및 모의 (대략 25℃에서) PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å)을 나타낸다.
도 6은 TALL1 인간 T-세포 급성 림프모구성 백혈병에 대한 실시예 1의 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (■) 실시예 1, 5 mg/kg/adm, QD x 3, IV.
도 7은 T-세포 급성 림프모구성 백혈병 세포주 TALL1에서 실시예 2의 생체내 항종양 활성을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (△) 실시예 2, 12 mg/kg, QDx15; (■) 실시예 2, 6 mg/kg, QDx15; (□) 실시예 2, 3 mg/kg, QDx15; (▲) 실시예 2, 1.5 mg/kg, QDx15; (○) 실시예 2, 0.75 mg/kg, QDx15.
도 8은 인간 유방 암종 세포주 MDA-MB-157에서 실시예 2의 생체내 항종양 활성을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (○) 대조군; (▲) 실시예 2, 24 mg/kg; (■) 실시예 2, 18 mg/kg; (●) 실시예 2, 12 mg/kg.
도 9는 ALL-SIL T-세포 림프모구성 백혈병에서 실시예 1 및 다사티닙의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (◆) 실시예 1, 3.75 mg/kg/adm, QD x 3, 7주 동안 매주, PO; (■) 다사티닙, 10 mg/kg/adm, QD x 49, PO; (□) 실시예 1, 3.75 mg/kg/adm, QD x 3, 7주 동안 매주, PO + 다사티닙 10 mg/kg/adm, QD x 49, PO. 동일한 날에 투여되는 경우에, 2종의 작용제는 거의 동시에 주어졌다 (실시예 1, 이어서 1시간 미만 내에 다사티닙).
도 10은 ALL-SIL T-세포 림프모구성 백혈병에서 실시예 1 및 다사티닙의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (◆) 실시예 1, 7.5 mg/kg/adm QD x 3, 7주 동안 매주, PO; (■) 다사티닙, 10 mg/kg/adm, QD x 49, PO; (□) 실시예 1, 7.5 mg/kg/adm, QD x 3, 7주 동안 매주, PO + 다사티닙 10 mg/kg/adm, QD x 49, PO. 동일한 날에 투여되는 경우에, 2종의 작용제는 거의 동시에 주어졌다 (실시예 1, 이어서 1시간 미만 내에 다사티닙).
도 11은 MDA-MB-468 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 파클리탁셀의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (◆) 파클리탁셀, 12 mg/kg/adm, Q7D x 6, IV; (▲) 실시예 1, 3.75 mg/kg/adm, QD x 3, 7주 동안 매주, PO; (□) 실시예 1 및 파클리탁셀의 조합물.
도 12는 MDA-MB-468 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 파클리탁셀의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (◆) 파클리탁셀, 12 mg/kg/adm, Q7D x 6, IV; (▲) 실시예 1, 7.5 mg/kg/adm, QD x 3, 7주 동안 매주, PO; (□) 실시예 1 및 파클리탁셀의 조합물.
도 13은 MCF7 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 타목시펜의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (■) 타목시펜, 20 mg/kg/adm, Q2D x 12, IP; (◆) 실시예 1, 3.75 mg/kg/adm, QD x 3, 3주 동안 매주, PO; (□) 실시예 1 및 타목시펜의 조합물.
도 14는 MCF7 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 타목시펜의 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (■) 타목시펜, 20 mg/kg/adm, Q2D x 12, IP; (◆) 실시예 1, 7.5 mg/kg/adm, QD x 3, 3주 동안 매주, PO; (□) 실시예 1 및 타목시펜의 조합물.
도 15는 인간 T-ALL 백혈병 이종이식편 HPB-ALL에서 실시예 1 및 덱사메타손 (덱사)을 사용한 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 6-8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (◆) 덱사메타손, 7.5 mg/kg/adm, QD x 14, IP; (△) 실시예 1, 3.75 mg/kg/adm, QD x 3, 3주 동안 매주, PO; (□) 실시예 1 및 덱사메타손의 조합물.
도 16은 PA-1 인간 난소 기형암종에서 실시예 1 및 카르보플라틴을 사용한 조합 화학요법에 의한 상승작용적 항종양 효능을 나타낸다. 각각의 기호는 8마리 마우스 군의 중앙 종양 부담을 나타낸다. (●) 대조군; (□) 카르보플라틴, 90 mg/kg/adm, Q7D x 3, IV; (△) 실시예 1, 1 mg/kg/adm, QD x 21, PO; (◆) 실시예 1 및 카르보플라틴의 조합물.

본 발명의 제1 측면은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R₁은 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃이고;

R₂는 -CH₂CF₃, -CH₂CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고;

R₃은 H 또는 -CH₃이고;

각각의 R_a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃이고;

z는 0, 1, 또는 2이다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂, R₃, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₂가 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂, R₃, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₂가 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₂가 -CH₂CF₃이고; R₁, R₃, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₂가 -CH₂CH₂CF₃이고; R₁, R₃, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₂가 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₁, R₃, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₃이 H이고; R₁, R₂, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 중수소 (D) 또는 삼중수소 (T)인 화합물이 이 실시양태에 포함된다. 또한, R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고, R₂가 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₃이 -CH₃이고; R₁, R₂, R_a 및 z가 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₃은 메틸 기를 포함하고, 여기서 1개 이상의 수소 원자는 중수소 (D) 및/또는 삼중수소 (T)로 동위원소 치환된다. 이 실시양태의 한 예에서, R₃은 -CD₃이다. 또한, R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고, R₂가 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 z가 2이고, 각각의 R_a가 독립적으로 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃이고; R₁, R₂, 및 R₃이 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고, R₂이 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 z가 1이고, R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 또는 -NHCH₂CH₂OCH₃이고; R₁, R₂ 및 R₃이 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고, R₂가 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 z가 0이고; R₁, R₂ 및 R₃이 제1 측면에서 정의된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고, R₂가 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃인 화합물이 이 실시양태에 포함된다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 0인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고; R₂가 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고; R₃이 H 또는 -CH₃이고; z가 1이고; R_a가 F, Cl, -CN, -OCH₃ 및/또는 -NHCH₂CH₂OCH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 다음으로부터 선택된 제1항에 따른 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다.

한 실시양태는 (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (1); (2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (2); (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (3); (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (4); (2R,3S)-N-((3S)-1-(²H₃)메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (5); (2R,3S)-N-((3S)-7-클로로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (6); (2R,3S)-N-((3S)-8-메톡시-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (7); (2R,3S)-N-((3S)-8-플루오로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (8); (2R,3S)-N-((3S)-7-메톡시-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (9); (2R,3S)-N-((3S)-7-플루오로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (10); (2R,3S)-N-((3S)-8-클로로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (12); (2R,3S)-N-((3S)-8-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (13); (2R,3S)-N-((3S)-7-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (14); (2R,3S)-N-((3S)-8-시아노-9-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (15); (2R,3S)-N-((3S)-8,9-디클로로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-플루오로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (17); (2R,3S)-N-((3S)-9-클로로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (18); (2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (19); (2R,3S)-N1-((3S)-8-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (20); 및 (2R,3S)-N-((3S)-9-((2-메톡시에틸)아미노)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (21)로부터 선택된 화학식 I의 화합물; 및 상기 화합물 중 하나 이상의 전구약물을 제공한다.

본 발명은 그의 취지 또는 본질적인 속성에서 벗어나지 않으면서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다. 본 발명은 본원에 언급된 본 발명의 측면 및/또는 실시양태의 모든 조합을 포함한다. 본 발명의 임의의 및 모든 실시양태가 임의의 다른 실시양태 또는 실시양태들과 조합되어 추가 실시양태를 기재할 수 있다는 것이 이해된다. 또한, 실시양태의 각각의 개별 요소가 임의의 실시양태로부터의 임의의 및 모든 다른 요소와 조합되어 추가 실시양태를 기재하는 것으로 의도되는 것으로 이해된다.

정의

본 발명의 특징 및 이점은 하기 상세한 설명을 읽음으로써 당업자에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다. 명확성을 위해 개별 실시양태와 관련하여 상기 및 하기에 기재된 본 발명의 특정 특징이 또한 조합되어 단일 실시양태를 형성할 수 있음이 인지되어야 한다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태와 관련하여 기재된 본 발명의 다양한 특징이 조합되어 그의 하위조합을 형성할 수도 있다. 본원에서 예시적이거나 또는 바람직한 것으로서 확인되는 실시양태는 예시하려는 의도이며, 제한하려는 의도가 아니다.

본원에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 단수형으로의 언급은 또한 복수형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단수형은 하나 또는 하나 이상을 지칭할 수 있다.

달리 나타내지 않는 한, 충족되지 않은 원자가를 갖는 임의의 헤테로원자는 원자가를 충족시키기에 충분한 수소 원자를 갖는 것으로 간주된다.

본원에 기재된 정의는 본원에 참조로 포함된 임의의 특허, 특허 출원 및/또는 특허 출원 공개공보에 기재된 정의보다 우선한다.

본 발명을 기재하는데 사용된 다양한 용어의 정의를 하기에 열거한다. 이들 정의는 개별적으로 또는 보다 큰 군의 일부로서 (구체적인 경우에 달리 제한되지 않는 한) 명세서 전반에 걸쳐 사용된 경우의 용어에 적용된다.

본 명세서 전반에 걸쳐, 기 및 그의 치환기는 안정한 모이어티 및 화합물을 제공하도록 당업자에 의해 선택될 수 있다.

당업계에서 이용되는 관례에 따라,

는 코어 또는 백본 구조에 대한 모이어티 또는 치환기의 부착 지점인 결합을 도시하기 위해 본원의 구조 화학식에 사용된다.

본원에 사용된 용어 "할로" 및 "할로겐"은 F, Cl, Br 또는 I를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "알킬"은 예를 들어 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 및 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 분지쇄 및 직쇄 둘 다의 포화 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me), 에틸 (Et), 프로필 (예를 들어, n-프로필 및 i-프로필), 부틸 (예를 들어, n-부틸, i-부틸, sec-부틸 및 t-부틸) 및 펜틸 (예를 들어, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸), n-헥실, 2-메틸펜틸, 2-에틸부틸, 3-메틸펜틸 및 4-메틸펜틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 숫자가 기호 "C" 다음에 아래첨자로 나타나는 경우에, 아래첨자는 특정한 기가 함유할 수 있는 탄소 원자의 개수를 보다 구체적으로 정의한다. 예를 들어, "C_1-6알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 알킬 기를 나타낸다.

어구 "제약상 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 언급하기 위해 본원에서 사용된다.

화학식 I의 화합물은 무정형 고체 또는 결정질 고체로서 제공될 수 있다. 동결건조는 화학식 I의 화합물을 고체로 제공하기 위해 사용될 수 있다.

생체내 전환되어 생물활성제 (즉, 화학식 I의 화합물)를 제공할 수 있는 임의의 화합물은 본 발명의 범주 및 취지 내의 전구약물이다.

다양한 형태의 전구약물이 당업계에 널리 공지되어 있으며, 하기에 기재되어 있다:

또한, 화학식 I의 화합물은, 그의 제조에 후속적으로, 바람직하게는 단리 및 정제하여 99 중량% 이상의 양의 화학식 I의 화합물 ("실질적으로 순수한")을 함유하는 조성물을 수득하고, 이어서 이를 본원에 기재된 바와 같이 사용하거나 또는 제제화한다. 이러한 "실질적으로 순수한" 화학식 I의 화합물은 또한 본원에서 본 발명의 일부로서 고려된다.

"안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는, 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리를 견디고 효능있는 치료제로 제제화되기에 충분히 견고한 화합물을 나타내는 것으로 의도된다. 본 발명은 안정한 화합물을 실시하는 것으로 의도된다.

"치료 유효량"은 본 발명의 화합물 단독의 양 또는 청구된 화합물의 조합물의 양 또는 NOTCH 수용체에 대한 억제제로서 작용하기에 효과적이거나 또는 증식성 질환, 예컨대 암을 치료하거나 예방하는데 효과적인 다른 활성 성분과 조합된 본 발명의 화합물의 양을 포함하도록 의도된다.

본원에 사용된 "치료하다" 또는 "치료"는 포유동물에서, 특히 인간에서의 질환-상태의 치료를 포함하고, (a) 질환-상태를 포유동물에서, 특히 이러한 포유동물이 질환-상태에 걸리기 쉽지만, 아직 이를 앓는 것으로 진단되지 않은 경우에 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환-상태를 억제하는 것, 즉 그의 진행을 저지하는 것; 및/또는 (c) 질환-상태를 완화시키는 것, 즉 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.

본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적인 예로서 및 비제한적으로, 수소의 동위원소는 중수소 (D) 및 삼중수소 (T)를 포함한다. 탄소의 동위원소는 ¹³C 및 ¹⁴C를 포함한다. 동위원소-표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상의 기술 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.

실시예 1의 화합물의 결정 형태

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물

은 하나 이상의 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 1의 화합물의 적합한 결정질 형태의 예는 형태 N-1, A-2 및 EA-3을 포함한다.

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물은 제1 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 1의 화합물의 제1 결정질 형태는 "형태 N-1" 또는 "N-1 형태"로서 본원에 언급된 순수한 결정질 형태를 포함한다.

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 N-1 형태는 하기와 거의 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:

셀 치수:

공간군: P2₁

실시예 1의 분자/비대칭 단위: 4

단위 셀에서 분자의 부피/수 = 659 Å³

밀도 (계산치) = 1.402 g/cm³

(여기서, 형태 N-1의 단위 셀 파라미터는 약 -10℃의 온도에서 측정됨).

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 N-1 형태는 실질적으로 도 1에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 1에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 N-1 형태는 5.7±0.2, 7.5±0.2, 10.3±0.2, 10.7±0.2, 15.2±0.2, 16.8±0.2, 20.2±0.2 및 20.7±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (약 25℃의 온도에서 CuKα λ=1.5418Å)을 특징으로 하며, 여기서 형태 N-1의 PXRD 패턴은 약 20℃의 온도에서 측정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 N-1 형태는 실질적으로 표 1에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표를 특징으로 한다.

<표 1>

약 25℃의 온도에서 계산된 실시예 1의 형태 N-1의 분율 원자 좌표; 원자 좌표 (x10⁴) 및 등가 등방성 변위 파라미터 (Å²x 10³)

^*U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 N-1 형태는 실질적으로 순수하다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 N-1 형태는 중량을 기준으로 하여 실시예 1의 화합물의 형태 N-1을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 실질적으로 순수한 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 나타낸다. 가장 바람직하게는, 실질적으로 순수한 결정질 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 결정질 형태는 형태 N-1로 본질적으로 이루어진다. 이 실시양태의 결정질 형태는 실시예 1의 화합물의 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 N-1을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 실시예 1의 화합물의 실질적으로 순수한 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함한다.

추가 실시양태에서, 치료 유효량의 실시예 1의 화합물의 형태 N-1은 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 조합하여 하나 이상의 제약 조성물을 제공한다.

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물은 제2 결정질 형태로 제공된다. 제2 결정질 형태는 "형태 A-2" 또는 "A-2 형태"로서 본원에 언급된 아세톤 용매화물 결정질 형태이다. A-2 형태는 실시예 1의 각각의 분자에 대해 약 1개의 아세톤 분자를 포함한다.

한 실시양태에서, A-2 형태는 하기와 거의 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:

셀 치수:

공간군: P2₁

실시예 1의 분자/비대칭 단위: 2

단위 셀에서 분자의 부피/수 = 767 Å³

밀도 (계산치) = 1.331 g/cm³

(여기서, 형태 A-2의 단위 셀 파라미터는 약 -50℃의 온도에서 측정됨).

또 다른 실시양태에서, A-2 형태는 실질적으로 도 2에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 2에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 A-2 형태는 실질적으로 표 2에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표를 특징으로 한다.

<표 2>

약 25℃의 온도에서 계산된 실시예 1의 형태 A-2의 분율 원자 좌표; 원자 좌표 (x10⁴) 및 등가 등방성 변위 파라미터 (Å²x 10³)

^*U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 A-2 형태는 실질적으로 순수하다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 A-2 형태는 제2 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 A-2를 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 실질적으로 순수한 제2 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실질적으로 순수한 제2 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 제2 결정질 형태는 형태 A-2로 본질적으로 이루어진다. 이 실시양태의 제2 결정질 형태는 제2 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 A-2를 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물은 제3 결정질 형태로 제공된다. 제3 결정질 형태는 "형태 EA-3" 또는 "EA-3 형태"로서 본원에 언급된 에틸 아세테이트 용매화물 결정질 형태이다. EA-3 형태는 실시예 1의 각각의 분자에 대해 약 1개의 에틸 아세테이트 분자를 포함한다.

한 실시양태에서, EA-3 형태는 하기와 거의 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:

셀 치수:

공간군: P2₁2₁2₁

실시예 1의 분자/비대칭 단위: 1

단위 셀에서 분자의 부피/수 = 789 Å³

밀도 (계산치) = 1.357 g/cm³

(여기서, 형태 EA-3의 단위 셀 파라미터는 약 -50℃의 온도에서 측정됨).

또 다른 실시양태에서, EA-3 형태는 실질적으로 도 3에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 3에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 EA-3 형태는 6.8±0.2, 9.6±0.2, 10.6±0.2, 15.4±0.2, 20.5±0.2, 21.0±0.2 및 24.8±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (약 25℃의 온도에서 CuKα λ=1.5418Å)을 특징으로 하며, 여기서 형태 N-1의 PXRD 패턴은 약 20℃의 온도에서 측정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 EA-3 형태는 실질적으로 표 3에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표를 특징으로 한다.

<표 3>

약 25℃의 온도에서 계산된 실시예 1의 형태 EA-3의 분율 원자 좌표; 원자 좌표 (x10⁴) 및 등가 등방성 변위 파라미터 (Å²x 10³)

^*U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 EA-3 형태는 실질적으로 순수하다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 EA-3 형태는 제3 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 EA-3을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 실질적으로 순수한 형태 EA-3은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실질적으로 순수한 형태 EA-3은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 제3 결정질 형태는 형태 EA-3으로 본질적으로 이루어진다. 이 실시양태의 제3 결정질 형태는 제3 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 EA-3을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 실시예 1의 화합물은 제4 결정질 형태로 제공된다. 제4 결정질 형태는 "형태 THF-2" 또는 "THF-2 형태"로서 본원에 언급된 테트라히드로푸란 용매화물 결정질 형태이다. THF-2 형태는 실시예 1의 각각의 분자에 대해 약 1개의 테트라히드로푸란 분자를 포함한다.

한 실시양태에서, THF-2 형태는 하기와 거의 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:

셀 치수:

공간군: P2₁

실시예 1의 분자/비대칭 단위: 2

테트라히드로푸란의 분자/비대칭 단위: 2

부피 = 3082 Å³

(여기서, 형태 THF-2의 단위 셀 파라미터는 약 -50℃의 온도에서 측정됨).

또 다른 실시양태에서, THF-2 형태는 실질적으로 도 4에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 4에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 THF-2 형태는 6.9±0.2, 9.6±0.2, 11.2±0.2, 12.6±0.2, 16.6±0.2, 21.4±0.2 및 24.2±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (약 25℃의 온도에서 CuKα λ=1.5418Å)을 특징으로 하며, 여기서 형태 N-1의 PXRD 패턴은 약 20℃의 온도에서 측정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 THF-2 형태는 실질적으로 표 4에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표를 특징으로 한다.

<표 4>

약 -50℃의 온도에서 계산된 실시예 1의 형태 THF-2의 분율 원자 좌표; 원자 좌표 (x10⁴) 및 등가 등방성 변위 파라미터 (Å²x 10³)

^*U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 THF-2 형태는 실질적으로 순수하다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 THF-2 형태는 제4 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 THF-2를 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 실질적으로 순수한 형태 THF-2는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실질적으로 순수한 형태 THF-2는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 1의 화합물의 제4 결정질 형태는 형태 THF-2로 본질적으로 이루어진다. 이 실시양태의 제4 결정질 형태는 제4 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 THF-2를 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.

실시예 2의 화합물의 결정질 형태

한 실시양태에서, 실시예 2의 화합물

은 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 2의 화합물의 적합한 결정질 형태의 예는 형태 M2-1이다. M2-1 형태는 실시예 2의 각각의 분자에 대해 약 2개의 메탄올 분자를 포함한다.

한 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 M2-1 형태는 하기와 거의 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:

셀 치수:

공간군: P2₁

실시예 2의 분자/비대칭 단위: 2

단위 셀에서 분자의 부피/수 = 777 Å³

밀도 (계산치) = 1.297 g/cm³

(여기서, 형태 M-1의 단위 셀 파라미터는 약 -100℃의 온도에서 측정됨).

또 다른 실시양태에서, M2-1 형태는 실질적으로 도 5에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 5에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 M2-1 형태는 8.2±0.2, 12.2±0.2, 14.2±0.2, 15.1±0.2, 16.8±0.2, 17.3±0.2 및 23.0±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (약 25℃의 온도에서 CuKα λ=1.5418Å)을 특징으로 하며, 여기서 형태 M2-1의 PXRD 패턴은 약 20℃의 온도에서 측정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 2의 M2-1 형태는 실질적으로 표 5에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표를 특징으로 한다.

<표 5>

약 25℃의 온도에서 계산된 형태 M2-1의 분율 원자 좌표; 실시예 2, 형태 M2-1의 원자 좌표 (x10⁴) 및 등가 등방성 변위 파라미터 (Å²x 10³)

U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정된다.

추가 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 M2-1 형태는 실질적으로 순수하다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 M2-1 형태는 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 M2-1을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 형태 M2-1의 실질적으로 순수한 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, M2-1의 실질적으로 순수한 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 결정질 형태는 형태 M2-1로 본질적으로 이루어진다. 이 실시양태의 결정질 형태는 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 형태 M2-1을 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.

화학식 I에 따른 화합물은 치료할 상태에 적합한 임의의 수단에 의해 투여될 수 있으며, 이는 부위-특이적 치료에 대한 필요 또는 전달하려는 화학식 I 화합물의 양에 따라 달라질 수 있다.

또한, 본 발명에는 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물; 및 하나 이상의 비-독성의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 보조제 (본원에서 집합적으로 "담체" 물질로서 지칭됨), 및 원하는 경우에 다른 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 부류가 포함된다. 화학식 I의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의해, 바람직하게는 이러한 경로에 적합한 제약 조성물의 형태로, 및 의도된 치료에 유효한 용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 조성물은, 예를 들어 통상의 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클을 함유하는 투여 단위 제제로, 경구로, 점막으로 또는 비경구로, 예를 들어 혈관내로, 정맥내로, 복강내로, 피하로, 근육내로 및 흉골내로 투여될 수 있다. 예를 들어, 제약 담체는 만니톨 또는 락토스 및 미세결정질 셀룰로스의 혼합물을 함유할 수 있다. 혼합물은 추가의 성분, 예컨대 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘 및 붕해제, 예컨대 크로스포비돈을 함유할 수 있다. 담체 혼합물은 젤라틴 캡슐 내로 충전되거나 또는 정제로서 압축될 수 있다. 제약 조성물은 예를 들어 경구 투여 형태 또는 주입으로서 투여될 수 있다.

경구 투여를 위해, 제약 조성물은, 예를 들어 정제, 캡슐, 현탁액 또는 액체의 형태일 수 있다. 제약 조성물은 바람직하게는 특정한 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위의 형태로 제조된다. 예를 들어, 제약 조성물은 약 1 내지 2000 mg, 바람직하게는 약 1 내지 500 mg, 보다 바람직하게는 약 5 내지 150 mg 범위의 활성 성분의 양을 포함하는 정제 또는 캡슐로서 제공될 수 있다. 인간 또는 다른 포유동물에게 적합한 1일 용량은 환자의 상태 및 기타 인자에 따라 매우 광범위하게 달라질 수 있으나, 통상 방법을 이용하여 결정될 수 있다.

본원에서 고려되는 임의의 제약 조성물은 예를 들어 임의의 허용되는 및 적합한 경구 제제를 통해 경구로 전달될 수 있다. 예시적인 경구 제제는 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 및 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 및 연질 캡슐, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물은 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물을 제조하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있다. 제약상 맛좋은 제제를 제공하기 위해, 본 발명에 따른 제약 조성물은 감미제, 향미제, 착색제, 완화제, 항산화제 및 보존제로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다.

정제는 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 정제의 제조에 적합한 하나 이상의 비-독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 예시적인 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대, 예를 들어, 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 및 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대, 예를 들어, 미세결정질 셀룰로스, 나트륨 크로스카르멜로스, 옥수수 전분 및 알긴산; 결합제, 예컨대, 예를 들어, 전분, 젤라틴, 폴리비닐-피롤리돈 및 아카시아; 및 윤활제, 예컨대, 예를 들어, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 활석을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 정제는 비코팅되거나, 또는 불쾌한 맛의 약물의 나쁜 맛을 차폐하거나 또는 위장관에서 활성 성분의 붕해 및 흡수를 지연시켜 이에 의해 활성 성분의 효과를 더 장기간 동안 지속시키기 위해 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예시적인 수용성 맛 차폐 물질은 히드록시프로필메틸셀룰로스 및 히드록시프로필셀룰로스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 시간 지연 물질은 비제한적으로 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트 부티레이트를 포함한다.

경질 젤라틴 캡슐은 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 불활성 고체 희석제, 예컨대, 예를 들어, 탄산칼슘; 인산칼슘; 및 카올린을 혼합함으로써 제조될 수 있다.

연질 젤라틴 캡슐은 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 수용성 담체, 예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜; 및 하나 이상의 오일 매질, 예컨대, 예를 들어, 땅콩 오일, 액상 파라핀 및 올리브 오일과 혼합함으로써 제조될 수 있다.

수성 현탁액은, 예를 들어, 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 수성 현탁액의 제조에 적합한 하나 이상의 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액의 제조에 적합한 예시적인 부형제는 예를 들어 현탁화제, 예컨대, 예를 들어, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 알긴산, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산화제 또는 습윤화제, 예컨대, 예를 들어, 자연-발생 포스파티드, 예를 들어, 레시틴; 알킬렌 옥시드와 지방산과의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 알콜 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜과의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 헵타데카에틸렌-옥시세탄올; 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트; 및 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대, 예를 들어, 에틸 및 n-프로필 p-히드록시벤조에이트; 하나 이상의 착색제; 하나 이상의 향미제; 및/또는 하나 이상의 감미제, 예컨대 예를 들어 수크로스, 사카린 및 아스파르탐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

유성 현탁액은 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어, 아라키스 오일; 올리브 오일; 참깨 오일; 및 코코넛 오일 중에; 또는 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어, 액상 파라핀 중에 현탁화시킴으로써 제조될 수 있다. 유성 현탁액은 또한 하나 이상의 증점제, 예컨대, 예를 들어, 밀랍; 경질 파라핀; 및 세틸 알콜을 포함할 수 있다. 맛좋은 유성 현탁액을 제공하기 위해, 상기 이미 기재된 하나 이상의 감미제 및/또는 하나 이상의 향미제가 유성 현탁액에 첨가될 수 있다. 유성 현탁액은 예를 들어, 항산화제, 예컨대, 예를 들어, 부틸화 히드록시아니솔 및 알파-토코페롤을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 보존제를 추가로 포함할 수 있다.

분산성 분말 및 과립은 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 분산화제 및/또는 습윤화제; 하나 이상의 현탁화제; 및/또는 하나 이상의 보존제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적합한 분산화제, 습윤화제 및 현탁화제는 상기 이미 기재된 바와 같다. 예시적인 보존제는 예를 들어 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 분산성 분말 및 과립은 또한 예를 들어, 감미제; 향미제; 및 착색제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 부형제를 함유할 수 있다.

화학식 I의 하나 이상의 화합물의 에멀젼은 예를 들어 수중유 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물을 포함하는 에멀젼의 유성 상은 공지된 성분으로부터 공지된 방식으로 구성될 수 있다. 유상은 이에 제한되지는 않지만 예를 들어, 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어, 올리브 오일 및 아라키스 오일; 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어, 액상 파라핀; 및 그의 혼합물에 의해 제공될 수 있다. 상이 단지 유화제만을 포함할 수 있지만, 이는 하나 이상의 유화제의, 지방 또는 오일과의 또는 지방 및 오일 둘 다와의 혼합물을 포함할 수 있다. 적합한 유화제는 예를 들어 자연-발생 포스파티드, 예를 들어, 대두 레시틴; 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대, 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트; 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함된다. 또한 오일 및 지방 둘 다를 포함하는 것이 바람직하다. 동시에, 안정화제(들)와 함께 또는 이들 없이 유화제(들)는 소위 유화 왁스를 제조하고, 오일 및 지방과 함께 왁스는 소위 유화 연고 베이스를 제조하며, 이는 크림 제제의 유성 분산 상을 형성한다. 에멀젼은 또한 감미제, 향미제, 보존제 및/또는 항산화제를 함유할 수 있다. 본 발명의 제제에 사용하기 위해 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈(Tween) 60, 스팬(Span) 80, 세토스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노스테아레이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로, 또는 왁스 또는 당업계에 널리 공지된 다른 물질과 함께 포함한다.

화학식 I의 화합물은 예를 들어 또한 정맥내로, 피하로 및/또는 근육내로 임의의 제약상 허용되는 및 적합한 주사가능한 형태를 통해 전달될 수 있다. 예시적인 주사가능한 형태는 예를 들어 허용되는 비히클 및 용매, 예컨대, 예를 들어, 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액을 포함하는 멸균 수용액; 멸균 수중유 마이크로에멀젼; 및 수성 또는 유성 현탁액을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

비경구 투여용 제제는 수성 또는 비-수성 등장성 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 및 현탁액은 경구 투여용 제제에서의 사용을 위해 언급된 담체 또는 희석제 중 하나 이상을 사용하거나, 또는 다른 적합한 분산화제 또는 습윤화제 및 현탁화제를 사용함으로써 멸균 분말 또는 과립으로부터 제조될 수 있다. 화합물은 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 참깨 오일, 벤질 알콜, 염화나트륨, 트라가칸트 검 및/또는 다양한 완충제 중에 용해될 수 있다. 다른 보조제 및 투여 방식은 제약 업계에 널리 광범위하게 공지되어 있다. 활성 성분은 또한 염수, 덱스트로스 또는 물을 비롯한 적합한 담체, 또는 시클로덱스트린 (즉, 캅티솔(CAPTISOL)®), 공용매 가용화제 (즉, 프로필렌 글리콜) 또는 미셀 가용화제 (즉, 트윈 80)를 함유하는 조성물로서 주사에 의해 투여될 수 있다.

멸균 주사가능한 제제는 또한 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 추가로, 멸균된 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 비롯한 임의의 완하성 고정 오일이 사용될 수 있다. 추가로, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용된다는 것이 밝혀졌다.

멸균 주사가능한 수중유 마이크로에멀젼은 예를 들어 1) 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 유성 상, 예컨대, 예를 들어, 대두 오일과 레시틴의 혼합물 중에 용시시키고; 2) 화학식 I을 함유하는 유상을 물과 글리세롤의 혼합물과 합하고; 3) 조합물을 가공하여 마이크로에멀젼을 형성함으로써 제조될 수 있다.

멸균 수성 또는 유성 현탁액은 당업계에 이미 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 멸균 수용액 또는 현탁액은 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예컨대, 예를 들어, 1,3-부탄 디올과 함께 제조될 수 있고; 멸균 유성 현탁액은 멸균 비-독성의 허용되는 용매 또는 현탁 매질, 예컨대, 예를 들어, 멸균 고정 오일, 예를 들어, 합성 모노글리세리드 또는 디글리세리드; 및 지방산, 예컨대, 예를 들어, 올레산과 함께 제조될 수 있다.

본 발명의 제약 조성물에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 자기-유화 약물 전달 시스템 (SEDDS), 예컨대 d-알파-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙시네이트, 제약 투여 형태에 사용되는 계면활성제, 예컨대 트윈, 폴리에톡실화 피마자 오일, 예컨대 크레모포르(CREMOPHOR) 계면활성제 (BASF(바스프)), 또는 다른 유사한 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스-기재 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모 지방을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 시클로덱스트린, 예컨대 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린, 또는 화학적으로 개질된 유도체, 예컨대 히드록시알킬시클로덱스트린, 예컨대 2- 및 3-히드록시프로필-시클로덱스트린, 또는 다른 가용화된 유도체가 또한 본원에 기재된 화학식의 화합물의 전달을 증진시키는데 유리하게 사용될 수 있다.

본 발명의 제약 활성 화합물을 제약학의 통상의 방법에 따라 가공하여 인간 및 다른 포유동물을 비롯한 환자에게 투여하기 위한 의약제를 제조할 수 있다. 제약 조성물은 통상의 제약 작업, 예컨대 멸균화에 적용될 수 있고/거나 통상의 보조제, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤화제, 유화제, 완충제 등을 함유할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 또한 보조제, 예컨대 습윤화제, 감미제, 향미제 및 방향제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물 및/또는 조성물로 질환 상태를 치료하기 위해 투여되는 화합물의 양 및 투여 요법은 대상체의 연령, 체중, 성별, 의학적 상태, 질환의 유형, 질환의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 사용된 특정한 화합물을 비롯한 다양한 인자에 따라 좌우된다. 따라서, 투여 요법은 광범위하게 달라질 수 있으나, 표준 방법을 이용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 약 0.001 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.005 내지 약 50 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.01 내지 10 mg/kg 체중의 1일 용량이 적절할 수 있다. 1일 용량은 1일에 1 내지 4회의 용량으로 투여될 수 있다.

치료 목적을 위해, 본 발명의 활성 화합물은 지시된 투여 경로에 적절한 하나 이상의 보조제와 통상적으로 조합된다. 경구로 투여되는 경우에, 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 알킬 에스테르, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아검, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합한 다음, 편리한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화될 수 있다. 이러한 캡슐 또는 정제는 히드록시프로필메틸 셀룰로스 중 활성 화합물의 분산액으로 제공될 수 있기 때문에 제어-방출 제제를 함유할 수 있다.

본 발명의 제약 조성물은 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물, 및 임의로, 임의의 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클로부터 선택된 추가의 작용제를 포함한다. 본 발명의 대안적 조성물은 본원에 기재된 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물, 및 제약상 허용되는 담체, 보조제 또는 비히클을 포함한다.

유용성

화학식 I의 화합물은 암, 예를 들어, Notch 활성화에 의존적인 암의 치료에 유용하다. Notch 활성화는 다양한 고형 종양, 예를 들어 난소암, 췌장암 뿐만 아니라 유방암 및 혈액 종양, 예컨대 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종의 발병기전에 연관되어 있다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 이 실시양태의 방법은 다양한 암, 예를 들어 이에 제한되지는 않지만 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 비소세포 폐암 (NSCLC)을 비롯한 폐암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 횡문근육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 섬유육종, 교모세포종/성상세포종, 신경모세포종, 흑색종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL) 및 중피종을 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이 실시양태의 방법은 유방암, 결장암 또는 췌장암을 치료하는데 사용된다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 이 실시양태의 방법은 하기 구조를 갖는 화합물의 투여를 포함한다.

이 실시양태의 방법은 또한 하기 구조를 갖는 화합물의 투여를 포함한다.

본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 결장직장암이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 삼중 음성 유방암이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 비소세포 폐암이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 췌장암이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 난소암이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 암은 흑색종이다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서 투여 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물의 용도가 제공된다. 바람직하게는, 본 발명의 실시양태에서, 치료에 적용되는 암은 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 비소세포 폐암 (NSCLC)을 비롯한 폐암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 횡문근육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 섬유육종, 교모세포종/성상세포종, 신경모세포종, 흑색종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL) 및 중피종 중 하나 이상을 포함한다. 본 실시양태의 적합한 의약은 비경구 투여용 의약, 예컨대, 예를 들어, 용액 및 현탁액, 및 경구 투여용 의약, 예컨대, 예를 들어, 정제, 캡슐, 용액 및 현탁액을 포함한다.

한 실시양태는 암을 치료하는 요법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 제공한다. 본 발명의 실시양태에서, 치료에 적용되는 암은 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 비소세포 폐암 (NSCLC)을 비롯한 폐암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 횡문근육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 섬유육종, 교모세포종/성상세포종, 신경모세포종, 흑색종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL) 및 중피종 중 하나 이상을 포함한다.

한 실시양태에서, 환자에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 Notch 활성화에 의존적인 암을 치료하는 방법이 제공된다. 이 실시양태의 방법은 다양한 암, 예를 들어 이에 제한되지는 않지만 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 비소세포 폐암 (NSCLC)을 비롯한 폐암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 횡문근육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 섬유육종, 교모세포종/성상세포종, 신경모세포종, 흑색종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL) 및 중피종을 치료하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이 실시양태의 방법은 유방암, 결장암 또는 췌장암을 치료하는데 사용된다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 예를 들어, 암을 치료하기 위한 치료 유효량은 본 발명의 실시양태의 방법으로 투여될 수 있다. 투여의 적합한 경로는 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다.

암 치료에서, 화학요법제 및/또는 다른 치료제 (예를 들어, 방사선 요법)의 조합이 종종 유리하다. 제2 (또는 제3) 작용제는 1차 치료제와 동일하거나 이와 상이한 작용 메카니즘을 가질 수 있다. 예를 들어, 투여되는 2종 이상의 약물이 상이한 방식으로 또는 세포 주기의 상이한 단계에서 작용하고/거나 2종 이상의 약물이 중복되지 않는 독성 또는 부작용을 갖고/거나 조합된 약물이 각각 환자에 의해 나타난 특정한 질환 상태를 치료하는데 있어서 입증된 효능을 갖는 약물 조합물이 사용될 수 있다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물; 및 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.

어구 "추가의 항암제"는 하기 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 약물을 지칭한다: 알킬화제 (질소 머스타드, 알킬 술포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체 및 트리아젠 포함); 항혈관신생제 (매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제 포함); 항대사물 (아데노신 데아미나제 억제제, 폴산 길항제, 퓨린 유사체 및 피리미딘 유사체 포함); 항생제 또는 항체 (모노클로날 항체, CTLA-4 항체, 안트라시클린 포함); 아로마타제 억제제; 세포-주기 반응 조절제; 효소; 파르네실-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 호르몬제 및 항호르몬제 및 스테로이드 (합성 유사체, 글루코코르티코이드, 에스트로겐/항에스트로겐 [예를 들어, SERM], 안드로겐/항안드로겐, 프로게스틴, 프로게스테론 수용체 길항제, 및 황체형성 호르몬-방출 [LHRH] 효능제 및 길항제 포함); 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)/인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR) 시스템 조절제 (IGFR1 억제제 포함); 인테그린-신호전달 억제제; 키나제 억제제 (다중-키나제 억제제 및/또는 Src 키나제 또는 Src/abl의 억제제, 시클린 의존성 키나제 [CDK] 억제제, panHer, Her-1 및 Her-2 항체, VEGF 억제제, 예컨대 항-VEGF 항체, EGFR 억제제, 미토겐-활성화 단백질 [MAP] 억제제, MET 억제제, MEK 억제제, 오로라(Aurora) 키나제 억제제, PDGF 억제제, 및 다른 티로신 키나제 억제제 또는 세린/트레오닌 키나제 억제제; 미세관-파괴인자 작용제, 예컨대 엑테이나시딘 또는 그의 유사체 및 유도체; 미세관-안정화제, 예컨대 탁산, 및 자연-발생 에포틸론 및 그의 합성 및 반합성 유사체; 미세관-결합, 탈안정화제 (빈카 알칼로이드 포함); 토포이소머라제 억제제; 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 백금 배위 착물; 신호 전달 억제제; 및 항암제 및 세포독성제로서 사용되는 기타 작용제, 예컨대 생물학적 반응 조절제, 성장 인자 및 면역 조절제.

따라서, 본 발명의 화합물은 암 또는 다른 증식성 질환의 치료에 유용한 다른 항암 치료와 조합하여 투여될 수 있다. 본 발명은 본원에서 추가로 암 치료용 의약 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물의 용도를 포함하고/거나, 본원에서 화학식 I의 화합물이 다른 항암제 또는 세포독성제 및 암 치료용 치료제와 조합하여 사용된다는 지침서와 함께 들어 있는 상기 화합물의 패키지를 포함한다. 본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물 및 하나 이상의 추가의 작용제의 조합물을 키트 형태로 포함하고, 예를 들어, 여기서 이들은 함께 패키징되거나 또는 키트로서 함께 판매되는 개별 패키지에 들어 있거나, 또는 이들이 함께 제제화되도록 패키징된다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하고; 다사티닙; 및 임의로 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하고; 파클리탁셀; 및 임의로 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하고; 타목시펜; 및 임의로 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하고; 글루코코르티코이드; 및 임의로 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 적합한 글루코코르티코이드의 예는 덱사메타손이다.

한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물을 투여하고; 카르보플라틴; 및 임의로 하나 이상의 추가의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 상기 언급된 상태와 연관된 부작용을 다루는데 있어서 그의 특정한 유용성에 대해 선택된 다른 치료제와 함께 제제화되거나 또는 공동-투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 오심, 과민증 및 위 자극을 예방하는 작용제, 예컨대 항구토제, 및 H₁ 및 H₂ 항히스타민제와 함께 제제화될 수 있다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물; 키나제 억제제 (소분자, 폴리펩티드 및 항체), 면역억제제, 항암제, 항바이러스제, 항염증제, 항진균제, 항생제 또는 항-혈관 과다증식 화합물로부터 선택된 하나 이상의 추가의 작용제; 및 임의의 제약상 허용되는 담체, 보조제 또는 비히클을 포함하는 제약 조성물이 제공된다.

상기 다른 치료제는 본 발명의 화합물과 조합하여 사용하는 경우에, 예를 들어 문헌 [Physicians' Desk Reference] (PDR)에 지시된 양으로 또는 다르게는 당업자에 의해 결정된 양으로 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에 있어서, 이러한 다른 치료제(들)는 본 발명의 화합물의 투여 전에, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여될 수 있다.

그러나, 임의의 특정한 대상체를 위한 구체적인 용량 수준 및 투여 빈도는 달라질 수 있고, 일반적으로 이에 제한되지는 않지만 예를 들어, 투여된 형태의 화학식 I의 구체적 화합물의 생체이용률, 화학식 I의 구체적 화합물의 대사 안정성 및 작용 길이, 대상체의 종, 체중, 전반적 건강, 성별, 식이, 투여 방식 및 시간, 배출률, 약물 조합물 및 특정한 상태의 중증도를 비롯한 다양한 인자에 의존적이다. 예를 들어, 약 0.001 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.005 내지 약 50 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.01 내지 10 mg/kg 체중의 1일 용량이 적절할 수 있다. 1일 용량은 하루에 1 내지 4회의 용량으로 투여될 수 있다.

투여는 연속적, 즉 매일, 또는 간헐적일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "간헐적" 또는 "간헐적으로"는 규칙적 또는 불규칙적 간격으로 중단하고 시작하는 것을 의미한다. 예를 들어, 간헐적 투여는 1주에 1 내지 6일 투여; 주기 투여 (예를 들어, 연속 2 내지 8주 동안 매일 투여, 이어서 1주 이하 동안 투여 없는 휴지기); 또는 격일 투여를 포함한다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 이상 이를 필요로 하는 환자에게 연속적으로 투여된다. 예를 들어, 치료 유효량의 화학식 I의 화합물은 연속 일 동안 1일 1회 이상 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 이상 이를 필요로 하는 환자에게 간헐적으로 투여된다. 예를 들어, 치료 유효량의 화학식 I의 화합물은 간헐적 스케줄에 따라 1일 1회 이상 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 연속 일 동안 1일 1회 이상 이를 필요로 하는 환자에게 투여되고, 이어서 1일 이상 투여되지 않는다. 바람직하게는, 치료 유효량의 화학식 I의 화합물이 투여된다. 휴약기를 갖는 연속 투여의 예는 하기의 주기이다: 치료 진행 7일, 이어서 치료 중단 7일; 치료 진행 14일, 이어서 치료 중단 7일; 및 치료 진행 7일, 이어서 치료 중단 14일. 치료 진행/치료 중단의 주기는 필요에 따라 환자를 치료하기 위해 다수회 반복될 수 있다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 간헐적 투여 스케줄에 따라 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다. 간헐적 투여 스케줄은 환자에게 화학식 I의 화합물을 투여하는 날 및 환자에게 화학식 I의 화합물을 투여하지 않는 날을 포함하는 스케줄을 반복한다. 간헐적 투여 스케줄의 예는 하기와 같다: 연속 3주 동안 각각의 주에 4일 투여, 이어서 투여 없이 1주, 및 4주 간격으로 반복; 연속 2주 동안 각각의 주에 5일 투여, 이어서 투여 없이 1주, 및 3주 간격으로 반복; 및 1주 동안 각각의 주에 4일 투여, 이어서 투여 없이 2주, 및 3주 간격으로 반복. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물의 치료 유효량이 투여된다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 투여되고, 이어서 6일 휴지되고, 이를 주간 스케줄로 반복한다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 연속 2일 투여되고, 이어서 5일 휴지되고, 이를 주간 스케줄로 반복한다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 연속 3일 투여되고, 이어서 4일 휴지되고, 이를 주간 스케줄로 반복한다.

한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 투여되고, 이어서 10 내지 13일 휴지된다.

제조 방법

본 발명의 화합물은 유기 합성 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있는 다수의 방식으로 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물은 합성 유기 화학 업계에 공지된 합성 방법과 함께 하기 기재된 방법 또는 당업자에 의해 인지된 바와 같은 이들의 변형을 이용하여 합성될 수 있다. 바람직한 방법은 하기 기재된 것들을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에 인용되는 모든 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

본 발명의 화합물은 본 섹션에 기재되어 있는 반응 및 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 반응은 사용된 시약 및 물질에 적절한 용매 중에서 수행되며, 변형이 이루어지기에 적합하다. 또한, 하기 기재된 합성 방법의 기재에서, 용매의 선택, 반응 분위기, 반응 온도, 실험 지속기간 및 후처리 절차를 비롯한 모든 제안된 반응 조건이 해당 반응을 위한 표준 조건이 되도록 선택되며, 이것이 당업자에 의해 용이하게 인지되어야 한다는 것이 이해되어야 한다. 유기 합성의 당업자는, 분자의 다양한 부분에 존재하는 관능기가 제안된 시약 및 반응과 상용성이어야 한다는 것을 이해한다. 반응 조건과 상용성인 치환기에 대한 이러한 제한은 당업자에게 용이하게 명백할 것이며, 이에 따라 대안적 방법이 이용되어야 한다. 이는 때때로 본 발명의 목적 화합물을 수득하기 위해, 합성 단계의 순서를 변경하거나 또는 또 다른 것에 비해 한 특정한 공정 반응식을 선택하기 위한 판단을 필요로 할 것이다. 또한, 이 분야의 임의의 합성 경로의 계획에서 또 다른 주요 고려사항이, 본 발명에 기재된 화합물에 존재하는 반응성 관능기의 보호를 위해 사용되는 보호기의 신중한 선택임을 인지할 것이다. 숙련된 진료의에게 많은 대안을 기재하는 권위있는 보고는 문헌 [Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley and Sons (1999)]이다.

화학식 I의 화합물은 하기 반응식에 예시된 방법을 참조하여 제조될 수 있다. 여기에 나타낸 바와 같이, 최종 생성물은 화학식 I과 동일한 구조 화학식을 갖는 화합물이다. 화학식 I의 임의의 화합물이 적절한 치환을 갖는 시약의 적합한 선택에 의한 반응식에 의해 제조될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 용매, 온도, 압력 및 다른 반응 조건은 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 출발 물질은 상업적으로 입수가능하거나 또는 당업자에 의해 용이하게 제조된다. 화합물의 구성성분은 본원에서 또는 본 명세서의 다른 곳에 정의된 바와 같다.

화학식 I의 화합물의 합성은 반응식 1 내지 5에 요약된 방법을 이용하여 제조될 수 있다.

<반응식 1>

벤조디아제피논 (iv)의 제조는 당업자에게 공지된 다수의 방법으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 적절하게 치환된 2-아미노벤조페논 (i) (예를 들어, 문헌 [Walsh, D.A., Synthesis, 677 (1980)]; 및 그 안에 인용된 참고문헌, 또는 당업자에게 공지된 다른 방법으로부터)을 보호된 글리신 유도체 (ii) (PG = 보호기, 예를 들어 PG = CBz, 문헌 [Katritzky, A.R., J. Org. Chem., 55:2206-2214 (1990)] 참조)와 커플링시키고, 시약, 예컨대 암모니아로 처리하고, 고리화에 적용하여, 문헌에 요약된 절차 (예를 들어 문헌 [Sherrill, R.G. et al., J. Org. Chem., 60:730 (1995)]; 또는 당업자에게 공지된 다른 경로)에 따라 벤조디아제피논 (iii)을 수득할 수 있다. 생성된 라세미 혼합물을 분리하여 (당업자에게 공지된 절차 이용) 개별 부분입체이성질체를 얻을 수 있거나, 또는 라세미체로서 사용할 수 있다. 또한 R₃=H인 경우에, (iii)은 예를 들어 용매, 예컨대 DMF 중에서 시약, 예컨대 MeI 및 염기, 예컨대 K₂CO₃로 처리하여 R₃=Me를 제조할 수 있다.

단계 2: (iii)의 탈보호는 당업자에게 공지된 여러 방법으로 달성될 수 있다. 예를 들어, PG = CBz인 경우에, 화합물 (iii)은 용매, 예컨대 AcOH 중에서 시약, 예컨대 HBr로 처리될 수 있다. 화합물 (iv)는 라세미체로서 사용될 수 있다. 대안적으로, 화합물 (iv)는 표준 방법 (예를 들어, 키랄 정제용 크로마토그래피)를 이용하여 거울상이성질체 분할에 적용될 수 있다.

<반응식 2>

단계 1: 반응식 2의 제1 단계는 당업자에게 공지된 다수의 방법 중 하나를 이용하여, 예컨대 용매, 예컨대 THF 중 적절한 온도에서 시약, 예컨대 삼플루오린화붕소 에테레이트의 존재 하에, 치환된 아세트이미드산, 예컨대 화합물 (vi)으로 처리하여 화합물 (v)를 에스테르 (vii)로 전환시킴으로써 달성된다.

단계 2: 산 (viii)은 당업자에게 공지된 다수의 방법으로 화합물 (ix)로 전환될 수 있다. 예를 들어, 용매, 예컨대 DCM 중에서 산 (viii)을 시약, 예컨대 옥살릴 클로라이드로 처리하여 산 클로라이드 (ix)를 수득한다. 화합물 (ix)를 표준 조건 하에 옥사졸리디논 (x)으로 처리하여 화합물 (xi)을 수득할 수 있다 (문헌 [Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc., 112:4011 (1990)]).

단계 3: 화합물 (xi)을 다수의 방법으로 화합물 (xii)로 전환시킬 수 있다 (문헌 [Baran, P. et al., J. Am. Chem. Soc., 130(34):11546 (2008)]). 예를 들어, 화합물 (vii)을 불활성 분위기, 예컨대 N₂ 하에 저온, 예컨대 -78℃에서 용매, 예컨대 톨루엔 중에서 염기, 예컨대 LDA로 처리한다. 생성된 혼합물을 불활성 분위기, 예컨대 N₂ 하에 용매, 예컨대 톨루엔 중에서 염화리튬 및 염기, 예컨대 LDA로 처리된 화합물 (xi)의 용액에 첨가한다. 화합물 (vii) 및 (xi)의 에놀레이트의 생성된 혼합물에 불활성 분위기, 예컨대 N₂ 하에 저온, 예컨대 -78℃에서 화합물, 예컨대 비스(2-에틸헥사노일옥시)구리를 첨가하고, 실온으로 가온하여 화합물 (xii)를 수득한다.

단계 4: 화합물 (xii)에서 (xiii)으로의 전환은 용매, 예컨대 THF/물의 혼합물을 사용하여, 적절한 온도에서 시약, 예컨대 과산화수소 및 수산화리튬으로 이를 처리함으로써 달성될 수 있다. 필요한 경우에, 부분입체이성질체는 실리카 겔 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC를 통해 이 시점에서 분리될 수 있다. 대안적으로, 혼합물을, 예를 들어 LDA 및 디에틸알루미늄 클로라이드로 처리한 다음, 메탄올 또는 아세트산으로 켄칭하여 목적하는 부분입체이성질체를 농축시킴으로써 에피머화 조건에 적용할 수 있다.

단계 5: 화합물 (xiii)을 용매, 예컨대 DMF 중에서 커플링 시약, 예컨대 TBTU 및 염기, 예컨대 TEA의 존재 하에 벤조디아제피논 (iv)와 커플링시켜 화합물 (xiv)를 수득할 수 있다.

단계 6: 용매, 예컨대 DCM 중에서 적절한 온도, 예컨대 0℃에서 산, 예컨대 TFA로 화합물 (xiv)를 처리하여 화합물 (xv)를 수득한다.

단계 7: 화합물 (xv)의 화합물 (xvi)으로의 전환은 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 아민 공급원, 예컨대 염화암모늄, 카르보디이미드, 예컨대 EDC, HOBT 및 염기, 예컨대 TEA와 화합물 (xv)의 커플링을 통해 달성될 수 있다. 필요한 경우에 부분입체이성질체 혼합물은 적절한 분리 기술, 예컨대 키랄 정제용 크로마토그래피를 이용하여 분리될 수 있다.

<반응식 3>

단계 1: 벤조디아제피논 (iii)의 제조는 또한 당업자에게 공지된 조건 하에 할로겐 원자, 예컨대 염소 (X=Cl) 및 보호기 (PG), 예컨대 Boc를 함유하는 벤조디아제피논 (xvii)을 적절한 커플링 파트너, 예컨대 보론산과 함께 교차 커플링시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 할로겐을 함유하는 모이어티와 보론산과의 커플링은 불활성 분위기, 예컨대 N₂하에서 촉매, 예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 염기, 예컨대 탄산나트륨 및 용매, 예컨대 DME의 존재 하에 발생한다.

<반응식 4>

단계 1: 반응식 4의 제1 단계는 카르보디이미드, 예컨대 DCC, 염기, 예컨대 TEA 및 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에 용매, 예컨대 DCM 중에서 화합물 (xvii)을 카르복실산 (xix)로 처리하여 화합물 (xx)을 수득한다.

단계 2: 화합물 (xx)의 화합물 (xxi)로의 전환은 불활성일 수 있는 대기 분위기 하에, 예를 들어 N₂ 하에 산, 예컨대 HCl의 존재 하에 시약, 예컨대 나트륨 시아노보로히드라이드로의 처리에 의해 달성될 수 있다.

단계 3: 화합물 (xxi)의 화합물 (xxiii)으로의 전환은 적절한 이탈기 (LG)를 보유한 화합물 (xxii)를 통해 진행될 수 있다. 예를 들어, 적절한 온도, 예컨대 -78℃에서 용매, 예컨대 DCM 중에서 염기, 예컨대 2,6-루티딘 및 시약, 예컨대 트리플루오로메탄술폰산 무수물로 화합물 (xxi)을 처리하여 화합물 (xxii)의 트리플레이트를 수득한다. 화합물 (xxii)를 여기서 교차 커플링 반응 조건에 적용시켜 화합물 (xxiii)을 수득할 수 있다. 예를 들어, 불활성일 수 있는 대기 분위기 하에, 예를 들어 N₂ 하에 용매, 예컨대 디옥산 중에서 촉매, 예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 염기, 예컨대 인산칼륨의 존재 하에 화합물 (xxii)를 적절하게 치환된 커플링 파트너, 예를 들어 보론산으로 처리하여 화합물 (xxiii)을 수득한다.

단계 4: 화합물 (xxiii)의 화합물 (xxiv)로의 전환은 당업자에게 공지된 표준 절차를 통해 달성될 수 있다. 예를 들어, 용매, 예컨대 메탄올 중에서 촉매, 예컨대 Pd/C의 존재 하에 화합물 (xxiii)을 처리하여 화합물 (xxiv)를 수득한다.

단계 5: 화합물 (xxv)는 화합물 (xxiv)와 화합물 (iv)의 커플링에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 변형은 불활성 분위기, 예컨대 N₂ 하에 용매, 예컨대 DCM 중에서 시약, 예컨대 AlMe₃을 사용하여 달성될 수 있다. 이 경우에, 수득된 부분입체이성질체의 혼합물은 혼합물로서 사용될 수 있거나, 또는 적절한 방법, 예컨대 키랄 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다.

단계 6: 화합물 (xxv)를 용매, 예컨대 아세톤 중에서, 산화제, 예컨대 존스(Jones) 시약을 사용하여 산화시켜 화합물 (xxvi)을 수득한다. 화합물이 부분입체이성질체 혼합물인 경우에, 이것은 혼합물로서 사용될 수 있거나, 또는 적절한 방법, 예컨대 키랄 크로마토그래피를 이용하여 분리될 수 있다.

단계 7: 화합물 (xxvi)의 화합물 (xxvii)로의 전환은 당업자에게 공지된 표준 절차를 통해 달성될 수 있다. 예를 들어, 용매, 예컨대 DMF 중에서 화합물 (xxvi)과 적절한 아민 공급원, 예컨대 염화암모늄, 카르보디이미드, 예컨대 EDC, HOBT 및 염기, 예컨대 TEA와 커플링시켜 화합물 (xxvii)을 수득한다. 이 경우에, 화합물은 거울상이성질체적으로 순수할 수 있거나, 또는 필요한 경우에 부분입체이성질체 혼합물은 적절한 분리 기술, 예컨대 키랄 크로마토그래피를 이용하여 분리될 수 있다.

<반응식 5>

단계 1: 반응식 5의 제1 단계는 산, 예컨대 H₂SO₄ 및 용매, 예컨대 물 중에서 화합물 (xxviii)을 시약, 예컨대 아질산나트륨으로 처리하여 화합물 (xxix)를 수득함으로써 달성된다.

단계 2: 산 (xxix)를 화합물 (xxx) (PG = 보호기)으로 전환시킨다. 예를 들어, 산 (xxix)를 용매, 예컨대 톨루엔 및 산, 예컨대 H₂SO₄ 중에서 알콜, 예컨대 벤질 알콜로 처리하여 화합물 (xxx)을 수득한다.

단계 3: 적합한 이탈기를 보유한 화합물 (xxxi)은 적절한 온도에서 용매, 예컨대 DCM 중에서 염기, 예컨대 2,6-루티딘 및 시약, 예컨대 트리플루오로메탄술폰산 무수물로 화합물 (xxx)을 처리함으로써 제조될 수 있다.

단계 4: 화합물 (xxxii)는 당업자에게 공지된 다수의 방법으로 화합물 (xxxiv)로 전환될 수 있다. 예를 들어, 용매, 예컨대 DCM 중에서 상응하는 카르복실산과 시약, 예컨대 옥살릴 클로라이드로부터 제조되거나 또는 상업적으로 입수된 산 클로라이드 (xxxii)를 표준 조건 하에 옥사졸리디논 (xxxiii)으로 처리하여 화합물 (xxxiv)를 수득할 수 있다 (문헌 [Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc., 112:4011 (1990)]).

단계 5: 화합물 (xxxv)의 제조는 적절한 온도, 예컨대 -78℃에서 용매, 예컨대 THF 중에서 화합물 (xxxiv)를 염기, 예컨대 LiHMDS로 처리함으로써 달성될 수 있고, 생성된 혼합물에 용매, 예컨대 THF 중의 화합물 (xxxi)을 첨가한다.

단계 6: 화합물 (xxxv)의 보호기는 당업자에게 공지된 많은 방법을 통해 제거될 수 있다. 예를 들어, 벤질 기를 용매, 예컨대 메탄올 중에서 팔라듐 촉매, 예컨대 펄맨(Pearlman) 촉매를 사용하는 수소화 조건에 이를 적용함으로써 제거하여 화합물 (xxxvi)을 수득할 수 있다.

단계 7: 용매, 예컨대 DMF 중에서 커플링 시약, 예컨대 TBTU 및 염기, 예컨대 TEA의 존재 하에 화합물 (iv)를 화합물 (xxxvi)과 커플링시켜 화합물 (xxxvii)을 수득한다. 필요한 경우에, 부분입체이성질체는 적절한 방법, 예컨대 키랄 정제용 크로마토그래피를 이용하여 분리될 수 있다.

단계 8: 화합물 (xxxvii)의 가수분해는 용매, 예컨대 THF/물의 혼합물을 사용하여 적절한 온도에서 과산화수소 및 수산화리튬으로 이를 처리하여 화합물 (xv)를 수득함으로써 달성될 수 있다. 필요한 경우에, 부분입체이성질체는 적절한 방법, 예컨대 키랄 정제용 크로마토그래피를 이용하여 분리될 수 있다.

<반응식 6>

반응식 2에서의 화합물 (xiii)은 또한 반응식 6에서 요약된 합성 순서에 의해 화합물 (xi)로부터 제조될 수 있다.

단계 1: 반응식 6의 제1 단계는 불활성 분위기 하에 저온, 예컨대 -78℃ 에서 용매, 예컨대 THF 중에서 화합물 (xi)을 염기, 예컨대 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드로 처리함으로써 달성된다. (xi)의 생성된 에놀레이트를 시약, 예컨대 tert-부틸 브로모아세테이트로 처리하여 화합물 (xxxviii)을 수득한다.

단계 2: 화합물 (xxxviii)의 (xxxix)로의 전환은 용매, 예컨대 THF/물의 혼합물을 사용하여 적절한 온도에서 시약, 예컨대 과산화수소 및 수산화리튬으로 화합물 (xxxviii)을 처리함으로써 달성될 수 있다.

단계 3: 화합물 (xxxix)는 불활성 분위기 하에 저온, 예컨대 -78℃에서 용매, 예컨대 THF 중에서 염기, 예컨대 LDA를 사용하여 (xxxix)의 에놀레이트를 생성시키고, 추가로 적절한 이탈기를 보유한 시약 (R₂-LG) (예를 들어, LG = 트리플레이트)으로 처리함으로써 화합물 (xiii)으로 전환될 수 있다.

실시예

본 발명은 하기 실시예에서 추가로 정의된다. 실시예가 단지 예시의 방식으로 주어지는 것임을 이해해야 한다. 상기 논의 및 실시예로부터, 당업자는 본 발명의 필수적인 특징을 확인할 수 있으며, 본 발명의 취지 및 범주에서 벗어나지 않으면서, 본 발명을 다양한 용도 및 조건에 적합하도록 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 결과적으로, 본 발명은 하기 기재된 예시적인 예에 의해 제한되지 않으며, 본원에 첨부된 특허청구범위에 의해 규정된다.

약어

AcOH 아세트산

ACN 아세토니트릴

AlMe₃ 트리메틸 알루미늄

Boc tert-부틸옥시카르보닐

DCC 1,3-디시클로헥실카르보디이미드

DCM 디클로로메탄

DEA 디에틸아민

DMAP 디메틸아미노피리딘

DME 디메틸 에테르

DMF 디메틸포름아미드

DMSO 디메틸 술폭시드

EDC 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드

EDCI 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드

Et₂AlCl 디에틸 알루미늄 클로라이드

EtOAc 에틸 아세테이트

H₂SO₄ 황산

HCl 염산

HOBT 히드록시벤조트리아졸

HPLC 고성능 액체 크로마토그래피

hr 시간

IPA 이소프로필 알콜

LCMS 액체 크로마토그래피-질량 분광분석법

LDA 리튬 디이소프로필아미드

LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드

Me 메틸

MeOH 메탄올

min 분

MTBE 메틸 tert-부틸 에테르

N₂ 질소

NaHMDS 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드

Pd/C 탄소상 팔라듐

Ph 페닐

RT 체류 시간

sat 포화

TBTU O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트

TEA 트리에틸아민

Tf₂O 트리플루오로메틸술폰산 무수물

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

실시예 1

(2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 1A: tert-부틸 5,5,5-트리플루오로펜타노에이트

0℃에서 THF (30 mL) 및 헥산 (30 mL) 중 5,5,5-트리플루오로펜탄산 (5 g, 32.0 mmol)의 교반 용액에 tert-부틸 2,2,2-트리클로로아세트이미데이트 (11.46 mL, 64.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 삼플루오린화붕소 에테레이트 (0.406 mL, 3.20 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온으로 가온되도록 하였다. 투명한 반응 혼합물에 고체 NaHCO₃ (5 g)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 MgSO₄를통해 여과하고, 헥산 (200 mL)으로 세척하였다. 용액을 45분 동안 휴지되도록 하고, 생성된 고체 물질을 동일한 MgSO₄ 필터 상에서 다시 여과에 의해 제거하고, 헥산 (100 mL)으로 세척하고, 가열 없이 감압 하에 농축시켰다. 부피를 약 30 mL로 감소시키고, 깨끗한 소결 깔때기를 통해 여과하고, 헥산 (5 mL)으로 세척한 다음, 가열 없이 감압 하에 농축시켰다. 생성된 순수한 오일을 0.45μm 나일론 막 필터 디스크를 통해 여과하여 tert-부틸 5,5,5-트리플루오로펜타노에이트 (6.6 g, 31.4 mmol 98% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 1B: (4S)-4-(프로판-2-일)-3-(5,5,5-트리플루오로펜타노일)-1,3-옥사졸리딘-2-온

DCM (50 mL) 및 DMF (3 방울) 중 5,5,5-트리플루오로펜탄산 (5.04 g, 32.3 mmol)의 교반 용액에 옥살릴 클로라이드 (3.4 mL, 38.8 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하고, 모든 버블링이 가라앉을 때까지 용액을 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 연황색 오일을 수득하였다. -78℃에서 THF (100 mL) 중 (4S)-4-(프로판-2-일)-1,3-옥사졸리딘-2-온 (4.18 g, 32.4 mmol)의 용액이 충전된 개별 플라스크에 n-BuLi (헥산 중 2.5M) (13.0 mL, 32.5 mmol)를 시린지를 통해 5분에 걸쳐 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, THF (20 mL) 중에 용해시킨 상기 산 클로라이드를 캐뉼라를 통해 15분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하고, 가온된 조와 같이 실온으로 되게 하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 NH₄Cl을 첨가한 다음, EtOAc (2x)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (텔레다인 이스코 콤비플래쉬(Teledyne ISCO CombiFlash) Rf, 5% → 60% 용매 A/B=헥산/EtOAc, 레디셉(REDISEP)® SiO₂ 120g))에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 농축시켜 제조예 1B (7.39 g, 86%)를 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 1C: (2S,3R)-tert-부틸 6,6,6-트리플루오로-3-((S)-4-이소프로필-2-옥소옥사졸리딘-3-카르보닐)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트 및

제조예 1D: (2R,3R)-tert-부틸 6,6,6-트리플루오로-3-((S)-4-이소프로필-2-옥소옥사졸리딘-3-카르보닐)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트

질소 분위기 하에 THF (59 mL) 중 디이소프로필아민 (5.3 mL, 37.2 mmol)의 차가운 (-78℃) 교반 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5M) (14.7 mL, 36.8 mmol)를 첨가한 다음, 0℃로 가온하여 LDA의 0.5M 용액을 수득하였다. 별도의 용기를 제조예 1B (2.45 g, 9.17 mmol)로 충전시키고, 물질을 벤젠과 2회 공비혼합하고 (회전증발기 공기 유입구를 질소 유입구에 장착하여 습도를 완전히 제외함), 이어서 톨루엔 (15.3 mL)을 첨가하였다. 이 용액을 건조 염화리튬 (1.96 g, 46.2 mmol)이 들은 플라스크에 첨가하였다. -78℃로 냉각시킨 생성된 혼합물에 LDA 용액 (21.0 mL, 10.5 mmol)을 첨가하고, 10분 동안 -78℃에서 교반하고, 10분 동안 0℃로 가온하고, 이어서 -78℃로 재냉각시켰다. 또한 벤젠과 2회 공비혼합된 제조예 1A (3.41 g, 16.07 mmol)를 함유하는 별도의 반응 용기에 톨루엔 (15.3 mL)을 첨가하고, -78℃로 냉각시키고, LDA (37.0 mL, 18.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 -78℃에서 25분 동안 교반하였다. 이때 에스테르로부터 유래된 에놀레이트를 캐뉼라를 통해 옥사졸리디논 에놀레이트의 용액 내로 전달하고, -78℃에서 추가 5분 동안 교반하고, 이때 격막을 제거하고, 고체 분말화된 비스(2-에틸헥사노일옥시)구리 (9.02 g, 25.8 mmol)를 반응 용기에 빠르게 첨가하고, 격막을 다시 놓았다. 용기를 즉시 냉각조로부터 제거하고, 빠르게 와류시키면서 온수조 (40℃)에 함침시켰고, 이때 수반되는 색상은 초기 청록색에서 갈색으로 변화하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반하고, 5% 수성 NH₄OH (360 mL)에 붓고, EtOAc (2x)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (텔레다인 이스코 콤비플래쉬 Rf, 0% → 60% 용매 A/B=헥산/EtOAc, 레디셉® SiO₂ 120g)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 농축시켜 제조예 1C (2.87 g, 66%)를 연황색 점성 오일로서 수득하였다. ¹H NMR은 생성물이 2.74 & 2.84 ppm에서 다중선의 적분에 의해 결정된 바와 같이 부분입체이성질체 1C:1D의 1.6:1 혼합물임을 나타내었다.

제조예 1E: (2R,3S)-3-(tert-부톡시카르보닐)-6,6,6-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산 및

제조예 1F: (2R,3R)-3-(tert-부톡시카르보닐)-6,6,6-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산

THF (140 mL) 및 물 (42 mL) 중 제조예 1C 및 1D (4.54 g, 9.51 mmol)의 냉각된 (0℃) 교반 용액에 과산화수소 (물 중 30%) (10.3 g, 91 mmol) 및 LiOH (685.3 mg, 28.6 mmol)를 순차적으로 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 이 때, 반응 용기를 냉각조로부터 제거한 다음, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응이 HPLC에 의해 완료된 것으로 판단되었다. 반응 혼합물에 포화 NaHCO₃ (45 mL) 및 포화 Na₂SO₃ (15 mL)을 첨가한 다음, 감압 하에 부분적으로 농축시켰다. 생성된 조 용액을 DCM (3x)으로 추출하였다. 수성 상을 1N HCl을 사용하여 pH~1-2로 산성화시키고, DCM (3x) 및 EtOAc (1x)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 제조예 1E 및 1F의 혼합물 (3.00 g, 86%)을 무색 오일로서 수득하였다.

¹H NMR은 t-부틸 기에 대한 피크의 적분에 의해 1E:1F의 1.7:1 혼합물을 나타내었다.

질소 분위기 하에 THF (19 mL) 중 디이소프로필아민 (1.7 mL, 11.93 mmol)의 차가운 (-78℃) 교반 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5M) (4.8 mL, 12.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 0℃로 가온하였다. 별도의 용기에서, THF (18 mL) 중 제조예 1E 및 1F의 혼합물 (1.99 g, 5.43 mmol)의 차가운 (-78℃) 교반 용액에 상기 제조된 LDA 용액을 캐뉼라를 통해 천천히 25분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 15분 동안 실온 (24℃ 수조에 넣음)으로 가온한 다음, 이어서 15분 동안 -78℃로 다시 냉각시켰다. 반응 혼합물에 Et₂AlCl (헥산 중 1M) (11.4 mL, 11.40 mmol)을 시린지를 통해 첨가하고, 10분 동안 교반하고, 15분 동안 실온으로 가온한 다음, 15분 동안 -78℃로 역냉각시켰다. 메탄올 (25 mL)을 신속하게 첨가하고, 실온으로 가온시키면서 격렬하게 와류시킨 다음, 최초 부피의 ~1/4로 농축시켰다. 혼합물을 EtOAc 중에 용해시키고, 1N HCl (50 mL) 및 얼음 (75 g)으로 세척하였다. 수성 상을 분리하고, EtOAc (2x)로 추출하였다. 합한 유기부를 KF (75 mL 물 중 2.85g) 및 1N HCl (13 mL)의 혼합물로 세척하고 [생성된 용액 pH 3-4], 이어서 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 제조예 1E 및 제조예 1F의 9:1 (1E:1F) 농축 부분입체이성질체 혼합물 (¹H NMR에 의해 결정된 바와 같음) (2.13 g, >99%)을 연황색 점성 오일로서 수득하였다.

제조예 1G: (3S)-3-아미노-1-메틸-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온 및

제조예 1H: (3R)-3-아미노-1-메틸-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온

라세미 3-아미노-1-메틸-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온 (문헌 [Rittle, K.E. et al., Tetrahedron Letters, 28(5):521-522 (1987)])을 문헌 절차에 따라 제조하였다. 거울상이성질체를 하기 방법을 이용하는 키랄-SFC 조건 하에서 분리하였다: 키랄팩(CHIRALPAK)® AS-H 5x25; 이동상: CO₂ 중 30% MeOH+ 0.1% DEA; 유량: 280 mL/min; 압력: 100 bar; 온도: 35℃.

S-거울상이성질체 (제조예 1G)를 수득하였다: HPLC: RT=1.75 min (CO₂ 중 30% MeOH + 0.1% DEA, 키랄팩® AS-H 4.6x250 mm, 3 mL/min, 35℃, 100 bar, 230 nm, 10μl 주사);

R-거울상이성질체 (제조예 1H)를 또한 수득하였다:

제조예 1G의 제조를 위한 대안적 절차:

제조예 1G·CSA 염: (3S)-3-아미노-1-메틸-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온, (1S)-(+)-10-캄포르술폰산 염

제조예 1G·CSA를 라세미 3-아미노-1-메틸-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온 (9.98g, 37.6 mmol) (상기 나타낸 문헌에 따라 제조됨)으로부터 문헌 절차 (문헌 [Reider, P.J. et al., J. Org. Chem., 52:955-957 (1987)])에 따라 제조하였다. 제조예 1G·CSA (16.91g, 99%)를 무색 고체로서 수득하였다: 광학 회전:

제조예 1I: tert-부틸 (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트 및

제조예 1J: tert-부틸 (2R,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트

DMF (19 mL) 중 제조예 1G (1.45 g, 5.47 mmol) 및 제조예 1E 및 1F의 9:1 혼합물 (1.989 g, 5.43 mmol)의 교반 용액에 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라-메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (1.79 g, 5.57 mmol) 및 트리에틸아민 (3.0 mL, 21.52 mmol)을 첨가하고, 밤새 교반하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 판단되었다. 반응 혼합물을 물 (125 mL)에 붓고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 공기 건조시켜 제조예 1I 및 제조예 1J의 8:1 혼합물 (2.95 g, 89%)을 크림색 고체로서 수득하였다.

제조예 1K: (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산 및

제조예 1L: (2R,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산

DCM (20 mL) 중 제조예 1I 및 제조예 1J의 상기 혼합물 (2.95 g, 4.81 mmol)의 냉각된 (0℃) 교반 용액에 TFA (20 mL, 260 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 2.5시간 동안 교반하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 판단되었다. 반응 혼합물을 톨루엔 (50 mL)으로 희석하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류 혼합물을 톨루엔 (50 mL) 중에 재용해시키고, 감압 하에 농축시킨 다음, 고 진공 하에 건조시켰다. 조 생성물을 DCM 중에 용해시키고, SiO₂ (15g)를 첨가하고, 농축시킨 다음, 플래쉬 크로마토그래피 (텔레다인 이스코 콤비플래쉬 Rf, 0% → 45% 용매 A/B=DCM/EtOAc, 레디셉® SiO₂ 80g)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 농축시켜 제조예 1K 및 제조예 1L의 혼합물 (2.00 g, 75%)을 크림색 고체로서 수득하였다: HPLC: RT=2.770 min (크로모리스(CHROMOLITH)® 스피드ROD(SpeedROD) 4.6 x 50 mm (4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH, 4 min, 0.1% TFA 함유, 4 mL/min, 254 nm에서 모니터링);

실시예 1:

DMF (25 mL) 중 제조예 1K 및 제조예 1L의 8:1 혼합물 (3.46 g, 6.21 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 염화암모늄 (3.32 g, 62.1 mmol), EDC (3.55 g, 18.52 mmol), HOBT (2.85 g, 18.61 mmol) 및 트리에틸 아민 (16 mL, 115 mmol)을 첨가하고, 밤새 교반하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 판단되었다. 반응 혼합물을 격렬하게 와류시키면서 물 (200 mL)에 붓고, 이어서 방치되도록 하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 건조되도록 하여 3.6 g 무색 고체를 수득하였다. 고체를 정제용 SFC 크로마토그래피 (룩스-셀룰로스(Lux-Cellulose)-2 (3x25cm), CO₂ 중 8% 메탄올, 140ml/min @220nm 및 35℃; 샘플: 50cc 메탄올 중 3.6g, 농도=70mg/ml, 스택 주사: 0.5cc/9.2min)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 농축시키고, 밤새 진공 하에 건조시켰다. 실시예 1 (2.74 g, 79%)을 무색 고체로서 수득하였다 (결정 형태 N-1): HPLC: RT=9.601 min (H₂O/CH₃CN, TFA 함유, 선파이어(Sunfire) C18 3.5um, 4.6x150mm, 4.6x150mm, 구배 = 15 min, 파장 = 220 및 254 nm).

결정 형태 A-2는 대략 1 mg의 실시예 1을 아세톤/아세토니트릴/물 용액 (2:2:1) 대략 0.7 mL에 첨가함으로써 제조하였다. 무색 바늘 및 얇은 블레이드 결정의 혼합물을 실온에서 용액의 느린 증발 1일 후에 수득하였다. 얇은 블레이드 결정을 분리하여 결정 형태 A-2를 수득하였다.

결정 형태 EA-3은 대략 1 mg의 실시예 1을 에틸 아세테이트/헵탄 용액 (1:1) 대략 0.7 mL에 첨가함으로써 제조하였다. 무색 블레이드 결정을 실온에서 용액의 느린 증발 3일 후에 수득하였다.

결정 형태 THF-2는 대략 5 mg의 실시예 1을 THF/물 용액 (4:1) 대략 0.7 mL에 첨가함으로써 수득하였다. 무색 블레이드-유사 결정을 실온에서 용매 증발 1일 후에 수득하였다.

실시예 1의 제조를 위한 대안적 절차:

제조예 1M: 3,3,3-트리플루오로프로필 트리플루오로메탄술포네이트

CH₂Cl₂ (120 mL) 중 2,6-루티딘 (18.38 mL, 158 mmol)의 차가운 (-25℃) 교반 용액에 Tf₂O (24.88 mL, 147 mmol)를 3분에 걸쳐 첨가하고, 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 3,3,3-트리플루오로프로판-1-올 (12 g, 105 mmol)을 3분 간격에 걸쳐 첨가하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 절반 부피로 농축시킨 다음, 실리카 겔 칼럼 (330g ISCO) 상에 직접 로딩하고 CH₂Cl₂로 용리함으로써 정제하였다. 제조예 1M (13.74 g, 53%)을 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 1N: (4S)-4-벤질-3-(5,5,5-트리플루오로펜타노일)-1,3-옥사졸리딘-2-온

제조예 1N을 제조예 1B에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 5,5,5-트리플루오로펜탄산 (3.35 g, 21.46 mmol) 및 (4S)-4-벤질-1,3-옥사졸리딘-2-온 (3.80 g, 21.46 mmol)으로부터 제조하였다. 제조예 1N (5.67 g, 84%)을 무색 점성 오일로서 수득하였다.

제조예 1O: tert-부틸 (3R)-3-(((4S)-4-벤질-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-3-일)카르보닐)-6,6,6-트리플루오로헥사노에이트

THF (20 mL) 중 제조예 1N (3.03 g, 9.61 mmol)의 차가운 (-78℃) 교반 용액에 NaHMDS (THF 중 1.0M) (10.6 mL, 10.60 mmol)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 2시간 후에, tert-부틸 2-브로모아세테이트 (5.62 g, 28.8 mmol)를 시린지를 통해 -78℃에서 순수하게 첨가하고, 동일한 온도에서 교반을 유지하였다. 6시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl과 EtOAc 사이에 분배하였다. 유기 상을 분리하고, 수성부를 EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄) 시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (텔레다인 이스코 콤비플래쉬 Rf, 5% → 100% 용매 A/B=헥산/EtOAc, 레디셉® SiO₂ 120g)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 농축시켜 제조예 1O (2.79 g, 67.6%)를 무색 점성 오일로서 수득하였다.

제조예 1P: (2R)-2-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸)-5,5,5-트리플루오로펜탄산

제조예 1P를 제조예 1E에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조예 1O (2.79 g, 6.50 mmol)으로부터 제조하였다. 제조예 1P (1.45 g, 83%)를 무색 오일로서 수득하였다.

THF (60 mL) 중 제조예 1P (5.44 g, 20.13 mmol)의 차가운 (-78℃) 교반 용액에 LDA (24.60 mL, 44.3 mmol)를 7분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후에, 제조예 1M (6.44 g, 26.2 mmol)을 반응 혼합물에 3분에 걸쳐 첨가하였다. 45분 후에, 반응 혼합물을 -25℃ 조 (얼음/MeOH/드라이아이스)로 1시간 동안 가온한 다음, 0℃로 가온하였다. 45분 후에, 제조예 1M (1g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 반응물을 물 및 1N NaOH로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 다시 1N NaOH (2x)로 추출하고, 수성 층을 합하였다. 수성 층을 빙수조에서 냉각시킨 다음, 진한 HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다. 그 다음, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 고 진공 하에 건조시켜 제조예 1E 및 제조예 1F의 1:5 (1E:1F) 혼합물 (¹H NMR에 의해 결정된 바와 같음) (5.925 g, 80%)을 연황색 고체로서 수득하였다.

제조예 1E 및 제조예 1F의 혼합물 (64 mg, 1.758 mmol)을 THF (6 mL)에 녹여 무색 용액을 얻고, 이를 -78℃로 냉각시켰다. 이어서, LDA (2.149 mL, 3.87 mmol) (헵탄/THF/에틸벤젠 중 1.8M)를 반응 혼합물에 10분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 실온 수조에 넣었다. 15분 후에, 반응 혼합물을 -78℃ 조에 다시 넣고, 이어서 디에틸알루미늄 클로라이드 (3.87 mL, 3.87 mmol) (헥산 중 1M)를 5분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 교반하였다. 15분 후에, 반응 혼합물을 실온 수조에서 10분 동안 두고, 이어서 -78℃ 조로 역냉각시켰다. 15분 후에, 반응물을 MeOH (8 mL, 198 mmol)로 켄칭하고, -78℃ 조로부터 제거하고, 농축시켰다. 반응 혼합물에 얼음 및 HCl (16 mL, 16.00 mmol)을 첨가한 다음, EtOAc (2x)로 추출하였다. 유기 층을 플루오린화칼륨 (920 mg, 15.84 mmol) (25 mL H₂O 중) 및 HCl (4.5 mL, 4.50 mmol)로 세척하였다. 유기부를 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 제조예 1E 및 제조예 1F의 9:1 (1E:1F) 농축 혼합물 (540 mg, 1.583 mmol, 90% 수율)을 담황색/오랜지색 고체로서 수득하였다.

이것을 상기 요약된 반응 순서에 의해 실시예 1로 전환시켰다.

제조예 1E의 제조를 위한 대안적 절차:

제조예 1Q: (2R,3S)-1-벤질 4-tert-부틸 2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙시네이트

기계식 교반기, 온도계 소켓 및 질소 버블러를 갖춘 깨끗한 건조 5 L 4구 둥근 바닥 플라스크를 실온에서 N,N-디메틸 포름아미드 (2.07 L), 제조예 1E 및 제조예 1F의 1.2:1 혼합물 (207 g, 0.5651 mol), 탄산칼륨 (117.1 g, 0.8476 mol)에 이어서 벤질 브로마이드 (116 g, 0.6781 mol)로 15-20분에 걸쳐 충전시켰다. 반응 혼합물을 2-3시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후에, 반응 혼합물을 50-55℃에서 진공 하에 농축 건조시켰다. 에틸 아세테이트 (3.1 L, 30 Vol.)를 농축된 반응물에 충전시키고, 이어서 물 (2.07 L), 염수 (0.6 L)로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 (207 g) 상에서 건조시키고, 여과하고, 40-45℃에서 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 (1.035 L, 5 vol.) 중에 용해시킨 다음, 실리카 겔 (60-120) (607 g, 3.0 w/w) 상에 흡수시키고, 이어서 석유 에테르 및 에틸 아세테이트를 용매로서 사용하여 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 몇몇 배치를 모은 후에, 제조예 1Q (235 g)를 수득하였다. HPLC 순도: 99.77%,

제조예 1E: (2R,3S)-3-(tert-부톡시카르보닐)-6,6,6-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산

깨끗한 건조 2 L 오토클레이브를 메탄올 (540 mL)로 충전시키고, 5-10분 동안 질소로 퍼징하였다. 오토클레이브에 탄소상 10% 팔라듐 (12 g, 20%)을 첨가하고, 5-10분 동안 질소로 1회 더 퍼징한 다음, 제조예 1Q (60g, 0.1315 mol)로 충전시키고, 오토클레이브를 메탄올 (60mL)로 플러싱하고, 4-6시간 동안 20-25℃에서 5Kg 수소압 하에 교반하였다. 반응 완료 후에, 반응물을 셀라이트(CELITE)®를 통해 여과하고, 메탄올 (180 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 (60 g)으로 건조시키고, 여과하고, 45-50℃에서 진공 하에 농축 건조시켰다. 제조예 1E (45.8 g, 95%)를 무색 고체로서 수득하였다: HPLC 순도: 98.9%.

제조예 1E의 제조를 위한 대안적 절차:

제조예 1E를 상기와 동일한 절차에서 제조예 1E 및 1F의 혼합물 (200g, 0.5460 mol)로부터 THF (2.0L) 중 LDA (THF, 에틸 벤젠 및 헵탄 중 1.8 M 용액) (698mL, 2.3당량) 및 디에틸 알루미늄 클로라이드 (헥산 중 1.0 M 용액) (1256mL, 2.3당량)를 사용하여 제조하였다. 상기 설명된 바와 같은 후처리 후에, 생성된 잔류물을 하기와 같이 처리하였다: 조 물질을 2L 4구 둥근 바닥 플라스크에 첨가한 다음, 30℃ 미만에서 충전된 MTBE (1.0L)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5-10분 동안 교반하여 투명한 용액을 수득하였다. 헥산 (600mL)을 반응 혼합물에 30℃ 미만의 온도에서 충전시켰다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 그 다음, tert-부틸아민 (43.8g, 1.1eq)을 15분의 기간에 걸쳐 30℃ 미만에서 천천히 충전시켰다. 이 첨가는 발열인 것으로 관찰되었다. 반응 혼합물을 2시간 동안 30℃ 미만에서 교반하고 여과하였다. 고체 물질을 5:3 MTBE: 헥산 (200mL)으로 세척하고, 여과물을 농축시키고, 호박색 병에 옮겼다. 여과된 고체를 디클로로메탄 (2.0L) 중에 용해시키고, 1N HCl (2.0)로 세척하고, 유기 층을 염수 (1.0L x 2)로 세척한 다음, 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켰다. 이 물질은 91.12% 순도인 것으로 밝혀졌다. 물질을 상기 t-부틸아민 결정화 정제 절차에 의해 재정제하였다. 제조예 1E (78 g, 39%)를 수득하였다: HPLC 순도: 99.54%.

실시예 1의 제조를 위한 대안적 절차:

제조예 1I: tert-부틸 (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트

기계식 교반기, 온도계 소켓 및 질소 버블러를 갖춘 깨끗한 건조 2 L 4구 둥근 바닥 플라스크를 N,N-디메틸포름아미드 (457 mL), 제조예 1E (45.7g, 0.1248mol) 및 제조예 1G·CSA (62.08g, 0.1248mol)로 질소 분위기 하에 20-25℃에서 충전시켰다. 반응 혼합물을 15-20분 동안 교반하여 20-25℃에서 투명한 용액으로 만들었다. 반응 혼합물에 TBTU (48.16g, 0.1498 mol)를 20-25℃에서 첨가한 다음, 트리에틸아민 (50.51g, 0.4992 mol)을 15-20분에 걸쳐 20-25℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 60-120분 동안 20-25℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응 완료 후에, 반응물을 20-25℃에서 교반 하에 물 (1.37L, 30 Vol.) 내로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 20-25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 물 (228 mL)로 세척하였다. 생성된 고체 물질을 에틸 아세테이트 (457 mL) 중에 용해시키고, 물 (2x137 mL), 염수 (137 mL)로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 (45.7g)으로 건조시켰다. 활성탄 (9.14 g, 20%)을 반응 혼합물에 충전시키고, 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트® 층 및 1 마이크로미터 필터 클로스를 통해 여과하고, 목탄층을 에틸 아세테이트 (137 mL)로 세척하고, 1.0 Vol. 단계로 농축시킨 다음, 석유 에테르 (457 mL, 10 Vol.)를 충전시키고, 30분 동안 20-25℃에서 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 석유 에테르 (137 mL)로 세척한 다음, 건조 감량이 3.0% 미만이 될 때까지 진공 하에 40-45℃에서 8시간 동안 건조시켰다. 제조예 1I (65.2 g, 85%)를 수득하였다: HPLC 순도: 98.26%.

제조예 1K: (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산

기계식 교반기, 온도계 소켓 및 질소 버블러를 갖춘 깨끗한 건조 3 L 4구 둥근 바닥 플라스크를 질소 분위기 하에 디클로로메탄 (980 mL)에 이어서, 제조예 1I (140 g, 0.2282 mol)로 20-25℃에서 충전시켰다. 반응 혼합물을 0-5℃로 냉각시키고, 트리플루오로아세트산 (980 mL)을 30-40분 동안 천천히 충전시켰다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 0-5℃에서 질소 분위기 하에 교반하였다. 반응 온도를 20에서 25℃로 상승시키고, 반응 혼합물을 1-2시간 동안 20 내지 25℃에서 교반하였다. 반응 완료 후에, 반응 혼합물을 50 내지 55℃에서 진공 하에 농축 건조시켰다. 톨루엔 (3x700 mL)을 농축된 반응물에 충전시키고, 이어서 50 내지 55℃에서 진공 하에 증류시켰다. 톨루엔으로부터의 완전 농축 후에, 에틸 아세테이트 (280 mL)를 20 내지 25℃에서 반응물에 충전시키고, 60분 동안 교반하고, 이어서 고체를 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트 (140 mL)로 세척하고, 건조 감량이 2.0% 미만이 될 때까지 진공 하에 50 내지 55℃에서 12시간 동안 건조시켰다. 제조예 1K (106 g, 84%)를 수득하였다: HPLC 순도: 98.43%.

실시예 1:

반응 용기를 제조예 1K (30 g, 53.81 mmol), HOBt (8.7g, 64.38 mmol) 및 THF (150 mL)로 실온에서 충전시켰다. 균질 용액에 EDCI (12.4g, 64.68 mmol)를 첨가하고, 15분 동안 교반하고, 이어서 8℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물에 암모니아 (IPA 중 2M) (81 mL, 162 mmol)를 5분에 걸쳐 첨가하여, 온도를 10℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 무거운 슬러리를 10분 동안 교반하고, 실온으로 30분에 걸쳐 가온하고, 이어서 4시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후에, 물 (230 mL)을 15분에 걸쳐 천천히 첨가하여 온도를 20℃ 미만으로 유지하고, 이어서 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (3X60 mL)로 세척하고, 이어서 진공 하에 48시간 동안 55℃에서 건조시켰다. 상기 조 생성물을 1 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 충전시켰다. IPA (200 mL)를 첨가하고, 이어서 80℃로 가열하여 균질 용액을 생성하였다. 물 (170 mL)을 천천히 첨가하여 (15분) 내부 온도 >75℃를 유지하였다. 생성된 슬러리를 교반하고, 실온으로 2시간 동안 냉각시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (2 X 50 mL)로 세척하고, 이어서 진공 하에 건조시켰다 (24시간 동안 55℃ 및 48시간 동안 30℃). 실시예 1 (23.4 g, 78% 수율)을 수득하였다: HPLC 순도: 99.43%.

실시예 2

(2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 2A: (3S)-3-아미노-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온 및

제조예 2B: (3R)-3-아미노-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온

라세미 3-아미노-5-페닐-1,3-디히드로-2H-1,4-벤조디아제핀-2-온 (문헌 [J. Med. Chem., 49:2311-2319 (2006)], 화합물 # 5)을 문헌 절차에 따라 제조하였다. 거울상이성질체를 베르게르(Berger) SFC MGIII 칼럼 상에서 분리하였다: 룩스 25X3 cm, 5cm; 이동상: CO₂ 중 30% MeOH+ 0.1% DEA; 유량: 150 mL/min; 온도: 40℃; 검출기 파장: 250 nM. S-거울상이성질체 제조예 2A를 백색 고체로서 수득하였다.

또한 R-거울상이성질체 제조예 2B를 회백색 고체로서 수득하였다.

제조예 2C: tert-부틸 (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트 및

제조예 2D: tert-부틸 (2R,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥사노에이트

제조예 2C를 제조예 2A (564 mg, 2.244 mmol) 및 제조예 1E 및 제조예 1F의 혼합물 (822 mg, 2.244 mmol)로부터 제조예 1I에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 2C 및 제조예 2D (1.31 g, 97%)를 수득하였다: HPLC: RT=3.443 min (크로모리스® ODS 4.6 x 50 mm (4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.% TFA 함유, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링);

제조예 2E: (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산 및

제조예 2F: (2R,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헥산산

제조예 2E 및 제조예 2F의 혼합물을 제조예 2C 및 제조예 2D의 혼합물 (1.31g, 2.185 mmol)로부터 제조예 1K에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 2E 및 제조예 2F의 혼합물 (1.18 g, 99%)을 수득하였다: HPLC: RT=2.885 min (크로모리스® ODS 4.6 x 50 mm (4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.% TFA 함유, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링).

실시예 2:

실시예 2를 제조예 2E 및 제조예 2F의 혼합물 (354 mg, 0.651 mmol)로부터 실시예 1에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 부분입체이성질체의 분리 후에, 실시예 2를 백색 고체로서 수득하였다 (188 mg, 52%): HPLC: RT=9.063 min (H₂O/CH₃CN, TFA 함유, 선파이어 C18 3.5um, 4.6x150mm, 4.6x150mm, 구배 = 15 min, 파장 = 220 및 254 nm);

결정 형태 M2-1은 대략 1 mg의 실시예 2를 MeOH/플루오로벤젠 용액 (3:1) 대략 0.7 mL에 첨가함으로써 제조하였다. 무색 플레이트-유사 결정을 실온에서 용매 증발 2일 후에 수득하였다.

실시예 3

(2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 3A: (4S)-4-(프로판-2-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부타노일)-1,3-옥사졸리딘-2-온

제조예 3A를 (4S)-4-(프로판-2-일)-1,3-옥사졸리딘-2-온 (4.66 g, 36.1 mmol) 및 4,4,4-트리플루오로부탄산 (5.02 g, 35.3 mmol)으로부터 제조예 1B에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3A를 무색 오일로서 수득하였다 (3.64g, 40%).

제조예 3B: tert-부틸 (3R)-5,5,5-트리플루오로-3-(((4S)-2-옥소-4-(프로판-2-일)-1,3-옥사졸리딘-3-일)카르보닐)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)펜타노에이트

제조예 3B를 제조예 3A (1.04 g, 4.12 mmol) 및 tert-부틸 5,5,5-트리플루오로펜타노에이트 (제조예 1A) (1.55 g, 7.28 mmol)로부터 제조예 1C에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3B (528.3 mg, 28%)를 연황색 점성 오일로서 수득하였다:

제조예 3C: (2R)-3-(tert-부톡시카르보닐)-6,6,6-트리플루오로-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)헥산산

제조예 3C를 제조예 3B (528.3 mg, 1.140 mmol)로부터 제조예 1D에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3C (306.7 mg, 76%)를 무색 왁스상 고체 로서 수득하였다 (306.7 mg, 76%).

제조예 3D: (2R,3S)-3-(tert-부톡시카르보닐)-6,6,6-트리플루오로-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)헥산산

제조예 3D를 제조예 3C (306.7 mg, 0.871 mmol)로부터 제조예 1E 및 제조예 1F의 혼합물을 농축하기 위해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3D (297.0 mg, 97%)를 황색 왁스상 고체로서 수득하였다 (297.0 mg, 97%).

제조예 3E: tert-부틸 (2S,3R)-5,5,5-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)펜타노에이트

제조예 3E를 제조예 3D (297.0 mg, 0.843 mmol) 및 제조예 1G (212.0 mg, 0.799 mmol)로부터 제조예 1I에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3E (471.7 mg, 98%)를 황갈색 고체로서 수득하였다 (471.7 mg, 98%).

제조예 3F: (2S,3R)-5,5,5-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)펜탄산

제조예 3F를 제조예 3E (466.1 mg, 0.777 mmol)로부터 제조예 1H에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 제조예 3F (451 mg, >99%)를 황갈색 고체로서 수득하였다.

실시예 3:

실시예 3을 제조예 3F (446 mg, 0.821 mmol)로부터 실시예 1에 대해 제시된 일반적 방법에 의해 제조하였다. 부분입체이성질체의 분리 후에, 실시예 3을 수득하였다: HPLC: RT=3.17 min (H₂O/CH₃CN, TFA 함유, 선파이어 C18 3.5um, 4.6x150mm, 4.6x150mm, 구배 = 15 min, 파장 = 220 및 254 nm).

실시예 4

(2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 4A: tert-부틸 4,4,4-트리플루오로부타노에이트

제조예 4A를 4,4,4-트리플루오로부탄산 (4.99 g, 35.1 mmol)으로부터 제조예 1A에 대해 제시된 일반적 절차를 이용하여 제조하였다. 제조예 4A (5.58 g, 80%)를 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 4B: tert-부틸 (3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((4S)-2-옥소-4-(프로판-2-일)-1,3-옥사졸리딘-3-일)카르보닐)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)헥사노에이트

제조예 4B를 제조예 4A (1058.3 mg, 5.34 mmol) 및 제조예 1B (809.2 mg, 3.03 mmol)로부터 제조예 1C에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 4B (690.1 mg, 49%)를 연황색 점성 오일로서 수득하였다.

제조예 4C: (2R)-3-(tert-부톡시카르보닐)-5,5,5-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)펜탄산

제조예 4C를 제조예 4B (690.1 mg, 1.489 mmol)로부터 제조예 1E에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 4C (335.9 mg, 64%)를 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 4D: (2R,3S)-3-(tert-부톡시카르보닐)-5,5,5-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)펜탄산

제조예 4D를 제조예 4C (335.9 mg, 0.954 mmol)로부터 제조예 1E 및 제조예 1F의 혼합물을 농축시키기 위해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 4D (277.8 mg, 83%)를 갈색 오일로서 수득하였다.

제조예 4E: tert-부틸 (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)헥사노에이트

제조예 4E를 제조예 4D (277.8 mg, 0.789 mmol) 및 제조예 1G (210.2 mg, 0.792 mmol)로부터 제조예 1I에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 4E를 크림색 고체로서 수득하였다 (420.2 mg, 89%).

제조예 4F: (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)헥산산

제조예 4F를 제조예 4E (417.2 mg, 0.696 mmol)로부터 제조예 1K에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 4F를 TFA 용매화물로서 호박색 고체로서 수득하였다 (476.0 mg, 96%).

실시예 4:

실시예 4를 제조예 4F (476.3 mg, 0.667 mmol)로부터 실시예 1에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 부분입체이성질체의 분리 후에, 실시예 4를 크림색 고체로서 수득하였다 (120.3 mg, 32%). HPLC: RT=9.446 min (H₂O/CH₃CN, TFA 함유, 선파이어 C18 3.5μm, 4.6x150mm, 4.6x150mm, 구배 = 15 min, 파장 = 220 및 254 nm);

실시예 5

(2R,3S)-N-((3S)-1-(²H₃)메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

5 mL 스크류 상부 바이알에서 DMF (2 mL) 중 실시예 2 (50 mg, 0.092 mmol), 탄산세슘 (60.1 mg, 0.184 mmol) 및 아이오도메탄-d₃ (6.88 μL, 0.111 mmol)을 첨가하여 현탁액을 얻었다. 혼합물을 실온에서 질소 하에 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 1:1 DMF/AcOH 2ml 중에 용해시키고, 10% → 100% ACN/물 0.1% TFA → 100%의 7분 구배로 용리하는 루나(Luna) ODS 5um 21.2x100mm 상의 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 농축시켜 실시예 5 (35 mg, 65%)를 수득하였다: HPLC: RT=3.04 min (크로모리스® S5 ODS 칼럼 4.6 x 50 mm, 10-90% 수성 메탄올, 4 min, 0.1% TFA 함유, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링);

실시예 6 내지 11

하기 열거된 화합물은 실시예 1에 기재된 일반적 합성 절차에 따라, 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어 문헌 [Carter, M.C. et al., J. Med. Chem., 49:2311-2319 (2006)]에 공지된 방법에 의해 수득된 적절한 벤조디아제피논을 사용하여 제조하였다.

<표 6>

^a 엑스브리지 페닐(Xbridge Phenyl) (4.6X150 mm), 3.5마이크로미터; 1mL/min 유량; 구배 10-100%B, 30min (A: 물/CH₃CN (95:5) 중 0.05%TFA, B: 물/CH₃CN (5:95) 중 0.05%TFA @ 220 및 250nm); 30min 진행.

^b 엑스브리지 페닐 (4.6X150 mm), 3.5마이크로미터; 1mL/min 유량; 구배 10-100%B, 15min (A: 물/CH₃CN (95:5) 중 0.05%TFA, B: 물/CH₃CN (5:95) 중 0.05%TFA @ 220 및 250nm); 15min 진행.

실시예 12 내지 18

<표 7>

^a 엑스브리지 페닐 (4.6X150mm), 3.5마이크로미터; 1mL/min 유량; 구배 10-100%B, 12 min (A: 물/CH₃CN (95:5) 중 0.05%TFA, B: 물/CH₃CN (5:95) 중 0.05%TFA @ 220 및 250 nm); 25min 진행.

^b 엑스브리지 페닐 (4.6X150mm), 3.5마이크로미터; 1mL/min 유량; 구배 10-100%B, 12 min (A: 물/CH₃CN (95:5) 중 0.05%TFA, B: 물/CH₃CN (5:95) 중 0.05%TFA @ 220 및 250 nm); 15min 진행.

^c LCMS: MeOH/H₂O/0.1%TFA, BEH C18 2.1x50mm 1.7u, 2 min 구배, 파장=254nm.

^d MeOH/H₂O/0.1%TFA, 워터스 선파이어 C₁₈ 2.1x30mm, 2 min 구배, 파장=254nm.

^e 크로모리스® ODS 4.6 x 50 mm (4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.% TFA 함유, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링.

실시예 19

(2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 19A: (2R,3R)-3-(tert-부톡시카르보닐)-7,7,7-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헵탄산

제조예 19A를 제조예 9A (674 mg, 2.59 mmol) 및 제조예 1P (500 mg, 1.850 mmol)로부터 제조예 1E에 대해 제시된 대안적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 19A (521 mg, 28%)를 수득하였다.

제조예 19B: (2R,3S)-3-(tert-부톡시카르보닐)-7,7,7-트리플루오로-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)헵탄산

제조예 19B를 제조예 19A (198 mg, 0.521 mmol)로부터 제조예 1E 및 제조예 1F의 혼합물에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 19B (192 mg, 98%)를 수득하였다.

제조예 19C: tert-부틸 (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)헥사노에이트

제조예 19C를 제조예 19B (45.4 mg, 0.119 mmol) 및 제조예 2A (30 mg, 0.119 mmol)로부터 제조예 1I에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 19C (82 mg, 100%)를 수득하였다: HPLC: RT= 3.475 min (크로모리스® 5u C18 4.6 x 30mm(4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.1% TFA 함유, 220 nm에서 모니터링);

제조예 19D: (2S,3R)-6,6,6-트리플루오로-3-(((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)카르바모일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)헥산산

제조예 19D를 제조예 19C (73 mg, 0.119 mmol)로부터 제조예 1K에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 제조예 19D (80 mg, 100%)를 TFA 용매화물로서 수득하였다: HPLC: RT= 2.926 min (크로모리스® 5u C18 4.6 x 30mm(4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.1% TFA 함유, 220 nm에서 모니터링).

실시예 19:

실시예 19를 제조예 19D (80 mg, 0.119 mmol)로부터 실시예 1에 대해 제시된 일반적 절차에 따라 제조하였다. 부분입체이성질체의 분리 후에, 실시예 19 (35 mg, 49%)를 수득하였다. HPLC: RT=2.731 min (크로모리스® 5u C18 4.6 x 30mm(4 min 구배), 10-90% 수성 MeOH로 용리, 4 min, 0.1% TFA 함유, 220 nm에서 모니터링);

실시예 20

(2R,3S)-N1-((3S)-8-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

실시예 20을 실시예 19에 요약된 바와 같은 반응 순서를 이용하여 제조예 19B를 제조예 1E 대신에 사용하여 제조하였다. 수득된 부분입체이성질체의 혼합물을 키랄 HPLC를 통해 분리하여 실시예 20을 수득하였다. HPLC RT = 0.89 min (BEH C18 2.1X 50mm, 1.7u, 0 → 100 B 1 min, 0.5 min 유지 시간, 유량 = 1 ml/min, 254 nm에서 검출, 용매 A: 100% 물 / 0.1% TFA; 용매 B: 100% ACNl / 0.1% TFA).

실시예 21

(2R,3S)-N-((3S)-9-((2-메톡시에틸)아미노)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드

제조예 21A: (3-((4-메톡시벤질)(2-메톡시에틸)아미노)-2-니트로페닐)(페닐)메타논

(3-클로로-2-니트로페닐)(페닐)메타논 (850 mg, 3.25 mmol) 및 2-메톡시-N-(4-메톡시벤질)에탄아민 (3171 mg, 16.24 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)과 DCM (50 mL) 사이에 분배하고, DCM (3 X 50 mL)으로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (단계적 구배: 30% → 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 이용하여 정제하여 제조예 21A (780 mg, 57.1% 수율)를 갈색 오일로서 단리하였다: LC/MS (페노메넥스® 루나 5 마이크로미터 C18 4.6 X 30 mm, 0 → 100 B 2 min, 1 min 유지 시간, 유량 = 5 ml/min, 254 nm에서 검출, 용매 A: 10% 메탄올/ 90% 물 / 0.1% TFA; 용매 B: 10% 물 / 90% 메탄올 / 0.1% TFA) RT = 2.32;

제조예 21B: (2-아미노-3-((4-메톡시벤질)(2-메톡시에틸)아미노)페닐)(페닐)메타논

EtOH (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 제조예 21A (700 mg, 1.665 mmol), 아연 (1089 mg, 16.65 mmol) 및 염화암모늄 (891 mg, 16.65 mmol)을 5분 동안 90℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고, 물/DCM 사이에 분배하고, 3X10 mL DCM으로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켜 제조예 21B (580 mg, 89% 수율)를 수득하였다: LC/MS (페노메넥스® 루나 5 마이크로미터 C18 4.6 X 30 mm, 30 → 100 B 4 min, 1 min 유지 시간, 유량 = 5 ml/min, 254 nm에서 검출, 용매 A: 10% 메탄올 / 90% 물 / 0.1% TFA; 용매 B: 10% 물 / 90% 메탄올 / 0.1% TFA): RT = 2.47 min;

제조예 21C: 벤질 9-((4-메톡시벤질)(2-메톡시에틸)아미노)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-벤조[e][1,4]디아제핀-3-일카르바메이트

제조예 21C를 제조예 21B로부터 제조예 50D에 대한 일반적 절차에 따라 수득하였다 (38.6% 수율): LC/MS (페노메넥스® 루나 5 마이크로미터 C18 4.6 X 30 mm, 30 → 100 B 4 min, 1 min 유지 시간, 유량 = 5 ml/min, 254 nm에서 검출, 용매 A: 10% 메탄올/ 90% 물 / 0.1% TFA; 용매 B: 10% 물 / 90% 메탄올 / 0.1% TFA) RT = 2.42 min;

실시예 21:

실시예 21을 제조예 21C로부터 실시예 1에 요약된 바와 같은 반응의 일반적 순서를 이용하여 제조하였다. 수득된 부분입체이성질체의 혼합물을 키랄 HPLC를 통해 분리하여 실시예 21을 수득하였다: LC/MS (페노메넥스® 루나 5 마이크로미터 C18 4.6 X 30 mm, 30 → 100 B 4 min, 1 min 유지 시간, 유량 = 5 ml/min, 254 nm에서 검출, 용매 A: 10% 메탄올 / 90% 물 / 0.1% TFA; 용매 B: 10% 물 / 90% 메탄올 / 0.1% TFA) RT = 2.13 min;

비교 화합물 22 내지 25

비교 화합물 22 내지 25는 각각 실시예 8, 12a, 38 및 45a에 대한 미국 특허 번호 7,053,084에 기재된 절차에 따라 제조될 수 있다.

실시예 26

(2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드를 포함하는 제약 제제

(2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드, 실시예 1을 포함하는 주사 약물 제품을, 정제된 폴리옥시에틸화 피마자 오일 (계면활성제) 및 탈수 알콜 (용매)의 50:50 (v/v) 조합물을 사용하는 정맥내(IV) 투여용 단일-사용, 즉시-사용 (RTU) 멸균 용액으로서 제제화하였다. 약물 제품은 투명 내지 다소 흐린 (유백색), 무색 내지 연황색 멸균 용액이고, 5-mL 제I형 플린트 유리 바이알에 저장하고, 20-mm 스토퍼로 닫고, 20-mm 알루미늄 실로 밀봉하였다. 농축된 제제를 투여 전에 통상적으로 사용되는 정맥내 희석제, 예컨대 생리 염수 (NS) 또는 5% 덱스트로스로 희석하여 생리학상 허용되는 희석된 제품을 제공할 수 있다.

<표 11>

농축 제약 조성물

정제된 폴리옥시에틸화 피마자 오일: 크레모포르 (바스프 코포레이션(BASF Corp.))

농축 제약 제제는 25℃/60% 상대 습도, 40℃/75% 상대 습도 및 50℃에서 저장시 3개월의 기간 동안 안정한 것으로 밝혀졌다. 또한, 광-안정성 연구 (HIL/UVA)는 제품이 광으로부터 보호될 필요가 없다는 것을 나타내었다. 실시예 1의 농축 제제는 화학적 및 물리적 안정성을 비롯한 장기 저장 안정성을 가졌다.

IV 투여 전에, 농축 제약 제제를 생리 염수 (NS) 또는 물 중 5% 덱스트로스 (D5W)로 0.01 mg/mL 내지 0.06 mg/mL의 농도로 희석하였다. 사용-시간/상용성 결과는 NS 또는 D5W 중에 0.01 mg/mL 내지 0.06 mg/mL 범위의 농도로 희석된 제품이 비-PVC, 비-DEHP IV 주입 백과 상용성임을 나타내었다. 그 결과는 2℃ 내지 8℃에서 또는 실온/실내 조명 (25℃ 및 대략 5000 lux)에서 저장 24시간 내내 본질적으로 변화가 없음을 나타내었다.

생물학적 검정

본 발명의 화합물의 약리학적 특성은 수많은 생물학적 검정에서 확인될 수 있다. 하기 예시된 생물학적 검정을 본 발명의 화합물을 사용하여 수행하였다.

Notch-CBF1 전사활성화 검정

Notch-CBF1 (C-프로모터 결합 인자 I) 세포 기반 전사활성화 검정은 CBF1 및 다른 핵 인자와 함께 전사 인자로서 작용하는 방출된 Notch 세포내 도메인 단편 (NICD)의 능력을 기초로 한다. 루시페라제 검정을 이용하여 Notch-CBF1 전사 활성의 길항작용을 측정하였다. HeLa 자궁경부암 세포는 말단절단형 Notch 1, Notch 2, Notch 3 또는 Notch 4 수용체를 함유하는 pCDNA3.1/Hygro 플라스미드 및 CBF1 결합 부위 4개 카피를 함유하는 PGL3 루시페라제 리포터 벡터로 일시적으로 공동-형질감염시켰다. 이어서, 세포를 시험 화합물 부재 하에 또는 존재 하에 Notch-CBF1 활성에 대해 시험하였다. DMEM (고 글루코스, HEPES 함유), 1X 글루타민/페니실린/스트렙토마이신 및 10% 태아 소 혈청 중에 유지된 HeLa 세포를 제조자 설명에 따라 몬스터(Monster) 형질감염 키트 (미루스(Mirus) #MIR2906)를 이용하여 T175 플라스크 (4.5 x10⁶개 세포/플라스크)에서 일시적으로 형질감염시켰다. 표 12는 형질감염을 위한 각각의 DNA 양을 나타내었다.

<표 12>

6시간 형질감염후, 세포를 트립신처리하고, 95 μL 검정 배지 (DMEM (고 글루코스, HEPES 함유), 1X 글루타민/페니실린/스트렙토마이신, 0.0125% BSA, 1X 비-필수 아미노산) 중에 5x10³개 세포/웰 밀도로 384-웰 흑색 폴리-D-리신 코팅된 조직 배양 플레이트 내로 플레이팅하였다. 5 μM 내지 8.4x10^-5 μM (3배 연속 희석) 범위의 최종 농도로 시험 화합물을 함유하는 검정 배지 (5 μL)를 세포에 첨가하고, 이어서 세포 플레이트를 37℃ 및 5% CO₂에서 18시간 동안 인큐베이션하였다. 대조군 웰은 DMSO 비히클 (전체 카운트) 또는 0.5 μM의 인-하우스 소분자 억제제 (백그라운드 카운트)를 함유하였다. 각각의 샘플에 대해 2벌로 사용하였다. 루시페라제 활성을 제조자 설명 (프로메가(Promega), Cat. #: E2550)에 따라 50 μl 스테디-글로(STEADY-GLO)® 루시페라제 시약과 함께 20분 인큐베이션 후에 측정하였고, 엔비전(Envision) 플레이트 판독기 (퍼킨엘머(PerkinElmer), 매사추세츠주 보스톤)에 의해 분석하였다.

화합물의 길항제 효과는 100 x [1-(평균 샘플 - 평균 백그라운드)/(평균 전체 - 평균 백그라운드)]로 표현되었으며, 여기서 샘플은 시험 화합물의 존재 하에 루시페라제 활성이고, 백그라운드는 소분자 억제제 대조군의 존재 하에 루시페라제 활성과 동일하고, 전체는 DMSO 웰에서 유도된 신호이다. 데이터는 4 파라미터 로지스틱 적합 방정식을 이용하여 플로팅하였고, IC₅₀ 값은 루시페라제 활성의 50%를 억제하는 화합물의 농도로서 정의되었다.

하기 표 13은 상기 Notch-CBF1 전사활성화 검정에서 측정된 본 발명 실시예 1 내지 21 및 비교 화합물 22 내지 25에 대한 Notch 1 및 Notch 3 IC₅₀ 값을 열거하였다. 표 13의 결과는 2 자릿수로 반올림하였다. 실시예 1 내지 21에 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은 6.6 nM 이하의 Notch 1 값 및 13 nM 이하의 Notch 3 IC₅₀ 값을 나타내었다.

<표 13>

고처리량 (HT) 대사 안정성 패널

비경구로 투여된 화합물은 혈류에 도입되어, 간을 통한 하나 이상의 통과를 경험하였다. 간에 의해 쉽게 대사되지 않는 화합물이 치료 유효 시간 기간 동안 치료 유효 혈장 수준으로 투여될 수 있다.

경구로 투여된 화합물은 전형적으로 장벽을 통해 혈류 내로 흡수되고, 간을 통한 제1 통과를 경험하였다. 간을 통한 이 제1 통과에서 쉽게 대사되지 않는 화합물이 신체의 다른 영역에 치료 유효량으로 분배될 수 있다.

대사 안정성 검정은 10분 인큐베이션 후에 인간, 래트, 마우스, 개 및/또는 원숭이 마이크로솜을 이용하여 시험관내 CYP-매개 대사 안정성을 평가하였다. 각각의 화합물은 2벌로 시험하였다.

이들 검정의 결과는 10분 인큐베이션 후 반응 혼합물 중에 잔류한 모 화합물의 분획으로서 표현하였다 (잔류%). 일반적으로, 이들 결과는 단지 시험 화합물의 CYP-매개 또는 NADPH-의존성 대사의 범위를 평가하는데만 이용되었다. 화합물이 상당히 대사된 경우에 (<40-50% 잔류), 이는 CYP-매개 대사로 인한 생체내 화합물의 높은 클리어런스를 나타내었다. 그러나, 화합물이 이들 시험관내 검정에서 중간 (50-80%) 또는 낮은 (>85%) 대사를 발휘하는 경우에, 높은 클리어런스는 생체내 다른 대사 및 제거 경로를 통해 여전히 가능하였다.

이들 검정의 잔류% 결과는 생체내 화합물 클리어런스의 예측이며, CYP-매개 대사가 우세한 제거 경로임을 추정하였다. 다양한 마이크로솜 종에서, 결과의 범위는 대략 표 14에 나타낸 바와 같았다.

<표 14>

대사 안정성 - 결과 해석 가이드라인

하기 표 15는 인간 및 마우스 대사 안정성 검정에서 측정된 본 발명의 실시예 1 내지 21 및 비교 화합물 22 내지 25에 대한 CYP-매개 대사 안정성을 열거하였다. 표 15에서의 결과는 2 자릿수로 반올림하였다. 간 마이크로솜 검정에서, 잔류 0%의 값은 시험 화합물의 완전 CYP-매개 대사를 나타내고, 100%의 값은 시험 화합물의 CYP-매개 대사가 검출가능하지 않음을 나타내었다. 실시예 1 내지 21에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은 인간 간 마이크로솜 (HLM)에 대해 잔류 80% 이상 또는 마우스 간 마이크로솜 (MsLM)에 대해 잔류 72% 이상의 대사 안정성 값을 가졌다. 대조적으로, 비교 화합물 22 내지 25는 인간 간 마이크로솜에 대해 잔류 39% 이하 또는 마우스 간 마이크로솜에 대해 잔류 15% 이하의 대사 안정성 값을 가졌다.

<표 15>

본 발명의 화합물 (실시예 1 내지 21)을 미국 특허 번호 7,456,172에 개시된 비교 화합물 22 내지 25와 비교하였고, 이들이 특히 유리하다는 것을 발견하였다. 본 발명의 화합물은 Notch 1 및 Notch 3의 억제제로서의 활성 조합의 놀라운 이점 및 간 마이크로솜에 대한 우수한 대사 안정성을 가졌다. 표 13 및 15에 나타낸 바와 같이, 보고된 시험에서, 본 발명의 실시예 1 내지 21은 6.6 nM 이하의 Notch 1 IC₅₀ 값 및 13 nM 이하의 Notch 3 IC₅₀ 값; 및 인간 간 마이크로솜 (HLM)에 대해 잔류 80% 이상 및 마우스 간 마이크로솜 (MsLM)에 대해 잔류 72% 이상의 대사 안정성 값을 가졌다. 대조적으로, 유사한 시험에서, 비교 화합물 22 내지 25는 5.1 nM 이상의 Notch 1 IC₅₀ 값 및 13 nM 이상의 Notch 3 IC₅₀ 값; 및 인간 간 마이크로솜에 대해 잔류 39% 이하 및 마우스 간 마이크로솜에 대해 잔류 15% 이하의 대사 안정성 값을 가졌다.

방법 및 물질

간 마이크로솜과의 인큐베이션

시험 화합물을 100% DMSO 중 3.5 mM 원액으로서 입수하였다. 시험 화합물을 희석하여 1.4% DMSO를 함유하는 50 μM 아세토니트릴 (ACN) 용액을 생성하고, 이어서 이것을 마이크로솜과의 인큐베이션을 위한 100x 원액으로서 사용하였다. 각각의 화합물을 대사 안정성-인간, 래트 및 마우스 검정 세트에서 3가지 종 각각에서 개별적으로 또는 대사 안정성-개 또는 대사 안정성-원숭이 세트에서 개별적인 종으로서 2벌로 시험하였다. 화합물, NADPH 및 간 마이크로솜 용액을 인큐베이션을 위해 하기 3단계로 합하였다:

1. 100 mM NaP_i, pH 7.4, 5 mM MgCl₂ 완충제 중 단백질 농도 1.1 mg/ml의 간 마이크로솜 현탁액 152 μl를 37℃에서 미리 가온하였다.

2. 50 μM 화합물 (98.6% ACN, 1.4% DMSO) 1.7 μl를 동일한 튜브에 첨가하고, 37℃에서 5분 동안 미리 인큐베이션하였다.

3. 100 mM NaP_i, pH 7.4 중 미리 가온된 10 mM NADPH 용액 17 μl를 첨가함으로써 반응을 개시하였다.

반응 성분을 잘 혼합하고, 반응 혼합물 75 μl를 켄칭/정지 용액 150 μl 내로 즉시 옮겼다 (제로-시점, T₀). 반응물을 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하고, 이어서 추가 75 μl 분취액을 150 μl 켄칭 용액 내로 옮겼다. 100 μM DMN (주사 품질 대조군을 위한 UV 표준)을 함유하는 아세토니트릴을 켄칭 용액으로서 사용하여 대사 반응을 종결시켰다.

켄칭된 혼합물을 알레그라(ALLEGRA)® X-12 원심분리, SX4750 로터 (베크만 쿨터 인크.(Beckman Coulter Inc.), 캘리포니아주 풀러턴)에서 1500 rpm (~500 X g)으로 15분 동안 원심분리하여 변성 마이크로솜을 펠릿화시켰다. 이어서, 모 화합물 및 그의 대사물의 혼합물을 함유하는 90 μl 부피의 상청액 추출물을 UV-LC/MS-MS 분석을 위한 별도의 96-웰 플레이트로 옮겨 혼합물 중에 잔류한 모 화합물의%를 결정하였다.

<표 16>

대사 안정성 검정 - 반응 성분

샘플 분석 - 기기

HPLC: 펌프 - 써모 서베이어(Thermo Surveyor); 오토샘플러 - CTC/LEAP HTS; UV 검출기 - 써모 서베이어 PDA 플러스; 칼럼 - 배리안(Varian) C18, 3 μm, 2 x 20 mm, 0.5 μm 인-라인 필터; 구조 완전성 사전-분석을 위한 이동상: (A) 98% 물, 2% 아세토니트릴, 10 mM 아세트산암모늄 함유; (B) 10% 물, 90% 아세토니트릴, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 반응 샘플 분석을 위한 이동상: (A) 98% 물, 2% 아세토니트릴, 0.1% 포름산 함유; (B) 2% 물, 98% 아세토니트릴, 0.1% 포름산 함유; (C) 물 중 0.1% 수산화암모늄; (D) 아세토니트릴 중 0.1% 수산화암모늄.

질량 분광계: 써모 TSQ 양자 울트라 삼중-사중극자 질량 분광계;

샘플 분석: 구조적 완전성 사전-분석.

대사 안정성 구조적 완전성 사전-분석을 이용하여 검정되는 화합물의 순도를 평가하였다. 화합물을 3.5 mM DMSO 용액 57 μl로서 96-웰 플레이트에 수용하였다. 3.5 mM 화합물 DMSO 원액을 동등한 부피의 아세토니트릴, 이소프로판올 및 밀리큐(MilliQ)-H₂O를 함유한 용액으로 18배 희석하였다. 생성된 용액 (200 μM)을 워터스 엑스브리지(Waters XBridge) C18, 5 μm, 2 x 50 mm 칼럼을 워터스 센트리(Waters Sentry) 2.1 mm 가드 칼럼과 함께 사용하여, 및 5 μl 주사 및 유량 1 ml/분의 하기 표에 기재된 LC 조건을 사용하여, 써모 LCQ 데카(Deca) XP 플러스 이온 포획 질량 분광계 상에서 LC-UV/MS에 의해 구조적 완전성에 대해 분석하였다. 획득된 데이터는 220 nm에서의 UV 흡수에 의해 순도를 반영하였다. 50% 초과의 순도를 갖는 그러한 화합물에 대한 결과만을 보고하였다.

<표 17>

대사 안정성 - 구조적 완전성 구배

샘플 분석 - 인큐베이션된 샘플

MS/MS 조건 최적화를 자동화 주입에 의해 가열된-전기분무 (H-ESI) 공급원이 장착된 써모 TSQ 양자 삼중-사중극자 질량 분광계 상에서 수행하여 SRM 전이 및 그의 상응하는 충돌 에너지 값을 수득하였다. 1:1 메탄올:물 중 20 μM 농도의 화합물 용액을 유량 90 μL/분으로 주입하고, 이어서 유량 50 μL/분으로 이동상과 합한 후에, 공급원에 도입하였다. 모든 화합물을 먼저 이동상 A 및 B (50% A 및 50% B)를 사용하여, 및 필요한 경우에, 이동상 C 및 D (또한 50:50 조성물)를 사용하여 최적화하였다. 극성, SRM 전이 및 충돌 에너지를 비롯한 최적화된 파라미터를 마이크로소프트 액세스 데이터베이스(Microsoft Access database)에 저장하였다.

자동화된 주입으로부터 수득된 질량 분광측정 조건을 이용하여 인큐베이션 샘플을 대사 안정성 검정으로부터 분석하였다. 주입 부피는 5 μl였고, 유량은 0.8 ml/분이었다. 이용된 구배를 하기 표에 나타내었다. 모든 샘플을 먼저 이동상 A 및 B를 사용하는 구배로 주입하였다. 필요한 경우에 (예를 들어, 크로마토그래피적 이유), 샘플을 동일한 구배로 재주사하되, 이동상 C 및 D를 사용하였다. 모든 LC-MS/MS 분석 파라미터는 미가공 데이터 파일에서 전자적으로 포획하였다.

<표 18>

대사 안정성 - 샘플 분석 구배

데이터 분석

피크 적분은 엑스칼리버(XCALIBUR)® 소프트웨어로 수행하였다. 잔류% 계산은 각각의 화합물에 대한 T₁₀ _분 샘플로부터의 LC-MS/MS 피크 면적 대 T₀ _분 샘플로부터의 것을 비교함으로써 수행하였다.

품질 대조군

3가지 화합물 세트를 각각의 검정 플레이트에서 시험 화합물과 함께 시험하였다. 이들 대조군 화합물에 대한 결과가 단지 하기 나타낸 예상 범위 내에 있는 경우에만, 데이터를 수용하고 업로드하였다.

<표 19>

대사 안정성 검정 - 마이크로솜 종에 따른 대조군 화합물 값

대사 안정성 반감기 패널

인간 또는 동물 간 마이크로솜에서 시험관내 결정된 대사율 및 반감기를 이용하여 화합물의 고유 클리어런스 (CL_int) 및 간 클리어런스 (CLh,b)를 결정하였다. 이들 파라미터는 생체내 약물 노출의 수준을 규정하는 생체내 인간 클리어런스를 예측하는데 유용하였다 (문헌 [Obach et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 283:46-58 (1997); Obach, Drug Metab. Dispos., 27:1350-1359 (1999)]).

대사 안정성 반감기 검정 패널은 인간, 래트, 마우스, 개 및 원숭이 마이크로솜에서 시험관내 CYP-매개 (NADPH-의존성) 대사의 시간-과정 및 대사율을 평가하였다. 시간 과정은 45분 인큐베이션을 포괄하고, 0, 5, 10, 15, 30 및 45분 시점을 포함하며, 이들 각각에서 혼합물 중 시험 화합물의 잔류량을 측정하였다.

결과 해석 가이드라인

이들 검정의 결과는 반감기 (T_1/2, 분)로서 표현하였으며, 각각의 시점에서 반응 혼합물 중에 잔류한 모 화합물의 분획 (잔류%)을 또한 보고하였다. 일반적으로, 이들 결과는 시험 화합물의 CYP-매개 또는 NADPH-의존성 대사의 범위를 평가하는데만 이용되어야 한다. 화합물이 상당히 대사되는 경우에 (T_1/2 < 8-14분), 이는 CYP-매개 대사로 인한 생체내 높은 클리어런스를 나타내었다. 그러나, 화합물이 이들 시험관내 검정에서 중간 (50-80%) 또는 낮은 (>85%) 대사를 발휘하는 경우에, 높은 클리어런스는 생체내 다른 대사 및 제거 경로를 통해 여전히 가능하였다.

이들 검정의 결과는 생체내 화합물 클리어런스의 예측이며, CYP-매개 대사가 우세한 제거 경로임을 추정하였다. 다양한 마이크로솜 종에서, 결과의 범위는 대략 하기 표에 나타낸 바와 같았다:

<표 20>

대사 안정성 반감기 - 결과 해석 가이드라인

방법 및 물질

간 마이크로솜은 BD-바이오사이언시스(BD-Biosciences) (매사추세츠주 워번)로부터 및 NADPH는 어플리켐 인크(AppliChem Inc)으로부터 구입하였고; 다른 모든 시약은 시그마(Sigma)로부터 입수하였다.

간 마이크로솜과의 인큐베이션

시험 화합물을 100% DMSO 중 3.5 mM 원액으로서 입수하였다. 시험 화합물을 희석하여 1.4% DMSO를 함유하는 50 μM 아세토니트릴 (ACN) 용액을 생성하고, 이어서 이것을 마이크로솜과의 인큐베이션을 위한 100배 원액으로서 사용하였다. 각각의 화합물을 인간, 래트, 마우스, 개 또는 원숭이 간 마이크로솜에서 시험하였다. 화합물, NADPH 및 간 마이크로솜 용액을 인큐베이션하기 위해 하기 3단계로 합하였다:

1. 100 mM NaP_i, pH 7.4, 5 mM MgCl₂ 완충제 중 단백질 농도 1.1 mg/ml의 간 마이크로솜 현탁액 450 μl를 37℃에서 미리 가온하였다.

2. 50 μM 화합물 (98.6% ACN, 1.4% DMSO) 5 μl를 동일한 튜브에 첨가하고, 37℃에서 5분 동안 미리 인큐베이션하였다.

3. 100 mM NaP_i, pH 7.4 중 미리 가온된 10 mM NADPH 용액 50 μl를 첨가함으로써 반응을 개시하였다.

반응 성분을 잘 혼합하고, 65 μl를 켄칭/정지 용액 130 μl 내로 즉시 옮겼다 (제로-시점, T₀). 반응물을 37℃에서 5, 10, 15, 30 및 45분 동안 인큐베이션하고, 각각의 시점에서 65 μl 분취액을 130 μl 켄칭 용액 내로 옮겼다. 내부 표준 (100 ng/ml)을 함유하는 아세토니트릴을 켄칭 용액으로서 사용하여 대사 반응을 종결시켰다.

켄칭된 혼합물을 알레그라® X-12 원심분리, SX4750 로터 (베크만 쿨터 인크., 캘리포니아주 풀러턴)에서 1500 rpm (~500X g)으로 15분 동안 원심분리하여 변성 마이크로솜을 펠릿화시켰다. 이어서, 모 화합물 및 그의 대사물의 혼합물을 함유하는 90 μl 부피의 상청액 추출물을 LC/MS-MS 분석을 위한 별도의 96-웰 플레이트로 옮겨 혼합물 중에 잔류한 모 화합물의%를 결정하였다.

<표 21>

대사 안정성 반감기 검정 - 반응 성분

샘플 분석 -기기

HPLC: 펌프 - 시마즈(Shimadzu) LC-20 AD 시리즈 2원 펌프; 오토샘플러 - CTC/LEAP HTS.

본 발명의 예시된 화합물은 인간 (HLM) 및 마우스 (MsLM) 대사 안정성 검정 둘 다에서 CYP-매개 대사로 인한 낮은 클리어런스의 놀라운 이점을 나타내었다. 실시예 1-2, 5-7, 9-14, 16, 18, 21-23 및 26에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은 인간 간 마이크로솜 검정에 대해 60% 내지 100% 및 마우스 간 마이크로솜 검정에 대해 25% 내지 100% 범위의 잔류% 값을 가졌다. 대조적으로, 비교 화합물 60-61은 인간 및 마우스 간 마이크로솜 검정 둘 다에서 7.0% 이하의 잔류% 값을 가졌다. 비교 화합물 61-62는 인간 및 마우스 대사 안정성 검정 둘 다에서 높은 클리어런스를 나타내었으며, 이는 화합물이 간에서 CYP-매개 대사에 의해 제거되었음을 나타내었다.

마우스에서 인간 종양 이종이식 모델

모든 설치류는 하를란 스프라그 돌리 캄파니(Harlan Sprague Dawley Co.) (인디애나폴리스, 인디애나)로부터 입수하였고, 규정된 병원체-무함유 콜로니에서 암모니아-무함유 환경에서 유지하였다. 모든 마우스를 종양 전파 및 약물 효능 시험을 위해 그의 사용 전에 대략 1주 격리시켰다. 마우스에게 사료 및 물을 자유롭게 공급하였다. 브리스톨-마이어스 스큅 파마슈티칼 리서치 인스티튜트(Bristol-Myers Squibb Pharmaceutical Research Institute)의 동물 관리 프로그램은 미국 실험 동물 관리 인증 협회 (AAALAC)에 의해 완전히 인정받았다. 모든 실험은 브리스톨-마이어스 스큅 (BMS) 동물 시험 방법 및 가이드라인에 따라 수행하였다.

종양 이종이식편을 성장시키고 면역손상 balb/c nu/nu 누드 또는 NOD-SCID 마우스 (하를란 스프라그 돌리)에서 피하로 (SC) 유지하였다. 종양은 공여자 마우스로부터 수득된 종양 단편을 사용하여 적절한 마우스 균주 (표 22)에서 피하 이식으로서 전파되었다.

<표 22>

마우스에서 다양한 인간 종양 이종이식편의 전파를 위한 조직학적 유형 및 숙주 마우스 균주/성별 요건

전임상 화학요법 시험

의미있는 반응을 검출하기 위해 필요한 동물의 소요 수를 실험을 시작할 때 모으고, 각각은 13-게이지 투관침으로 종양 단편 (~ 20 mg)의 피하 이식편을 제공받았다. 종양을 예정된 크기 윈도우로 성장되도록 하였고 (범위 외의 종양은 제외하였음), 동물을 다양한 실험군 및 대조군으로 균등하게 분배하였다. 전형적으로 실험군 및 대조군 당 8마리 마우스가 존재하였으며, 단, SAL-IGF (이것은 표 22에 포함되지 않음) 종양 모델에서 수행되는 실험은 전형적으로 실험군 및 대조군 당 5마리 마우스가 존재하였다. 각 동물의 치료는 개체 체중을 기준으로 하였다. 치료된 동물을 독성/사망률과 관련하여 치료 동안 매일 체크하였다. 각 군의 동물은 실험 개시 전에 체중을 측정하고 (Wt₁), 이어서 마지막 치료 투여 후 다시 체중을 측정하였다 (Wt₂). 체중에서의 차이 (Wt₂-Wt₁)는 치료-관련 독성의 척도를 제공하였다.

종양이 종양 유형에 따라 0.5 gm 또는 1 gm의 예정된 "표적" 크기에 도달할 때까지, 종양 반응은 1주에 2회 캘리퍼를 사용한 종양의 측정에 의해 결정되었다. 종양 중량 (mg)은 하기 식으로부터 평가하였다:

종양 중량 = (길이 x 너비²) ÷ 2

종양 반응 기준은 종양 성장 억제 (%TGI)에 대하여 표현하였다. 종양 성장 지연은 예정된 표적 크기에 도달할 때까지 치료된 종양 (T)에 대해 요구된 시간 (일)을 대조군 (C)의 그것과 비교한 차이로서 정의된다. 이 목적을 위해, 군의 종양 중량은 중앙 종양 중량 (MTW)으로 표현하였다.

종양 성장 억제는 다음과 같이 계산된다:

상기 식에서,

C_t = 치료 종료에서의 중앙 대조군 종양 크기

C₀ = 치료 개시에서의 중앙 대조군 종양 크기

T_t = 치료 종료에서의 치료군의 중앙 종양 크기

T₀ = 치료 개시에서의 치료군의 중앙 종양 크기

활성은 적어도 1 종양 부피 배가 시간과 동등한 기간 동안 50% 이상의 지속적 종양 성장 억제 (즉, TGI ≥ 50%)의 달성으로서 정의되고, 약물 치료는 적어도 2 종양 부피 배가 시간과 동등한 기간 동안 이루어져야 한다.

종양 반응은 또한 종양 성장 지연과 관련하여 표현되었고 (TGD 값), 예정된 표적 크기에 도달할 때까지 치료된 종양 (T)에 대해 요구된 시간 (일)을 대조군 (C)의 그것과 비교한 차이로서 정의된다.

가능한 경우마다, 과도한 독성 (즉, 1마리 초과의 사망)이 발생하는 바로 아래의 용량 수준으로서 정의되는 최대 허용 용량 (MTD)까지의 용량 수준의 범위에서 항종양 활성을 결정하였다. 사망이 발생한 경우에, 사망일을 기록하였다. 종양이 표적 크기에 도달하기 전에 사망한 치료된 마우스는 약물 독성으로 인해 사망한 것으로 여겨졌다. 표적 크기 미만의 종양을 보유한 대조군 마우스는 사망하지 않았다. 약물 독성에 의해 유발된 1마리 초과의 사망을 갖는 치료군은 과도한 독성 치료를 갖는 것으로 여겨지고, 이들 데이터는 화합물의 항종양 효능의 평가에 포함되지 않았다.

치료 허용성에 영향을 미치는 잠재적 약물 독성 상호작용은 조합 화학요법 시험에서 중요한 고려사항이다. 조합 요법 결과의 해석은 단일 작용제 대 필적하는 허용 용량의 조합물에 대한 최상의 가능한 반응의 항종양 활성의 비교를 기초로 해야 한다. 따라서, 치료 상승작용은 단독요법의 임의의 허용 용량에서 달성되는 최적의 효과를 능가하는 조합 작용제의 허용 요법으로 달성되는 치료 효과로서 정의되었다. 데이터의 통계적인 평가는 게한(Gehan) 일반화 윌콕슨(Wilcoxon) 검정을 이용하여 수행하였다. 통계적 유의성은 P < 0.05에서 밝혀졌다.

약물 투여

시험관내 연구에서, 모든 작용제는 100% DMSO 중에 용해시키고, 배지/10% 태아 소 혈청 중에 연속 희석시켰다. 설치류에게 Notch 억제제를 투여하기 위해, 2가지 상이한 부형제를 사용하였다: [1] 94% 라브라필/5% ETOH/ 1% TW80 또는 [2] ETOH/TPGS/PEG300 (10:10:80). Notch 억제제는 전형적으로 QDx15의 스케줄, 10일-진행-2일-중단으로 경구로 투여되지만, 다른 스케줄이 또한 평가되고 효능있는 것으로 나타났다. 예를 들어, QDx12, 4일-진행-3일-중단으로 이루어진 투여 요법은 QDx15, 10일-진행-2일-중단과 동등하게 효능있는 것으로 나타났다.

생체내 항종양 활성

정맥내 경로 (IV)을 통해 투여된 실시예 1의 항종양 활성은 마우스에서 이식된 인간 종양 이종이식편에서 평가하였다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 항종양 활성을 나타내었다.

하기 표 23은 마우스에서 인간 종양 이종이식 모델에서 측정된 본 발명의 실시예의 항종양 활성을 열거하였다. 실시예 1 및 2에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은 경구 투여 (PO)로 항종양 활성을 나타내었다.

<표 23>

스케줄: QDx15, 10일-진행-2일-중단; 경구 투여

QD - 1일 1회

LCK - Log 세포 사멸

실시예 1은 마우스에서 성장시킨 인간 암 이종이식편의 다양한 집합체에 대한 넓은-스펙트럼 항신생물 활성을 입증하였다. 유의한 항종양 활성은 인간 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 유방 암종, 췌장 암종, 난소 암종, 교모세포종, 비소세포 폐 암종, 결장 암종, 골원성 육종 및 신경모세포종을 비롯한 16가지 인간 암 이종이식편에서 입증되었다 (표 24).

<표 24>

^a모든 치료는 PO, QDx15, 10일-진행-2일-중단, 5-10 mg/kg/adm 범위의 투여량이었다.

조합 화학요법

일련의 연구는 다사티닙, 파클리탁셀, 타목시펜, 덱사메타손 및 카르보플라틴을 비롯한 수많은 항암제와의 실시예 1의 조합가능성을 평가하기 위해 수행하였다.

I. 실시예 1 및 다사티닙

인간 T-세포 림프모구성 백혈병은 실시예 1과 다사티닙의 조합 효능을 평가하는데 사용되었다. 단독 다사티닙 치료는 1.7 LCK (10 mg/kg/adm, QD x 49, PO)의 항종양 효과를 생성하였다. 실시예 1 화합물은 3.75-7.5 mg/kg의 용량 범위에서 0.1-0.5 LCK의 단지 보통 활성을 생성하였다. 그러나, 2종의 작용제의 조합물은 단독의 다사티닙 단일 작용제 (P<0.05)보다 상당히 우수한 >>2.6 LCK의 항종양 효능을 생성하면서 상승작용적 항종양 활성을 생성하였다. 추가로, 조합 요법은 마우스 중 100%에서 완전 반응 (CR)을 생성한 반면, 단일 작용제는 CR을 전혀 생성하지 않았다 (도 7-8 및 표 25).

<표 25>

ALL-SIL T-세포 림프모구성 백혈병에서 실시예 1 및 다사티닙을 사용한 조합 화학요법에 의한 항종양 효능

^a요법 = PO, QD x3, 매주 x7

^b요법 = PO, QD x 49

^c표적 종양 크기 = 1000 mg

II. 실시예 1 및 파클리탁셀

파클리탁셀과 조합된 실시예 1의 항종양 효능은 MDA-MB-468 유방 암종에서 평가하였다. 단일 작용제로서의 실시예 1은 3.75-7.5 mg/kg/adm의 용량 범위에서 0.5-1.4 LCK를 생성하였다. 12 mg/kg/adm의 용량으로 매주 투여된 파클리탁셀은 0.5 LCK를 생성하였다 (도 9-10 및 표 26). 3.75-7.5 mg/kg/adm 용량-범위의 실시예 1 및 파클리탁셀의 조합물은 3.4-4.1 LCK의 항종양 효과를 생성하였으며, 이는 단일 작용제 실시예 1 화합물 단독보다 상당히 우수한 것이다 (각각 P=0.0006 및 0.0002).

<표 26>

MDA-MB-468 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 파클리탁셀을 사용한 조합 화학요법에 의한 항종양 효능

^a요법 = PO, QD x3, 매주 x7

^b요법 = IV, Q7D x 6

^c표적 종양 크기 = 500 mg

III. 실시예 1 및 타목시펜

타목시펜과 조합된 실시예 1의 항종양 효능은 암컷 nu/nu 마우스에서 성장시킨 ER 수용체 양성 인간 유방 암종 이종이식편 MCF7에서 평가하였다. 단일 작용제로서의 실시예 1은 CR 또는 PR 없이 3.75-7.5 mg/kg/adm의 용량 범위에서 43-58%의 종양 성장 억제 (TGI)를 생성하였다. 20 mg/kg/adm의 MTD 용량, IP, Q2 DX12로 투여되는 타목시펜은 CR 또는 PR 없이 78%의% TGI를 생성하였다. 실시예 1 화합물 및 타목시펜의 조합물은 7.5 및 3.75 mg/kg/adm의 실시예 1 용량에서 각각 101 및 99의% TGI를 생성하였으며, 이는 명백히 상승작용적이었다. 더욱이, 조합물을 투여받은 마우스 중 대략 50%가 PR 또는 CR로서 종양 수축을 경험하였다 (도 11-12 및 표 27).

<표 27>

MCR7 인간 유방 암종에서 실시예 1 및 타목시펜을 사용한 조합 화학요법에 의한 항종양 효능

^a요법 = PO, QD x3, 매주 x3

^b요법 = IP, Q2D x 10

^c표적 종양 크기 = 500 mg

IV. 실시예 1 및 덱사메타손

글루코코르티코이드, 즉 덱사메타손과 조합된 실시예 1의 항종양 효능은 NOD-SCID 마우스에서 성장시킨 인간 T-ALL 백혈병 이종이식편 HPB-ALL에서 평가하였다. 단일 작용제로서의 실시예 1은 7.5 mpk에서 1.1 LCK를 생성하는 이 모델에서 활성이었다. 덱사메타손은 7.5 mpk의 MTD에서 0.7 LCK를 생성하는 단일 작용제로서 보통 활성이었다. 실시예 1 및 덱사메타손의 조합물은 1.9 LCK를 생성하였고, 이는 단독의 개별 단일 작용제보다 상당히 우수하였다 (도 13 및 표 28).

<표 28>

HPB-ALL 인간 급성 림프모구성 백혈병에서 실시예 1 및 덱사메타손을 사용한 조합 화학요법에 의한 항종양 효능

^a요법 = PO, QD x3, 매주 x3

^b요법 = IP, QD x 14

^c표적 종양 크기 = 3000 mg

V. 실시예 1 및 카르보플라틴

카르보플라틴과 조합된 실시예 1의 항종양 효능은 암컷 nu/nu 마우스에서 성장시킨 인간 난소 기형암종 이종이식편 PA-1에서 평가하였다. 단일 작용제로서의 실시예 1은 1 mg/kg/adm의 용량에서 0.2 LCK를 생성하였다. 90 mg/kg/adm의 용량으로 매주 투여된 카르보플라틴은 2.1 LCK를 생성하였다 (도 14 및 표 29). 1 mg/kg/adm 용량의 실시예 1 및 카르보플라틴의 조합물은 >3.1 LCK의 항종양 효과를 생성하였으며, 이는 단독의 단일 작용제 실시예 1 화합물 (P=0.004)보다 상당히 우수하였다.

<표 29>

PA-1 인간 난소 기형암종에서 실시예 1 및 카르보플라틴을 사용한 조합 화학요법에 의한 항종양 효능

^a요법 = PO, QD x21 (1 mg/kg)

^b요법 = IV, Q7D x 3

^c표적 종양 크기 = 500 mg

단결정 X선 회절측정법

단일 결정 데이터를 Cu Kα 방사선 (λ= 1.5418 Å)을 사용하는 브루커(Bruker)-AXS APEX2 CCD 시스템 상에서 수집하였다. 측정된 강도 데이터의 색인 및 가공은 APEX2 소프트웨어 프로그램 스위트로 수행하였다. 나타난 경우에, 결정은 데이터 수집 동안 옥스포드 크리오 시스템(Oxford cryo system)의 저온 스트림에서 냉각시켰다. 구조를 직접 방법에 의해 해결하고, SHELXTL을 이용하여 관찰된 반사를 기준으로 하여 정밀화하였다. 유래된 원자 파라미터 (좌표 및 온도 인자)를 전체 행렬 최소-제곱법을 통해 정밀화하였다. 정밀화에서 최소화된 함수는 Σ_w(|F_o| - |F_c|)²이다. R은 Σ ||F_o| - |F_c||/Σ |F_o|로서 정의되는 한편, R_w = [Σ_w(|F_o| - |F_c|)²/Σ_w |F_o|²]^1/2이고, 여기서 w는 관찰된 강도에서의 오차를 기준으로 하는 적절한 가중 함수이다. 전형적으로, 모든 비-H 원자를 이방성으로 정밀화하고, N 및 O 원자에 부착된 것 이외의 모든 H-원자를 기하학적 방법으로 계산하고, 라이딩 모델을 이용하여 정밀화하였다.

X선 분말 회절측정법

X선 분말 회절 (PXRD) 데이터는 브루커 GADDS (제너럴 에리어 디텍터 디프랙션 시스템(General Area Detector Diffraction System)) 매뉴얼 카이 플랫폼 측각기를 이용하여 수득하였다. 분말 샘플을 직경 0.7mm의 박벽 유리 모세관에 넣고; 모세관을 데이터 수집 동안 회전시켰다. 샘플에서 검출기까지의 거리는 17 cm에서 유지하였다. 데이터는 2.5 < 2θ < 35°의 범위에서 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5418 Å)으로 수집하였고, 여기서 샘플 노출 시간은 600초였다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물.
<화학식 I>

상기 식에서,
R₁은 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃이고;
R₂는 -CH₂CF₃, -CH₂CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CH₂CF₃이고;
R₃은 H 또는 -CH₃이고;
각각의 R_a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OCH₃ 또는 -NHCH₂CH₂OCH₃이고;
z는 0, 1 또는 2이다.
제1항에 있어서,
R₁이 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃이고;
R₂가 -CH₂CF₃ 또는 -CH₂CH₂CF₃인
화합물.
제1항에 있어서,
z가 0 또는 1인
화합물.
제1항에 있어서,
R₁이 -CH₂CH₂CF₃이고;
R₂가 -CH₂CH₂CF₃인
화합물.
제4항에 있어서,
z가 0 또는 1인
화합물.
제1항에 있어서,
z가 1 또는 2인
화합물.
제1항에 있어서, (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (1); (2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (2); (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (3); (2R,3S)-N-((3S)-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (4); (2R,3S)-N-((3S)-1-(²H₃)메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (5); (2R,3S)-N-((3S)-7-클로로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (6); (2R,3S)-N-((3S)-8-메톡시-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (7); (2R,3S)-N-((3S)-8-플루오로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (8); (2R,3S)-N-((3S)-7-메톡시-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (9); (2R,3S)-N-((3S)-7-플루오로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (10); (2R,3S)-N-((3S)-8-클로로-1-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (12); (2R,3S)-N-((3S)-8-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (13); (2R,3S)-N-((3S)-7-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (14); (2R,3S)-N-((3S)-8-시아노-9-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (15); (2R,3S)-N-((3S)-8,9-디클로로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-플루오로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (17); (2R,3S)-N-((3S)-9-클로로-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (18); (2R,3S)-N-((3S)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (19); (2R,3S)-N1-((3S)-8-메톡시-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-3-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2-(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (20); 및 (2R,3S)-N-((3S)-9-((2-메톡시에틸)아미노)-2-옥소-5-페닐-2,3-디히드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일)-2,3-비스(3,3,3-트리플루오로프로필)숙신아미드 (21)로부터 선택된 화합물.
제1항에 있어서,

로부터 선택된 화합물.
제8항에 있어서,

인 화합물.
제9항에 있어서,
결정질 형태 N-1이며,
a) 하기에 나타낸 바와 같은 모의 분말 X선 회절(PXRD) 패턴 또는 하기에 나타낸 바와 같은 관찰 PXRD 패턴 또는 둘 다;

b) 5.7±0.2, 7.5±0.2, 10.3±0.2, 10.7±0.2, 15.2±0.2, 16.8±0.2, 20.2±0.2 및 20.7±0.2로부터 선택된 4개 이상 또는 5개 이상의 2θ 값 (CuKα λ=1.5418Å)을 포함하는 분말 X선 회절(PXRD) 패턴으로서, 여기서 형태 N-1의 PXRD 패턴이 20℃의 온도에서 측정된 것인 분말 X선 회절 패턴;
c) 하기와 동등한 단위 셀 파라미터:
셀 치수:

공간군: P2₁
비대칭 단위당 상기 화합물의 분자: 4
(여기서, 형태 N-1의 단위 셀 파라미터는 -10℃의 온도에서 측정됨); 및
d) 25℃의 온도에서 하기에 열거된 바와 같은 분율 원자 좌표

(^*U(eq)는 직교화 U^ij 텐서의 트레이스의 1/3으로 규정됨)
중 하나 이상을 특징으로 하는 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물.
순차적 또는 동시 사용을 위한, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물; 및 다사티닙, 파클리탁셀, 타목시펜, 덱사메타손 및 카르보플라틴으로부터 선택된 하나 이상의 추가 작용제를 포함하는, 암을 치료하기 위한 조합물.
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