CN103435562B - 6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物及其用途。本发明通过对现作为治疗焦虑和心律失常等疾病的药物—苯并二氮卓类化合物进行适当地化学修饰（即在苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物的6位引入适当的取代基团），得到一类结构新颖的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物。经研究发现该类化合物对癌细胞具有很好的抑制活性，可以成为一种潜在治疗肿瘤的药物。

Description

6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物及其用途

技术领域

本发明涉及一种取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物及其用途，具体地说，涉及一种6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物及其用途。

体外活性实验表明，本发明提供的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物能有效地抑制人结肠癌细胞（HCT116）、人乳腺癌细胞（MCF-7）、人肺癌细胞（A549）和人子宫颈癌细胞（Helacells）等肿瘤细胞的生长，因此本发明涉及到的化合物可以成为潜在的抗肿瘤治疗药物。

背景技术

肿瘤是当今世界直接危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病，它是指机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的局部肿块,其中恶性肿瘤又称癌症。每年全世界有百万人死于癌症，占死亡人数的12%；据08年卫生部统计报告，我国近年癌症死亡人数年均150万，占死亡人数的25%，且有逐年增加的趋势。继心脑血管疾病之后，癌症已成为威胁我国人口健康的第二大疾病。

苯并二氮卓类化合物在医药上也有应用，比如作为抗焦虑药物，抗心律失常药物，抗利尿激素拮抗剂，HIV逆转录酶抑制剂和缩胆囊素拮抗剂。我们通过在苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物的6位引入取代基团之后，经研究发现该类化合物对癌细胞具有很好的抑制活性，因此在抗癌的方面具有应用价值，可以成为一种潜在的肿瘤治疗药物。

发明内容

本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现并合成了一系列结构新颖、对人结肠癌细胞（HCT116），人乳腺癌细胞（MCF-7），人肺癌细胞（A549）和人子宫颈癌细胞（Hela）具有很好的抑制活性的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物，其IC₅₀值达到μM的水平，在此基础上，完成了本发明。

本发明的一个目的在于，提供一种6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物，所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物为式I所述化合物，或其药学上可接受的盐、光学异构体、阻转异构体、或晶型：

式I中，X为O、S或NH；Y为烷基或卤代烷基；

A选自：取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、含氮、氧和/或硫的五元或六元杂环基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基中一种；

所述取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、含氮、氧和/或硫的五元或六元杂环基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基的取代基选自下列基团中一种或二种以上（含二种）：

卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、R¹、OR¹、NR¹R²、C(O)R¹、C(O)OR¹、C(O)NR¹R²、SR¹、S(O)_mR¹、S(O)₂NR¹R²、OC(O)R¹、OC(O)NR¹R²、OS(O)₂R¹、OS(O)₂NR¹R²、N(R²)C(O)R¹、N(R²)C(O)NR¹R²、N(R²)S(O)₂R¹或N(R²)S(O)₂NR¹R²；

R¹、R²各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基，或取代的或未取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基、苄基、萘基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基中一种；

所述取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基、苄基、萘基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基的取代基选自下列基团中一种或二种以上（含二种）：

卤素、氰基、酯基、三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基、羟基、羟基、C_1-4烷基、OR³、NR³R⁴、C(O)R³、C(O)OR³、C(O)NR³R⁴、SR³、S(O)_mR³、S(O)₂NR³R⁴、OC(O)R³、OC(O)NR³R⁴、OS(O)₂R³、OS(O)₂NR³R⁴、N(R³)C(O)R⁴、N(R³)C(O)NR⁴R⁵、N(R³)S(O)₂R⁴或N(R³)S(O)₂NR⁴R⁵；

R³、R⁴、R⁵各自独立地为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基或C_2-6卤代炔基；

B为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基；

所述的取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基的取代基选自下列基团中一种或二种以上（含二种）：

卤素、氰基、硝基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、R⁷、OR⁷、SR⁷、NR¹R⁸、C(O)R⁷、C(O)OR⁷、S(O)_mR⁷、S(O)₂NR⁷R⁸、OC(O)R⁷、OS(O)₂R⁷、OS(O)₂NR⁷R⁸或N(R⁷)S(O)₂R⁷；

R⁷、R⁸各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基、或取代的或未取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基或苄基中一种，

所述取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基或苄基的取代基选自下列基团中一种或二种以上（含二种）：

卤素、氰基、硝基、酯基、三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、OR³、SR³、NR³R⁴、C(O)R³、C(O)OR³、S(O)_mR³、S(O)₂NR³R⁴、OC(O)R³、OS(O)₂R³、OS(O)₂NR³R⁴或N(R⁴)S(O)₂R³；

R³、R⁴、R⁵的定义与前文所述一致；m为1或2。

本发明的另一个目的在于，提供一种组合物，所述组合物包含上述6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物和在药理或药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂等添加剂。

本发明的再一个目的在于，揭示上述6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物或其组合物的一种用途，即本发明所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物或其组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

此外，本发明还提供一种制备式I所示化合物的方法，所述方法的主要步骤是：在回流条件下，由异腈类化合物（CN-B）、米氏酸（式Ⅲ所示化合物）与式Ⅱ所示化合物于卤代烷（反应介质）中反应得到；

或，

在回流及有卤代丙酮存在条件下，由异腈类化合物（CN-B）、米氏酸（式Ⅲ所示化合物）与式Ⅱ所示化合物于卤代烷（反应介质）中反应得到。

其中，B、A和X的定义与前文所述一致；所述的异腈类化合物（CN-B）及式Ⅱ和Ⅲ所示化合物均为已知化合物，其可通过购买或按现有制备技术得到。

具体实施方式

在一优选例中，Y为甲基或卤代甲基（如CH₃、CF₃或CCl₃或CH₂Cl等）；

在另一优选例中，A为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、噻唑基、噁唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、四氢呋喃基、吡啶基、嘧啶基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,3,4-噁二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并[d]噻唑基、苯并[d]噁唑基、苯并[d][1,2,3]噻二唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、1,8-萘啶基、或苯并[d][1,2,3]三嗪-4(3H)-3-基，

所述的取代基选自下组的一个或多个：卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4卤代烯基、C_2-4炔基或C_2-4卤代炔基。

在又一优选例中，B为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基；

所述的取代基选自下组的一个或多个：卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4卤代烯基、C_2-4炔基或C_2-4卤代炔基。

在又一优选例中，以本发明所述组合物的总重为100%计，本发明所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物的含量为0.01-99.9重量%，较佳的含量为0.05-90重量%。

在又一优选例中，所述组合物可制成片剂、锭剂、豆状胶囊、分散剂、悬浮剂、溶液、胶囊、膜片及类似物。

术语定义

除非另有定义，本发明所用的技术和科学上的术语，与本发明所属于领域的通用技术的一般理解具有相同的意义。

术语“C_1-6烷基”指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

术语“C_2-6烯基”指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。

术语“C_2-6炔基”指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。

术语“C_3-7环烷基”指具有3-7个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或类似基团。

术语“C_5-7环烯基”指具有5-7个碳原子的、具有一个或多个双键的环状烯基，例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、或类似基团。

术语“C_1-6烷氧基”指具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、或类似基团。

术语“卤素”指氟、氯、溴、或碘。

术语“卤代的”指被相同或不同的一个或多个上述卤原子取代的基团，例如三氟甲基、五氟乙基、七氟异丙基、或类似基团。

术语“环”或“环系”指碳环或杂环。

术语“杂环”指形成所述杂环骨架的原子中至少一个原子不是碳，为氮、氧或硫。通常，杂环包含不超过4个氮、不超过2个氧和/或不超过2个硫。除非另外指明，杂环可以是饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的环。

术语“环系”指两个或更多个环并在一起的稠环。

术语“5元或6元杂环基”指含一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子的五元或六元环，例如吡啶基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、嘧啶基、四氢呋喃基、噁唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、或1,3,4-噁二唑基等。

术语“杂环环系”指环系中的至少一个环是杂环的环系。

术语“杂芳环环系”指环系中的至少一个环为芳族环的体系。

术语“8元至12元杂芳二环环系”包括苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并[d]咪唑基、苯并[d]噻唑基、苯并[d]噁唑基、苯并[d][1,2,3]噻二唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、1,8-萘啶基、或苯并[d][1,2,3]三嗪-4(3H)-3-基等。

本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出现。可以存在的不对称中心，取决于分子上各种取代基的性质。每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物和纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明包括化合物的所有异构形式。

本发明的化合物含有酰胺键，因此存在阻转异构体，因此，本发明包括化合物的所有阻转异构体的形式。

本文所用，“药学上可接受的盐，酯或其他衍生物”包括领域技术人员用已知方法易于制备的任何盐，酯或衍生物。这样衍生和生成的化合物客队动物和人给药，不具有毒性作用，该化合物或是具有药物活性，或是前体药物。

本文所用，“治疗”指疾病和症状用任何方式得以改善，或其他有益的的改变，治疗也包括本发明化合物在药物上的应用。

本文所用的“组合物”指任何混合物。可以是溶液、混合液、液体、粉末、油膏、水性的、非水性的或他们的任何组合。

这里使用的任何保护性基团，氨基酸和其他化合物的缩写，与他们通用的、公认的缩写或IUPAC-IUB委员会颁布的生化命名一致，除非特别说明。

术语“可药用的盐”指该盐的阴离子在形成药学上可接受的盐时为已了解的和可接受的。较佳地，该盐为水溶性的。合适的，由式(I)的化合物形成的酸加成盐包括无机酸形成的盐，例如盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐；及包括有机酸形成的盐，如醋酸盐，苯甲酸盐。配方和剂量

根据本发明，本发明的化合物，单独或其他药剂，载体或赋形剂联合，为任何合适的给药途径制定制剂，例如腔内注射、皮下注射、静脉内注射、肌肉注射、真皮注射、口服或局部给药。本方法可以使用注射给药制剂，以单剂量的形式在安瓿，或多剂量容器中添加的缓冲剂注射给药。制剂可采取以下形式如混悬液、溶液或在油性或水性媒介中的乳液。制剂可以含有配方试剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。此外，使用前，活性成分可以粉末形式与合适的载体，无菌无热源水或其他溶剂构成剂型。本发明的局部用药可采用泡沫，凝胶，软膏，油膏，转皮膜片，或膏状物。

任何合适的给药途径均可被采用。剂型包括片剂，锭剂，豆状胶囊，分散剂，悬浮剂，溶液，胶囊，膜片及类似物等。

在实际应用中，本发明的化合物，单独或与其他制剂联合，可以按照一般药物学混合技术与药物载体或赋形剂，例如β-环糊精和2-羟基-丙基-β-环糊精紧密混合。根据投药的需要，可采用通用载体、局部或非肠道途径的特殊载体。制备非肠道剂型，例如静脉内注射或灌输的组合物，可采用类似的药物媒介，本领域技术人员所公知的水，乙二醇，油，缓冲剂，糖，防腐剂，脂质体等。这种非肠道组合的例子包括，但不应限制于5%W/V的右旋糖，生理盐水或其他溶液。本发明化合物的总剂量，单独或其他制剂联合给药，可用小瓶静脉注射液给药，体积大约从1毫升到2000毫升。根据给药的总剂量，稀释液量也会不同。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1-37：化合物的制备

实施例1

3-(1-(苄基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(3-(三氟甲基)苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-1)

将618mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(3-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和234mg(2mmol)苄异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率50%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.52(s,1H),10.46(s,1H),9.35(t,J=6.0Hz,1H),8.20(bs,1H),7.69-7.54(m,5H),7.34-7.18(m,7H),4.66-4.51(m,2H),4.31-4.20(m,2H),3.55(s,1H),1.57(s,3H),1.49(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+Na]⁺C₂₉H₂₇N₄O₄F₃Na⁺，计算值：575.1882,实测值：575.1881.

实施例2

3-(1-(((6-氯吡啶-3-基)甲基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-N-(3-氰基苯基)-2,4-二氧杂--2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-2)

将504mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(3-氰基苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和304mg(2mmol)2-氯-5-(异腈甲基)吡啶依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率46%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.63(s,1H),10.54(s,1H),10.25(s,1H),8.30(s,1H),8.24(bs,1H),7.91(d,J=8.4Hz,1H),7.59-7.55(m,2H),7.47(d,J=8.0Hz,1H),7.30-7.16(m,5H),4.34-4.23(m,2H),3.67(s,1H),1.65(s,3H),1.48(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+Na]⁺C₂₇H₂₃ ³⁵ClN₆O₄Na⁺，计算值：553.1367,实测值：5553.1366;C₂₇H₂₃ ³⁷ClN₆O₄Na⁺，计算值：555.1338,实测值：555.1333.

实施例3

N-乙基-3-(2-甲基-1-氧杂-1-((4-三氟甲基)苄基)氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-3)

将358mg(2mmol)2,3-二氨基-N-乙基苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和370mg(2mmol)4-三氟甲基苄异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率60%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.65(s,1H),10.50(s,1H),8.70(t,J=5.6Hz,1H),8.32(bs,1H),7.64(d,J=8.0Hz,2H),7.51(dd,J₁=6.8Hz,J₂=2.4Hz,1H),7.36(d,J=8.0Hz,2H),7.30-7.25(m,2H),4.38-4.27(m,2H),3.50(s,1H),3.32-3.21(m,2H),1.54(s,6H),1.20(t,J=7.2Hz,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₄H₂₆N₄O₄F₃ ⁺，计算值：491.1906,实测值：5491.1909.

实施例4

3-(1-(苄基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-N-(6-氯吡啶-3-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-4)

将524mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(6-氯吡啶-3-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和234mg(2mmol)苄异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率40%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.79(s,1H),10.68(s,1H),10.62(s,1H),8.36(bs,1H),8.24(s,1H),7.86(d,J=8.4Hz,1H),7.59-7.42(m,4H),7.33-7.16(m,5H),4.36-4.25(m,2H),3.70(s,1H),1.68(s,3H),1.50(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₆H₂₅ ³⁵ClN₅O₄ ⁺，计算值：506.1595,实测值：506.1590;C₂₆H₂₅ ³⁷ClN₅O₄ ⁺，计算值：508.1566,实测值：508.1572.

实施例5

N-(3-氟-[1,1’-联苯]-4-基)-3-(2-甲基-1-氧杂-1-((噻唑-2-基甲基)氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-5)

将642mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(3-氟-[1,1’-联苯]-4-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和248mg(2mmol)2-(异腈甲基)噻唑依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率45%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.74(s,1H),10.62(s,1H),10.34(s,1H),8.39(s,1H),8.34(bs,1H),7.91(d,J=8.0Hz,2H),7.59-7.42(m,5H),7.30-7.16(m,5H),4.45-4.36(m,2H),3.69(s,1H),1.66(s,3H),1.53(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₀H₂₇N₅O₄FS⁺，计算值：572.1768,实测值：572.1777.

实施例6

3-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-((4-(三氟甲基)苄基)甲酰胺基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-6)

将466mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸，370mg(2mmol)4-三氟甲基苄异腈和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率50%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.70(s,1H),10.50(s,1H),8.74(t,J=4.8Hz,1H),8.33(bs,1H),7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.51(dd,J₁=6.8Hz,J₂=2.0Hz,1H),7.46(d,J=8.0Hz,2H),7.35-7.29(m,2H),4.81-4.70(m,2H),4.33-4.23(m,2H),3.85(s,1H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₄H₁₇N₄O₄F₁₂ ⁺，计算值：653.1058,实测值：653.1057.

实施例7

N-(4-(溴乙炔基)苄基)-3-(1-((4-甲氧基苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-7)

将686mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(溴乙炔基)苄基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和266mg(2mmol)4-甲氧基苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率50%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),10.39(s,1H),10.28(s,1H),8.20(bs,1H),7.49-7.36(m,5H),7.28-7.10(m,6H),4.26-4.17(m,2H),3.76(s,3H),3.45(s,1H),1.57(s,3H),1.49(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+Na]⁺C₃₀H₂₇N₄O₅ ⁷⁹BrNa⁺，计算值：625.1063,实测值：625.1062；C₃₀H₂₇N₄O₅ ⁸¹BrNa⁺，计算值：627.1042,实测值：627.1049.

实施例8

3-(3-1-((4-乙炔基苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺基)乙酸苯酯(I-8)

将570mg(2mmol)3-(2,3-二氨基苯甲酰基)乙酸苯酯,288mg(2mmol)米氏酸和254mg(2mmol)4-乙炔基苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率47%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.52(s,1H),10.39(s,1H),10.31(s,1H),10.20(s,1H),7.86(d,J=6.8Hz,1H),7.63(d,J=4.0Hz,1H),7.38-7.34(m,3H),7.30-7.20(m,6H),3.79(s,3H),3.50(s,1H),2.35(s,1H),1.57(s,3H),1.49(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₀H₂₇N₄O₆ ⁺，计算值：539.1931,实测值：539.1933.

实施例9

3-(2-(6-(环戊基苯甲酰基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-3-基)-2-甲基丙基氨基)苯甲酸甲酯(I-9)

将438mg(2mmol)2,3-二氨基-N-环戊基苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和322mg(2mmol)3-异腈苯甲酸甲酯依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率56%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.55(s,1H),10.52(s,1H),10.31(s,1H),8.45(d,J=8.0Hz,1H),7.46(m,1H),7.32-7.18(m,6H),4.14-4.06(m,1H),3.89(s,3H),3.52(s,1H),1.91-1.82(m,2H),1.71-1.47(m,12H),.HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₇H₃₁N₄O₆ ⁺，计算值：507.2244,实测值：507.2240.

实施例10

N-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-(1-((3-氟苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-10)

将568mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和242mg(2mmol)3-氟苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率40%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.55(s,1H),10.52(s,1H),10.31(s,1H),10.25(s,1H),7.66(d,J=4.8Hz,1H),7.52-7.26(m,10H),3.62(s,1H),1.55(s,3H),1.50(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₇H₂₃N₅O₄SF⁺，计算值：532.1455,实测值：532.1456.

实施例11

N-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-3-(2-甲基-1-氧杂-1-(4-甲基苯基氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-11)

将674mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(4-氟苯氧基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和234mg(2mmol)4-甲基苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率40%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.79(s,1H),10.72(s,1H),10.54(s,1H),10.35(s,1H),7.72(d,J=8.0Hz,2H),7.69-7.49(m,7H),7.30-7.16(m,6H),3.71(s,1H),2.46(s,3H),1.66(s,3H),1.53(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₃H₃₀N₄O₅F⁺，计算值：581.2200,实测值：581.2201.

实施例12

3-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-(苯基甲酰胺基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(4-(丙基-2-乙炔基-1-氧基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-12)

将562mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(丙基-2-乙炔基-1-氧基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸，206mg(2mmol)苯基异腈和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率45%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.59(s,1H),10.50(s,1H),10.38(s,1H),10.33(s,1H),8.10(d,J=4.0Hz,1H),7.65(d,J=4.0Hz,2H),7.48-7.29(m,9H),3.84(d,J=6.8Hz,2H),3.64(s,1H),2.34(t,J=6.8Hz,1H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₁N₄O₅F₆ ⁺，计算值：619.1416,实测值：619.1422.

实施例13

N-(4-乙酰氨基苄基)-3-(1-(叔丁基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-13)

将596mg(2mmol)N-(4-乙酰氨基苄基)-2,3-二氨基苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和166mg(2mmol)叔丁基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率60%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.49(s,1H),10.27(s,1H),8.20(s,1H),8.02(s,1H),7.55(s,1H),7.43(t,J=4.4Hz,1H),7.30-7.21(m,6H),4.31-4.21(m,2H),3.57(s,1H),2.45(s,3H),1.59(s,3H),1.47(s,3H),1.37(s,9H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₇H₃₄N₅O₅ ⁺，计算值：508.2560,实测值：508.2556.

实施例14

(E)-N-(3-(2-氯乙烯基)苯基)-3-(2-甲基-1-氧杂-1-(丙基-2-炔基-1-基氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-14)

将574mg(2mmol)(E)-2,3-二氨基-N-(3-(2-氯乙烯基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和130mg(2mmol)丙炔基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率49%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.53(s,1H),10.42(s,1H),10.20(s,1H),8.12(t,J=6.0Hz,1H),7.47(d,J=6.8Hz,1H),7.34-7.26(m,6H),6.47(d,J=5.6Hz,1H),6.25(d,J=5.6Hz,1H),4.12(d,J=6.0Hz,2H),3.57(s,1H),2.22(t,J=6.0Hz,1H),1.58(s,3H),1.48(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₅H₂₄N₄O₄ ³⁵Cl⁺，计算值：479.1486,实测值：479.1487;C₂₅H₂₄N₄O₄ ³⁷Cl⁺，计算值：481.1457,实测值：481.1455.

实施例15

3-(1-(叔丁基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(丙基-2-乙炔基-1-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-15)

将378mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(丙基-2-乙炔基-1-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和166mg(2mmol)叔丁基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率49%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),10.21(s,1H),8.67(t,J=5.2Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(d,J=8.4Hz,1H),7.46(d,J=7.2Hz,1H),7.23(dd,J₁=8.4Hz,J₂=7.2Hz,1H),4.00(dd,J₁=5.2Hz,J₂=2.4Hz,2H),3.47(s,1H),2.40(t,J=2.4Hz,1H),1.48(s,3H),1.39(s,3H),1.35(s,9H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₁H₂₇N₄O₄ ⁺，计算值：399.2032,实测值：399.2037.

实施例16

3-(1-(叔丁基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(吡啶基-3-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-16)

将456mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(吡啶基-3-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和166mg(2mmol)正丁基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率53%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.67(s,1H),10.59(s,1H),10.30(s,1H),8.67(t,J=5.6Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.76(d,J=7.2Hz,1H),7.64-7.42(m,5H),3.52(s,1H),3.30-3.16(m,2H),1.58-1.33(m,10H),0.97(t,J=7.2Hz,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₃H₂₈N₅O₄ ⁺，计算值：438.2141,实测值：438.2147.

实施例17

3-(1-(环丙基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-N-(3-氟-4-(苯基氨基)苯基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-17)

将672mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(3-氟-4-(苯基氨基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和134mg(2mmol)环丙基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率56%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.56(s,1H),10.50(s,1H),10.14(s,1H),8.65(d,J=4.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.62(d,J=8.0Hz,2H),7.42-7.37(m,2H),7.31-7.18(m,7H),3.52(s,1H),2.96-2.89(m,1H),1.56(s,6H),0.73-0.68(m,2H),0.65-0.56(m,2H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₉N₅O₄F⁺，计算值：530.2202,实测值：530.2206.

实施例18

3-(2-(环丙基甲酰胺基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙基-2-基)-N-(2’,6’-二氟-[1,1’-联苯]-4-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-18)

将678mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(2’,6’-二氟-[1,1’-联苯]-4-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸，134mg(2mmol)环丙基异腈和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率42%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.66(s,1H),10.60(s,1H),10.24(s,1H),8.75(d,J=4.8Hz,1H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),7.48-7.38(m,3H),7.34-7.19(m,5H),3.82(s,1H),2.99-2.93(m,1H),0.75-0.70(m,2H),0.68-0.62(m,2H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₁N₄O₄F₈ ⁺，计算值：641.1435,实测值：641.1433.

实施例19

3-(1-((2-氟苄基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(4-(苯硫基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-19)

将670mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(苯硫基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和270mg(2mmol)2-氟苄基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率42%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.64(s,1H),10.52(s,1H),10.30(s,1H),8.25(s,1H),7.96(d,J=8.0Hz,2H),7.89-7.67(m,8H),7.36-7.19(m,6H),4.48-4.40(m,2H),3.70(s,1H),1.67(s,3H),1.55(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₃H₃₀N₄O₄SF⁺，计算值：597.1972,实测值：597.1977.

实施例20

N-(2-溴-4-苯氧基苯基)-3-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-(异丙基甲酰胺基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-20)

将794mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(2-溴-4-苯氧基苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸，138mg(2mmol)异丙基异腈和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率42%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.72(s,1H),10.62(s,1H),10.34(s,1H),8.48(d,J=4.8Hz,1H),7.84(d,J=7.6Hz,2H),7.55-7.44(m,3H),7.35-7.17(m,6H),4.15(m,1H),3.87(s,1H),1.17(d,J=2.8Hz,3H),1.15(d,J=2.8Hz,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₄N₄O₅ ⁷⁹BrF₆ ⁺，计算值：701.0834,实测值：701.0833;C₂₉H₂₄N₄O₅ ⁸¹BrF₆ ⁺，计算值：703.0814,实测值：703.0820.

实施例21

3-(1-((3-氯苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(4-(3-甲基苯基氨基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-21)

将664mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(3-甲基苯基氨基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和274mg(2mmol)3-氯苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率42%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.54(s,1H),10.42(s,1H),10.30(s,1H),10.15(s,1H),8.67(s,1H),7.86(d,J=8.0Hz,2H),7.66-7.33(m,8H),7.22-7.07(m,5H),3.62(s,1H),2.37(s,3H),1.67(s,3H),1.55(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₃H₃₁N₅O₄ ³⁵Cl⁺，计算值：596.2065,实测值：596.2069;C₃₃H₃₁N₅O₄ ³⁷Cl⁺，计算值：598.2035,实测值：598.2039.

实施例22

3-(1-(环丙基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-N-(萘基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-22)

将554mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(萘基-2-基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和134mg(2mmol)环丙基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率56%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.46(s,1H),10.35(s,1H),10.16(s,1H),8.35(d,J=4.8Hz,1H),7.65(d,J=8.0Hz,1H),7.55(d,J=8.0Hz,2H),7.42-7.37(m,3H),7.29-7.18(m,4H),3.46(s,1H),2.86-2.83(m,1H),1.57(s,6H),0.73-0.68(m,2H),0.65-0.56(m,2H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₇H₂₇N₄O₄ ⁺，计算值：471.2032,实测值：471.2036.

实施例23

3-(2-甲基-1-氧杂-1-((3-(三氟甲基)苄基)氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-N-(4-(苯基亚砜基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-23)

将702mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(4-(苯基亚砜基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和370mg(2mmol)3-三氟甲基苄基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率43%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.68(s,1H),10.54(s,1H),10.40(s,1H),8.35(s,1H),8.00(d,J=8.0Hz,2H),7.87-7.67(m,7H),7.42-7.23(m,7H),4.40-4.32(m,2H),3.76(s,1H),1.69(s,3H),1.59(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₄H₃₀N₄O₅SF₃ ⁺，计算值：663.1889,实测值：663.1899.

实施例24

3-(1-((4-碘苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-N-(3-(氨基甲酰基)苯基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-24)

将568mg(2mmol)2,3-二氨基-N-(3-(氨基甲酰基)苯基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和558mg(2mmol)4-碘苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率47%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),10.30(s,1H),10.21(s,1H),10.16(s,1H),8.22(q,J=5.2Hz,1H),7.77(d,J=7.6Hz,2H),7.73-7.68(m,2H),7.48-7.39(m,2H),7.28-7.20(m,5H),4.29(d,J=5.2Hz,3H),3.44(s,1H),1.57(s,3H),1.49(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₈H₂₇IN₅O₅ ⁺，计算值：640.1057,实测值：640.1058.

实施例25

N-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-(2-甲基-1-氧杂-1-(苯基氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-25)

将552mg(2mmol)2,3-二氨基-N-((6-氯吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺,288mg(2mmol)米氏酸和206mg(2mmol)苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率47%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.62(s,1H),10.50(s,1H),10.30(s,1H),8.41(s,1H),8.35(s,1H),7.88(d,J=8.4Hz,1H),7.70-7.58(m,3H),7.52-7.39(m,3H),7.31-7.20(m,3H),4.31-4.25(m,2H),3.46(s,1H),1.60(s,3H),1.54(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₆H₂₅N₅O₄ ³⁵Cl⁺，计算值：506.1595,实测值：506.1599;C₂₆H₂₅N₅O₄ ³⁷Cl⁺，计算值：508.1566,实测值：508.1569.

实施例26

N-((2-氯噻唑-5-基)甲基)-3-(1-(环己基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-甲酰胺(I-26)

将564mg(2mmol)2,3-二氨基-N-((2-氯噻唑-5-基)甲基)苯甲酰胺,288g(2mmol)米氏酸和218mg(2mmol)环己基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率50%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.32(s,1H),10.26(s,1H),8.31(d,J=6.0Hz,1H),8.21(s,1H),8.07(s,1H),7.48(q,J=3.2Hz,1H),7.30-7.26(m,2H),4.27(d,J=6.0Hz,2H),3.78(s,1H),3.54(s,1H),1.84-1.68(m,4H),1.55(s,6H),1.34-1.08(m,6H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₄H₂₉N₅O₄ ³⁵ClS⁺，计算值：518.1629,实测值：518.1619;C₂₄H₂₉N₅O₄ ³⁷ClS⁺，计算值：520.1599,实测值：520.1600.

实施例27

3-(三氟甲氧基)苯基3-(1-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-27)

将624mg(2mmol)3-(三氟甲氧基)苯基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和274mg(2mmol)4-氯苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率46%¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.38(s,1H),10.34(s,1H),10.20(s,1H),7.81-7.72(m,2H),7.67-7.50(m,5H),7.46-7.33(m,4H),3.55(s,1H),1.58(s,3H),1.54(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₇H₂₂N₃O₆ ³⁵ClF₃ ⁺，计算值：576.1149,实测值：576.1148;C₂₇H₂₂N₃O₆ ³⁷ClF₃ ⁺，计算值：578.1120,实测值：578.1120.

实施例28

3-氟-4-苯氧基苯基3-(1-(环丙基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-28)

将676mg(2mmol)3-氟-4-苯氧基苯基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和134mg(2mmol)环丙基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率48%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),10.33(s,1H),8.32(s,1H),7.72(d,J=6.8Hz,1H),7.59-7.39(m,5H),7.30-7.12(m,5H),3.61(s,1H),2.82-2.79(m,1H),1.64(s,3H),1.52(s,3H),0.73-0.68(m,2H),0.65-0.56(m,2H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₇N₃O₆F⁺，计算值：532.1884,实测值：532.1882.

实施例29

3-((3-氟苯基)甲酰胺基)苯基3-(1-((3-氟苄基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-29)

将730mg(2mmol)3-((3-氟苯基)甲酰胺基)苯基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和270mg(2mmol)3-氟苄基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率39%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.45(s,1H),10.36(s,1H),10.19(s,1H),8.25(s,1H),7.87(d,J=8.0Hz,1H),7.80-7.70(m,3H),7.47-7.43(,1H),7.38-7.10(m,10H),4.31-4.24(m,2H),3.55(s,1H),1.66(s,3H),1.50(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₄H₂₉N₄O₆F₂ ⁺，计算值：627.2055,实测值：627.2056.

实施例30

2,2,2-三氟乙基3-(2-((4-乙酰氧基苄基)甲酰胺基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-30)

将468mg(2mmol)2,2,2-三氟乙基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸，350mg(2mmol)4-乙酰氧基苄基异腈和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率45%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.30(s,1H),10.23(s,1H),8.43(s,1H),7.65(d,J=8.0Hz,2H),7.45(dd,J₁=6.8Hz,J₂=2.0Hz,1H),7.40(d,J=8.0Hz,2H),7.35-7.29(m,2H),4.61-4.50(m,2H),4.31-4.23(m,2H),3.85(s,1H),2.35(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₅H₁₉N₃O₇F₉ ⁺，计算值：644.1079,实测值：644.1080.

实施例31

[1,1’-联苯]-4-基3-(1-((4-(氯乙炔基)苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-31)

将608mg(2mmol)[1,1’-联苯]-4-基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和322mg(2mmol)4-氯乙炔基苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率40%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.55(s,1H),10.50(s,1H),10.33(s,1H),7.92(d,J=8.0Hz,2H),7.73-7.42(m,8H),7.34-7.18(m,6H),3.70(s,1H),1.60(s,3H),1.52(s,3H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₃₄H₂₇N₃O₅ ³⁵Cl⁺，计算值：592.1639,实测值：592.1641;C₃₄H₂₇N₃O₅ ³⁷Cl⁺，计算值：594.1610,实测值：594.1611.

实施例32

环己基3-(2-甲基-1-氧杂-1-(苯基氨基)丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯甲酸酯(I-32)

将468mg(2mmol)环己基2,3-二氨基苯甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和206mg(2mmol)苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率51%。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.48(s,1H),10.45(s,1H),10.20(s,1H),7.48(d,J=3.2Hz,1H),7.31-7.18(m,7H),3.78(s,1H),3.55(s,1H),1.84(m,2H),1.70(m,2H),1.55(s,6H),1.34-1.11(m,6H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₆H₃₀N₃O₅ ⁺，计算值：464.2185,实测值：464.2188.

实施例33

S-(3,4-二甲氧基苯基)3-(1-((4-溴苯基)氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯硫代甲酸酯(I-33)

将608mg(2mmol)S-(3,4-二甲氧基苯基)2,3-二氨基苯硫代甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和362mg(2mmol)4-溴苯基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率42%¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),10.29(s,1H),10.21(s,1H),7.66(d,J=8.0Hz,1H),7.47-7.33(m,4H),7.25-7.09(m,5H),3.99(s,3H),3.93(s,3H),3.44(s,1H),1.56(s,6H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₈H₂₇N₃O₆ ⁷⁹BrS⁺，计算值：612.0804,实测值：612.0808;C₂₈H₂₇N₃O₆ ⁸¹BrS⁺，计算值：614.0783,实测值：614.0788.

实施例34

S-2-溴苄基3-(2-甲基-1-((2-甲基苄基)氨基)-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯硫代甲酸酯(I-34)

将672mg(2mmol)S-2-溴苄基2,3-二氨基苯硫代甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和262mg(2mmol)2-甲基苄基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率43%¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),10.35(s,1H),8.20(s,1H),7.45(d,J=7.6Hz,1H),7.39(d,J=8.0Hz,1H),7.33-7.21(m,4H),7.16-7.02(m,5H),4.53-4.46(m,2H),4.32-4.22(s,2H),3.54(s,1H),2.25(s,3H),1.54(s,6H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₉H₂₉N₃O₄ ⁷⁹BrS⁺，计算值：594.1062,实测值：594.1060;C₂₉H₂₉N₃O₄ ⁸¹BrS⁺，计算值：596.1042,实测值：596.1040.

实施例35

甲基2-(2-(6-((硫代烯丙基)羰基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-3-基)-3,3,3-三氟-2-(三氟甲基)丙基氨基)苯甲酸酯(I-35)

将416mg(2mmol)S-丙烯基2,3-二氨基苯硫代甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸,322mg(2mmol)2-异腈苯甲酸酯和440mg(2mmol)六氟丙酮三水合物依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率41%¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.62(s,1H),10.55(s,1H),10.22(s,1H),7.66(d,J=8.0Hz,1H),7.53-7.41(m,3H),7.30-7.22(m,3H),6.06(t,J=6.0Hz,1H),5.18(d,J=6.0Hz,1H),5.08(d,J=6.0Hz,1H),4.63-4.55(m,2H),3.90(s,3H),3.64(s,1H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₅H₂₀N₃O₆SF₆ ⁺，计算值：604.0977,实测值：604.1000.

实施例36

S-(2-甲基呋喃-3-基)3-(1-(环丙基氨基)-2-甲基-1-氧杂丙基-2-基)-2,4-二氧杂-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-6-苯硫代甲酸酯(I-36)

将496mg(2mmol)S-(2-甲基呋喃-3-基)2,3-二氨基苯硫代甲酸酯,288mg(2mmol)米氏酸和134mg(2mmol)环丙基异腈依次加入含10mL1,2-二氯乙烷的25mL的圆底瓶中,氩气保护，在回流条件下反应,TLC跟踪反应进程，反应结束后，将反应液浓缩，重结晶得到目标产物，为白色固体，产率48%¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.57(s,1H),10.50(s,1H),8.55(d,J=4.8Hz,1H),7.55(d,J=7.6Hz,1H),7.40(d,J=8.0Hz,1H),7.31-7.26(m,3H),3.54(s,1H),2.99-2.90(m,1H),2.20(s,3H),1.54(s,6H),0.75-0.72(m,2H),0.65-0.58(m,2H).HRMS(ES+)m/z[M+H]⁺C₂₂H₂₄N₃O₅S⁺，计算值：442.1437,实测值：442.1445.

实施例37

重复实施例1-36中的方法，不同点在于采用不同的起始原料，从而制得一系列化合物，具体见表1。

表1

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实施例38

材料与方法

1.1.细胞株与试剂

Helacells人子宫颈癌细胞,A549肺癌细胞，HCT116(humancoloncarcinomacells)人结肠癌细胞和MCF-7(humanbreastcarcinomacells)人乳腺癌细胞培养在RPMI1640培养基中（含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素），37℃、5%的CO2、饱和湿度下进行培养。

噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)购自Sigma公司。胎牛血清（BD），青霉素及硫酸链霉素（华北制药股份有限公司），胰蛋白酶（Sigma），RPMI1640培养基（Gibico）

MK3酶标仪（Thermo），501A型超级数显恒温水浴锅（上海浦东荣丰科学仪器有限公司），BB5060CO2培养箱（Thermo）。

1.2.方法

①培养好的细胞以5×104cells/mL接种于96孔培养板，每孔0.1mL，使之贴壁培养24h以上。

②然后根据实验规划，设置相应的空白组和实验组，空白组加入等体积的培养液，其他组则加入规划体积的药物培养基，重新把96孔板置于37℃、5%的CO₂、饱和湿度下进行培养48h。

③培养结束后，小心吸弃上清液，每孔再重新加200μL培养基(含10%(v/v)MTT)，37℃培养。

④4h后，吸弃上清，用移液器向每孔加入100μL的DMSO，培养箱中放置10min溶解甲臜后，利用酶标仪测定492nm，630nm处的光密度(OD)值。

⑤Origin7.0软件以化合物的不同浓度为横坐标，不同细胞的存活率为纵坐标作图，确定化合物对不同细胞系的半数抑制浓度IC₅₀。

表2

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在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物，其为式I所述化合物，或其药学上可接受的盐：

式I中，X为O、S或NH；Y为甲基或卤代甲基；

A选自：取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、含氮、氧和/或硫的五元或六元杂环基或8元至12元杂芳二环环系基中一种；

所述取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、含氮、氧和/或硫的五元或六元杂环基或8元至12元杂芳二环环系基的取代基选自下列基团中一种或二种以上：

卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、R¹、OR¹、NR¹R²、C(O)R¹、C(O)OR¹、C(O)NR¹R²、SR¹、S(O)_mR¹、S(O)₂NR¹R²、OC(O)R¹、OC(O)NR¹R²、OS(O)₂R¹、OS(O)₂NR¹R²、N(R²)C(O)R¹、N(R²)C(O)NR¹R²、N(R²)S(O)₂R¹或N(R²)S(O)₂NR¹R²；

R¹、R²各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基，或取代的或未取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基、苄基、萘基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基中一种；

所述取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基、苄基、萘基、5元或6元杂环基、或8元至12元杂芳二环环系基的取代基选自下列基团中一种或二种以上：

卤素、氰基、酯基、三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基、羟基、OR³、NR³R⁴、C(O)R³、C(O)OR³、C(O)NR³R⁴、SR³、S(O)_mR³、S(O)₂NR³R⁴、OC(O)R³、OC(O)NR³R⁴、OS(O)₂R³、OS(O)₂NR³R⁴、N(R³)C(O)R⁴、N(R³)C(O)NR⁴R⁵、N(R³)S(O)₂R⁴或N(R³)S(O)₂NR⁴R⁵；

R³、R⁴、R⁵各自独立地为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基或C_2-6卤代炔基；

B为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基；

所述的取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基的取代基选自下列基团中一种或二种以上：

卤素、氰基、硝基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、R⁷、OR⁷、SR⁷、NR¹R⁸、C(O)R⁷、C(O)OR⁷、S(O)_mR⁷、S(O)₂NR⁷R⁸、OC(O)R⁷、OS(O)₂R⁷、OS(O)₂NR⁷R⁸或N(R⁷)S(O)₂R⁷；

R⁷、R⁸各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6卤代烯基、C_2-6炔基、C_2-6卤代炔基、或取代的或未取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基或苄基中一种，

所述取代的C_3-7环烷基、C_5-7环烯基、苯基或苄基的取代基选自下列基团中一种或二种以上：

卤素、氰基、硝基、酯基、三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、OR³、SR³、NR³R⁴、C(O)R³、C(O)OR³、S(O)_mR³、S(O)₂NR³R⁴、OC(O)R³、OS(O)₂R³、OS(O)₂NR³R⁴或N(R⁴)S(O)₂R³；

R³、R⁴、R⁵的定义与前文所述一致；m为1或2。

2.如权利要求1所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物，其特征在于，其中A为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、苄基、萘基、噻唑基、噁唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、四氢呋喃基、吡啶基、嘧啶基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,3,4-噁二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并[d]噻唑基、苯并[d]噁唑基、苯并[d][1,2,3]噻二唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、1,8-萘啶基、或苯并[d][1,2,3]三嗪-4(3H)-3-基，

所述的取代基选自下组的一个或多个：卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4卤代烯基、C_2-4炔基或C_2-4卤代炔基。

3.如权利要求1所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物，其特征在于，其中B为取代或未取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基或苄基；

所述的取代基选自下组的一个或多个：卤素、氰基、酯基，三氟甲基、三氟乙酰基、三氟甲磺酰基、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4卤代烯基、C_2-4炔基或C_2-4卤代炔基。

4.一种组合物，其包含权利要求1～3中任意一项所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物和在药理或药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂；

以所述组合物的总重为100％计，权利要求1～3中任意一项所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物的含量为0.01重量％～99.9重量％。

5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，其中权利要求1～3中任意一项所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物的含量为0.05重量％～90重量％。

6.权利要求1～3中任意一项所述的6-取代苯并二氮卓-2,4-二酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，其中所述的肿瘤为人结肠癌细胞HCT116、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549或人子宫颈癌细胞Hela。

8.如权利要求4所述组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，其中所述的肿瘤为人结肠癌细胞HCT116、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549或人子宫颈癌细胞Hela。