KR101393403B1

KR101393403B1 - 콜라겐 펩티드를 함유하는 피부미용 개선용 조성물

Info

Publication number: KR101393403B1
Application number: KR1020090079933A
Authority: KR
Inventors: 김정기; 이지해; 양미숙; 이지은; 김완기
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2008-08-27
Filing date: 2009-08-27
Publication date: 2014-05-14
Also published as: CN102131492B; US20110160137A1; JP2012501320A; WO2010024608A3; CN102131492A; WO2010024608A2; KR20100025500A

Abstract

본 발명은 섭취 시, 피부의 주름개선 및 주름생성 억제 효과를 나타내는 경구용 피부미용 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명의 조성물은 콜라겐 펩티드에 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 한다. 특히, 본 발명에 따라 콜라겐 펩티드, 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C를 최적화된 비율로 동시에 함유하고 있는 조성물은 섭취 시 인체에 부작용이 없을 뿐만 아니라, 피부 진피층의 콜라겐 생합성을 최대로 촉진하고, 생체 잔존율이 뛰어나며, 피부의 주름 생성 억제 효과와 탄력유지 혹은 개선, 건조개선 효과를 나타내므로, 피부미용 증진과 피부노화 방지를 위한 건강기능 식품으로 유용하게 사용될 수 있다.

콜라겐 펩티드, 엘라스틴, 히알루론산, 비타민 C

Description

콜라겐 펩티드를 함유하는 피부미용 개선용 조성물{Composition for improving beauty of skin containing collagen peptide}

본 발명은 콜라겐 펩티드 혼합물을 함유하는 피부미용 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 콜라겐 펩티드(collagen peptide)에 히알루론산, 엘라스틴 단백질 및 비타민 C로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 함유함으로써 우수한 피부개선 효과를 갖는 피부미용 개선용 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 노화에 미치는 요인에 따라 내인성 노화(intrinsic aging)와 외인성 노화(extrinsic aging)로 구분할 수 있는데, 내인성 노화는 나이가 들어감에 따라 피부의 구조와 생리기능이 환경변화와는 무관하게 감퇴하는 것이고, 외인성 노화는 태양광선 등의 외부환경에 지속적으로 노출되기 때문에 나타나는 것이다. 특히, 빛에 의한 노화를 광노화(photoaging)라고 하며 자외선은 피부 노화의 생리학적 및 형태학적 변화의 주된 원인이 된다. 내인성 피부노화가 진행되면 피부는 건조해지며 잔주름이 늘어나고, 시간이 지나면서 주름은 더욱 깊어진다. 그리고, 표피, 진피 등의 구조 및 기능적인 변화로 인해 피부가 탄력성을 잃고 처져 보이게 된다. 진피의 두께는 감소하는데 반해 콜라겐(교원질)의 총량은 성인이 된 후 1년에 1%씩 소실되며, 또한 남아있는 콜라겐 섬유는 점차 두꺼워지면서 가교(cross-linking)가 증가하게 되어 용해도, 팽창력 등이 감소한다. 아울러 탄력섬유도 두꺼워지게 되며, 가교도 증가하게 된다. 그 외 진피 내에서는 섬유아세포의 증식 활성이 떨어지고 콜라겐의 합성, 분해능 역시 감소한다. 이와 같이 콜라겐은 피부노화와 관련된 주요 피부조직 성분이며, 지방을 제외한 피부 전체 건조 중량의 77%, 진피섬유 성분의 90%를 차지하고 있는 단백질로서 피부의 강도, 탄력성, 유연성을 유지할 수 있게 하는 기능을 부여한다. 따라서, 콜라겐의 합성 증진 및 분해 억제는 피부미용 및 노화억제와 관련하여 주요 관심사가 되었으며, UV에 의한 광노화를 억제하면서 콜라겐의 합성을 증진시킬 수 있는 미용식품의 개발이 요구되고 있다.

이를 위하여 경구로 섭취할 수 있는 콜라겐에 대한 연구가 지속적으로 이루어 졌으며, 기술의 발전에 따라 다양한 소스를 갖는 콜라겐과 다양한 후처리 과정을 거친 콜라겐 원료들이 개발되었다. 이와 관련하여 국내공개특허공보 제2001-0075842호(2001.08.11)에는 콜라겐이 함유된 “기능성 식품”이 개시되어 있고, 국내공개특허공보 제2002-0085307호(2002.11.16)에는 “경구용 피부미용 식품 조성물”로서 콜라겐이 다량 함유된 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 콜라겐 자체는 분자량이 크므로 소화 흡수에 대한 문제, 피부 등 타겟 기관으로의 전달 문제, 유효량의 도달 여부, 생체 콜라겐의 적합성 문제 등 다양한 의문이 대두되어 그 실체적 효능에 대해 추가적인 연구가 필요하였다.

이에, 본 발명자들은 피부 미용 개선 효과를 나타내는 콜라겐 유래의 처방을 찾고자 연구를 거듭한 결과, Gly-X-Y 형태의 트리펩티드(tripeptide)를 고농도로 함유한 콜라겐 펩티드의 피부 미용 개선 효과를 확인하고, 피부세포에서 프로콜라겐 생합성을 증대시키는 성분들을 연구한 결과, 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C를 최적의 비율로 더 함유할 경우 상기 효과를 최대화할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 부작용이 없으면서 프로콜라겐 생합성 증진 및 광노화 억제 작용 등에 의해 피부노화를 방지하고 탄력을 증대시켜 우수한 피부개선 효과를 갖는 피부미용 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 콜라겐 펩티드에 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 함유하는 피부미용 개선용 조성물을 제공한다.

상기 콜라겐 펩티드는 콜라겐 트리펩티드를 콜라겐 펩티드 전체 중량에 대하여 15 중량% 이상 함유함을 특징으로 한다.

본 발명의 의한 피부미용 개선용 조성물은 콜라겐 합성 증진 및 광노화 억제 작용 등에 의한 피부노화 방지 효과뿐만 아니라 상처 치유 능력 및 콜라겐 펩티드의 생체 잔존율을 높임으로써 우수한 피부개선 효과를 얻을 수 있었다.

본 발명의 피부미용 개선용 조성물은 콜라겐 펩티드에 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 함유한다.

상기의 다양한 성분들 간의 역할을 분석함에 있어서 주어진 비용과 시간과 예산 하에서 최대의 정보를 얻기 위해 종합적인 실험 방법과 분석 방법이 필요하며, 이를 위하여 본 발명에서는 실험계획법(DOE: Design of Experiments)을 이용하였다. DOE는 과학연구를 체계적으로 계획하고 수행하여 통계적으로 분석하는 방법론으로서, 특정 공정의 출력값 변화의 원인을 알아내기 위해 통제 가능한 입력인자의 수준값을 변화시켜 나가는 일련의 실험과정을 계획하고 실시하는 방법론이다. 이를 통해 실험의 목적을 만족시키고 적절한 성과물을 얻기 위해 가장 많은 정보를 가장 효율적으로 얻을 수 있는 일련의 실험 조건을 결정하는 실험전략을 세울 수 있다. 실험계획법을 이용하면 검정에 시스템적으로 접근이 가능하며, 프로세스와 결과 측정치들 간의 관계 정의 및 평가가 가능하고, 변동의 소수 중요인자(vital few) 원천들의 파악이 가능하며, 반응 변수들에 대한 소수 중요인자 효과의 측정치를 제공하고, 한번에 한 요인만 검정하는 것보다 효과적인 측정치들과 고품질의 데이터를 제공하며, 불확실성의 측정이 가능하고 시행해야 할 횟수의 최소화가 가능 하며, 잡음변수(nuisance variables)들의 관리가 가능해지는 등의 다양한 효과를 얻을 수 있다. 이러한 실험계획법에는 부분요인 배치법(fractional factorial designs), 완전요인 배치법(full factorial designs), 반응표면분석법(responsive surface methodology), 혼합물 실험법(mixture designs) 및 다구치 실험법(Taguchi design) 등이 있다.

본 발명에서 활성성분으로 사용하는 콜라겐 펩티드는 분자량이 500∼1,000 Da 인 펩티드로서, Gly-X-Y 형태의 트리펩티드를 15% 이상, 예를 들어 15 내지 95%를 함유한 복합물로서, 이때 X 및 Y는 어떠한 아미노산도 가능하다. 또한 상기 X와 Y는 동일하거나 서로 다른 아미노산일 수 있으며, 모든 아미노산으로서 가능한 모든 조합이 사용될 수 있다. 즉, 통상의 천연에 존재하는 알라닌(alanine, Ala), 발린(valine, Val), 류신(leucine, Leu), 이소류신(isoleucine, Ile), 프롤린(proline, Pro), 히드록시 프롤린(hydroxyproline, Hyp), 페닐알라닌(phenylalanine, Phe), 트립토판(tryptophan, Trp), 메티오닌(methionine, Met), 세린(serine, Ser), 트레오닌(threonine, Thr), 시스테인(cysteine, Cys), 글루타민(glutamine, Gln), 글리신(glycine, Gly), 아스파라긴(asparagine, Asn), 티로신(tyrosine, Tyr), 리신(lysine, Lys), 아르기닌(arginine, Arg), 히스티딘(histidine, His), 아스파트산(aspartic acid, Asp) 및 글루탐산(glutamic acid, Glu) 등의 아미노산이 모두 사용가능하지만, 바람직하게는 Gly-Pro-Hyp, Gly-Pro-Ala, Aly-Ala-Hyp, Gly-Leu-Hyp, Gly-Glu-Lys, Gly-Pro-Lys, Gly-Glu-Hyp, Gly-Phe-Hyp, Gly-Ser-Hyp, Gly-Gln-Hyp 및 Gly-Glu-Arg, Gly-Pro-Arg 의 구성으로 사 용할 수 있으며, 이에만 한정되지 않는다.

구체적으로 본 발명에서 사용하는 콜라겐 펩티드는 하기의 방법으로 제조될 수 있다. 콜라겐 또는 젤라틴 성분을 시스테인프로테아제, 펩신, 트립신 또는 콜라게나아제 등의 효소를 이용하여 분해하면 트리펩티드 및 디펩티드를 5중량% 이상 함유한 콜라겐 펩티드를 제조할 수 있다. 이렇게 제조한 펩티드 혼합물에서 트리펩티드의 함량을 보다 높이기 위해서는 Gly-X-Y 형태의 트리펩티드를 함유한 펩티드 혼합물을 알칼리성 음이온 교환 수지와 접촉시키고, 트리펩티드 Gly-X-Y를 상기 이온 교환 수지에 흡착시킨 다음, 트리펩티드를 흡착한 이온 교환 수지로부터 트리펩티드를 용출하면, 트리펩티드의 함량이 보다 높은 펩티드 정제물을 제조할 수 있다. 또한, 트리펩티드 Gly-X-Y를 함유한 펩티드 혼합물을 비극성 흡착제와 접촉시키어, 펩티드 혼합물에 함유된 소수성 펩티드의 일부를 비극성 흡착제에 흡착시키고, 비극성 흡착제에 흡착하지 않은 친수성 트리펩티드를 회수함으로써 친수성 트리펩티드의 함량이 높은 펩티드 정제물을 제조할 수 있다.

본 발명에서 상기 콜라겐 펩티드는 조성물 총 중량에 대하여 1∼80 중량%의 양으로 함유된다. 콜라겐 펩티드의 함량이 1 중량% 미만이면 원하는 효과를 얻기 어렵고, 80 중량%를 초과하면 제형화에 어려움이 있다.

또한, 본 발명에서 사용하는 엘라스틴 단백질은 가다랑어의 동맥구(aortic bulb)에서 가수분해로 얻어진 엘라스틴으로서 엘라스틴 특유의 아미노산인 가교 아미노산인 데스모신, 이소데스모신을 함유하고 있는 것이 특징이다.

본 발명에서 사용하는 히알루론산(hyaluronic acid)은 연쇄상 구균의 발효로 대량 생산하여 히알루론산 함량이 90∼100%에 도달하도록 개발된 것으로서, 화장품과 의약품 분야에서 널리 사용되고 있으며 최근 건강 보조 식품을 비롯한 다양한 분야에서 사용되고 있다.

본 발명의 콜라겐 펩티드, 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C는 조성물 총 중량에 대하여 콜라겐 펩티드는 1∼80 중량%, 엘라스틴 단백질은 1∼20 중량%, 히알루론산은 1∼10 중량%, 비타민 C는 1∼20 중량%의 양으로 함유된다.

본 발명에 의한 조성물은 피부내 콜라겐의 합성을 촉진시키고, 광노화를 억제시킬 뿐만 아니라 피부 보습을 증가시키고, 상처 치유 능력 및 콜라겐 펩티드의 생체 잔존율을 높이는 등 전반적으로 피부 상태를 개선시킬 수 있다.

또한, 콜라겐 펩티드, 엘라스틴 단백질, 비타민 C 및 히알루론산 각 성분끼리의 함량 비율은 1:0.0001 내지 150:0.0001 내지 20:0.0001 내지 50000임이 바람직하다.

본 발명의 피부미용 개선용 조성물은 환, 음료, 티백차, 인스턴트 차, 드링크제, 과립, 정제, 캡슐 등 여러 형태로 제형화하여 건강식품, 의약품 등으로 사용할 수 있다.

이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포 함된다.

[시험예 1] 콜라겐 생성능 측정

섬유아세포(fibroblast)를 이용하여 제1형(type 1) 프로콜라겐 (procollagen) 생성능을 비교하였다.

구분	투여내용
대조군	정상군으로서 생리식염수를 세포에 처리하였다.
비교예 1	일반 콜라겐 원료를 생리식염수에 녹여 세포에 처리하였다.
비교예 2	젤라이스사에서 입수한 콜라겐 펩티드를 생리식염수에 녹여 세포에 처리하였다.

프로콜라겐 생성능 비교를 위하여 48-웰 플레이트(well plate)에 섬유아세포를 웰당 5×10⁴개로 넣고 부착시킨 상태에서 상기 표 1의 비교예 1∼2를 최종 농도가 각각 0.1, 1 및 10 ppm이 되도록 처리하였다. 이 때 대조군으로 별도의 시료를 첨가하지 않은 실험군을 마련하였다. 48시간 배양 후, 배양 상층액에서 제1형(type 1) 프로콜라겐 생성량을 ELISA 키트(Takara MK101)를 이용하여 측정하였다. 측정된 결과는 대조군을 100으로 한 비교치로 산출하여 하기 표 2에 나타내었다.

프로콜라겐 생성량

구분	농도 (ppm)	프로콜라겐 생성량 (%)
비교예 1	0.1	106.1
	1	98.6
	10	57.8
비교예 2	0.1	107.6
	1	117.5
	10	113.1
대조군	-	100

상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 2의 경우에는 프로콜라겐의 생성량이 대조군 보다 증가하였으며, 특히 적정 농도(1∼10 ppm)를 처리한 군에서는 대조군보다 콜라겐 생성량이 훨씬 증가한 반면, 비교예 1의 경우에는 콜라겐 생성촉진 효과가 없으며, 오히려 10 ppm 이상에서는 콜라겐 생성이 감소되는 것을 확인할 수 있다.

따라서, 효능이 확인된 Gly-X-Y의 트리펩티드가 다량 함유된 콜라겐 펩티드를 이용하여, 유효 적정농도를 설정하고, 타 후보원료와의 시너지 효과를 반영하여 조성물 제조에 유념할 필요가 있음을 확인하고 최적화를 진행하였다.

[시험예 2] 실험계획법을 이용한 최적화 실험

상기 시험예 1에서 확인된 콜라겐 펩티드 성분과 타 후보원료인 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C의 프로콜라겐 생성촉진 능력을 최적화시키기 위해 반응표면분석법(RSM: responsive surface method)을 이용하였다. 이를 이용하면 독립변수들의 어떠한 값에서 반응치가 최적화 될 것인가를 파악할 수 있으며, 독립변수들과 종속변수간의 함수 관계를 데이터로부터 추정하여 독립변수가 반응변수에 어떤 영향을 미치는 가를 예측하는 것이 가능하여, 변수들간의 최적의 실험조건을 찾아낼 수 있다. 본 발명에서는 미니탭(MiniTab) 14를 이용하여 반응표면분석법 중 중심합성 계획법(central composite designs)을 실행하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

*ctp: 콜라겐 펩티드, vitC: 비타민 C, elastin: 엘라스틴 단백질, HA: 히알루론산

상기 표 3의 실험 계획에 의해 실험을 수행하였으며, 실험 측정치를 이용하여 S/W 상에서 분석을 실시하였다. 그 결과를 도 1∼2 및 표 4에 나타내었다.

프로콜라겐 생성촉진을 위한 최적 농도 비율

성분	농 도 (ppm)
콜라겐 펩티드	25∼50	15∼25	0.1∼15
엘라스틴 단백질	0.1∼1	5∼10	10∼15
비타민 C	0.2	0.1	0.1
히알루론산	0.1∼1	1∼100	100∼500

상기 S/W 상의 분석결과, R²=71.8%이고 R²(adj)=60.8%로서, 비교적 높은 정도의 상관관계를 나타냄을 알 수 있었으며, 회귀 모형식도 유의함을 알 수 있었다. 또한, 도 1의 반응치조절기(response optimizer)를 통해 망대 특성에 있어 최대값을 갖는 최적 조건을 갖는 농도, 즉 12.5 ppm : 12.5 ppm : 0.1 ppm : 500 ppm 을 최적 조건으로 확인할 수 있었고, 도 2의 겹쳐진 등고선 플롯(overlaid contour plot)을 통해 최적의 농도 범위를 유추해 낼 수 있었으며, 그 결과를 상기 표 4에 기재한 것이다. 이상의 결과로부터 유효한 효과를 나타내기 위한 농도 비율은 다음과 같다:

콜라겐 펩티드: 엘라스틴 단백질: 비타민 C: 히알루론산 = 1: 0.0001 내지 150: 0.0001 내지 20: 0.0001 내지 50000.

[시험예 3] 피부주형을 이용한 광노화억제 실험

본 발명의 조성물이 광노화 증상에 미치는 영향을 조사하고자 무모생쥐 (hairless mouse)를 동물모델로 선정하여 실험하였다. 6-7주령의 암컷 무모생쥐 (SKH, HR-1)를 하기 표 5에 기재한 바와 같이 비교예 3(정상군), 비교예 4(UV 대조군), 실시예 1로 그룹 당 8마리씩으로 나누어 실험기간 동안 사육하였다.

구분	투여내용
비교예 3	정상군으로서 생리식염수를 투여하였다.
비교예 4	UV 대조군으로서 UV를 조사하고 생리식염수를 투여하였다.
실시예 1	UV를 조사하고 시험예2에서 도출된 최적처방을 생리식염수에 섞어 투여하였다.

비교예 3∼4는 0.5 ml의 생리식염수를 경구 투여하였고, 실시예 1은 상기 각 원료를 최적처방으로 혼합하고 고형분 기준으로 체중 kg당 500 mg의 파우더를 0.5 ml 식염수에 섞어 액체투여용 주사기를 이용하여 경구 투여하였다. 여기에서 각 성분은 생쥐를 기준으로 하여 콜라겐 펩티드는 666 mg/kg, 엘라스틴 단백질은 13 mg/kg, 비타민 C 및 히알루론산은 합쳐서 1 mg/kg에 해당한다. 투여기간은 총 5주로 주 5일 동안 동일한 시간에 투여하였다. 경구 투여 후 2주부터 5주까지 비교예 3∼4 및 실시예 1에 주 3회 태양광과 유사하게 UV를 조사하였다. 이때 실험기간 중 총 UV 조사량이 600 mJ/㎠이 되도록 하였다. 주름개선 효과의 객관적 판정을 위하여 부검 전 무모생쥐의 등쪽에서 실리콘 폴리머를 이용하여 피부 주형(replica)을 채취하였고, 피부의 주름 정도를 비교하기 위하여 피부 주름 측정장치(Skin Visiometer)를 이용하여 피부 표면의 이미지를 파일화하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에서 알 수 있듯이, 실시예 1의 무모생쥐의 피부 표면 주름의 굴곡이나 정도가 비교예 4의 무모생쥐에 비해 현저하게 완화되어 본 발명에 의한 조성물이 자외선에 의한 피부주름을 개선시키며, 따라서 광노화 현상을 억제하는데 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[시험예 4] 조직염색을 이용한 광노화억제 실험

상기 시험예 3의 비교예 3∼4 및 실시예 1의 무모생쥐를 이용, 병리조직학적 관찰을 위하여 면역조직 화학염색을 시행하였다. 생쥐의 등 부위의 피부를 떼어내어 10% 중성 포르말린에 고정한 후 피부조직 내 제1형 콜라겐의 발현 정도를 관찰하기 위하여 단클론(monoclonal) IgG1 항체를 이용한 면역조직 화학염색을 시행하였다.

도 4는 각 실험군의 피부조직에서 제1형 콜라겐을 면역조직 화학염색 한 것인데, 비교예 3(정상군)에 비해 비교예 4(UV 대조군)의 콜라겐은 적게 염색된 반면, 실시예 1은 표피/진피 경계층에 있는 콜라겐이 비교예 4에 비해 많이 염색되어 있음을 알 수 있다. 이러한 결과로 콜라겐 펩티드, 엘라스틴 단백질, 비타민 C 및 히알루론산을 혼합 복용할 때 피부 내 콜라겐 합성이 가장 많이 증가함을 알 수 있다.

그 외 일반적인 조직 상태 관찰과 표피층 두께 측정을 위하여 비교예 3∼4 및 실시예 1에 H&E(heamtoxylin & eosin) 염색을 실시하였다. 피부 표피층의 두께는 H&E 염색 슬라이드를 현미경상에서 100배 확대해서 읽어 조직당 무작위로 선정한 10군데의 두께를 측정하여 평균치를 계산하여 하기 표 6에 나타내었다.

구분	표피층 두께
비교예 3	5.23±0.31 mm (53.5%)
비교예 4	9.77±0.68 mm (100%)
실시예 1	7.56±0.75 mm (77.4%)

상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 4의 경우 9.77±0.68 mm이고, 실시예 1의 경우는 약 30% 감소된 7.56±0.75 mm을 나타내어, 콜라겐 펩티드 혼합물의 복용이 UV 조사로 인해 피부가 두꺼워지는 현상을 완화시킴을 알 수 있다.

[시험예 5] 간이임상실험

25∼45세의 성인여자 40명을 2군으로 나누고, 실험군은 하기 표 7의 조성으로 혼합한 조성물을 통상의 방법에 따라 1환당 4 g으로 하여 제조한 환을 1일 1정씩 30일간 복용시켰고, 대조군(플라시보군)은 하기 표 7에서 콜라겐 펩티드 대신 포도당 1.5 g을 첨가하여 환을 제조한 후 동일한 방법으로 복용시켰다. 시험 종료후의 피부 상태에 대한 설문조사를 실시하였으며, 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

성분	콜라겐 펩티드	포도당	엘라스틴	비타민 C	히알루론산	유당	글리세린	자일리톨
실험군	1		0.1	0.2	0.2	1.0	1	0.5
대조군		1.5	0.1	0.2	0.2	1.0	1	0.5

설문항목	실험군				대조군
설문항목	20대 (4명)	30대 (10명)	40대 (6명)	합계 (20명)	20대 (6명)	30대 (8명)	40대 (6명)	합계 (20명)
피부가 촉촉해짐	3	8	5	16(80%)	2	1	2	5(25%)
피부가 팽팽해짐	2	8	5	15(75%)	1	2	1	4(20%)
잔주름이 줄었음	2	8	4	14(70%)	1	3	2	6(30%)
화장이 잘받음	3	9	5	17(85%)	2	2	3	7(35%)
전반적으로 피부가 개선됨	3	7	4	14(70%)	2	3	1	6(30%)

상기 표 8에서 알 수 있는 바와 같이, 실험군은 대조군에 비해 피부의 촉촉한 감이나 탄력감을 느끼는 비율이 높았고, 잔주름이 줄었다고 느꼈으며 화장이 잘 받는다고 응답하는 사람이 많았다. 이를 통해 본 발명의 일실시예에 따른 조성물을 사용할 경우 피부 상태가 전반적으로 개선될 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 6] 생체잔존율 비교 실험

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물과 일반적인 콜라겐 및 콜라겐 펩티드 단독의 생체 잔존율 비교를 위하여, 비교예 1, 2 및 실시예 1에서의 각 시료를 각각 형광염료(fluorescence dye)와 연결하여 무모생쥐에 강제 경구 투여한 후, 생체 내 이미지 분석기(in vivo image analyzer)를 이용하여 시간에 따른 생체 잔존율을 측정하였으며, 그 결과는 도 5에 나타내었다.

도 5의 결과에서, 실시예 1의 시험예 2에서 도출된 최적조건으로 혼합한 조성물의 경우 동일 시간(9시간 경과 후)에서 생체 잔존율이 30% 이상 증대됨을 확인할 수 있었으며, 24시간 이후에도 증가된 잔존율을 시각적으로 확인할 수 있었다.

[시험예 7] 세포 이동 촉진 실험

사람 섬유아세포에 대한 상처치유능력, 즉 세포이동촉진(cell migration assay)을 비교하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다. 6-웰 플레이트에 섬유아세포를 웰당 1×10⁵개로 넣고 부착시킨 상태에서 상기의 실시예 1 및 비교예 1-2에서의 각 시료를 최종 농도가 각각 50 ppm이 되도록 처리하였다. 이때 대조군으로 별도의 시료를 첨가하지 않은 실험군을 마련하였다. 24시간 배양 후, 각 웰의 중간 부분을 마이크로피펫 팁으로 긁어 상처를 준 후, 회복되는 모습을 시간대별로 관찰하여 세포의 이동 정도를 상처의 평균간격을 현미경으로 측정 및 평가하여 표 9에 나타내었다.

구분	평균 간격 (average gap, %)
대조군	100 ± 3.4
비교예 1	83 ± 4.5
비교예 2	67 ± 7.5
실시예 1	58 ± 8.3

상기 표 9의 결과에서, 실시예 1의 시험예 2에서 도출된 최적조건으로 혼합한 조성물을 투여한 실험군에서 가장 뛰어난 회복 능력을 나타내었다.

본 발명이 제공하는 피부미용 개선용 조성물은 하기와 같이 여러 가지 제형으로 응용 가능하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1] 연질캅셀제

상기 시험예 2의 최적조건으로 혼합된 콜라겐 펩티드 혼합물 2000 mg, 대두추출물 50 mg, 대두유 180 mg, 홍삼추출물 50 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 혼합하고 통상의 방법에 따라 1캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.

[제형예 2] 정제

상기 시험예 2의 최적조건으로 혼합된 콜라겐 펩티드 혼합물 2000 mg, 대두추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다. 내용물의 최종 중량은 400 mg으로 하였다.

[제형예 3] 과립제

상기 시험예 2의 최적조건으로 혼합된 콜라겐 펩티드 혼합물 2000 mg, 대두추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.

[제형예 4] 드링크제

상기 시험예 2의 최적조건으로 혼합된 콜라겐 펩티드 혼합물 2000 mg, 대두추출물 50 mg, 포도당 10 g, 홍삼추출물 50 mg, 구연산 2 g 및 정제수 188 g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 100 ml로 하였다.

도 1은 반응최적화 도구를 통한 최적조건 도출 그림이다.

도 2는 중심합성 계획법을 실행한 결과를 나타내는 등고선도이다.

도 3은 비교예 2, 3 및 실시예 1의 피부 주형(replica)을 채취하여 비교한 사진이다.

도 4는 피부조직의 콜라겐 발현량을 면역조직 화학염색으로 나타낸 그림이다.

도 5는 비교예 1, 2와 실시예 1의 생체 잔존율을 확인한 결과이다.

Claims

콜라겐 펩티드에 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 함유하는 피부 상태 개선용 식품 조성물로서,

상기 콜라겐 펩티드는 콜라겐 트리펩티드를 콜라겐 펩티드 전체 중량에 대하여 15 내지 95 중량% 함유하고,

상기 피부 상태 개선은 피부내 콜라겐 합성 촉진, 피부 광노화 억제, 피부 보습 증가, 피부내 콜라겐 펩티드의 생체 잔존율 향상, 및 세포 손상 회복력 증가 중에서 선택되는 하나 이상을 통해 획득되는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 콜라겐 트리펩티드는 Gly-X-Y 형태이며, 상기 X 및 Y는 동일하거나 서로 다른 아미노산에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 콜라겐 펩티드는 조성물 총 중량에 대하여 1∼80 중량%의 양으로 함유됨을 특징으로 하는 식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 엘라스틴 단백질, 히알루론산 및 비타민 C의 각 함량은 조성물 총 중량에 대하여 엘라스틴 단백질은 1∼20 중량%, 히알루론산은 1∼10 중량%, 비타민 C는 1∼20 중량%임을 특징으로 하는 식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 펩티드: 엘라스틴 단백질: 비타민 C: 히알루론산을 1: 0.0001 내지 150: 0.0001 내지 20: 0.0001 내지 50000의 함량비로 함유함을 특징으로 하는 식품 조성물.
제1항 및 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 환, 음료, 티백차, 인스턴트 차, 드링크제, 과립, 정제 또는 캡슐의 형태로 제형화됨을 특징으로 하는 식품 조성물.
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