CN102131492B - 含胶原肽的皮肤美容用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种皮肤美容用口服组合物,该组合物具有减少皮肤皱纹和抑制皱纹形成的作用。该组合物含有胶原肽和选自由弹性蛋白、透明质酸和维生素C所组成的组中的至少一种。特别是,所述组合物含有最佳比例的胶原肽、弹性蛋白、透明质酸和维生素C,当被人体摄入后,不会引起副作用,能够最大化皮肤真皮层的胶原生物合成,表现出优异的体内保留率,具有抑制皮肤皱纹形成,保持或增加皮肤弹性和保湿皮肤的作用。因此,所述组合物可用作用于皮肤美容和预防皮肤老化的健康功能食品。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有胶原肽混合物的皮肤美容用组合物,更具体地,涉及一种含有胶原肽和选自由透明质酸、弹性蛋白和维生素C所组成的组中的至少一种,且因此具有卓越的改善皮肤状况的作用的皮肤美容用组合物。
背景技术
皮肤老化根据其起因可分为内因性老化和外因性老化。内因性老化是随着人的年龄增长,皮肤结构和生理功能减退的过程,这与环境变化无关。外因性老化是由于持续暴露于阳光等外部环境而引起的。尤其是,光线引起的皮肤老化被称为光老化。紫外线是皮肤老化的生理和形态学改变的主要因素。随着内因性皮肤老化的进行,皮肤变得干燥,同时细纹增加且变深。此外,由于表皮、真皮等的结构和功能的改变,皮肤失去许多弹性且看起来下垂。真皮变薄,而成人的胶原总量以每年1%的速度流失。同样,留下的胶原纤维逐渐变厚,同时其交联增加,因此胶原的可溶性、弹性等降低。另外,弹性纤维变厚且其交联也增加。另外,在真皮内的纤维母细胞(fibroblasts)的增殖活性降低,合成和分解胶原的能力也降低。胶原是与皮肤老化有关的皮肤组织的主要成分。胶原蛋白占除脂肪之外的皮肤全部干重的77%,占真皮纤维成分的90%。它负责维持皮肤强度、弹性和柔韧性。因此,胶原合成的促进和胶原分解的抑制成为针对皮肤美容和防止皮肤老化的主要问题,且需要开发能够抑制由紫外线引起的光老化,同时促进胶原合成的美容食品。
为此,对能够口服的胶原产品进行了不断的研究。随着技术的发展,开发了不同来源的胶原产品以及经过不同后处理过程的胶原材料。与此相关的,韩国专利公告号第2001-0075842号(2001.08.11)中公开了一种含有胶原的功能食品,且韩国专利公告号第2002-0085307(2002.11.16)公开了一种含大量胶原的皮肤美容用口服食品组合物。然而,由于胶原具有高分子量,胶原的消化和吸收、向靶器官如皮肤输送胶原、向靶器官输送有效量的胶原、胶原的生物相容性等问题上存在多种问题。因此,需要对胶原类(collagen-based)材料的实效(substantial effects)进行额外的研究。
发明内容
因此,本发明的发明人为了寻找显示出皮肤美容改善效果的胶原类制剂而进行了广泛的研究,结果发现含有高浓度Gly-X-Y型三肽的胶原肽具有皮肤美容改善效果。基于此发现,本发明的发明人实施了关于在皮肤细胞中促进原胶原生物合成的化合物的研究,结果发现,若向胶原肽中添加最佳量的弹性蛋白、透明质酸和维生素C,能够使皮肤美容改善效果最大化,由此完成了本发明。
因此,本发明的目的在于提供一种没有副作用的改善皮肤美容用组合物,该组合物通过促进原胶原的生物合成预防皮肤老化,同时抑制光老化,并通过增加皮肤弹性显示出卓越的皮肤状况改善效果。
为了达到上述目的,本发明提供了改善皮肤美容用组合物,该组合物含有胶原肽和选自由弹性蛋白、透明质酸和维生素C所组成的组中的至少一种。
以胶原肽的总量为基准,所述胶原肽优选含有含量为15重量%或更多的胶原三肽。
根据本发明的改善皮肤美容用组合物能够通过促进胶原合成预防皮肤老化并抑制光老化,同时也通过促进伤口愈合和提高胶原肽的体内保留率(invivo retention rate)而显示出卓越的皮肤状况改善效果。
附图说明
图1显示了使用响应最佳化工具(response optimization tool)得出的最佳条件;
图2是显示实施中心组合设计结果的等值线图(contour diagram);
图3是显示比较例2和3以及实施例1的取样于动物的皮肤复制品(replicas)之间差别的一组图片;
图4表明了实施免疫组化染色来检测皮肤组织中的胶原表达的结果;
图5表明了比较例1和2以及实施例1的体内保留率的分析结果。
具体实施方式
根据本发明的皮肤美容用组合物含有胶原肽和选自由弹性蛋白、透明质酸和维生素C所组成的组中的至少一种。
当分析上述成分的功能时,为了在给定的费用、时间和预算内最大限度地获得信息,需要综合的实验方法和分析方法。为此,在本发明中使用了实验设计(DOE,Design of Experiments)。DOE是系统设计、执行并统计分析科学研究的方法论。尤其,通过DOE设计一系列实验步骤并执行,其中,可控制的输入值水平逐渐的变化,以确定特定步骤中的输出值变化的原因。通过此,使得建立起用于确认实验条件的实验策略成为可能,在所述实验条件下,能够有效地获得最多的信息,从而满足实验目的并获得充足的结果。所述DOE能够校正系统方法,且能够定义及评价实验方法和结果值之间的关系。另外,DOE能够知道少数极重要的参数的变量(variance),提供针对响应参数的少数极重要的效果的测定值,相比单次单因子(One-Factor-At-a-Time)标定得到有效测量值和高品质数据,允许不确定性的测定,最少化检查试验(test trials),且允许控制干扰变量(nuisancevariables)。这种DOE法包括部分因子析因设计(fractional factorial design)、全因子析因设计、响应曲面法(response surface methodology)、混料设计(mixture design)、田口设计等等。
本发明中用作活性成分的胶原肽具有500-1000Da的分子量,且以胶原肽的总重量为基准,该胶原肽含有含量为15重量%或更多,如15-95%的Gly-X-Y型三肽,其中,每个X和Y可以是任何氨基酸。此外,X和Y可以是相同或不同的氨基酸,且也可以选自所有可能的氨基酸组合。即,X和Y可以选自天然氨基酸,包括丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、羟脯氨酸(Hyp)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、谷酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、天冬酰胺(Asn)、酪氨酸(Tyr)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)。尤其,本发明中使用的三肽可以选自,但不限于由Gly-Pro-Hyp,Gly-Pro-Ala,Aly-Ala-Hyp,Gly-Leu-Hyp,Gly-Glu-Lys,Gly-Pro-Lys,Gly-Glu-Hyp,Gly-Phe-Hyp,Gly-Ser-Hyp,Gly-Gln-Hyp,Gly-Glu-Arg,和Gly-Pro-Arg所组成的组。
具体地,本发明所用的胶原肽可以通过下述方法制备。当利用酶,例如半胱氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶或胶原酶,降解胶原或明胶成分时,可制备出含有5重量%或更多的三肽和二肽的胶原肽。为了增加由此制备的肽混合物的三肽含量,将含Gly-X-Y型三肽的肽混合物与碱性阴离子交换树脂接触,三肽Gly-X-Y被吸附在离子交换树脂上,然后从吸附了三肽的离子交换树脂上将三肽洗脱下来,从而制备具有高三肽含量的纯化肽。选择性地,可通过将含有三肽Gly-X-Y的肽混合物与非极性吸附剂接触,使肽混合物中含有的疏水性肽部分吸附到非极性吸附剂上,然后将没有吸附到非极性吸附剂上的亲水性三肽部分回收,从而制备具有更高亲水性三肽含量的纯化肽。
在本发明中,胶原肽的含量占组合物总重量的1-80重量%。如果组合物中的胶原肽的含量少于1重量%,将难以获得理想效果;而如果含量大于80重量%,组合物将难以剂型化。
同样,本发明使用的弹性蛋白是通过水解正鲣(Euthynus pelamis)的主动脉球(aortic bulb)而获得,且特征在于含有弹性蛋白特有的交联氨基酸,锁链赖氨素和异锁链赖氨素。
本发明所使用的透明质酸是通过链球菌发酵大量生产的,以使透明质酸的含量为90-100%。这在化妆品和医药领域广泛使用,近来还在保健食品等多种领域得到应用。
基于组合物的总重量,本发明组合物中的胶原肽、弹性蛋白、透明质酸和维生素C的含量分别为1-80重量%,1-20重量%,1-10重量%和1-20重量%。
根据本发明的组合物能够促进皮肤的胶原合成,抑制皮肤光老化,增加皮肤湿润度,促进伤口愈合且增加胶原肽的体内保留率,从而改善皮肤状况。
同样,胶原肽∶弹性蛋白∶维生素C∶透明质酸的含量比优选为1∶0.0001-150∶0.0001-20∶0.0001-50000。
本发明的改善皮肤美容用组合物可以制备成各种不同剂型,包括丸剂、茶包、速溶茶、饮料、颗粒剂、片剂和胶囊剂,能够应用于包括保健食品和医疗药物等多种领域。
下面,将参考附图、实施例以及试验实施例进一步对本发明进行更详细的描述。这些实施例和试验实施例仅用于促进对本发明的理解,本发明的范围并不由此限定。本领域技术人员应当理解的是在不脱离随附的本发明权利要求的思想和范围的条件下,可以进行各种常规的众所周知的变形,替代和插入。
实验实施例1:生成胶原能力的测定
1型原胶原的生成能力通过成纤维细胞测定,如下表1所示。
[表1]
组别 | 处理 |
对照组 | 在正常组中,细胞用生理盐水处理 |
比较例1 | 细胞用溶解有普通胶原材料的生理盐水处理 |
比较例2 | 细胞用溶解有胶原肽(购自Jellice公司)的生理盐水处理 |
为了比较各组之间的产原胶原能力,将成纤维细胞以5×104细胞/孔的密度加入到48孔板中并使其附着在每个孔上。在此状态下,比较例1和2的胶原各自以最终浓度为0.1ppm、1ppm和10ppm加入到细胞中。制备了没有用任何胶原样品处理的组作为对照组。将细胞培养48小时之后,培养液上清液中的1型原胶原的产量利用ELISA试剂盒(Takara MK101)来测定。将对照组的结果作为100%,测定结果表达为与对照组的相对值,如下表2所示。
[表2]
原胶原的产量
如上表2所示,比较例2中原胶原的产量与对照组相比增加了。尤其,比较例2中以适当浓度(1-10ppm)的胶原处理的组中的原胶原产量相比对照组显著增加。然而,在比较例1中,没有观察到促进胶原产量的效果,且在比较例1中的用10ppm胶原处理的组中,胶原产量没有增加反而减少。
因此,发现含有大量的具有确认效果的Gly-X-Y三肽的胶原肽的有效浓度需要被确定,且在制备组合物时,要考虑到胶原肽和其他候选原料(candidate material)的协同作用。为此,进行了如下的最佳化实验。
实验实施例2:利用试验设计法的最佳化实验
为了最佳化在实验实施例1中确认的胶原肽成分和其他候选原料(弹性蛋白、透明质酸和维生素C)的原胶原生成能力,使用了响应曲面法(RSM)。当使用响应曲面法时,能够确定在何值时自变量能够最佳化,且能够根据数据推算出自变量和因变量之间的函数关系,从而预测自变量对响应变量(response variables)产生的影响。因此,能够找到变量之间的最佳实验条件。在本发明中,利用MiniTab 14进行了作为响应曲面法的中心组合设计法,且结果在下表3中示出。
[表3]
通过中心组合设计法的设计及其测定值(Y)
*ctp:胶原肽,vitC:维生素C,elastin:弹性蛋白,和HA:透明质酸。
通过中心组合设计法进行的实验如上表3中所示,实验结果利用软件进行了分析。分析结果如图1、图2和下表4所示。
[表4]
促进原胶原生成的最佳浓度比
从软件分析结果能够看出,R2和R2(adj)为71.8%和60.8%,说明R2和R2(adj)之间存在相对高程度的相关性。同样,可以看到回归模型也很显著。通过图1的响应优化器(response optimizer),可以看出,在值大性优特性(lager-the-better)中显示最高值的具有最佳条件的浓度为12.5ppm∶12.5ppm∶0.1ppm∶500ppm。
同样,通过图2的重叠等值线图(overlaid contour plot),能够推断出最佳浓度范围,且结果如下表4所示。从上述结果确定的有效浓度比例如下:胶原肽∶弹性蛋白∶维生素C∶透明质酸=1∶0.0001-150∶0.0001-20∶0.0001-50000。
实验实施例3:利用皮肤复制品的光老化抑制实验
为了检验本发明组合物对光老化的抑制作用,利用无毛小鼠作为动物模型进行了实验。6-7周龄的雌性无毛小鼠(SKH,HR-1)分成如下表5所示的三个组。比较例3(正常组)、比较例4(UV对照组)、和实施例1,每个组有8只小鼠。在实验期间饲养这些小鼠。
[表5]
在比较例3和4中,小鼠口服施用0.5ml生理盐水,在实施例1中,将原料以最佳比例混合,且将混合物以500mg/kg体重(以固含量为准)添加到0.5ml生理盐水中,并利用注射器向小鼠口服施用。在此,所述混合物含有666mg/kg胶原肽、13mg/kg弹性蛋白和1mg/kg维生素C及透明质酸。所述混合物在同一时间施用,每周5天,共施用超过5周。口服施用2-5周之后,比较例3和4及实施例1中的小鼠照射与太阳光相似的紫外光,每周照射3次。实验期间照射的紫外光的总量为600mJ/cm2。为了客观地评价皱纹减少效果,在活组织检查之前在无毛小鼠的背上利用硅酮聚合物取样了复制品,且为了比较各组之间的皮肤皱纹的程度,利用皮肤皱纹测定仪(skinvisiometer)对皮肤表面成像,结果显示在图3中。
从图3中可以看出,与比较例4中的无毛小鼠相比,实施例1中的无毛小鼠皮肤表面皱纹的深度和程度明显减少。这表明本发明的组合物对紫外光引起的皮肤皱纹具有减少效果,由此抑制光老化。
实验实施例4:利用组织染色的光老化抑制实验
为了对比较例3和4及实施例1的无毛小鼠进行组织病理学观察,进行了免疫组化染色。从小鼠背部取样皮肤并固定在10%的中性福尔马林中。然后,为了观察皮肤组织中1型胶原的表达程度,利用IgG1单克隆抗体进行了免疫组化染色。
图4示出了每个实验组的皮肤组织中的1型胶原的免疫组化染色结果。从中可以看出,比较例4中(UV对照组)的胶原与比较例3(正常组)相比被染色的少。然而,实施例1中小鼠的表皮/真皮边界层的胶原与比较例4相比被染色的多。由此可知,组合施用胶原肽、弹性蛋白、维生素C和透明质酸时,皮肤中的胶原合成最大化。
此外,为了观察普通组织的状态和测定表皮层的厚度,对比较例3和4及实施例1中的小鼠进行了H&E(苏木和曙红)染色。为了测定皮肤表皮层的厚度,H&E染色切片在100x放大率的显微镜下观察,随机选择10处的厚度进行测量,并计算平均值。测量结果显示在下表6。
[表6]
组别 | 皮肤表皮层的厚度 |
比较例3 | 5.23±0.31mm(53.5%) |
比较例4 | 9.77±0.68mm(100%) |
实施例1 | 7.56±0.75mm(77.4%) |
从上表6中可知,比较例4的表皮层厚度为9.77±0.68mm,实施例1的表皮层厚度为7.56±0.75mm,与比较例4相比减少了30%。这表明本发明的胶原肽混合物的施用抑制由紫外线照射引起的皮肤变厚的现象。
实验实施例5:迷你临床试验
将25-45岁的40名成年女性分为两组:实验组和对照组。实验组施用4g丸剂,所述丸剂通过混合下表7中所示的组分制得,每天施用一次,施用30天。而对照组(安慰剂组)通过与实验组相同的方法施用丸剂,所述丸剂通过加入下表7中的1.5g的葡萄糖代替胶原肽制得。
实验完成后,进行了对皮肤状况的问卷调查,结果如表8所示。
[表7]
成分 | 胶原肽 | 葡萄糖 | 弹性蛋白 | 维生素C | 透明质酸 | 乳糖 | 甘油 | 木糖醇 |
实验组 | 1 | - | 0.1 | 0.2 | 0.2 | 1.0 | 1 | 0.5 |
对照组 | - | 1.5 | 0.1 | 0.2 | 0.2 | 1.0 | 1 | 0.5 |
[表8]
如上表8所示,在实验组中,受试者中感到皮肤湿润或有弹性的比例高于对照组,且回答细纹减少和面部上妆良好的受试者数目大于对照组。这表明使用根据本发明一种实施方式的组合物,普遍地改善了皮肤状况。
实验实施例6:体内保留率的实验
为了比较根据本发明一种实施方式的组合物,单独的普通胶原和胶原肽的体内保留率,比较例1和2及实施例1的每种原料与荧光染料连接,并给无毛小鼠口服施用。然后,利用体内图像分析仪测定各个原料随时间的体内保留率,且测量结果如图5所示。
如图5的结果所示,在同一时间点(经过9小时后),实施例1中最佳组合物的体内保留率增加30%或更多,且实施例1即使在24小时后还显示出体内保留率的增加。
实验实施例7:细胞移动促进实验
为了比较各组之间的伤口愈合能力,用成纤维细胞进行了细胞移动测试。具体地,成纤维细胞以1×105细胞/孔的密度添加到6孔板中并使其附着到每个孔上。在此状态下,实施例1、比较例1和2各自以最终浓度为50ppm添加到细胞中。准备了没有用任何样品进行处理的组作为对照组。在细胞培养24小时后,每个孔的中间部分用微量移液器吸头划伤后观察伤口恢复随时间变化的情况,并评价基于伤口平均间隔的细胞移动程度。评价结果如下表9所示。
[表9]
组别 | 平均间隔(%) |
对照组 | 100±3.4 |
比较例1 | 83±4.5 |
比较例2 | 67±7.5 |
实施例1 | 58±8.3 |
由上表9的结果可知,施用实施例的组合物的组显示出最显著的伤口愈和能力。
根据本发明的皮肤美容用组合物可制备成如下的各种剂型,但是本发明的范围并不限于此。
制剂例1:软胶囊
实施例2的胶原肽混合物2000mg、大豆提取物50mg、大豆油180mg、红参提取物50mg、棕榈油2mg、氢化棕榈油8mg、蜂蜡4mg和卵磷脂6mg互相混合,每粒胶囊分装400mg所述混合物,从而制备了软胶囊。
制剂例2:片剂
实施例2的胶原肽混合物2000mg、大豆提取物50mg、葡萄糖100mg、红参提取物50mg、淀粉96mg和硬脂酸镁4mg互相混合,在此中加入40mg的30%乙醇制成颗粒。上述颗粒在60℃干燥且用压片机压成片剂。所述片剂最终的重量为400mg。
制剂例3:颗粒剂
实施例2的胶原肽混合物2000mg、大豆提取物50mg、葡萄糖100mg、红参提取物50mg和淀粉600mg互相混合,在此中加入100mg的30%乙醇制成颗粒。上述颗粒在60℃干燥并装袋。所述袋中内容物的最终重量为1g。
制剂例4:饮料
胶原肽混合物2000mg、大豆提取物50mg、葡萄糖10g、红参提取物50mg、柠檬酸2g及纯净水188g互相混合并装瓶。所述瓶中内容物的最终重量为100ml。
Claims (10)
1.一种皮肤美容用组合物,其特征在于,该组合物含有胶原肽、弹性蛋白、透明质酸和维生素C,以所述胶原肽的总量为基准,所述胶原肽含有含量为15-95重量%或更多的胶原三肽,所述胶原肽是Gly-X-Y型,且X和Y选自相同或不同的氨基酸,以所述组合物的总量为基准,所述胶原肽的含量为1-80重量%,所述弹性蛋白、透明质酸和维生素C的含量分别为1-20重量%、1-10重量%和1-20重量%。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中,所述组合物的剂型为丸剂、茶包、饮料、颗粒、片剂或胶囊。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中,所述组合物的剂型为速溶茶。
4.一种促进皮肤胶原生成的组合物,其特征在于,该组合物含有权利要求1-3中任意一项所述的组合物。
5.一种抗老化组合物,其特征在于,该组合物含有权利要求1-3中任意一项所述的组合物。
6.一种增加皮肤湿润度的组合物,其特征在于,该组合物含有权利要求1-3中任意一项所述的组合物。
7.一种权利要求1-3中任意一项所述的组合物用于非治疗目的的皮肤美容的应用。
8.一种权利要求1-3中任意一项所述的组合物用于非治疗目的的促进皮肤胶原生成的应用。
9.一种权利要求1-3中任意一项所述的组合物用于非治疗目的的抗皮肤老化的应用。
10.一种权利要求1-3中任意一项所述的组合物用于非治疗目的的增加皮肤湿润度的应用。
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