CN104382943A - 鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及鱼鳞提取物的新用途，即鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途，特别是鱼鳞胶原蛋白或鱼鳞胶原蛋白肽在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途。

Description

鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途

技术领域

本发明涉及鱼鳞提取物的新用途，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽的新用途，即在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途。

背景技术

银屑病是一种多因素诱导、多基因遗传的慢性复发性的炎症性皮肤病，它严重影响患者的生活质量。据介绍，其治疗原则为控制病情，延缓发展，减轻症状，减少复发。临床上，银屑病的治疗药物和方法分为局部治疗和系统治疗。局部治疗包括使用糖皮质激素、地蒽酚等药物或光化学疗法；系统治疗包括使用口服维甲酸、甲氨蝶呤、环孢素及生物制剂。影响治疗方法的选择因素包括年龄、银屑病的类型、皮损波及的部位及程度、过去的治疗和合并的疾病。生物制剂和传统治疗方法的原理不同，两者可以协同作用。

银屑病诊断依据：

1.原发损害为粟粒至绿豆大小淡红色丘疹，上覆多层银白色鳞屑，刮除后可见薄膜和点状出血现象。病程中皮损形态可有点滴状到钱币状再到地图状演变。边界清，常伴程度不等的瘙痒。

2.皮损好发于头皮和四肢伸侧。头发上损害常致毛发成簇状外观，但不伴脱发。

3.少数病例可累及睑缘、口唇、颊粘膜、龟头及包皮。

4.甲板常呈点状凹陷，亦可变黄、增厚及指甲剥离。

5.一般为冬重夏轻，常反复发作。

6.组织病理有辅助诊断价值，示表皮角化不全，可见微脓疡形成，棘层肥厚，钉突规则地下伸，真皮乳头呈棒状，内有弯曲而扩张的毛细血管。

7.严重程度的分类：在给银屑病患者制订合理的治疗方案前，临床医师需要对银屑病的严重程度进行评估。一个简单界定银屑病严重程度的方法称为十分规则：即体表受累面积(BSA)>10％(10个手掌的面积)或银屑病皮损面积>10％即为重度银屑病。BSA<3％为轻度，3％～10％为中度。

治疗药物与方案选择：

1.局部外用药：依据病情选择润肤剂、角质促成剂、角质松解剂、维生素D3衍生物、糖皮质激素、维A酸类制剂、地蒽酚、焦油类等各种外用制剂。选择用药及用药时间长短应视病情而定。中/强效的糖皮质激素、卡泊三醇、他扎罗汀可作为局部治疗的一线药物。

2.物理治疗：可选用长波紫外线(UVA)、光化学疗法(PUVA)、宽谱UVB、窄谱UVB、激光、光动力学等物理治疗手段。

3.系统用药：维A酸类药物、免疫抑制剂、生物制剂、抗感染药物、免疫调节剂、辨证施治。

4.联合疗法：联合疗法是指两种或两种以上的方法联用，局部治疗经常与光疗或系统治疗联用，从而使各种治疗的不良反应降至最低。光疗也可以与多种生物制剂联合治疗银屑病，提高治疗的有效率。

5.序贯疗法是指先使用一种强效药物清除皮损，然后改用一种更安全的、弱效的药物来维持治疗。

以上治疗方法可单独使用或联合应用，应用时针对各种临床类型的银屑病及不同类型的银屑病有不同的使用禁忌。

鱼鳞含有丰富的蛋白质、脂肪、多种不饱和脂肪酸和多种维生素，还有铁、锌、钙等多种人体必需的微量元素，以及胶质。鱼鳞中的不饱和脂肪酸和可以在血液中以结合蛋白的形式帮助传递及乳化脂肪，减少胆固醇在血管壁上沉积，具有防止动脉硬化、预防高血压及心脏病等多种作用。鱼鳞中还含有大量的胶原蛋白，鱼鳞胶原蛋白与其他胶原蛋白比，其蛋白质易分解，容易被消化、吸收。人们服用后效果比较明显，能增加血液中的氨基酸，同时又能促进胶原蛋白生成。

胶原蛋白是细胞外基质的一种结构蛋白质，英文名“collagen”，由希腊文演化而来，多糖蛋白，呈白色，含有少量的半乳糖和葡萄糖，是细胞外基质(ECM)的主要成分，约占胶原纤维固体物的85％。胶原蛋白是动物体中普遍存在的一种大分子蛋白，主要存在于动物的结缔组织(骨、软骨、皮肤、腱、韧等)中，占哺乳动物体内总蛋白的25％～30％，相当于体重的6％。在许多海洋生物，如鱼类的皮，蛋白质含量甚至高达80％以上。对机体和脏器起着支持、保护、结合以及形成界隔等作用。除了生物力学方面的以外，还具有诸如信号转导、生长因子与细胞因子的运输等功能。

胶原蛋白中含有大量的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸和羟赖氨酸、丙氨酸和谷氨酸，不溶于稀酸稀碱溶液，不易被一般的蛋白酶水解，不易被人体消化吸收。羟脯氨酸和羟赖氨酸是其他蛋白质所没有的，羟赖氨酸残基是胶原分子中糖苷化所必需的，它和赖氨酸与胶原分子的交联及纤维的形成密切相关，而羟脯氨酸的羟基(经脯氨酸羟化酶的羟基化作用后形成)对于氢键的形成以及三股螺旋结构的稳定都是必不可少的，所以胶原蛋白的性质稳定。而色氨酸、酪氨酸及蛋氨酸等必需氨基酸含量低，因此胶原蛋白属于不完全蛋白质。

迄今为止，已发现19种以上氨基酸序列不同的胶原蛋白分子，这些胶原蛋白分子在氨基酸序列上、形态结构、物理化学性质和生理功能上有很大的不同。

蛋白质是生物体中最主要的组成物质，包括覆盖人体的皮肤、毛发都是由蛋白质组成。因此，蛋白质几乎主导着生物界全部的生命活动，如细胞分裂、新陈代谢、传递信息，以及对疾病的抵抗能力等，都是依赖蛋白质来完成的。因此，在化妆品中，以蛋白质作为活性物质。美国CTFA化妆品原料手册录用的天然物质和《功能性化妆品原料》中，选用的天然物质中有胶原蛋白或其水解产物(羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸)。胶原蛋白具有美白作用，这是由于黑色素主要是醌型聚合物，胶原蛋白中含有酪氨酸残基，由于化学结构的相似性，化妆品中添加的胶原蛋白的酪氨酸残基与皮肤中的酪氨酸竞争并与酪氨酸酶的活性中心结合，从而抑制酪氨酸酶催化氨酸转化为多巴醌，阻止皮肤中黑色素的形成，达到美白作用。

在水产动物与哺乳动物中，胶原蛋白的种类和含量有较大差异。鱼鳞中含有丰富的蛋白质、卵磷脂和各种矿物质，其中蛋白质占鱼鳞总重的70％。实验证明：鱼鳞胶原蛋白水解液具有抗氧化和降低血压、降低血液总胆固醇、抗衰老等功效。对鱼鳞肽方面的研究报道有以鱼鳞为原料，生产具有降血糖和血脂作用的功能肽；还有人以鱼鳞或其它水产废弃物为原料，生产具有清除体内自由基和具有ACE抑制活性的寡肽的方法。

胶原蛋白肽是从胶原蛋白中提取得到的产物，胶原蛋白肽的平均分子量在1.000Da左右，相对胶原蛋白复杂的三级超螺旋结构，胶原蛋白肽的线状结构使其消化吸收率高达80％(胶原蛋白为≤1％)。胶原蛋白肽是胶原蛋白的水解产物。是胶原蛋白的最小单元，是一种在N端带有甘氨酸的高纯度肽，与普通胶原蛋白2.000～3.000Da的分子量相比，胶原蛋白肽无需分解即可被人体吸收和利用。

由于银屑病目前理解是一种终生疾病，目前尚无有效的治疗药物。而临床治疗主要使用免疫抑制剂，但是这些免疫抑制剂疗效大多不理想且毒副作用大。在现有公开文献中，胶原蛋白常见用于美容增白，至今未见使用鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽对银屑病进行治疗的报道。

发明内容

本发明的目的是提供鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途；

本发明的另一目的是提供鱼鳞胶原蛋白在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途；

本发明的另一目的是提供鱼鳞胶原蛋白肽在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途；

本发明的另一目的是提供鱼鳞提取物的制备方法；

本发明的另一目的是提供鱼鳞胶原蛋白的制备方法；

本发明的另一目的是提供鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法。

本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：

本发明鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽来自于鱼鳞。

鱼鳞(scale)是大多数鱼类体表的皮肤衍生物。鱼鳞占鱼体重2％～3％。鳞片外表上看是透明的，像花瓣，且边缘呈微小的卷曲，白色光泽，略带有鱼腥味，质地坚且柔软。鱼鳞含水量为16.4％～17.8％，平均为17.5％。

发明人在研究银屑病的治疗过程中发现，鱼鳞提取物，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽可明显改善豚鼠实验性银屑病。鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽治疗银屑病的临床研究和药效学研究结果显示：鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽不但能够治疗银屑病，在与现有西药疗法外搽糖皮质激素卡泊三醇相比，发现鱼鳞提取物，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽不但治疗银屑病的效果优于现有技术，还能使豚鼠的皮肤光滑，不干燥，起到保护皮肤的功效。

在此基础上，本发明人通过对鱼鳞提取物，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽使用量有目的地控制以后，使其用于治疗和/或预防银屑病的效果更显著。

鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽制备用于治疗和/或预防银屑病的药物，临床使用时每日口服量折合蛋白质1600-10000mg时效果较佳；

优选地，每日口服量折合蛋白质3000-6000mg时效果最佳。

银屑病发病原因复杂，现在研究一般认为，银屑病的发病涉及的主要因素有角质形成细胞(KC细胞)、树突状细胞(DC细胞)、肥大细胞(MC细胞)、巨噬细胞及T细胞功能的改变。这些细胞及其相关细胞因子、趋化因子间相互作用进而介导一系列的炎症反应、表皮增殖、角化不全、棘层肥厚、及血管改变等。随着对银屑病的发生和持续过程中涉及的细胞因子及细胞间信号分子的作用机制研究不断深入，这些重要的分子间相互作用及细胞因子提供了许多治疗靶点，不少针对这些靶点而研发的银屑病治疗药物已被批准上市或正在进行临床试验。

鱼鳞提取物，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽在治疗银屑病时取得的显著疗效，初步估计与下列机制有关：鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽与正常人体皮肤中的蛋白质含量比例较为接近，其所含有的特定蛋白质或某些激素能调控细胞内DNA和角蛋白合成，抑制细胞增殖，诱导细胞正常分化，调节免疫细胞内细胞因子释放，诱导KC产生具有抗炎或免疫调节作用的介质，抑制炎症细胞因子的产生，从而产生治疗银屑病的抗炎抗增生作用。

可以这样说，鱼鳞提取物，特别是鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽，与正常人体皮肤中的蛋白质比例最为接近，鱼鳞胶原蛋白在治疗过程中其作用是平衡调节，调节细胞内DNA和角蛋白合成，不单纯是竞争抑制，所以才能既有美白的功效，又在治疗银屑病中显示出惊喜的效果。

本发明专利临床应用的安全性较高，在治疗银屑病的药物治疗中不失为一种好药，其拓宽了治疗银屑病的新方法，同时为患者解决了现有技术治疗银屑病后遗留下的不良反应。

因此，申请人提供鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽能够用于治疗银屑病药物方面的新用途。

本发明公开了鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物的应用，所述鱼鳞提取物的制备包括以下步骤：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量4-12倍的水，提取2-4次，提取温度为90-120℃，合并提取液，滤过，滤液浓缩，得鱼鳞提取物。

本发明还公开了鱼鳞胶原蛋白在制备治疗和/或预防银屑病药物的应用，所述鱼鳞胶原蛋白的制备包括以下步骤：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量5-10倍的酸浸泡5-120分钟，滤过，鱼鳞用清水漂洗后粉碎，加鱼鳞重量3-10倍的水加热提取1-8小时，提取1-3次，滤过，合并滤液，干燥，得鱼鳞胶原蛋白。

本发明还公开了鱼鳞胶原蛋白肽在制备治疗和/或预防银屑病药物的应用，所述鱼鳞胶原蛋白肽的制备包括以下步骤：

取鱼鳞提取物或鱼鳞胶原蛋白，在50-60℃时加蛋白酶水解20-60分钟后，加热灭活，取上清液，浓缩，干燥，得鱼鳞胶原蛋白肽。

本发明公开的鱼鳞胶原蛋白肽还可以由以下步骤制备而得：

选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量5-10倍的酸浸泡5-120分钟，滤过，用清水漂洗至pH为5-6；加浓度为1-5％的NaCl溶液浸泡1-10小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的8-12倍；冷至3-10℃，加入蛋白酶，水解2-6小时，水解结束后，加热20-40分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

上述制备过程中所述加酸浸泡时，选用0.5-2％的盐酸、冰醋酸、乳酸、醋酸、柠檬酸或苹果酸之中任何一种。

上述制备过程中所述蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶或碱性蛋白酶之中任何一种。

上述制备过程中所述蛋白酶还可以为胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶之中任何一种或两种以上的组合。

上述制备过程中干燥方法，可以使用直接干燥、冷冻干燥或喷雾干燥；还可以加辅料后，使用沸腾干燥；还可以使用制粒干燥等常规干燥方法。

本发明提供的鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽能够用于治疗银屑病药物方面的新用途具有以下优点：

1、鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽从鱼类组织鱼鳞中提取而得，安全无毒，可长期服用。

2、使用鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽在治疗豚鼠实验性银屑病后，双侧耳廓皮肤外观变化、皮肤颜色转为正常，表面光滑，毛发脱落现象有所改善，扩张的毛细血管得到修复，各种症状明显减轻或消失；组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01),证明豚鼠银屑病的模型建立成功。而治疗组组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与造模后观察组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01),且治疗组各项评分指标均优于对照组，有显著性差异(P<0.05)。总体治疗效果显示：本发明可改善豚鼠耳部银屑病样皮损症状及其病理特征，治疗效果最优为鱼鳞胶原蛋白肽，鱼鳞胶原蛋白次之，鱼鳞提取物再次之，但三者均显著性优于对照组。

3、本发明制备的鱼鳞提取物、鱼鳞胶原蛋白及鱼鳞胶原蛋白肽工艺简单易行，可用于大生产推广。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液的体积比。

实施例1：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量4倍量的水，提取4次，前两次提取温度为100℃，后两次提取温度为120℃，合并4次提取液，滤过，滤液浓缩，得鱼鳞提取物。

实施例2：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量5倍的0.5％的盐酸浸泡5分钟，滤过，鱼鳞用清水漂洗后粉碎，加鱼鳞重量10倍的水加热提取1小时，提取3次，滤过，合并滤液，干燥，得鱼鳞胶原蛋白。

实施例3：

选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量5倍的2％的柠檬酸浸泡5分钟，滤过，用清水漂洗至pH为6；加浓度为1％的NaCl溶液浸泡10小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的12倍；冷至10℃，加入胰蛋白酶，水解6小时，水解结束后，加热40分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

实施例4：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量12倍量的水，提取2次，提取温度为90℃，合并2次提取液，滤过，滤液浓缩，得鱼鳞提取物。

实施例5：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量10倍的2％的乳酸浸泡120分钟，滤过，鱼鳞用清水漂洗后粉碎，加鱼鳞重量3倍的水加热提取8小时，提取1次，滤过，滤液，干燥，得鱼鳞胶原蛋白。

实施例6：

选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量10倍的0.5％的冰醋酸酸浸泡120分钟，滤过，用清水漂洗至pH为5；加浓度为5％的NaCl溶液浸泡1小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的8倍；冷至3℃，加入组织蛋白酶，水解2小时，水解结束后，加热20分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

实施例7：

选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量5倍的0.5％的盐酸浸泡5分钟，滤过，鱼鳞用清水漂洗后粉碎，加鱼鳞重量10倍的水加热提取1小时，提取3次，滤过，合并滤液，干燥，得鱼鳞胶原蛋白，在50℃时加木瓜蛋白酶水解60分钟后，加热灭活，取上清液，浓缩，干燥，得鱼鳞胶原蛋白肽。

实施例8：

选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量8倍的2％的苹果酸浸泡20分钟，滤过，用清水漂洗至pH为5；加浓度为2％的NaCl溶液浸泡8小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的10倍；冷至5℃，加入枯草杆菌蛋白酶，水解4小时，水解结束后，加热30分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

实施例9：

选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量10倍的1％的醋酸浸泡100分钟，滤过，用清水漂洗至pH为6；加浓度为4％的NaCl溶液浸泡3小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的12倍；冷至8℃，加入胃蛋白酶，水解5小时，水解结束后，加热40分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

实施例10：

取实施例1中制得的鱼鳞提取物，加入0.3％中性蛋白酶保温水解30分钟，水解结束后，加热30分钟灭活，得水解液，水解液浓缩后干燥，得鱼鳞胶原蛋白肽。

药效实验

实验例1对豚鼠实验性银屑病治疗作用

1实验材料

1.1实验动物：健康豚鼠140只，初始体质量250-300g，由广西中医药大学动物实验中心提供。

1.2实验药物：

鱼鳞提取物：本发明实施例1制备所得样品；

鱼鳞胶原蛋白：本发明实施例2制备所得样品；

鱼鳞胶原蛋白肽：本发明实施例3制备所得样品；

甲醛溶液：配成10％的浓度备用；

乙醇：配成60％、70％、80％、90％、100％的浓度备用；

二甲苯；苏木精；伊红；卡泊三醇；

5％普萘洛尔软膏：取盐酸普萘洛尔5g溶于适量50％的乙醇液中，加人Azone－丙二醇5mL作为复合促进剂，加入酮K(PVPK)305g为成膜材料，最后加入50％的乙醇液使成100mL，搅匀即得。

2实验方法

2.1动物分组和造模

豚鼠适应性饲养3周后，随机取出20只做空白组，余120只以5％普萘洛尔软膏均匀涂于豚鼠耳背，1cm²用药0.3g，用玻璃棒涂匀，每日3次，厚度1.0mm。至第3周末，随机处死2O只做耳组织病理学检查，如有银屑病样病理改变，则提示造模成功，并将其归入模型组。将其余100只模型鼠随机分为5个组：造模后观察组、对照组、治疗1组、治疗2组、治疗3组，每组20只。

2.2给药

空白对照组、模型组不作任何处理。

从造模型的第10天开始给药，每天2次，共4周。

对照组：外搽卡泊三醇适量，

治疗1组：口服实施例1鱼鳞提取物，一次口服量折合蛋白质5mg/100g；

治疗2组：口服实施例2鱼鳞胶原蛋白，一次口服量折合蛋白质5mg/100g；

治疗3组：口服实施例3鱼鳞胶原蛋白肽，一次口服量折合蛋白质5mg/100g；

对照组和治疗1组、治疗2组、治疗3组每周照射NB-UVB 3次，初始剂量为70％MED，每次递增20％，每周3次，共4周。

2.3标本制备：将第4周取下的耳廓皮肤标本，皮肤组织立即分别用10％甲醛液固定2周，将组织流水冲洗24h，由低浓度到高浓度分别用70％、80％、90％、95％、100％乙醇上行脱水，二甲苯透明，石蜡包埋、切片，温箱45℃烤24h。二甲苯脱蜡10min×3次。由高浓度到低浓度乙醇下行入水：100％、95％、90％、85％、80％、70％、50％的乙醇各1min。自来水冲洗3min。苏木精染色5min。自来水冲洗5min。l％盐酸乙醇分化20s。自来水冲洗1min。1％氨水返蓝20s。自来水冲洗1min。伊红染色lmin。由低浓度到高浓度乙醇上行脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，每只豚鼠取两侧耳部标本各制作3张片子。

3实验结果

3.1肉眼观察：大体观察双侧耳廓皮肤外观变化、皮肤颜色、微血管变化、鳞屑脱落情况等。结果见表1。

表1 各组动物肉眼观察结果

空白组豚鼠精神好，反应敏捷，好斗，毛发浓密有光泽，紧贴皮肤，饮食、二便正常。所有造模动物l周后均出现精神差，反应迟钝，喜卧，进食减少，体重下降，毛发无光泽，易脱落。3周后造模动物上述症状加重并出现搔抓耳部现象。

造模2周后，模型组动物耳背部涂药处毛发部分脱落无毛根，部分动物耳背局部皮肤红，毛细血管扩张明显。空白组豚鼠双耳毛发正常无脱落。

用药期间，造模后观察组症状无明显变化；经治疗4周后，治疗1组、治疗2组、治疗3组及对照组豚鼠上述症状明显减轻；且治疗1组、治疗2组、治疗3组上述症状基本消失与对照组相比有明显差异。

实验例2对豚鼠耳部银屑病样病理改变情况

1实验材料、实验动物、实验仪器设备、实验方法、对照组均同实验例1。

治疗组为：

治疗2组：口服实施例2鱼鳞胶原蛋白，一次口服量折合蛋白质5mg/100g；

治疗3组：口服实施例3鱼鳞胶原蛋白肽，一次口服量折合蛋白质5mg/100g；

治疗4组：口服实施例3鱼鳞胶原蛋白肽，一次口服量折合蛋白质5mg/100g，且外搽卡泊三醇适量。

2疗效观察及标准：用药后4周光镜下观察E染色结果。

光镜下观察每只豚鼠两侧耳部各制作3张切片，光镜下随机选取6个视野，利用计算机图像分析软件，对选取视野进行图像分析，参照Baker法进行组织学评分评估，并对炎症细胞进行计数。结果见表2、表3。

表2 各组动物组织形态结果

表3 豚鼠耳部银屑病样病理改变组织学评分及炎症细胞浸润情况评分

注：造模后观察组与空白对照组比较，△P<0.01；与造模后观察组比较，*P<0.01；与对照组比较，#P<0.05。

研究结果显示，造模后观察组、对照组和治疗2组、治疗3组、治疗4组的皮损和组织病理表现符合银屑病组织病理表现，且组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与空白对照组相比明显升高(P<0.01)，证明银屑病的豚鼠模型建立成功。对照组和治疗2组、治疗3组、治疗4组的组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与造模后观察组相比明显降低(P<0.01)，且空白对照组豚鼠各主要脏器未发现组织病理学改变，证明对照组和治疗2组、治疗3组、治疗4组均可改善豚鼠耳部银屑病样模型的病理变化。治疗2组、治疗3组、治疗4组与对照组相比，红斑、丘疹、斑块等皮损表现改善程度更高，具有显著性差异(P<0.05)，显示治疗2组、治疗3组、治疗4组临床疗效明显优于对照组。治疗4组为治疗3组和对照组联合用药，疗效分别优于治疗3组、对照组单独用药治疗，提示临床使用时口服与外用联合用药效果更加理想。

结论：鱼鳞胶原蛋白和鱼鳞胶原蛋白肽在治疗豚鼠实验性银屑病后，双侧耳廓皮肤外观变化、皮肤颜色转为正常，表面光滑，毛发脱落现象有所改善，扩张的毛细血管得到修复，各种症状明显减轻或消失；组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01),证明豚鼠银屑病的模型建立成功。而治疗2组、治疗3组、治疗4组的组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与造模后观察组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01),且治疗2组、治疗3组、治疗4组各项评分指标均优于对照组，有显著性差异(P<0.05)。

总体实验效果显示：本发明可改善豚鼠耳部银屑病样皮损症状及其病理特征，治疗效果最优为鱼鳞胶原蛋白肽，鱼鳞胶原蛋白次之，鱼鳞提取物再次之，但三者均显著性优于对照组。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (15)

1.鱼鳞提取物在制备治疗和/或预防银屑病药物方面的新用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述鱼磷提取物为鱼鳞胶原蛋白。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述鱼磷提取物为鱼鳞胶原蛋白肽。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于所述治疗和/或预防银屑病的药物，每日口服量折合蛋白质1600-10000mg。

5.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于所述治疗和/或预防银屑病的药物，每日口服量折合蛋白质3000-6000mg。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述鱼鳞提取物通过以下步骤制备而得：选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量4-12倍的水，提取2-4次，提取温度为90-120℃，合并提取液，滤过，滤液浓缩，得鱼鳞提取物。

7.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述鱼鳞胶原蛋白通过以下步骤制备而得：选取鱼鳞，清洗后加鱼鳞重量5-10倍的酸浸泡5-120分钟，滤过，鱼鳞用清水漂洗后粉碎，加鱼鳞重量3-10倍的水加热提取1-8小时，提取1-3次，滤过，合并滤液，干燥，得鱼鳞胶原蛋白。

8.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述鱼鳞胶原蛋白肽通过以下步骤制备而得：取鱼鳞提取物或鱼鳞胶原蛋白，在50-60℃时加蛋白酶水解20-60分钟后，加热灭活，取上清液，浓缩，干燥，得鱼鳞胶原蛋白肽。

9.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述鱼鳞胶原蛋白肽通过以下步骤制备而得：选取鱼鳞，清洗、沥干，加鱼鳞重量5-10倍的酸浸泡5-120分钟，滤过，用清水漂洗至pH为5-6；加浓度为1-5％的NaCl溶液浸泡1-10小时，所加NaCl溶液为鱼鳞重量的8-12倍；冷至3-10℃，加入蛋白酶，水解2-6小时，水解结束后，加热20-40分钟灭活；得水解液，水解液浓缩后干燥，得到鱼鳞胶原蛋白肽。

10.根据权利要求7或9所述的用途，其特征在于所述加酸浸泡时，选用0.5-2％的盐酸、冰醋酸、乳酸、醋酸、柠檬酸或苹果酸之中任何一种。

11.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于所述蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶或碱性蛋白酶之中任何一种。

12.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于所述蛋白酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶之中任何一种或两种以上的组合。

13.根据权利要求1所述的用途，其特征在于由权利要求6所述的鱼鳞提取物与医药学上可接受的载体配合制备而成。

14.根据权利要求2所述的用途，其特征在于由权利要求7所述的鱼鳞胶原蛋白与医药学上可接受的载体配合制备而成。

15.根据权利要求3所述的用途，其特征在于由权利要求8或9所述的鱼鳞胶原蛋白肽与医药学上可接受的载体配合制备而成。