이하, 본 발명의 구성에 대해 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 강낭콩추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는, 세포증식효과, 콜라겐 및 히아루론산 합성 효과가 우수한 강낭콩 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 이를 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
상기 강낭콩 추출물은 강낭콩의 씨앗을 건조, 분말화 하고, 상기 분말화된 강낭콩에 대해 추출 용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 헥산(Hexane), 디에틸 에테르(Diethyl ether), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소-프로판올(iso-propanol), 노말-부탄올(n-Butanol)을 사용해 추출한다.
상기와 같이 제조된 강낭콩 추출물은 기초제품 화장료(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 보디 오일), 색조제품 화장료(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발제품 화장료(샴푸, 린스, 헤어콘디셔너, 헤 어젤)등에 화장료의 건조중량에 대하여 0.05-10.0중량%으로 함량으로 배합된다.
다음은 상기와 같이 구성된 본 발명에 대해 아래의 실시예를 참고로 보다 구체적으로 설명된다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다. 배합량은 중량%로 나타낸다.
실시예: 강낭콩 추출물의 제조방법
강낭콩 추출물 제조공정을 보다 상세히 설명하면 다음과 같다. 건조된 강낭콩의 씨앗을 정제수로 세척한 다음 건조하여 분말화 하고, 분말화된 강낭콩의 건조 중량에 대하여 추출 용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 헥산(Hexane), 디에틸 에테르(Diethyl ether), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소-프로판올(iso-propanol), 노말-부탄올(n-Butanol)을 1-15배의 양으로 가해 실온에서 1-15일간 침적시켜 유효 성분을 여과하여 추출한다. 상기 추출용액을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 감압 농축하여 본 발명의 강낭콩 추출물을 얻는다.
실시예 1:
강낭콩을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 강낭콩 가루 1Kg을 물 5L에 넣고 15-40℃에서 3-5일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃에서 7-10일간 방치하여 저온 숙성시킨 후 와트만 5번 여과지로 여과한 다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 70℃로 감압 농축하고 건조하여 132.20g(건조중량)을 얻었으며, 추출 수율은 13.2±0.8%이다.
실시예 2:
강낭콩을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 강낭콩 가루 1Kg을 10% 에탄올 5L에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고 4-15℃에서 7-10일간 방치하여 저온 숙성시킨 후 와트만 5번 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 70℃로 감압 농축하고 건조하여 127.4g(건조중량)을 얻었으며, 추출 수율은 12.7±0.7%이다.
실시예 3-21:
하기 표 1에 기재된 용매를 사용하여 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 추출하여 추출 수율을 표1에 나타내었다.
구 분 |
용 매 |
추출수율 (%평균±표준편차) |
실시예 3 |
20% 에탄올 |
12.1±0.7 |
실시예 4 |
30% 에탄올 |
11.2±0.6 |
실시예 5 |
40% 에탄올 |
9.9±0.4 |
실시예 6 |
50% 에탄올 |
8.4±1.0 |
실시예 7 |
60% 에탄올 |
6.7±0.5 |
실시예 8 |
70% 에탄올 |
5.4±0.3 |
실시예 9 |
80% 에탄올 |
4.3±0.3 |
실시예 10 |
90% 에탄올 |
2.5±0.1 |
실시예 11 |
100% 에탄올 |
1.7±0.1 |
실시예 12 |
80% 메탄올 |
4.2±0.4 |
실시예 13 |
100% 메탄올 |
1.5±0.1 |
실시예 14 |
아세톤 |
0.7±0.1 |
실시예 15 |
에틸 아세테이트 |
1.1±0.2 |
실시예 16 |
50% 1,3-부틸렌 글리콜 수용액 |
5.8±0.5 |
실시예 17 |
헥산 |
0.8±0.1 |
실시예 18 |
디에틸에테르 |
0.3±0.1 |
실시예 19 |
노말-프로판올 |
0.2±0.1 |
실시예 20 |
이소-프로판올 |
0.2±0.1 |
실시예 21 |
노말-부탄올 |
0.2±0.1 |
실험예 1: 강낭콩 추출물의 세포 증식 효과
본 발명의 강낭콩 추출물에 대해 세포 증식 효과를 알아보기 위해, 인체 정상 섬유아세포(Human Normal Fibroblast)를 96웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(well)에 1x104 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM) 배지에서 24시간 배양한다. 배양 후 실시예 1-21에서 제조한 강낭콩 추출물을 최종 농도 250㎍/㎖ 되도록 조정한 시럼(serum)이 없는 디엠이엠(DMEM) 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. MTT 용액[3-(4,5-Dimethyl-thiazole-2-yl) 2,5-diphenyl tetrazolium bromide : 5 ㎎/㎖] 10㎕씩 첨가하고 4시간 방치 후, 배지 부분을 버린다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭시드 (DMSO :Dimethyl sulfoxide)용액을 가하여 마이크로 플레이트 리더 (microplate Reader)로 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 상기 과정을 3회 실시하여 하기식으로부터 세포증식 효과를 구해 그 결과를 표 2에 나타내었다.
추출물 처리시의 흡광도 - 대조군의 흡광도
세포증식효과(%) = ------------------------------------- X 100
대조군의 흡광도
추출물 |
세포 증식 효과(%) |
실시예 1 |
15.4±1.3 |
실시예 2 |
18.6±1.6 |
실시예 3 |
21.5±2.5 |
실시예 4 |
27.6±0.9 |
실시예 5 |
35.9±1.3 |
실시예 6 |
42.7±2.1 |
실시예 7 |
51.3±2.4 |
실시예 8 |
58.7±2.5 |
실시예 9 |
54.6±2.5 |
실시예 10 |
56.5±2.3 |
실시예 11 |
52.8±2.0 |
실시예 12 |
54.5±2.2 |
실시예 13 |
45.7±1.6 |
실시예 14 |
31.4±1.5 |
실시예 15 |
44.8±1.8 |
실시예 16 |
52.1±2.4 |
실시예 17 |
10.3±0.6 |
실시예 18 |
11.4±0.8 |
실시예 19 |
22.4±1.4 |
실시예 20 |
25.3±1.6 |
실시예 21 |
21.7±1.4 |
상기 표 2에 보는 바와 같이, 본 발명의 강낭콩 추출물이 함유된 인체 정상 섬유아세포에서 세포증식 효과가 대조군에 비해 우수함을 알 수 있다.
실험예 2: 강낭콩 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과
강낭콩 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과를 알아보기 위해, 인체정상 섬유아세포(Human Normal Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고(2x104 세포/ 웰) 디엠이엠(DMEM) 배지에서 24시간 배양한다. 배양 후 실시예 8에서 제조한 강낭콩 추출물을 100㎍/㎖, 250㎍/㎖, 500㎍/㎖의 농도로 준비하여 시럼이 함유되지 않은 디엠이엠(DMEM) 배지와 함께 넣고 48시간 배양한다. 배양 마지막 24시간 전에 아스코르빅산 (Ascorbic acid : 50㎍/㎖)을 첨가하여 콜라겐 합성을 촉진시킨다. 배양 후 각 웰을 세척하고 시럼(serum)이 함유되지 않은 디엠이엠(DMEM) 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 배양 후 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐(procollagen) Type I C-peptide (PICP) 양을 Kit (Takara, Kyoto, Japan)을 이용하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였으며 PICP 양은 ng/2x104 세포로 환산하여 콜라겐 1의 합성 효과를 하기 표 3에 나타내었다.
농 도 |
콜라겐 합성량 (ng/2x104세포) |
대조군 |
151 |
100 ㎍/㎖ |
204 |
250 ㎍/㎖ |
254 |
500 ㎍/㎖ |
291 |
상기 표 3과 같이 강낭콩 추출물의 농도가 클수록 콜라겐 합성량이 증가함을 알 수 있으며 농도의존적 형태를 나타내었다.
실험예 3: 강낭콩 추출물의 세포증식 효과
강낭콩 추출물의 세포증식 효과를 알아보기 위해, 실시예 8에서 제조한 강낭 콩 추출물을 100㎍/㎖, 250㎍/㎖, 500㎍/㎖의 농도로 준비하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 실시하여 그 결과를 표 4에 나타내었다.
농 도 |
흡 광 도 (570 ㎚) |
세포 증식 효과 (%) |
대 조 군 |
0.320±0.008 |
- |
100 ㎍/㎖ |
0.414±0.012 |
29.4 |
250 ㎍/㎖ |
0.453±0.030 |
41.6 |
500 ㎍/㎖ |
0.563±0.015 |
75.9 |
상기 표 4와 같이, 본 발명의 강낭콩 추출물이 첨가된 인체 정상 섬유아세포에서 세포 증식 효과가 우수함을 알 수 있고, 강낭콩 추출물의 농도가 클수록 세포 증식 효과가 증가함을 알 수 있다.
실험예 4: 강낭콩 추출물의 히아루론산 합성 증진 효과
강낭콩 추출물의 히아루론산 합성 증진 효과를 알아보기 위해, 인체정상 섬유아세포(Human Normal Fibroblast)를 6-웰 배양 플레이트에 접종시키고 (3x104 세포/웰) 48시간 배양한다. 이때 배지는 10% FCS (Fetal calf serum), 페니실린, 스트렙토마이신 (100㎍/㎖)등이 함유된 디엠이엠(DMEM) 배지를 사용한다. 배양후 실시예 8에서 제조된 강낭콩 추출물을 100㎍/㎖, 500㎍/㎖의 농도로 준비한 배지로 교체하고 24시간 배양한다. 배양 후 배지 부분만 모으고 단백질을 제거하기 위해서 트리클로로아세트산(Trichloroacetic aicd)을 최종농도 10%가 되게 넣고 4℃에서 24시간 보관한다. 이 용액을 원심분리하여 상층액을 투석(Dialysis)하고 NaCl을 처리하여 최종농도 0.04M이 되도록 한 후 세틸피리디움 클로라이드(Cetylpyridium chloride)를 첨가하여 히아루론산을 침전시킨다. 원심분리하여 침전물을 4M NaCl에 용해시키고, 에탄올에 재침전 시킨 후, 이 침전물을 정제수에 용해시킨다. 히아루론산을 정량하기 위하여 셀루로오스 아세테이트 스트립(Cellulose acetate strip)을 이용하여 전기영동한다. [Hata, R. & Nagai, Y.(1972) Anal. Biochem. 45, 462-468] 전기영동 후 0.5% 알시안 블루(Alcian blue)가 함유된 3% 아세트산에 침지 시킨 후 세척, 건조하여 600nm의 스캐너로 그 양을 측정한다.
농도 |
히아루론산 합성증진효과 |
100㎍/㎖ |
35.8 |
500㎍/㎖ |
56.4 |
상기 표 5와 같이, 강낭콩추출물은 인체정상 섬유아세포에서 히아루론산 합성증진효과를 나타냄을 알 수 있다.
제조예:
본 발명의 강낭콩 추출물을 제품에 도입한 것으로, 화장료의 건조중량에 대해 0.05-10.0중량%로 배합하여 통상적인 화장품 분야에서 제조 방법에 따라 제조한다.
제조예 1: 유연 화장수 제조
본 발명의 강낭콩 추출물을 함유하는 유연 화장수를 제조하기 위해 하기 표 6에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
성 분 |
함량 (중량%) |
강낭콩 추출물 |
5.0 |
1,3-부틸렌 글리콜 |
6.0 |
소듐 히아루로네이트 |
2.0 |
글리세린 |
4.0 |
피이지 4000 |
1.0 |
폴리 솔베이트 20 |
0.5 |
에탄올 |
10.0 |
방부제 |
적량 |
벤조페논-9 |
0.05 |
향 |
적량 |
정제수 |
적량 |
합 계 |
100 |
제조예 2: 밀크 로션 제조
본 발명의 강낭콩 추출물을 함유하는 밀크 로션을 제조하기 위해 하기 표 7에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
성 분 |
함량(중량%) |
강낭콩 추출물 |
5.0 |
스테아린산 |
0.4 |
1,3-부틸렌 글리콜 |
6.0 |
세토스테아릴 알콜 |
1.2 |
글리세린 |
4.0 |
글리세릴 스테아레이트 |
1.0 |
트리에탄올아민 |
0.25 |
토코페릴 아세테이트 |
3.0 |
유동 파라핀 |
5.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
마카다미아 너트 오일 |
2.0 |
폴리 솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄 세스퀴올레이트 |
0.6 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.15 |
방부제 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합 계 |
100 |
제조예 3: 영양 크림의 제조
하기 표 8에 기재된 성분을 사용하여 통상적인 화장품 분야에서 제조 방법에 따라 영양 크림을 제조하였다.
성 분 |
함량( 중량 %) |
강낭콩 추출물 |
5.0 |
바셀린 |
7.0 |
세토스테아릴 알콜 |
2.5 |
글리세릴 스테아레이트 |
2.0 |
스테아린산 |
1.5 |
유동 파라핀 |
10.0 |
밀납 |
2.0 |
폴리 솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄 세스퀴올레이트 |
0.8 |
스쿠알란 |
3.0 |
1,3-부틸렌 글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
토코페릴 아세테이트 |
0.1 |
방부제 |
적량 |
향 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
합 계 |
100 |
제조예 4: 에센스 제조
본 발명의 강낭콩 추출물을 함유한 에센스를 제조하기 위해, 하기 표 9에 따라 화장품 분야에서 통상적인 제조 방법에 따라 제조하였다.
성 분 |
함량 (중량%) |
강낭콩 추출물 |
5.0 |
글리세린 |
10.0 |
피이지 1500 |
2.0 |
알란토인 |
0.1 |
판테놀 |
0.3 |
이.디.티이.에이(EDTA) |
0.02 |
벤조페논-9 |
0.04 |
히드록시 에틸 셀룰로오스, |
0.1 |
소듐 히아루로네이트 |
8.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.2 |
트리에탄올아민 |
0.18 |
옥틸도데세스-25 |
0.6 |
에탄올 |
6.0 |
방부제, 향, 색소 |
미량 |
정제수 |
잔량 |
합 계 |
100 |
제조예 5: 맛사지 크림 제조
본 발명의 강낭콩 추출물을 함유하는 맛사지 크림을 제조하기 위해 하기 표10에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
성 분 |
함량 (중량%) |
강낭콩 추출물 |
3.0 |
글리세릴 스테아레이트 |
2.0 |
세토스테아릴 알콜 |
2.5 |
스테아린산 |
1.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄 스테아레이트 |
0.6 |
이소스테아릴 이소스테아레이트 |
5.0 |
스쿠알렌 |
5.0 |
광물유 |
35.0 |
디메치콘 |
1.0 |
산탄검 |
0.1 |
히드록시에틸 셀룰로오스 |
0.12 |
글리세린 |
6.0 |
트리에탄올 아민 |
0.5 |
방부제, 향, 색소 정제수 |
적량 |
잔량 |
합 계 |
100 |
처방예 6: 팩 제조
본 발명의 강낭콩 추출물을 함유하는 팩을 제조하기 위해 하기 표 11에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
성 분 |
함량 (중량%) |
강낭콩 추출물 |
3.0 |
폴리비닐 알콜 |
15.0 |
셀룰로오스 검 |
0.15 |
글리세린 |
3.0 |
피이지 1500 |
2.0 |
판테놀 |
0.4 |
알란토인 |
0.1 |
에탄올 |
6.0 |
피이지 40 경화 피마자유 |
0.3 |
방부제, 향, 색소 정제수 |
미량 |
|
잔량 |
합 계 |
100 |