KR20170045927A - 위릉채 추출물을 함유한 항노화 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 위릉채 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 위릉채 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 위릉채 추출물 함유 피부 외용제 조성물은 피부 세포에 독성이 없으면서도 피부노화방지, 피부 콜라겐 합성능이 탁월하여 주름 개선에 효능이 있으며, 피부 보습, 피부 진정, 미백, 피부 자극 완화, 자외선에 따른 피부 보호, 피부 손상 개선 등의 효능을 가지고 있다.

Description

위릉채 추출물을 함유한 항노화 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법{Anti-aging composition for skin external application comprising Potentilla chinensis Extract and Method for Preparing the Same}

본 발명은 위릉채 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 위릉채 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

인간의 피부는 시간이 지남에 따라 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되어 생기는 내인성 노화(intrinsic aging)와, 외적으로는 각종 오염물질과 자외선에 의한 광노화(photoaging)에 의해, 피부가 얇아지며 (내인성 노화의 경우), 탄력이 감소하게 되며 자외선 조사에 노출됨에 따라 표피 내 각질형성세포와 멜라닌세포가 UVB에 의해 세포손상을 받게 된다. 피부 노화는 태양광선에 노출되지 않는 부위에서 나타나는 연대학적 노화 (chronologic aging)와 태양광선의 노출부에서 일어나는 퇴행성 변화가 연대학적 노화와 복합되어 일어나는 광인성 노화 (actinic ageing) 로 구분된다. 연대학적 노화에서는 특징적인 임상 피부소견으로 미세한 주름, 진피의 위축, 피하지방층의 감소 등이 관찰된다. 광노화 과정에서는 거칠고 깊은 주름 (coatse wrinkling and furrowing)이 나타나고 비정상적인 탄력질양 물질(elastotic material)이 축적되어 피부가 가죽같이 두터워지며 느슨해진다. 만성적 일광손상을 입은 피부에서 볼 수 있는 현상은 진피의 상부 쪽 교원질의 비정상적인 탄력질양 물질의 침착 (solar elastosis)과 프로테오글리칸 (proteoglycan)이 증가되고 진피의 주단백질인 콜라겐이 현저히 감소되는 것이다. 콜라겐은 피부에 강도와 장력을 부여하며 이로 인해 외부의 자극이나 힘으로부터 피부를 보호하는 역할을 하며 진피층의 90%를 차지하고 있어 콜라겐의 감소는 피부와 노화와 밀접한 관계를 가지고 있다.피부를 구성하는 세포에서는 내인성 노화나, 광노화에 의해 세포활성이 떨어지고, 신호전달체계가 불완전해지면서 피부조직을 분해하는 효소인 MMPs (matrix metalloproteinases)의 생합성이 증가하고, 콜라겐의 생합성이 감소하여 주름살이 생기고 탄력이 감소하고, 피부흑화를 초래하는 멜라닌생성이 증가하는 것으로 알려져있다.

이러한 피부노화를 효과적으로 예방하기 위해서는 자외선 등의 외부 자극을 효과적으로 제거하고 피부 내에서 발생하는 활성산소 등의 피부 유해 인자들을 제거해주는 것이 관건이다. 따라서 최근에 개발되는 대부분의 화장품들은 외부 자극을 막아주고 내부에서의 피부 유해 인자를 제거하는 방향으로 연구되고 있으며 특히, 이러한 효과를 구현하면서도 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위하여 천연 식물소재를 사용한 화장품 원료개발이 활발하다.

한편, 위릉채는 장미과의 다년생 초본 식물로 학명은 Potentilla chinensis Ser.이며, 맛은 쓰며 성질은 평하며 독이 없다. 또한, 이질, 풍습으로 인한 근골의 의 동통, 반신 불수, 전간, 옴등을 치료한다(중약대사전). 위릉채 추출물을 이용하여 아토피성 치료로 쓰이는 물질에 대한 연구가 있으나(특허문헌 1) 본 발명과 같은 항노화 소재로의 연구는 미비하다.

특허문헌 1 : 국제 공개특허 WO 9600078

본 발명자들은 피부의 견고성을 개선하고, 태양 노출 및 다른 환경적 스트레스와 같은 외부적,내부적 원인으로부터 유래하는 주름과 같은 노화의 가시적 증상을 방지하거나 감소시키는데 위릉채 추출물이 유용함을 확인하고, 피부노화개선 또는 방지, 피부주름개선, 피부보습, 피부진정, 피부 미백, 자외선에 따른 피부 보호, 자외선에 의한 피부 손상 개선을 비롯한 피부노화방지, 피부노화 개선, 즉, 항노화에 효능이 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 우수한 항노화 효능을 가지는 위릉채 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기 위릉채 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물의 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명은 인체에 안전하면서도 피부 노화 개선 효능이 우수한 항노화 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 피부 노화 방지 또는 개선, 피부주름개선, 피부 미백, 피부보습, 피부진정, 자외선에 따른 피부 보호, 자외선에 의한 피부 손상 개선을 비롯한 피부 노화방지, 피부노화 개선, 즉, 항노화에 효능을 가지는 위릉채 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 위릉채 (Potentilla chinensis) 추출물을 제조하여 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 위릉채 건조물 자체 또는 분말화하여 정제수에 혼합시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 위릉채 식물을 건조하고, 건조물 자체 또는 분말화하여 정제수에 혼합시킨 다음, 초음파 추출 또는 열수 추출하여 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 위릉채 추출물을 이용한 주름 개선을 포함한 피부 노화 억제 또는 예방 방법, 자외선 차단방법에 관한 것으로, 구체적으로는, 상기 위릉채 추출물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법이다. 여기서의 대상은, 인간을 포함하는 동물, 식물, 미생물 등에 해당하는 것으로, 투여는 in vivo, 또는 in vitro로 수행될 수 있으며, 종래에 알려져 있는 다양한 투여 방법, 투여 형태 등을 이용하여 적절하게 수행될 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 위릉채(Potentilla chinensis) 추출물을 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 노화 방지 또는 개선, 피부 주름 개선용, 피부 보습용, 피부 자극 완화용, 피부 미백용, 자외선에 따른 피부 보호 또는 피부 손상 개선용, 피부 진정용인 것을 특징으로 할 수 있다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

위릉채의 다른 이름은 딱지꽃으로, 높이 30 ~ 60 cm 되는 여러해살이풀이다. 잎은 깃겹잎이다. 쪽잎은 깃 모양으로 깊이 갈라진 비들잎 모양이다. 줄기와 잎에 털이 있다. 꽃은 노란색이고 가지 끝에 모여 핀다. 각지의 들판 특히 개울가의 모래땅에서 잘 자란다. 전초와 뿌리에 많은 양의 플라보노이드, 뿌리에 흔적의 사포닌이 있다. 같은 속 식물의 뿌리에서는 켐페롤, 시아니딘, 여러 가지 카테킨이 분리되었다. 잎에서는 220 ~ 300 mg, 뿌리줄기에서 약 106 mg의 아스코르브산, 전초, 뿌리줄기에서 10 ~ 18% 탄닌질, 정유 및 플라보노이드로서 미리세틴, 쿠에르세틴, 켐페롤, 델피니딘, 시아니딘 등이 분리되었다. 또한, P-쿠마르산, 페룰라산, 엘라그산, 수지, 쓴맛물질이 있다. 같은 속 식물에 들어있는 다가페놀 물질은 티푸스막대균, 적리막대균, 포도알균에 대한 살균작용이 있고 항염증 작용, 모세혈관 강화 작용이 있다. 이것은 히알루로니다아제의 활성을 낮추는 것과 관련된다. 동의치료에서 뿌리줄기를 열내림약, 아메바적리 치료약으로 쓴다. 월경주기가 고르지 못할 때에도 쓴다. 전초는 피멎이약으로 각혈과 설사, 대장염 고장에 쓰며 염증약으로 감기, 위장질병, 진통진경약으로 관절류머티즘, 통풍, 기관지천식, 기침 등에 쓴다.

일 관점에서, 본 발명은 위릉채 (Potentilla chinensis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 위릉채 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10 중량%로 함유할 수 있다. 이러한 비율은 단지 바람직한 범위일 뿐이며, 예컨대, 하기 실시예에서는 1 중량%,또는 2.5중량%, 5중량%, 10중량% 등의 경우를 실험한 결과를 포함하고 있으나, 이 이외에 1%, 0.5% 이하, 20%, 30% 이상 경우도, 우수한 항노화 - 피부 노화 방지, 노화 개선, 피부 미백, 개선, 피부 수렴, 주름개선 기능, 피부 보습, 피부 진정, 피부 자극 완화, 자외선에 따른 피부보호 효능 등을 가짐은 당업자에게 자명하다.

본 발명은 위릉채 추출물을 함유한 피부개선용 피부외용제 조성물의 제조방법은 다음의 단계를 포함한다:

(a) 위릉채 추출물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계에서 얻어진 위릉채의 추출물 함유하는 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 (a)단계는, 위릉채 (딱지꽃)을 건조하고, 건조물 자체 또는 분말화하여 정제수에 혼합시킨 다음, 냉수 추출, 열수 추출 또는 에탄올 추출하여 조성물을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.

또 다른 예로, 상기 (a)단계에서 위릉채를 열풍 건조후 분말화하여 수분을 증발시켜 건조된 위릉채를 제조할 수 있다.

본 발명에 있어서, (b)단계는 본 발명이 속한 기술분야에 공지된 방법으로 피부외용제 조성물을 제조하는 것을 포함한다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 위릉채를 건조하거나, 건조물을 분말화하거나, 냉수추출법, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에서 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 추출, 열수 추출 등이 있다. 여기서, 열수추출의 경우, 열탕증류기에서 8~48시간동안, 80~100℃ 로 가열하여 열수 추출물을 얻는다.

냉수 추출의 경우, 예컨대, 냉수 (15-25℃)에 상기 위릉채 건조물 또는 그것의 건조된 분말을 혼합하여 3일동안 추출하여 냉수추출물을 얻는다.

또는, 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 제조될 수 있다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 예컨대, 에탄올 추출물의 경우, 바람직하게는 20-50% 에탄올 추출물, 일 구체예로써 50% 에탄올에 섞은 후 3일동안 교반하여 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 농축, 또는 희석하여 사용할 수 있고, 추출물의 증류액을 사용할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 항노화란, 피부 보호 및 피부 상태 개선, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 모공 수축, 축소, 피부 수렴, 피부 보습, 피부 진정, 피부자극 완화, 멜라닌생성저해능, 항산화능, 콜라겐 합성 증진능, 자외선에 따른 피부 보호, 자외선에 의한 피부 손상개선 등을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 피부 보습, 피부 미백, 피부 진정, 피부 자극 완화, 주름 개선을 비롯한 항노화에 따른 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 피부 외용제 조성물로써 주름개선효능과 관련된 콜라겐 합성, 멜라닌 생성 억제, 피부 보습, 자외선으로부터의 피부 보호, 피부 진정 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.

아울러, 본 발명에 따른 위릉채 추출물이 자외선 조사에 따른 피부 세포 보호 효과가 월등함을 확인한 바, 자외선 조사에 따른 피부 보호용으로도 활용 가능하다.

따라서, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 프로콜라겐 증가, 콜라겐 생합성 증가능에 기초한 피부 주름개선, 이외에도 자외선과 같은 광노화로부터의 피부 보호, 피부 손상 개선, 피부 진정, 피부 보습, 피부 자극 완화, 항산화용 등으로도 적용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물일 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 위릉채 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서의 피부는 얼굴 뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 피부 외용제 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 위릉채 추출물을 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 위릉채 추출물을 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.

특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

이러한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 콜라겐 합성 증진능에 따른 주름 개선, 피부 보습, 피부 미백, 피부 진정, 항산화 등을 할 수 있는 등 항노화의 기능성 화장품의 형태를 포함한다.

본 발명에 있어서, 약제학적 조성물의 경우, 하기 실시예에서 제시하는 피부 상태 개선을 위한 약제학적 조성물로써 기능할 수 있다.

이러한 약제학적 조성물은 유효성분인 위릉채 추출물 외에, "약학적으로 허용가능한 담체"를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 약학 조성물은 첨가제를 더 포함할 수 있다. 상기 첨가제로 향료, 비타민, 및 항산화제가 포함될 수 있다. 상기 담체로 약제학적으로 허용 가능한 담체는 모두 가능하며, 예를 들면, 희석제로는 유당, 덱스트린, 타피오카(tapioca) 녹말, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필셀룰로오스일 수 있다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 또는 크로스포비돈, 감미제로는 백당, 과당, 솔비톨, 또는 아스파탐, 안정제로는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 베타-사이클로덱스트린, 또는 잔탄검, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 솔빈산칼륨일 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 약제학적 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 경구 투여제제, 주사제, 좌제, 경피 투여제제, 및 경비 투여제제의 제형으로 제제화되어 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 제형은 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제와 같은 경구 투여용 제형일 수 있다.

본 발명에 따른 위릉채 추출물 함유 피부 외용제 조성물은 피부 세포에 독성이 없으면서도 피부노화방지 또는 개선가능하고, 피부 콜라겐 합성능이 탁월하여 주름 개선에 효능이 있으며, 피부 보습, 피부 진정, 피부 미백, 자외선에 따른 피부 보호, 피부 손상 개선, 피부 자극 완화 효과 등을 가지고 있다.

도 1은 본 발명에 따른 건조된 위릉채를 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 위릉채 추출물의 피부 세포 독성 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 위릉채 추출물의 멜라닌 합성 억제 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 위릉채 추출물의 피부 자극 완화 시험 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

본 발명에 따른 위릉채 추출물의 제조

위릉채(딱지꽃)을 강원도 정선에서 수확하여 정제수로 여러차례 수세한 후, 60℃로 2일 동안 건조기에서 건조하였다. 건조된 딱지꽃 600 g을 용기에 담고, 정제수 15L 를 넣은 후, 80 ~ 100℃ 에서 12 ~ 14 시간 반응하여 딱지꽃 추출물을 제조하고, 여과하여 추출물을 제조하였다.

실험예 1 : 세포 독성효과 시험(Cytotoxicity Test)

본 발명에 따른 위릉채(딱지꽃) 추출물의 피부 세포에 대한 독성효과를 알아보기 위하여, 인간각질형성 세포(Human Skin Keratinocyte, HaCaT)를 사용하였다. 인간각질형성 세포를 1×10⁴cells/ml의 농도로 하여 24 well 배양판에 접종하였다. 배지는 10 % FBS를 함유한 DMEM(Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL,USA)을 사용하였다. 10 % FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30% 만큼 배양되면, 실시예 1에서 제조된 조성물이 0.1 % ~ 10 % 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브롬화물 (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50 첨가하고 3시간동안 추가로 배양한 후 상등액을 제거하고, 각 well 당 200㎕의 Dimethylsulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)용액을 가한 후 20분간 교반하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 녹인 다음, 100㎕씩을 96 well 로 취하여 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)로 570 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 피부 세포의 증식 활성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 하기 수학식 1에 따라 계산하여 백분율로 표시하였다.

인간각질형성세포(keratinocyte)를 이용하여, 딱지꽃 추출물을 처리하여 피부에 쓰기 적합한 범위 즉, Cell Viability 세포생존율효과를 확인한 결과, 1 % ~ 20 %의 딱지꽃 추출물 처리에 의하여 Cell Viability에 영향을 미치지 않고 세포독성(Cytotoxicity)을 확인하지 못하였다 (도 2).

실험예 2 : 미백효능 관련 B16 멜라노마 세포에서의 멜라닌 합성 억제 시험

멜라노마(Melanoma) B16 세포(1.5×10⁴ cells/well)는 α-MSH(α melanocyte-stimulating hormone)로 자극(stimulation) 되었고, 다양한 농도의 위릉채(딱지꽃) 추출물을 72시간동안 처리하였다. PBS로 세척 후, 세포들은 80㎕ 에서 1N NaOH 100㎕ 로 녹여졌다. ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정하였다.

딱지꽃 추출물의 B16 Melanoma 세포에서 멜라닌 합성에 대한 저해 정도를 확인하기 위하여 살아있는 세포당 멜라닌 함량을 측정한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 딱지꽃 추출물의 처리는 멜라노마 세포에서 멜라닌 함량을 눈에 띠게 감소하였다. 72시간 배양시간동안 대조군에 비하여 5 % 농도 이상의 딱지꽃 추출물이 처리된 시험군에서 20%의 멜라닌 합성감소를 확인하였다 (도 3).

실험예 3 : 피부 진정효과 시험

본 발명에 따른 딱지꽃 추출물 함유 조성물의 적용 시 피부 자극 완화 효과(피부 진정효과)를 살펴보기 위해, 20~40대 남여 20명을 대상으로 피부 자극 완화 시험을 하였다.

자극원으로 1% SLS(Sodium Lauryl Sulfate)을 이용하고, 실시예 1에서 제조한 딱지꽃 추출물을 정제수에 하기 표 2에 기재된 각각의 농도로 함유시킨 조성물을 제조하여, 10일간 사용하도록 하여, 1% SLS (Sodium Lauryl Sulfate) 에 의해 유발되는 자극에 대한 완화 효과를 비교하여 보았다. 매일 아침, 저녁으로 사용하게 한 다음 자극 여부 및 강도를 설문지에 표시하게 하였다. 시험 결과의 평가는 1일 1회로 하였으며, 주관적 자극과 객관적 자극으로 나누어 표시하게 하였으며, 그 결과는 다음과 같다.

딱지꽃 추출물은 1% SLS 에 비하여 자극의 완화효과가 매우 뛰어났으며, 특히, 딱지꽃 추출물이 1% 함유된 조성물이 1% SLS에 의해 유발된 피부자극의 완화 효과가 매우 뛰어났고, 전반적으로는, 딱지꽃 추출물 함량이 늘어날 수록 피부 진정효과가 뛰어난 것으로 나타났다.

실험예 4: 피부 자극 완화 시험

본 발명에 따른 딱지꽃 추출물의 피부자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 실험을 통한 베타-헥소사미니다제 분비 양의 억제 효과 확인하였다. RBL-2H3 세포를 10% 우태아혈청(FBS)를 함유한 DMEM(Dulbecco' modified Eagle medium)에 현탁시킨 후 24 웰 플레이트의 각 웰 당 2×10⁶세포가 들어가도록 처리한 다음, 각 웰에 100ng/mL의 마우스 모노클로날 IgE로 감작시킨 후 5% CO₂ 배양기에서 24 시간동안 배양하였다. 세포를 웰당 타이로드 완충액(Tyrode buffer) 500를 사용하여 헹구어 내고, 타이로드 완충액 160㎕를 첨가한 후, 37℃, 5% CO₂배양기에서 15분 동안 배양하였다. 농도별로 딱지꽃 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 15분간 배양하고, 한 시간 동안 DNP-BSA 100ng/mL로 처리하였다. 10분간 얼음에 두어 반응을 정지시키고 원심 분리하였다. 상층액에 기질로서 1mM p-nitrophenyl-N-acetyl--D-glucosaminide 50㎕ 로 처리 후 37℃, 5 % CO₂ 배양기에서 한 시간 동안 배양한 후 1M 탄산나트륨 완충액를 넣어 반응을 정지시켰다. ELISA 판독기를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 딱지꽃 추출물의 마스트세포(mast cell) 탈과립 억제효과를 평가한 결과, 농도의 증가에 따라 베타-헥소사미니다제의 방출양이 감소하여 그 억제 효과가 우수하여 피부자극완화 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 5 : 피부 보습 효과 시험

본 발명에 따른 딱지꽃 추출물 함유 피부외용제 조성물을 수분측정기[Corneometer CM 825, Courage+Khazaka 사]를 사용하여 다음과 같은 방법으로 보습 효과를 측정하였다.

20 - 30대 20명을 대상으로 상박부 2 X 2 cm²,12구획을 물로 여러 차례 세정한 후, 자극없이 수분을 제거하였다. 5분경과 후, 정제수와 실시예 1에 기재된 방법에 따라 제조된 딱지꽃 추출물 함유 조성물을 각각 2 구획에 대하여 10㎕ 씩 점적하여 고르게 도포하였다. 10분 후, 수분측정기(Corneometer)를 이용하여 하나의 구획당 5회 측정하였다. 1 구획에 대하여 5분 간격으로 6회, 다음 수학식 2에 의해 측정하고 데이터 값은 20명에 대한 평균치로 나타내었다. 실내온도는 22℃, 상대습도는 30 %였다.

상기 표 3에 나타난 결과와 같이, 정제수와 비교하여, 10 %를 함유한 딱지꽃 추출물 함유 조성물이 가장 뛰어난 보습효과를 갖는다는 것을 확인하였다. 따라서, 딱지꽃 추출물 함량이 늘어날수록 보습효과가 뛰어난 것으로 나타났다.

실험예 6: 자외선 조사에 의한 피부 세포보호 효과 시험

UV 조사에 사용할 광원으로는 302 nm 파장의 자외선을 방출하는 ultraviolet crosslinker CL-1000 (Ultra-Violet Products, CA)을 사용하였다. 피부각질형성세포인 HaCaT 세포를 1x10⁵ cells/ml 농도로 24-well plate에 넣고 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 인산완충액으로 세척하였다. 인산완충액을 500 L 첨가한 다음 자외선을 10 mJ/cm로 조사 후 FBS를 포함하지 않은 신선한 세포배양배지로 교체하고 시료를 1% 농도로 처리한 다음 24시간 추가 배양하였다. 여기에, MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Sigma) 5 mg/ml를 첨가한 후 배양기에서 3시간 배양한 후 형성된 fomazan을 DMSO로 녹이고, 96well plate로 옮긴 후 595 nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하여 자외선 조사 후 시료를 처리하지 않은 대조군과 세포생존율을 비교하였다.

딱지꽃 추출물의 각질형성세포 보호 효과를 평가하기 위하여, 인간각질형성세포(Keratinocytes, HaCaT)를 자외선 조사 20 mJ/cm에 노출시킨 뒤 24 시간 추가 배양한 뒤 세포 생존율을 확인할 수 있는 MTT assay를 수행한 결과, 딱지꽃 추출물은 세포보호 효과에 큰 영향을 미치지 않았다. 딱지꽃 추출물의 1 ~ 20 % 농도 처리에 의하여 자외선을 조사한 대조군에 비교하여 세포 생존율(Cell Vialbility)가 증가하였다. 따라서, 딱지꽃 추출물이 자외선조사에 의한 세포 보호효과를 확인할 수 있었다.

실험예 7: Procollagen 합성 증진 시험

인간섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO₂배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1×10⁵개/ml로 24 well plate에 500㎕ 씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 대조군(DMEM 배지)과 1 ~ 20 % 농도의 딱지꽃 추출물을 함유한 배지를 넣고 48시간동안 37℃, 5% CO₂배양기에서 배양하였다. 48시간 후, 배지의 상층액을 각각 20㎕ 을 취해 Procollagen Type I C-Peptide EIA Kit(PICP, Takara, Cat No. MK101)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. PICP양은 ng/1×10⁵세포로 환산하였으며, 하기 수학식 3에 따라 계산하여 그 결과는 표 5에 나타나 있다.

딱지꽃 추출물 처리에 의한 콜라겐 합성과 관련한 Procollagen 생성량을 측정한 결과, 처리 농도가 증가할수록 딱지꽃 추출물에 의한 PIP 생성량이 증가하여 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

실험예 8: 항산화 효과 시험

본 발명자들은 상기 실시예 1을 통해 제조된 딱지꽃 추출물의 항산화 효과를 조사하기 위하여, ABTS 라디칼 소거능 측정을 통해 항산화 정도를 살펴보았다.

ABTS 라디칼을 이용한 항산화 활성 측정은 과황산칼륨(potassium persulfate)과의 반응에 의해 생성된 ABTS 자유 라디칼이 추출물 내의 항산화 물질에 의해 제거되어 라디칼 특유의 색인 청록색이 탈색되는 것을 이용한 방법으로 Van den Berg 등의 방법을 변형하여 측정하였다. 자세하게는, 1.0 mM의 AAPH(2,2'-azo-bis 2-amidinopropanedeihydrochloride)는 100 mM PBS 버퍼에 녹인 2.5 mM ABTS(2,2'-azino-bis 3-ethylbenzenothiazolin-6-sulfonic acid)와 혼합한 후 68℃ 의 항온조에서 12분 동안 반응시켜 ABTS 양이온(ABTS+)을 형성시켰다. 그 후, 앞서 만든 ABTS+ 용액 980㎕ 에 실시예 1을 통해 준비한 본 발명의 1 ~ 20 % 농도별로 딱지꽃 추출물을 각각 20㎕ 씩 가하여 37℃ water bath에서 10분간 반응시키면서 734 nm에서 감소하는 흡광도의 정도를 측정하였으며 이때 양성대조군은 Trolox 0.1 % 을 사용하였다. ABTS 라디칼 소거능은 다음의 수학식 4에 따라 계산하였다.

그 결과 상기 표에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 딱지꽃 추출물의 처리 농도에 의존적으로 항산화 활성이 증대되는 것을 확인할 수 있었다.

화장료 조성물의 제조

본 발명의 실시예 1의 위릉채 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.

제조예 2-1: 화장수

다음 처방에 따라 통상의 화장수 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-2: 에센스

다음 처방에 따라 통상의 에센스 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-3: 로션

다음 처방에 따라 통상의 로션 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-4: 크림

다음 처방에 따라 통상의 크림 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-5: 젤

다음 처방에 따라 통상의 젤 제조 방법에 따라 제조하였다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

1. 위릉채(Potentilla chinensis) 추출물을 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 노화 방지 또는 개선인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 보습용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 진정용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 미백용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 피부 자극 완화용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
8. 제1항에 있어서, 상기 피부개선용은 자외선에 따른 피부 보호 또는 피부 손상 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.

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