KR100432461B1 - 흡입용프로리포좀분말 - Google Patents

Abstract

생물학적 활성 성분의 분리된 입자들을 상 전이 온도가 37?? 미만인 지질 또는 지질 혼합물과 함께 단일상으로 포함하는 프로리포좀 분말.

Description

흡입용 프로리포좀 분말{Proliposome Powders for Inhalation}

리포좀은 친수성 구획을 내부에 함유한 일련의 동심 지질 이중층으로 이루어진 막 유사 소포이다. 리포좀은 천연 및 합성 포스포글리세롤리피드, 스핀고리피드 및 디갈락토실글리세롤리피드 등의 여러가지 천연 및 합성 지질로부터 만들어질 수 있다. 리포좀의 주요 용도중 하나로 리포좀은 약제 전달을 개선하고 일부 치료의 부작용을 최소화하기 위하여 여러 가지 종류의 제약학상 활성 성분의 담체로 사용되었다. 제약학상 활성 성분은 (활성 성분이 수용성인 경우) 리포좀의 친수성 구획 내에 캡슐화되거나, 또는 활성 성분이 친지성인 경우 지질 이중층 내로 캡슐화되어 리포좀 내로 혼입될 수 있다.

리포좀 제약 제제와 관련된 주요 문제점 중의 하나는 장기간 안정성이다. 수성 리포좀 분산액은 응집, 캡슐화된 활성 성분의 외부 상으로의 손실, 활성 성분 또는 지질 물질의 화학적 분해 등으로 인하여 안정성이 제한된다.

상기 문제점들은 고상 조성물이 사용된다면 대부분 극복될 수 있다. 이러한 고상 조성물에는 리포좀 분말, 즉 건조 리포좀 분산물 또는 프로리포좀 분말이 포함될 수 있다.

리포좀 분산액의 건조 공정은 리포좀 막이 손상될 수 있는 위험이 있다. 이 위험을 최소화하기 위하여, 국제 특허 출원 공개 제86/01103호 등에서 기술된 바와 같이 보호당의 존재하에서 리포좀을 건조하는 것이 필요하다.

미국 특허 제4,906,476호에는 흡입에 의해 스테로이드를 전달하는 리포좀 제제가 기술되어 있다. 적당한 장치를 사용하여 분말 에어로졸로서 건조 리포좀을 전달하는 가능성이 기술되어 있다. 건조 리포좀 분말이 현탁되어 있는 분사 용매를 사용하여 자기 포함 분무기로부터 분무하여 전달하는 방법, 및 분사제를 사용하여 건조 입자를 폐로 분무하여 전달하는 방법도 기술되어 있다.

상기와 같은 리포좀은 프로리포좀 분말로 존재하지는 않으나 분말이 지질의 상 전이 온도 이상에서 수화될 때 형성된다. 따라서 건조 리포좀과 비교하여, 프로리포좀 분말은 탈수시 리포좀 막에 대한 손상 위험이 없다는 잇점을 갖는다.

프로리포좀 분말은 이전에 기술되었다.

예를 들면, 미국 특허 제4,311,712호에는 리포좀 형성 친양쪽성 지질 및 지질-가용성 또는 지질-결합된 생물학적 활성 화합물을 동결 건조 중에 고체로 존재하는 유기 용매 중에 용해하고 이 용액을 동결 건조함으로써 얻어진 동결 건조된 잠재적인 리포좀 혼합물을 기술하고 있다. 잠재적인 리포좀 혼합물이 저장되고, 필요하다면 수성 리포좀 제제로 만들어질 수 있다. 생물학적 활성 화합물은 생물학적으로 중요한 특성을 갖는 임의 화합물일 수 있다.

국제 특허 출원 공개 제90/00389호는 세포 내로 시클로스포린의 리포좀 전달을 가능하게 하는데 사용하기 위하여, 친양쪽성 지질 및 시클로스포린 또는 그의 유도체를 갖는 동결 건조된 잠재적인 리포좀 혼합물을 기술한다. 동결 건조된 혼합물을 수성 매질 중에 재구성하여 동결 건조 혼합물 중에 존재하는 모든 시클로스포린을 실질적으로 캡슐화하는 리포좀을 제공한다.

국제 특허 출원 공개 제92/11842호에는 물 또는 염수 용액을 사용하여 재구성할 때 니스타틴 등의 폴리엔 약제를 포함하는 리포좀 현탁액을 형성하는 프로리포좀 분말이 개시되어 있다.

프로리포좀 조성물에 관한 상기 특허 및 출원 모두는 투여 전에 수화시켜야 하는 조성물에 관한 것이다.

유럽 특허 제309464호는 흡입될 수 있는 프로리포좀 분말 조성물을 기술한다. 이 분말 조성물은 생물학적 활성 성분이 지질 중의 입상 분산물로 존재하는 고상 입자를 포함한다.

<발명의 목적>

본 발명자들은 흡입에 의한 전달이 필요한 경우 단일상만을 갖는 프로리포좀 분말을 제공하는 것이 유리하다는 것을 알아내었다. 따라서, 본 발명의 목적은 이러한 프로리포좀 분말을 제공하는 것이다.

<발명의 기술>

본 발명의 상기 목적은 프로리포좀 분말의 본 발명에 따른 공급에 의해 달성되며, 상기 분말은 생물학적 활성 성분의 분리된 입자들을 상 전이 온도 (T_c)가 37℃ 미만인 지질 또는 지질 혼합물과 함께 단일상으로 포함한다.

이 분말은 특히 흡입에 의한 투여에 적합하다.

단일상 분말은 또한 생물학적 활성 성분 및 상 전이 온도가 37℃ 미만인 지질 또는 지질의 혼합물의 균일 분자 혼합물을 포함하는 것으로서 설명될 수 있다.

"단일상" 및 "균일 분자 혼합물"의 용어로부터 본 발명의 분말 중에는 활성 성분 또는 지질의 별도의 결정상이 없다는 것을 이해할 수 있을 것이다.

단일상 분말은 직접 및 동시에, 예를 들면 호흡기의 상부 또는 하부로 흡입될 수 있으며, 생물학적 활성 성분이 전체로 혼입되어 있는 리포좀을 형성할 것이다.

일반적으로, 공지 방법에 의해 리포좀을 제조하는데 적합하다고 알려진 임의의 친양쪽성 지질 또는 지질 혼합물이 본 발명에서 사용될 수 있다. 지질 또는 지질 혼합물은 생리 조건하에서 수화될 수 있는 프로리포좀 분말 제품을 얻기 위하여 (즉, 호흡기 중에서 리포좀을 형성할 수 있기 위하여) 체온 (37℃) 미만의 상 전이 온도를 가져야 한다. 상이한 지질 혼합물의 상 전이 온도는 확립된 방법, 예를 들면 DSC법 (예컨대, J. Suurkuusk 등., Biochemistry, vol. 15, no.7, p. 1393 (1976) 참조)을 사용하여 쉽게 측정할 수 있다. 일반적으로, 상 전이 온도가 37℃ 미만인 임의의 천연 또는 합성 지질 또는 지질 혼합물이 본 발명에서 유용하다.

잠재적으로 유용한 지질의 예로는 천연 및 합성 포스포글리세롤리피드, 스핀고리피드 및 디갈락토실글리세롤리피드 등의 천연 및 합성 지질을 언급할 수 있다. 천연 지질 중에서 스틴고미에린 (SM), 세라미드 및 세레브로시드 등의 스핀고리피드 (SL); 디갈락토실디아실글리세롤 (DGalDG) 등의 갈락토실글리세롤리피드; 난황 포스파티딜콜린 (e-PC) 및 대두 포스파티딜콜린 (s-PC) 등의 포스포글리세롤리피드; 난황 레시틴 (e-레시틴) 및 대두 레시틴 (s-레시틴) 등의 레시틴을 언급할 수 있다. 합성 지질 중에서는 디미리스토일 포스파티딜콜린 (DMPC), 디팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC), 디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC), 디라우릴 포스파티딜콜린 (DLPC), 1-미리스토일-2-팔미토일 포스파티딜콜린 (MPPC), 1-팔미토일-2-미리스토일 포스파티딜콜린 (PMPC), 및 디올레오일 포스파티딜콜린 (DOPC)을 언급할 수 있다. 지질 혼합물 중에서는 SM/PC, SM/콜레스테롤, ePC/콜레스테롤, sPC/콜레스테롤, PC/PS/콜레스테롤, DMPC/DPPC, DMPC/DPPC/CH, DMPC/CH, DPPC/DOPC, DPPC/DOPC/CH, DLPC/DPPC, DLPC/DPPC/CH, DLPC/DMPC, DLPC/DMPC/CH, DOPC/DSPC, DPSM/DMSM, e-레시틴/콜레스테롤 및 s-레시틴/콜레스테롤을 언급할 수 있다. 상기한 것 이외에 디미리스토일 포스파티딜글리세롤 (DMPG), 디포스팔미토일 포스파티딜글리세롤 (DPPG), 디미리스토일 포스파티드산 (DMPA), 디팔미토일 포스파티드산 (DPPA) 또는 스테아릴아민 (SA) 등의 대전된 지질이 포함될 수 있다.

본 발명에서 특히 중요한 지질은 DPPC 및(또는) DMPC이다. 10중량% 이상의 DMPC (예를 들면 10 내지 50% DMPC)를 포함하는 DPPC 및 DMPC의 혼합물이 바람직하다. 또한 특히 바람직한 것은 예를 들면, 5중량% 이하의 양으로 DMPG, DPPG, DMPA 또는 SA 등의 하나 이상의 대전된 지질을 포함하는 DPPC 및 DMPC의 혼합물이다. 또다른 바람직한 혼합물은 하나 이상의 대전된 지질을 임의로 포함하는 DPSM과DMSM, 및 하나 이상의 대전된 지질을 임의로 포함하며 T_c는 37℃ 미만인 e-레시틴 또는 s-레시틴과 콜레스테롤의 혼합물이다. 다른 혼합물들은 예를 들면 문헌 [Gregor Cevc, Phospholipids Handbook, Marcel Dekker, New York (1993) pp 427-435]을 참고로 당분야의 숙련가에 의해 쉽게 선택될 수 있다.

활성 성분은 바람직하게는 수화 중 리포좀에서의 캡슐화를 위하여 지질 이중층 내로 혼입될 수 있는 분자 구조를 갖는다. 이러한 예로는 소수성 기로서 작용하기에 충분한 장쇄 탄화수소를 갖는 지방산 에스테르가 있다.

적합한 활성 성분은 당 기술 분야의 숙련자에 의해 쉽게 인식될 수 있으며, 항염증제와 기관지이완 (bronchorelaxing) 약제 및 항히스타민제, 시클로옥시게나아제 억제제, 류코트리엔 합성 억제제, 류코트리엔 길항제, 포스포리파아제-A2 (PLA2) 억제제, 혈소판 응집 인자 (PAF) 길항제 및 천식 예방제 등을 포함할 수 있다. 항부정맥 약제 (antiarrhythmic drug), 정신안정제, 심장제 글루코시드, 호르몬, 항고혈압 약제, 항당뇨제, 구충제 및 항암제, 진정제, 진통제, 항생제, 항류마티스제, 염증치료제, 항진균제, 항저혈압제, 백신, 항바이러스제, 단백질, 펩티드 및 비타민이 또한 중요할 수 있다.

구체적으로는, 부데소니드, 덱사메타손, 베타메타손, 플루오시노론, 플루메타손, 트리암시노론 아세토니드, 플루니소리드, 베크로메타손 및 프레그난 유도체의 16, 17-아세탈 등의 글루코코르티코스테로이드 및 그의 유도 화합물; 및 테르부타린, 살메테롤, 살부타몰, 포르모테롤, 페노테롤, 크렌부테롤, 프로카테롤, 비톨테롤 및 브록사테롤 등의 β-2 작용제가 본 발명에서 유용할 수 있다. 또한 활성 성분은 제약학상 활성 성분의 혼합물일 수 있으며, 예를 들면 포르모테롤, 살메테롤, 테르부탈린 또는 살부타몰 등의 기관지확장제와 글루코코르티코-스테로이드의 혼합물이 유용할 수 있다. 임의의 활성 성분에 대해 본원에서 언급되는 경우 의심없이 상기 언급은 제약학상 허용가능한 에스테르, 염 및 그의 수화물에 대한 언급을 포함하려는 것이다.

활성 성분이 스테로이드인 경우, 스테로이드 에스테르가 바람직하다.

활성 성분은 바람직하게는 스테로이드, 바람직하게는 8개 이상, 예를 들면 10개 이상 또는 12개 이상의 탄소 원자의 지방산과 21-위치에서 에스테르화되는 스테로이드이다. 지방산은 예를 들면, 24개 이하의 탄소 원자, 예를 들면 20개 이하의 탄소 원자 또는 18개 이하의 탄소 원자를 가질 수 있다. 보다 바람직하게는, 활성 성분은 스테로이드-21-팔미테이트, 미리스테이트, 라우레이트, 카프레이트, 카프릴레이트 또는 스테아레이트이다. 본 발명에 따른 가장 바람직한 활성 성분은 (22R)-16α,17α-부틸리덴디옥시-6α,9α-디플루오로-11β-히드록시-21-팔미토일옥시프레근-4-엔-3,20-디온, 로플포니드 팔미테이트 화합물이다.

활성 성분이 에스테르일때, 이는 주활성 물질 (active principal)로 가수분해되어야 한다. 결정상의 에스테르가 가수분해되지 않는 것에 반하여, 본 발명의 단일상 프로리포좀 분말은 동일계에서 필요한 가수분해를 용이하게 한다.

흡입에 의한 전달이 필요한 경우, 본 발명의 프로리포좀 분말의 가능한 많은 양은 직경이 10미크론 미만, 예를 들면 0.01-10미크론 또는 0.1-6미크론, 예를 들면 0.1-5미크론인 입자, 또는 상기 입자의 응집체로 이루어져야 한다. 바람직하게는 분말의 50% 이상은 바람직한 크기 범위 내에 있는 입자로 이루어진다. 예를 들면, 분말의 60% 이상, 바람직하게는 70% 이상, 보다 바람직하게는 80% 이상 및 가장 바람직하게는 90% 이상이 바람직한 크기 범위 내에 있는 입자 또는 이 입자의 응집체로 이루어진다.

본 발명의 프로리포좀 분말은 다른 성분을 포함할 필요가 없다. 그러나, 본 발명의 분말을 포함하는 제약 조성물은 제약학상 허용가능한 보조제, 희석제 및 담체 등의 다른 제약학상 허용가능한 첨가제를 포함할 수도 있다. 이들은 임의의 미분화 후, 또는 용매가 완전하게 제거된 후 임의의 미분화 전에 프로리포좀 조성물에 첨가될 수 있다. 임의의 담체는 바람직하게는 결정성의 친수성 물질이다. 바람직한 담체로는 결정성 락토스 모노히드레이트이다. 다른 적합한 담체는 글루코스, 프럭토스, 갈락토스, 트레할로스, 수크로스, 말토스, 라피노스, 말티톨, 멜레지토스, 스타치오스, 락티톨, 팔라티니트, 전분, 크실리톨, 만니톨, 미오이노시톨 등 및 그의 수화물, 및 알라닌 등의 아미노산, 및 베타인이 포함된다.

제제 중에 존재하는 첨가제의 양은 매우 다양한 범위에 걸쳐 변화시킬 수 있다. 어떤 경우에는, 첨가제가 거의 또는 전혀 필요하지 않을 수 있지만, 예를 들면, 흡입기에서 사용하기 위하여 분말 특성을 개선하기 위해 분말을 첨가제로 희석하는 것이 종종 바람직하다. 후자의 경우에, 예를 들면 제제의 50% 이상, 예를 들면 70% 이상, 또는 80% 이상이 첨가제로 이루어질 수 있으며, 나머지는 프로리포좀 분말이다. 첨가제의 분율은 또한 생물학적 활성 화합물의 효능 및 흡입을 위한 분말의 최적양에 좌우될 수 있다.

첨가제, 예를 들면 담체가 존재할때, 총 조성물은 호흡에 알맞은 입도 범위 내의 크기를 갖는 입자 형태일 수 있다. 별법으로, 담체는 예를 들면 20미크론이 넘는 질량 중앙 직경의 보다 조대한 입자를 포함하거나, 또는 예를 들면 20미크론이 넘는 질량 중앙 직경을 갖는 보다 작은 입자 응집체를 포함할 수 있는데, 어느 경우에나 프로리포좀 및 담체의 규칙 혼합물이 형성될 수 있다.

본 발명의 추가의 목적은 본 발명의 프로리포좀 분말의 제조 방법, 즉 단일상으로 프로리포좀을 제공하는 방법에 관한 것이다.

따라서, 본 발명은 또한 용매 중에 상 전이 온도가 37℃ 미만인 지질 또는 지질의 혼합물, 및 친지성 생물학적 활성 성분을 용해시키고, 이 용액을 지질 상의 상 전이 온도 미만에서 동결시켜 결정성 용매 매트릭스 및 단일 지질 상을 유리상으로 얻고, 지질 상의 상 전이 온도 미만에서 동결된 용매를 증발시키는 것을 포함하는, 흡입용 프로리포좀 분말의 제조 방법을 제공한다.

용액의 동결 및 용매 증발은 종래 방법에 의해, 예를 들면 종래의 동결-건조기 내에서 수행될 수 있다. 예를 들면, 지질 및 생물학적 활성 성분의 용액을 동결 건조기의 선반 상에 붓고 온도를 낮추어 동결시킨다. 그 다음, 용매 증발은 예를 들면 동결 건조 챔버의 압력을 낮춤으로써 달성될 수 있으며, 생성된 분말을 챔버의 선반으로부터 긁어내어 임의로 시브를 통과시킬 수 있다.

동결-건조 분말은 호흡에 알맞는 입도 범위 내의 입자를 얻기 위하여 필요하다면 추가의 공정을 수행할 수 있으며, 예를 들면 동결 건조 분말을 예를 들면 에어 젯트 밀을 사용하여 미분화하여 호흡에 알맞은 입자를 제공할 수 있다.

생물학적 활성 성분 및 지질의 용액의 동결은 동결된 용매 매트릭스 내에 단일 지질 상을 만드는 방법으로 수행된다. 단일 지질 상의 제조는 최종 온도 및 용액의 동결 속도에 의해 조절되며, 임의 입자 용액을 동결시키는 최적 속도는 해당 용매의 결정화에 필요한 시간 및 지질과 활성 성분의 결정화에 필요한 시간쯤일 것이고, 이는 시행착오를 거쳐 간단하게 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 최적의 최종 온도는 지질 상의 유리 전이 온도보다 10-20℃ 낮아야 한다. 예를 들면, 분말 X-선 방법은 결정도를 모니터하기 위하여 사용될 수 있으며, 시차 주사 열량계는 수화 후 리포좀 내로의 생물학적 활성 성분의 혼입 정도를 모니터하는데 사용될 수 있다.

분말이 하나 이상의 상을 갖도록 하는 침전 또는 상 분리를 피하기 위하여 동결 전에 모든 성분들이 용액 중에 있는 것이 필수적이므로, 용매는 지질 및 생물학적 활성 성분을 완전하게 용해하는 성능을 가져야 한다. 또한, 용매는 독물학상 허용가능하여야 하며 적합한 동결점 및 바람직하게는 높은 증기압을 가져야 한다. 용매는 예를 들면, 유기 용매, 예를 들면 알코올, 또는 수성 및 유기 용매의 혼합물일 수 있다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 용매는 tert-부탄올이다.

분말은 경우에 따라 작은 구체로 응집될 수 있어 분말의 응집성을 조절할 수 있다. 구체는 바람직하게는 직경이 1mm 보다 크지 않아야 하고, 이보다 큰 구체는 예를 들면 시빙 (sieving) 에 의해 제거될 수 있다. 응집체는 예를 들면 분말 흡입기 중에서 쉽게 탈응집화할 수 있도록 부스러지기 쉬워야 한다.

본 발명의 프로리포좀 분말은 질병의 국소 또는 전신 치료에 유용하며 예를 들면 비강 경로를 포함하여 호흡관의 상부 및 하부를 통하여 투여될 수 있다. 상기한 바와 같이 본 발명은 또한 치료 용도를 위한 상기 프로리포좀 분말을 제공하며, 호흡관을 통한 질병 치료용 약제의 제조에 있어서 프로리포좀 분말의 용도, 및 본 발명의 프로리포좀 분말의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 환자의 치료 방법을 제공한다.

예를 들면, 본 발명의 프로리포좀 분말은 호흡관의 염증 질환, 예를 들면 천식, 비염, 치조염, 기관지초염 및 기관지염의 치료에 사용될 수 있다.

호흡관으로의 투여는 예를 들면 건조 분말 흡입기 또는 가압 에어로졸 흡입기를 사용하여 수행될 수 있다.

적합한 건조 분말 흡입기에는 예를 들면, 모노할러 (Monohaler, 등록상표)라는 상표명으로 알려진 1회 투여용 흡입기 및 예를 들면 상표명 터부할러 (Turbuhaler, 등록상표)로 알려진 흡입기 등의 다회 투여용의 호흡-작용 건조 분말 흡입기를 포함한다.

본 발명의 프로리포좀 분말이 특히 흡입에 의한 투여에 적합하지만, 이는 다른 형태의 전달에 적합한 제제 중에 포함될 수도 있다. 예를 들면, 경구, 국소 및 주사용 제제가 예를 들면 염증성 관절 질병, 예를 들어 관절염, 피부 질환 및 창자 질환의 치료 용도로 제조될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하지 않고 설명하려는 것이다.

본 발명은 특히 흡입용 프로리포좀 분말, 프로리포좀 분말의 제조 방법, 프로리포좀 분말 포함 조성물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.

<실시예 1>

로플포니드 팔미테이트 (10부), DPPC (63부), DMPC (24부) 및 NaDPPG (3부)를 tert-부탄올 (1300부) 중에 80℃에서 용해하였다. 용액을 동결 건조기의 선반 에 붓고 -35℃로 냉각하였다. 용액은 약 30분 후에 이 온도에 도달하였고, 그후 동결 건조기의 압력을 감소시켜 용매의 승화를 유도하였다. 압력을 감소시키고 온도를 증가시킴으로써 승화 속도를 조절할 수는 있지만, 동결건조 과정 내내 온도는 -10℃를 넘지 않도록 하였다. 동결 건조를 모든 용매가 제거될때까지 계속하였다. 생성된 분말은 동결 건조기의 선반으로부터 긁어내어 시브를 통과시켰다.

이 분말을 에어 젯트 밀 내에서 미분화시켜 분말 입자 크기가 5㎛ 미만이 되게 하였다. 미분화된 분말을 락토스 모노히드레이트 (분말 20부: 락토스 모노히드레이트 80부)와 시빙 공정에 의해 혼합하고, 추가로 혼합물을 저압에서 젯트 밀 내에서 미분화에 의해 균질화하였다.

분말 혼합물을 표준 기법을 사용하여 1mm보다 크지 않은 구체로 응집시켰다. 이 보다 더 큰 구체는 시빙에 의해 제거하였다. 응집 분말을 터부할러 (Turbuhaler, 등록상표) 건조 분말 흡입기 내에 충진시켰다.

<실시예 2>

동결 시간을 6시간, 17시간 및 24시간으로 하여 실시예 1의 과정을 반복하였다.

<비교예>

실시예 1의 지질 및 활성 성분을 함께 단순히 건식 혼합하였다. 생성된 분말은 활성 성분 및 지질의 개별 입자들을 포함하는 다상계이다.

<실시예 3>

실시예 1의 과정을 상 전이 온도가 37℃ 미만인 하기 지질 혼합물을 사용하여 반복하였다:

DPSM/DPSM,

e-레시틴/콜레스테롤,

s-레시틴/콜레스테롤.

<실시예 4>

실시예 1의 과정을 하기 활성 성분을 사용하여 반복하였다:

로플포니드-21-미리스테이트,

로플포니드-21-라우레이트,

로플포니드-21-카프레이트,

로플포니드-21-카르릴레이트,

로플포니드-21-스테아레이트.

<분말 분석>

X선 분말 회절법을 실시예 1 및 2의 분말 혼합물에 대해 수행하여 결정 상태가 분말 중에 존재하지 않는다는 것을 알게 되었다. 비교예의 분말은 결정 상태인 활성 성분을 포함하였다.

<리포좀 내로 활성 성분의 혼입>

실시예 1 및 2의 프로리포좀 분말을 수화시켰고 활성 성분의 혼입 정도는 시차 주사 열량계법을 사용하여 측정하였다. 활성 성분이 리포좀 내로 충분히 혼입되었음을 DSC로 알 수 있었다. 비교예의 분말에 대해 수행된 DSC는 실질적으로 리포좀 내로 활성 성분의 혼입이 없었음을 보여주었다.

<에스테르 가수분해>

주활성 물질로의 실시예 1 및 비교예의 프로리포좀 분말의 가수분해 정도가 조사되었다. 실시예 1과 2 및 비교예 (각 경우에 스테로이드 에스테르 50μM)의 프로리포좀 분말을 물로 수화시켰고 15분 동안 50℃로 가열시켰다. 이어 시료를 완충액 중에서 (1mM EDTA, 80mM KCl, 10mM HEPES, pH 7.4) 돼지 췌장 리파아제의 존재하에 (2mg/ml) 37℃에서 배양하고, 120분 이하의 여러 시간 동안 주기적으로 초음파 처리를 하였다. 시료를 HPLC법으로 분석하여 에스테르의 얼마나 많은 양이 주활성 물질로 가수분해되었는가를 결정하였다.

비교예 분말은 단 2%가 가수분해된 것에 비하여, 실시예 1의 프로리포좀 분말 94%가 주활성 물질로 가수분해되었다.

<약리학적 연구>

항수종 효능은 문헌 [L. Kaellstroem 등, Agents and Actions 17(3/4) 355 (1985)]에서 기술된 바와 같이 쥐에 대해 세파덱스 모델을 사용하여 측정하였다.

실시예 1 및 비교예의 분말 시료를 냉각 염수 중에 현탁시키고, 이를 숫컷 스프라그-덜리 (Sprague-Dawley) 쥐의 왼쪽 폐로 기관내 주사하였다. 한시간 후에, 왼쪽 및 오른쪽 폐 모두로 세파덱스 방울 (5mg/kg)이 기관내로 스며듬에 의해 염증 과정이 유발되었다. 유발된 간질 수종은 왼쪽 및 오른쪽 폐의 중량을 측정함으로써 20시간 후에 정량화되었다. 폐 중량의 감소는 분말의 약리 효과를 나타내는 것으로 간주되었다. 실시예 1의 프로리포좀 분말로 치료된 쥐의 폐 중량은 비교예의 분말로 치료된 쥐의 폐 중량보다 40배 이상 감소하였으며, 이는 본 발명에 따른 프로리포좀 분말의 효능이 비교예의 분말의 효능보다 40배 크다는 것이다.

<흡입 연구>

비글 개를 마취시키고, 삽관시키고, 실시예 1 또는 비교예의 제제의 분말 에어로졸에 노출시켰다. 에어로졸은 1800rpm에서 작동되는 라이트 더스트 피드 (Wright Dust Feed) 장치를 사용하여 분말 정제로부터 생성되었다. 흡입하는 동안 에어로졸 농도 (Casella 950AMS), 주기적으로 변하는 체적, 불어넣은 주기적으로 변하는 체적 및 호흡수를 기록하였다. 표적 흡입 투여량은 25μg 로플포니드 팔미테이트/kg 체중이었다. 플라즈마 시료를 흡입에 이어 정기적으로 취하였다. 생체 이용율은 정맥내 투여에 따른 로플포니드의 플라즈마 농도와 비교하여 계산하였다. 실시예 1의 분말의 투여에 따른 로플포니드의 생체 이용율은 100%에 근접하였으나, 비교예 분말의 투여에 따른 로플포니드의 생체 이용율은 측정할 수 없었다.

Claims (40)

1. 생물학적 활성 성분의 분리된 입자들을 상 전이 온도가 37℃ 미만인 지질 또는 지질 혼합물과 함께 단일상으로 함유하는 프로리포좀 분말, 및 결정성의 친수성 제약학상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 분말이 천연 및 합성 포스포글리세롤리피드, 스핀고리피드 및 디갈락토실글리세롤리피드로부터 선택된 1종 이상의 지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 분말이 혼합물 스틴고미에린 (SM)/포스파티딜콜린 (PC), SM/콜레스테롤, 난황 포스파티딜콜린 (ePC)/콜레스테롤, 대두 포스파티딜콜린 (sPC)/콜레스테롤, PC/PS/콜레스테롤, 디미리스토일 포스파티딜콜린 (DMPC)/디팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC), DMPC/DPPC/CH, DMPC/CH, DPPC/디올레오일 포스파티딜콜린 (DOPC), DPPC/DOPC/CH, 디라우릴 포스파티딜콜린 (DLPC)/DPPC, DLPC/DPPC/CH, DLPC/DMPC, DLPC/DMPC/CH, DOPC/디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC)로부터 선택된 지질 혼합물을 포함하는 것인 제약 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 분말이 DPPC, DMPC, 또는 DPPC 및 DMPC의 혼합물을 포함하는 것인 제약 조성물.
5. 제4항에 있어서, 상기 혼합물이 DMPC 10% 이상을 포함하는 것인 제약 조성물.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 분말이 대전된 지질을 더 포함하는 것인 제약 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 대전된 지질이 DMPG, DPPG, DMPA 및 SA로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 항염증제, 기관지이완 약제, 항히스타민제, 시클로옥시게나아제 억제제, 류코트리엔 길항제, PLA2 억제제, PAF 길항제 및 천식 예방제로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 글루코코르티코스테로이드를 포함하는 것인 제약 조성물.
10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 β-2 작용제를 포함하는 것인 제약 조성물.
11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 8개 이상의 탄소 원자의 지방산과 21 위치에서 에스테르화되는 스테로이드를 포함하는 것인 제약 조성물.
12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 10개 이상의 탄소 원자의 지방산과 21 위치에서 에스테르화되는 스테로이드를 포함하는 것인 제약 조성물.
13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 12개 이상의 탄소 원자의 지방산과 21 위치에서 에스테르화되는 스테로이드를 포함하는 것인 제약 조성물.
14. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 스테로이드-21-팔미테이트를 포함하는 것인 제약 조성물.
15. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 활성 성분이 로플포니드 팔미테이트를 포함하는 것인 제약 조성물.
16. 제1항에 있어서, 상기 분말의 50% 이상이 직경 10미크론 미만인 입자를 포함하는 제약 조성물.
17. 제1항에 있어서, 상기 분말의 60% 이상이 직경 10미크론 미만인 입자를 포함하는 것인 제약 조성물.
18. 제1항에 있어서, 상기 분말의 70% 이상이 직경 10미크론 미만인 입자를 포함하는 것인 제약 조성물.
19. 제1항에 있어서, 상기 분말의 80% 이상이 직경 10미크론 미만인 입자를 포함하는 것인 제약 조성물
20. 제1항에 있어서, 상기 분말의 90% 이상이 직경 10미크론 미만인 입자를 포함하는 것인 제약 조성물.
21. 제16항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 입자가 직경이 0.01 내지 10미크론인 제약 조성물.
22. 제16항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 입자가 직경이 0.1 내지 6미크론인 제약 조성물.
23. 제16항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 입자가 직경 0.1 내지 5미크론인 제약 조성물.
24. 제1항 또는 제2항에 있어서, 응집 입자를 포함하는 제약 조성물.
25. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 담체가 결정성 락토스 모노히드레이트인 제약 조성물.
26. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 담체가 글루코스, 프럭토스, 갈락토스, 트레할로스, 수크로스, 말토스, 라피노스, 말티톨, 멜레지토즈, 스타치오스, 락티톨, 팔라티네이트, 전분, 크실리톨, 만니톨, 미오이노시톨 및 그의 수화물, 및 아미노산으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
27. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 담체가 질량 중앙 직경이 20미크론 이상인 입자를 포함하는 것인 제약 조성물.
28. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 담체가 10미크론 미만의 질량 중앙 직경의 입자를 포함하는 것인 제약 조성물.
29. 용매 중에 상 전이 온도가 37℃ 미만인 지질 또는 지질의 혼합물, 및 친지성 생물학적 활성 성분을 용해시키고, 이 용액을 지질 상의 상 전이 온도 미만에서 동결시켜 결정성 용매 매트릭스 및 단일 지질상을 유리상으로 얻고, 지질 상의 상 전이 온도 미만에서 동결 용매를 증발시키고, 제조 중에, 결정성의 친수성 제약학상 허용가능한 담체를 첨가하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의제약 조성물의 제조 방법.
30. 제29항에 있어서, 동결 건조 분말을 미분화하여 호흡에 알맞은 입도 범위 내의 입자를 얻는 단계를 더 포함하는 방법.
31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 동결 및 용매 증발이 동결 건조기에서 수행되는 방법.
32. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 용매가 유기 용매를 포함하는 방법.
33. 제32항에 있어서, 상기 용매가 알코올을 포함하는 방법.
34. 제33항에 있어서, 상기 용매가 tert-부탄올을 포함하는 방법.
35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 분말과 담체의 혼합물을 미분화하여 호흡에 알맞은 입도 범위 내의 입자를 얻는 단계를 추가로 포함하는 제약 조성물의 제조 방법.
36. 제29항 또는 제35항에 있어서, 직경 1mm 이하의 구체로 입자를 응집하는 단게를 더 포함하는 방법.
37. 제1항 또는 제2항에 있어서, 호흡관을 통하여 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에 사용되는 제약 조성물.
38. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 포함하는 건조 분말 흡입 장치.
39. 제38항에 있어서, 1회 투여용 흡입기인 건조 분말 흡입 장치.
40. 제38항에 있어서, 다회 투여용 흡입기인 건조 분말 흡입 장치.