JPWO2014200060A1 - Pdgfを含有するds細胞用無血清培地 - Google Patents
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Abstract
Description
[1] 真皮毛根鞘(DS)細胞を培養するための無血清培地であって、血小板由来成長因子(PDGF)を含んで成る、無血清培地。
[2] 前記PDGFがPDGF−BBである、[1]に記載の無血清培地。
[3] 前記真皮毛根鞘(DS)細胞が真皮毛根鞘カップ(DSC)領域に由来する、[1]又は[2]に記載の無血清培地。
[4] 血小板由来成長因子(PDGF)を含んで成る無血清培地を用いた、真皮毛根鞘(DS)細胞を培養するための方法。
[5] 前記PDGFがPDGF−BBである、[4]に記載の方法。
[6] 前記真皮毛根鞘(DS)細胞が真皮毛根鞘カップ(DSC)領域に由来する、[4]又は[5]に記載の方法。
12ウェルプレート(BD)をCELLStartTM (Lifetechnologies)でコーティングし、凍結保存したDS細胞(21歳男性頭皮由来、DSC、継代数0)を、該プレートに1ウェルあたり4×104細胞を1 mlの無血清培地に懸濁し、播種した。無血清培地としては、1) HFDM-1 (-) 培地(細胞科学研究所)、2) HFDM-1 (+) 培地(細胞科学研究所)、3) PDGF-AA (10 ng/ml) を溶解させた HFDM-1 (-) 培地、及び4) PDGF-BB (10 ng/ml) を溶解させた HFDM-1 (-) 培地を用いた。5%炭酸ガス存在下にて37℃で培養した。2, 5, 10 日目に細胞を顕微鏡観察し(図1:40倍)、1視野あたりの細胞数を計測した(図2)。
12ウェルプレート(BD)をCELLStartTM (Lifetechnologies)でコーティングし、凍結保存したDS細胞(50歳男性頭皮由来、DSC、継代数0)を、該プレートに1ウェルあたり4×104細胞を1 mlの無血清培地に懸濁し、播種した。無血清培地としては、1) StemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)、2) PDGF-BB (10 ng/ml)を溶解させた StemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)、3) Mosaic hMSC SF Culture Medium (sup+, BD)、4)PDGF-BB(10 ng/ml)を溶解させたMosaic hMSC SF Culture Medium (sup+, BD)を用いた。5%炭酸ガス存在下にて37℃で培養した。2, 7 日目に細胞を顕微鏡観察し(図3:40倍)、1視野あたりの細胞数を計測した(図4)。
12ウェルプレート(BD)をCELLStartTM (Lifetechnologies)でコーティングし、凍結保存したDS細胞(43歳男性頭皮由来、DS、継代数0)を、該プレートに1ウェルあたり4×104細胞を1 mlの無血清培地に懸濁し、播種した。無血清培地としては、1) HFDM-1 (-) 培地(細胞科学研究所)、2) HFDM-1 (+) 培地(細胞科学研究所)、3) PDGF-AA (10 ng/ml) を溶解させた HFDM-1 (-) 培地、及び4) PDGF-BB (10 ng/ml) を溶解させた HFDM-1 (-) 培地を用いた。5%炭酸ガス存在下にて37℃で培養した。2, 4, 7日目に細胞を顕微鏡観察し(図5:40倍;4日目については示されていない)、1視野あたりの細胞数を計測した(図6)。
12ウェルプレート(BD)をCELLStartTM (Lifetechnologies)でコーティングし、凍結保存したDS細胞(43歳男性頭皮由来、DS、継代数0)を、該プレートに1ウェルあたり4×104細胞を1 mlの無血清培地に懸濁し、播種した。無血清培地としては、1) StemProSFM CTS(sup-, Lifetechnologies)、2) PDGF-BB (10 ng/ml)を溶解させた StemProSFM CTS(sup-, Lifetechnologies)、3) StemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)、4)PDGF-BB(10 ng/ml)を溶解させたStemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)を用いた。5%炭酸ガス存在下にて37℃で培養した。2, 4, 7日目に細胞を顕微鏡観察し(図7:40倍;4日目については示されていない)、1視野あたりの細胞数を計測した(図8)。
12ウェルプレート(BD)をCELLStartTM (Lifetechnologies)でコーティングし、凍結保存したヒト皮膚繊維芽細胞を、該プレートに1ウェルあたり4×104細胞を1 mlの無血清培地に懸濁し、播種した。無血清培地としては、1) StemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)、2)PDGF-BB(10 ng/ml)を溶解させたStemProSFM CTS(sup+, Lifetechnologies)を用いた。5%炭酸ガス存在下にて37℃で培養した。2, 7日目に細胞を顕微鏡観察し(図9:40倍)、1視野あたりの細胞数を計測した(図10)。
Claims (6)
- 真皮毛根鞘(DS)細胞を培養するための無血清培地であって、血小板由来成長因子(PDGF)を含んで成る、無血清培地。
- 前記PDGFがPDGF−BBである、請求項1に記載の無血清培地。
- 前記真皮毛根鞘(DS)細胞が真皮毛根鞘カップ(DSC)領域に由来する、請求項1又は2に記載の無血清培地。
- 血小板由来成長因子(PDGF)を含んで成る無血清培地を用いた、真皮毛根鞘(DS)細胞を培養するための方法。
- 前記PDGFがPDGF−BBである、請求項4に記載の方法。
- 前記真皮毛根鞘(DS)細胞が真皮毛根鞘カップ(DSC)領域に由来する、請求項4又は5に記載の方法。
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