JP2006325445A - 間葉系幹細胞増殖培地 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 エタノールアミンを含み、かつインスリン、トランスフェリン、PDGF、bFGFからなる群より選択される1以上の物質を含み、さらに血清成分を1%以下添加することで間葉系幹細胞を良好に増殖させる培地を提供する。
【選択図】なし
Description
すなわち、本発明は:
[1]1%以下の血清を含有する間葉系幹細胞増殖培地;
[2]エタノールアミンを含み、かつインスリン、トランスフェリン、PDGF、bFGFからなる群より選択される1以上の物質を含む[1]の培地;
[3]該培地での間葉系幹細胞の増殖能が10%牛胎児血清含有DMEMでの増殖能の1.5倍以上である[1]の培地。
[4][1]〜[3]のいずれかの培地を用いて培養された間葉系幹細胞の培養物;
[4][1]〜[3]のいずれかの培地を含む、間葉系幹細胞の培養キット;
[5]間葉系幹細胞を1%以下の血清を含有する増殖培地中で培養する工程を包含し、該培地での間葉系幹細胞の増殖能が10%牛胎児血清含有DMEMでの増殖能の1.5倍以上であることを特徴とする間葉系幹細胞の培養方法;
[7]増殖培地がエタノールアミンを含み、かつインスリン、トランスフェリン、PDGF、bFGFからなる群より選択される1以上の物質を含む[6]の方法
に関する。
正常人より供与されたヒト骨髄を10%牛胎児血清含有DMEMに浮遊させ、シャーレに播種し、5%二酸化炭素存在下、37℃の条件で培養した。シャーレに接着した細胞をコンフレントになるまで培養し、トリプシン消化により細胞を継代培養し、ヒト間葉系幹細胞を得た。
9継代したヒト間葉系幹細胞について、一部を従来培地である10%牛胎児血清含有DMEM培地(以下、従来培地)で培養し、一部を本発明に係る培地(以下、間葉系幹細胞増殖培地)で培養した。間葉系幹細胞増殖培地はαMEMに5μg/mlインシュリン、5μg/mlトランスフェリン、6.2μg/mlエタノールアミン、10ng/mlPDGF、10ng/mlbFGF、0.2μg/mlヒドロコルチゾン、14μg/mlホスホリルエタノールアミン及び1%牛胎児血清を添加したものである。
図1は従来培地及び間葉系幹細胞増殖培地で培養したヒト間葉系幹細胞について培地変更後の培養日数と細胞集団倍化数との関係を示したものである。図1において○は従来培地での細胞集団倍化数を、●は本発明の間葉系幹細胞増殖培地での細胞集団倍化数を示す。図1のごとく間葉系幹細胞増殖培地は従来培地に比較して約2倍の細胞増殖が見られた。なお、間葉系幹細胞増殖培地の牛胎児血清をヒト血清に置換しても増殖性に変化がないことを確認した。
Claims (7)
- 1%以下の血清を含有する間葉系幹細胞増殖培地。
- エタノールアミンを含み、かつインスリン、トランスフェリン、PDGF、bFGFからなる群より選択される1以上の物質を含む請求項1記載の培地。
- 該培地での間葉系幹細胞の増殖能が10%牛胎児血清含有DMEMでの増殖能の1.5倍以上である請求項1記載の培地。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の培地を用いて培養された間葉系幹細胞の培養物。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の培地を含む、間葉系幹細胞の培養キット。
- 間葉系幹細胞を1%以下の血清を含有する増殖培地中で培養する工程を包含し、該培地での間葉系幹細胞の増殖能が10%牛胎児血清含有DMEMでの増殖能の1.5倍以上であることを特徴とする間葉系幹細胞の培養方法。
- 増殖培地がエタノールアミンを含み、かつインスリン、トランスフェリン、PDGF、bFGFからなる群より選択される1以上の物質を含む請求項6記載の方法。
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