JPWO2011013700A1 - キャリアペプチドフラグメント及びその利用 - Google Patents
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Abstract
Description
なお、本出願は2009年7月29日に出願された日本国特許出願2009−177103号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
例えば、特許文献1には、ポリペプチド、DNA等の外来物質を細胞内に導入するための細胞透過性キャリアペプチドが記載されている。この特許文献には、細胞透過性キャリアペプチドと異種ポリペプチド、DNA等を連結したキャリアペプチドコンジュゲートを用いることによって、ポリペプチド、DNA等の生理活性物質を高効率に細胞内に導入することができると記載されている。
また、導入したい外来物質(生理活性物質)として比較的分子量の大きいポリペプチド全体を特別な装置を用いることなく目的の細胞内に容易に導入して当該細胞の形質を転換したり機能を改善(若しくは向上)させたりする手法が求められている。
即ち、ここで開示される外来物質導入方法は、KKRTLRKNDRKKR(配列番号1)からなるアミノ酸配列、若しくは該アミノ酸配列のうちの1個又は2個又は3個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成されたアミノ酸配列の何れかから成るキャリアペプチドフラグメントと、該キャリアペプチドフラグメントのN末端側及び/又はC末端側に結合した目的の外来物質と、を有する外来物質導入用構築物を用意する工程と、
上記外来物質導入用構築物を、目的とする真核細胞を含む試料(典型的には該細胞を含む培養物)中に供給する工程と、
上記外来物質導入用構築物が供給された上記試料をインキュベートして(即ち対象の細胞が生存可能な条件下に試料を一定期間保持して)、上記試料中の真核細胞内に上記構築物を導入する工程と、を包含する。
ここで「外来物質」は、上記キャリアペプチドフラグメントのN末端側又はC末端側に直接的又は適当なリンカーを介して間接的に結合可能な無機化合物及び有機化合物であって、真核細胞内に導入可能な分子サイズ及び化学的性質を有するものをいう。
即ち、上記構成の本発明の外来物質導入方法によると、目的とする外来物質(典型的にはポリペプチド、核酸、色素、薬剤等の有機化合物)を上記キャリアペプチド(フラグメント)のN末端側及び/又はC末端側に直接的又は適当なリンカーを介して間接的に結合させて構築した外来物質導入用構築物を、対象とする真核細胞を含む試料(典型的には該細胞を含む培養物)中に供給する(即ち生存する真核細胞に添加する)ことによって、当該目的の外来物質を真核細胞の外部(細胞膜の外側)から細胞膜を通過させて細胞質内(好ましくはさらに核膜を通過させて核内)に高効率に導入することができる。
ここで「ポリペプチド」は、複数のアミノ酸がペプチド結合により結合した構造を有するポリマーをいい、ペプチド結合の数(即ちアミノ酸残基数)によって限定されない用語である。即ち、ポリペプチドには、アミノ酸残基数が10以上300未満程度の一般にペプチドと呼ばれるものや一般にタンパク質(典型的には300以上のアミノ酸残基から成る高分子化合物)と呼ばれるものを包含する用語である。実際に当該分野においてもポリペプチドとタンパク質とは厳密に区分されておらず、本明細書においても複数のアミノ酸残基から成るポリマー(オリゴマーを包含する。)をポリペプチドと総称する。
また、ここで「核酸」は、ヌクレオチドの重合体をいい、DNAおよびRNAを包含する。塩基数によって限定されない。
好ましくは、外来物質は何れかの生物種由来の成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチド(即ち、成熟型のポリペプチドに対するプレ型ポリペプチドやプレプロ型ポリペプチドを包含する。)であり、前記外来物質導入用構築物は、該外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドに対応するアミノ酸配列と前記キャリアペプチドフラグメントのアミノ酸配列とを有する合成ポリペプチドとして提供される。ここで合成ポリペプチドとは、いわゆる遺伝子工学的手法によって生合成されたポリペプチドと、化学的な合成(例えば市販のペプチド合成機の利用)によって得られたポリペプチドの両方を包含する用語である。
本態様の方法によると、上記合成ポリペプチドの状態で、目的のポリペプチド(即ち該ポリペプチドを構成するアミノ酸配列)を標的とする細胞内に導入することができる。例えば、100以上1000以下のアミノ酸残基により構成されている成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドを標的とする細胞内に導入することができる。
本発明によると、ヒトその他哺乳類の細胞(例えば皮膚細胞や神経細胞等の体細胞、体性幹細胞、人工多能性幹細胞、ES細胞)に所定の機能を有する目的の外来物質を導入することができる。例えば、ES細胞やiPS細胞等の幹細胞をターゲットとすることにより、導入する外来物質(ポリペプチド等)に応じて当該幹細胞の形質転換、例えば特定の細胞(神経細胞、骨細胞、筋肉細胞、皮膚細胞、等)への分化を実現することができる。
即ち、ここで開示される外来物質導入用構築物は、KKRTLRKNDRKKR(配列番号1)からなるアミノ酸配列、若しくは該アミノ酸配列のうちの1個又は2個又は3個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成されたアミノ酸配列の何れかから成るキャリアペプチドフラグメントと、該キャリアペプチドフラグメントのN末端側及び/又はC末端側に結合した目的の外来物質とを有する。
かかる構築物を利用して上述した本発明の外来物質導入方法を実施することにより、目的の細胞に目的の外来物質を効果的に導入することができる。また、該外来物質が導入された細胞並びに該外来物質を含む細胞を含む器官その他の生体組織を得ることができる。
また、特に好ましくは上記外来物質はポリペプチドであり、例えばアミノ酸残基数が100以上(例えば100〜1000程度、典型的には100〜600程度)であるポリペプチドを外来物質として採用することができる。
また、外来物質導入用構築物の好ましい一態様は、前記外来物質が何れかの生物種由来の成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドであり、該外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドに対応するアミノ酸配列(例えば100以上1000以下のアミノ酸残基により構成される。)と前記キャリアペプチドフラグメントのアミノ酸配列とを有する合成ポリペプチドとして作製される構築物である。
また、本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した1文字表記(但し配列表では3文字表記)で表す。なお、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のN末端アミノ酸及びC末端アミノ酸を包含する用語である。
ここで配列番号1に記載される具体的なアミノ酸配列は、細胞内情報伝達に関与するプロテインキナーゼの1種であるヒト内皮細胞に存在するLIMキナーゼ2(LIM Kinase 2:上記非特許文献1参照)の第491番目のアミノ酸残基から第503番目のアミノ酸残基までの合計13アミノ酸残基から成る配列部分(即ちモチーフ)に相当するNoLSであることに加え、本発明者によって新たに優れた細胞膜透過性を示すことが見出された配列である。即ち13アミノ酸残基という短い鎖長のペプチドフラグメントであるにもかかわらず比較的高分子量(例えば分子量が100〜20万程度、典型的には1000〜10万程度)の外来物質を細胞外から細胞質内に導入することができる。
従って、ここで開示される「キャリアペプチドフラグメント」は、典型的には配列番号1に記載のアミノ酸配列と同一の配列であるが、当該同一配列の他に、細胞膜透過性を損なうことなく1個または数個(典型的には2個又は3個)のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成されたアミノ酸配列を包含する。即ち、そのような軽微な改変配列は、ここで開示される情報に基づいて当業者にとって容易に利用されるものであり、ここで開示される技術的思想としての「キャリアペプチドフラグメント」に包含されるからである。典型例として、配列番号1のアミノ酸配列のうち1個又は数個(典型的には2個又は3個)のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換(conservative amino acid replacement)によって生じた配列(例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列)、或いは、所定のアミノ酸配列について1個又は数個(典型的には2個又は3個)のアミノ酸残基が付加(挿入)した若しくは欠失した配列が挙げられる。
典型的には、外来物質導入用構築物として作製する合成ポリペプチドを構成する総アミノ酸残基数が数個乃至数十個(例えば10個)以上であって1000以下が適当であり、好ましくは600以下であり、さらに好ましくは500以下であり、特に300以下(例えば10〜300)が好適である。このような長さのポリペプチドは合成(生合成、化学合成)が容易であり、使用しやすい。
例えば、導入対象の真核細胞がヒトその他哺乳動物の幹細胞(体性幹細胞、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞(Induced pluripotent stem cells:以下iPS細胞という。)を包含する。)である場合、当該幹細胞の分化誘導に関与する種々の生理活性を有するポリペプチドの成熟型又はその前駆体の利用が好ましい。また、導入対象の真核細胞が癌細胞(腫瘍細胞)である場合、当該癌細胞(腫瘍細胞)のアポトーシス誘導に関与する種々のポリペプチドの利用が好ましい。
従って、本発明の好適な一実施形態として、iPS細胞の作製に関与する複数の遺伝子のうちの少なくとも一つの遺伝子(例えばSox2)がコードするポリペプチド(例えばSOX2タンパク質)を外来物質として本発明に係る外来物質導入用構築物を作製し、該構築物を所定の真核細胞(ヒト皮膚線維芽細胞等)に導入することを特徴とするiPS細胞作製方法が挙げられる。
従って、本発明の好適な一実施形態として、神経分化誘導に関連するポリペプチドとして上記SOCS系タンパク質(非特許文献2参照)のいずれかを使用し、標的とする真核細胞(例えばヒトや哺乳動物由来の幹細胞)に導入する合成ポリペプチドを構築することができる。従って、上記説明から明らかなように、本発明によって、少なくとも一種の真核細胞を神経細胞に分化誘導する方法が提供される。即ち、本方法は、本発明に係る上記キャリアペプチドフラグメントのN末端側又はC末端側に、上記SOCS系タンパク質その他の何らかの神経分化誘導に関与するポリペプチドを構成するアミノ酸配列を備えるペプチド鎖を合成すること、および、該合成ポリペプチド(即ち外来物質導入用構築物である人工ポリペプチド)を対象である真核細胞又は該細胞を有する組織を含有する試料(典型的には該細胞を含む培養物)に供給すること、を包含する。典型的には、さらに該合成ポリペプチドが供給された試料をインキュベートすること、即ち対象の細胞が生存可能な条件下(換言すれば外来物質導入用構築物が細胞内に導入可能な条件下)に試料を一定期間保持しておくこと、を包含する。
なお、上述した本発明に係るキャリアペプチドフラグメントの場合と同様、神経分化誘導に関するポリペプチドとしての機能を保持する限りにおいて、1個または数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成される改変アミノ酸配列もまた神経分化誘導に関するポリペプチド(外来物質)として使用し得ることは勿論である。
神経分化誘導剤の形態に関して特に限定はない。例えば、典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液(例えばPBS)等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、神経分化誘導ポリペプチド(主成分)及び種々の担体(副成分)を材料にして種々の形態の薬剤(組成物)を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修,Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。
或いはまた、生体から一時的に又は永久的に摘出した細胞材料、即ち生組織や細胞塊(例えば体性幹細胞の培養物)に、適当量の神経分化誘導剤(神経分化誘導ポリペプチド)を供給することによって、効率よく目的のポリペプチドを細胞外から細胞質内(さらに好ましくは核体)に導入することができ、神経細胞を効率よく発生させることができる。このことは当該細胞材料中に所望する神経細胞を大量に生産し得ることを意味する。而して、大量に生産された神経細胞、或いは該生産された神経細胞を含む細胞材料(生組織や細胞塊)を再び生体内(典型的には神経再生が要求されている患部)に戻すことによっても、生体に直接神経分化誘導剤(神経分化誘導ポリペプチド)を投与する場合と同様の治療効果が得られ得る。
以上の説明から明らかなように、本発明は別の側面として、神経分化誘導ポリペプチドを細胞内に導入することによって、神経疾患治療に有用な、神経細胞に分化誘導された細胞、細胞塊又は生組織を提供することができる。
人工ポリペプチドは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が数個(例えば10個)以上で1000以下程度(好適には600以下、特に好ましくは300以下、例えば50〜300又は50以下でもよい)であるものが望ましい。このような鎖長のポリペプチドは合成によって容易に構築することができるため、目的とする真核細胞を含む試料に供給し易い。
なお、ポリペプチドのコンホメーション(立体構造)については特に限定されるものではないが、免疫原(抗原)になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。
なお、人工ポリペプチドとしては、全てのアミノ酸残基がL型アミノ酸であるものが好ましいが、内在するキャリアペプチドフラグメントならびにペプチドモチーフの所望する機能を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部又は全部がD型アミノ酸に置換されているものであってもよい。
また、内在するキャリアペプチドフラグメントならびに外来物質であるポリペプチドの所望する機能を失わない限りにおいて、これら配列に含まれ得ない付加的な配列を部分的に含み得る。例えばリンカーとして機能する数個のアミノ酸残基(例えばグリシン残基)をキャリアペプチドフラグメントと外来ペプチドモチーフとの間に配置した構成のアミノ酸配列を構築してもよい。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物(哺乳類)細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的のアミノ酸配列から成るポリペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的のポリペプチド(即ち外来物質導入用構築物)を得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型DNA(即ち目的とする人工ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片)を構築し、ポリペプチド合成に必要な種々の化合物(ATP、RNAポリメラーゼ、アミノ酸類等)を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット(例えば、日本の東洋紡績(株)から入手可能なPROTEIOS(商標)Wheat germ cell-free protein synthesis kit)が市販されている。
従って、細胞質内(好ましくは核内)への導入対象であるポリペプチドに対応するアミノ酸配列を決定し、上記配列番号1に示す細胞膜透過性のキャリアペプチドフラグメントと合わせてペプチド鎖を設計しさえすれば、そのアミノ酸配列に従って無細胞タンパク質合成システムによって目的の人工ポリペプチドを容易に合成・生産することができる。例えば、日本の(株)ポストゲノム研究所のピュアシステム(登録商標)に基づいてポリペプチドを容易に生産することができる。
アミノ酸残基数が100以上である比較的大きい分子量のポリペプチドを外来物質として有する外来物質導入用構築物を遺伝子工学的手法により計2種類(サンプル1及びサンプル2)作製した。
即ち、サンプル1は、外来ポリペプチドとして上記iPS細胞の作製に用いられる遺伝子の一つであるSox2の産物であるSOX2タンパク質(即ちDNA結合能を有するHMGドメインおよび転写活性化ドメインを備える転写因子、以下「SOX2」という。)を採用した。
また、サンプル2は、外来ポリペプチドとして蛍光タンパク質であるGFP(Green Fluorescent Protein)を採用した。
なお、SOX2のアミノ酸配列(アミノ酸残基数:317)は配列番号2に示しており、GFPのアミノ酸配列(アミノ酸残基数:238)は、配列番号3に示している。
ここで設計、合成した融合遺伝子の詳細なヌクレオチド配列及びコードされるアミノ酸配列はサンプル1(nols−sox2)については配列番号4及び5に示しており、サンプル2(nols−gfp)については配列番号6及び7に示している。
これら合成遺伝子を用いて一般的な昆虫細胞を用いたバキュロウイルス発現システムによって、目的の融合ポリペプチド(サンプル1及びサンプル2)を生合成した。
次いで、上記作製したトランスファーベクターを、バキュロウイルスCPd株のゲノムDNA(片倉工業社製品)とBmN細胞(片倉工業社製品)へ共感染させ、組換えウイルスを作製した。
得られた組換えウイルスを、カイコ(Bombyx mori、片倉工業社製品)5頭に感染させた。そして感染したカイコを蛹になるまで飼育した後、蛹を磨砕用のバッファー(20mMのTris−HCl(pH8.0)、150mMのNaCl、1mMのEDTA、1mMのEGTA、10%のGlycerol、10mMのBenzamidine、1mMのPMSF、ならびに1mMのDTTを含む。)中で先端部がテフロン(登録商標)製のホモジナイザーを用いて破砕した。得られたカイコ磨砕液に界面活性剤(商品名:Tween20)を濃度1%となる様に添加し、4℃で1時間攪拌して可溶化を実施し、超遠心(100000g×1時間)にて上清部(可溶性画分)と沈澱部(不溶性画分)とに分離した。
而して、この不溶性画分は可溶化バッファーであるリン酸緩衝液(pH 7.5、0.5MのNaCl、1mMのDTT、5mMのイミダゾール、8Mのウレアを含む。)に懸濁し、その後、室温で1時間攪拌して可溶化した。
そして同バッファーにてカラムをよく洗浄した後、溶出バッファー(リン酸緩衝液(pH 7.5)、0.5MのNaCl、0.5Mのイミダゾールを含む。)によってタンパク質を溶出させた。こうして精製されたサンプル1ポリペプチドの溶液を得た。
なお、得られた2種類の精製ポリペプチドをPD−10脱塩カラムを用いて、ダルベッコ−リン酸緩衝液(和光純薬社製品、以下「D−PBS」と略称する。)へとバッファー置換をした後、0.45μmフィルターによって滅菌ろ過し、以下の試験に用いた。
真核細胞としてヒト新生児線維芽細胞(ATCC、CCD−1079sk株)を使用し、上記実施例1で得られた2種のサンプル(外来物質導入用構築物)の細胞膜透過機能を調べた。
即ち、凡そ2×104個の上記細胞を10%FBS(GIBCO社製品)含有培養液(Eagle‘sMEM培地:0.1mMのNEAA、1mMのピルビン酸ナトリウム、Earle’sBSS(GIBCO社製品)を含む。)を用いて、コラーゲンコートした8ウェルスライド中で37℃、5%CO2存在下で一晩培養した。
この細胞培養液に、上記得られた精製ポリペプチドをサンプル1ポリペプチドについては1.5μg/mL、サンプル2ポリペプチドについては3.5μg/mLとなるように添加し、更に2時間培養した。
かかる抗原抗体反応時間の経過後、各ウェルから溶液を除去し、PBSにて3回洗浄した後、抗SOX2抗体添加ウェルにはPBSにて800倍希釈した抗マウスIgG抗体−蛍光色素(Alexa555)標識物(Invitrogen社製品)を添加し室温にて1時間静置した。一方、抗GFP抗体添加ウェルにはPBSにて800倍希釈した抗ウサギIgG抗体−蛍光色素(Alexa555)標識物(Invitrogen社製品)を添加し室温にて1時間静置した。
その後、溶液を除去し、PBSにて3回洗浄した後、DAPI含有封入液(Invitrogen社製品)とカバーガラスを用いて封入を行い、共焦点レーザー顕微鏡による蛍光観察を行った。
図1(顕微鏡写真)から明らかなように、ポリペプチド無添加の細胞では、DAPIによる核染色のみ認められ、抗SOX2抗体による染色は全く見られない一方、サンプル1ポリペプチドを添加した培養液からの細胞については、細胞内へのポリペプチド導入が認められた。さらに染色の位置から細胞質内に導入されたポリペプチドは核内に導入(移行)され局在していることが確認された。このことは、サンプル1ポリペプチドに含まれる本発明に係るキャリアペプチドフラグメントが、アミノ酸残基数300以上のSOX2ポリペプチドを細胞の外部から細胞質内、さらに核内に導入することができることを示している。
また、本発明によって、真核細胞(特に細胞壁を有しないヒトやそれ以外の哺乳動物に代表される種々の動物細胞)の外部から少なくとも細胞質内(好ましくはさらに核内)に目的とする外来物質を導入するために人為的に作製された構築物が提供される。かかる構築物を利用することにより、目的の細胞に目的の外来物質を効果的に導入することができ、該外来物質が導入された細胞並びに該外来物質を含む細胞を含む器官その他の生体組織を得ることができる。
配列番号4 合成物
配列番号5 合成物
配列番号6 合成物
配列番号7 合成物
Claims (9)
- 真核細胞の外部から少なくとも該細胞の細胞質内に目的とする外来物質を導入する方法であって、
以下のアミノ酸配列:
KKRTLRKNDRKKR(配列番号1)
若しくは該アミノ酸配列のうちの1個又は2個又は3個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成された改変アミノ酸配列から成るキャリアペプチドフラグメントと、該キャリアペプチドフラグメントのN末端側及び/又はC末端側に結合した目的の外来物質と、を有する外来物質導入用構築物を用意する工程と、
前記外来物質導入用構築物を、目的とする真核細胞を含む試料中に供給する工程と、
前記外来物質導入用構築物が供給された前記試料をインキュベートして、前記試料中の真核細胞内に前記構築物を導入する工程と、
を包含する方法。 - 前記外来物質がポリペプチド、核酸、色素及び薬剤から成る群から選択されるいずれかの有機化合物である、請求項1に記載の方法。
- 前記外来物質は何れかの生物種由来の成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドであり、前記外来物質導入用構築物は、該外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドに対応するアミノ酸配列と前記キャリアペプチドフラグメントのアミノ酸配列とを有する合成ポリペプチドである、請求項2に記載の方法。
- 前記外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドは、100以上1000以下のアミノ酸残基により構成されている、請求項3に記載の方法。
- 前記外来物質導入用構築物を導入する対象の真核細胞がヒト又はヒト以外の哺乳動物の細胞である、請求項1〜4の何れかに記載の方法。
- 真核細胞の外部から少なくとも該細胞の細胞質内に目的とする外来物質を導入するために作製された外来物質導入用構築物であって、
以下のアミノ酸配列:
KKRTLRKNDRKKR(配列番号1)
若しくは該アミノ酸配列のうちの1個又は2個又は3個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されて形成された改変アミノ酸配列から成るキャリアペプチドフラグメントと、該キャリアペプチドフラグメントのN末端側及び/又はC末端側に結合した目的の外来物質と、を有する外来物質導入用構築物。 - 前記外来物質は、ポリペプチド、核酸、色素及び薬剤から成る群から選択されるいずれかの有機化合物である、請求項6に記載の構築物。
- 前記外来物質は何れかの生物種由来の成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドであり、該外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドに対応するアミノ酸配列と前記キャリアペプチドフラグメントのアミノ酸配列とを有する合成ポリペプチドである、請求項7に記載の構築物。
- 前記外来物質としての成熟ポリペプチド又はその前駆体ポリペプチドは、100以上1000以下のアミノ酸残基により構成されている、請求項8に記載の構築物。
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