JPWO2008081812A1 - 抗腫瘍ペプチド及びその利用 - Google Patents
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Abstract
本発明によって提供される抗腫瘍ペプチドは、そのペプチド鎖に（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；が含まれる。
Description
本発明は、腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドとその利用に関する。
本願は２００６年１２月２８日に出願された日本国特許出願第２００６−３５６３４５号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
本願は２００６年１２月２８日に出願された日本国特許出願第２００６−３５６３４５号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
腫瘍（がん）の進行を抑制するための治療法として、腫瘍抑制遺伝子として知られるｐ５３を利用した遺伝子治療が注目されている。例えば、正常なｐ５３遺伝子をアデノウイルス等の適当なウイルスベクターに組み込み、ターゲット細胞（腫瘍細胞）に導入するような遺伝子治療法の研究が行われている。
しかし、ウイルスベクターを用いる遺伝子治療では、深刻な炎症反応或いはベクターそのものに対する免疫反応を引き起こすリスクがあり、治療法として確立させるためにはクリアすべき安全性のハードルが高い。
しかし、ウイルスベクターを用いる遺伝子治療では、深刻な炎症反応或いはベクターそのものに対する免疫反応を引き起こすリスクがあり、治療法として確立させるためにはクリアすべき安全性のハードルが高い。
一方、種々の腫瘍の治療目的にｐ５３遺伝子にコードされるｐ５３タンパク質を直接利用するアプローチの研究も進められている。例えば以下の非特許文献１及び２には、ヒト由来のｐ５３タンパク質のＮ末端側に存在する領域であって、ＭＤＭ２（Murine Double Minute clone 2）タンパク質に結合する領域（以下「ＭＤＭ２結合ドメイン」という。）から選択される一部のアミノ酸配列（アミノ酸残基数：９〜１５）から成る合成ペプチドを種々の腫瘍細胞に導入することにより、当該腫瘍細胞に細胞毒性を誘発し得ることが記載されている。
ＰＮＡＳ、９８巻、２００１年、ｐｐ．１２４３８−１２４４３ オンコジーン(Oncogene)、２２巻、２００３年、ｐｐ．１４３１−１４４４
ＰＮＡＳ、９８巻、２００１年、ｐｐ．１２４３８−１２４４３ オンコジーン(Oncogene)、２２巻、２００３年、ｐｐ．１４３１−１４４４
しかしながら、上記文献等に記載されるような既存の配列構成のｐ５３ベースの合成ペプチドでは細胞毒性の誘発レベルが低く、種々の腫瘍細胞の増殖を効果的に抑制し得る程の性能を有するとは言えなかった。
そこで本発明は、上記従来のｐ５３ベースの合成ペプチドよりも腫瘍細胞の増殖を抑制（阻害）する機能に優れる新たなアミノ酸配列から成るペプチドの提供を目的として創出されたものであり、そのようなペプチドを有効成分とする抗腫瘍剤（薬学的組成物）の提供を他の一つの目的とする。また、そのようなペプチドを設計することを他の一つの目的とする。また、そのようなペプチド（即ち、抗腫瘍剤）を使用して種々の腫瘍細胞の増殖を抑制（換言すれば腫瘍の増大を阻害）する方法の提供を他の一つの目的とする。
そこで本発明は、上記従来のｐ５３ベースの合成ペプチドよりも腫瘍細胞の増殖を抑制（阻害）する機能に優れる新たなアミノ酸配列から成るペプチドの提供を目的として創出されたものであり、そのようなペプチドを有効成分とする抗腫瘍剤（薬学的組成物）の提供を他の一つの目的とする。また、そのようなペプチドを設計することを他の一つの目的とする。また、そのようなペプチド（即ち、抗腫瘍剤）を使用して種々の腫瘍細胞の増殖を抑制（換言すれば腫瘍の増大を阻害）する方法の提供を他の一つの目的とする。
本発明によって提供される抗腫瘍ペプチドは、人為的に設計されたアミノ酸配列を有し、それ単独で自然界に存在するものではない人為的に合成された機能性ペプチドである。
本発明者は、ｐ５３タンパク質のＮ末端側に存在するＭＤＭ２結合ドメインから選択されるアミノ酸配列と、細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列と、更に種々の生物種やウイルスで見つかった核移行性シグナル（Nuclear Localization Signal：ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列とを連結させたペプチドが、種々の腫瘍細胞の増殖を好適に抑制し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明者は、ｐ５３タンパク質のＮ末端側に存在するＭＤＭ２結合ドメインから選択されるアミノ酸配列と、細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列と、更に種々の生物種やウイルスで見つかった核移行性シグナル（Nuclear Localization Signal：ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列とを連結させたペプチドが、種々の腫瘍細胞の増殖を好適に抑制し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成されたペプチドである。
そして該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；が含まれる。
また、好適には該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数は１００以下である。
そして該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。以下同じ。）；が含まれる。
また、好適には該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数は１００以下である。
ここで開示されるペプチドの好ましい一態様では、上記（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列として、ＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列を含む。
また、ここで開示されるペプチドの好ましい他の一態様では、上記（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列として、連続する７〜１１個のアルギニン残基から構成されるアミノ酸配列（即ちポリアルギニン）を含む。
また、ここで開示されるペプチドの好ましい他の一態様では、上記（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列として、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）から構成されるアミノ酸配列を含む。
また、ここで開示されるペプチドの好ましい他の一態様では、上記（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列として、連続する７〜１１個のアルギニン残基から構成されるアミノ酸配列（即ちポリアルギニン）を含む。
また、ここで開示されるペプチドの好ましい他の一態様では、上記（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列として、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）から構成されるアミノ酸配列を含む。
また、ここで開示されるペプチドの特に好ましい一態様では、ペプチド鎖のＮ末端側に（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列が配置され、そのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列が配置され、そのｐ５３関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列が配置されていることを特徴とする。
また、本発明は、ここで開示されるいずれかの抗腫瘍ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチド（例えばそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチド）を提供する。
好ましいポリヌクレオチドの例示として、配列番号８８，９０，９１，９２および９３のうちのいずれかに示されるアミノ酸配列（または該配列において部分的な改変が施されて成る改変配列）をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（例えばそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチド）が挙げられる。
好ましいポリヌクレオチドの例示として、配列番号８８，９０，９１，９２および９３のうちのいずれかに示されるアミノ酸配列（または該配列において部分的な改変が施されて成る改変配列）をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（例えばそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチド）が挙げられる。
また本発明は、ここで開示される少なくとも一種の抗腫瘍ペプチドを含有する抗腫瘍剤を提供する。
即ち、ここで開示される抗腫瘍剤は、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドであって、該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；が含まれており且つ該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下であるペプチドと、薬学的に許容され得る担体とを含む。
本発明の抗腫瘍剤に含まれる有効成分たる抗腫瘍ペプチドは、上述のとおり、上記（ａ）（ｂ）及び（ｃ）に規定される３種の部分アミノ酸配列を含む合成ペプチドであるため容易に製造することができる。
即ち、ここで開示される抗腫瘍剤は、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドであって、該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；が含まれており且つ該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下であるペプチドと、薬学的に許容され得る担体とを含む。
本発明の抗腫瘍剤に含まれる有効成分たる抗腫瘍ペプチドは、上述のとおり、上記（ａ）（ｂ）及び（ｃ）に規定される３種の部分アミノ酸配列を含む合成ペプチドであるため容易に製造することができる。
ここで開示される抗腫瘍剤は、好ましくは主成分たる抗腫瘍ペプチドが上記（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列としてＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列を含む。また好ましくは、抗腫瘍ペプチドが上記（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列として連続する７〜１１個のアルギニン残基から構成されるアミノ酸配列（即ちポリアルギニン）を含む。また好ましくは、抗腫瘍ペプチドが上記（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列としてＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）から構成されるアミノ酸配列を含む。
また、ここで開示される抗腫瘍剤の好ましい一態様では、ペプチド鎖のＮ末端側に（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列が配置され、そのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列が配置され、そのｐ５３関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列が配置されていることを特徴とするペプチドを含む。
また、ここで開示される抗腫瘍剤の好ましい一態様では、ペプチド鎖のＮ末端側に（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列が配置され、そのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列が配置され、そのｐ５３関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列が配置されていることを特徴とするペプチドを含む。
また、本発明は他の側面として、ここで開示される抗腫瘍ペプチドを製造する方法を提供する。即ち、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得るペプチドを製造する方法であって、以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；が含まれるペプチド鎖を設計すること、および、該設計したペプチド鎖を合成すること、を包含する。
好ましくは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下となるように該ペプチド鎖を設計する。
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；が含まれるペプチド鎖を設計すること、および、該設計したペプチド鎖を合成すること、を包含する。
好ましくは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下となるように該ペプチド鎖を設計する。
また、本発明は他の側面として、ここで開示される抗腫瘍ペプチドを利用する種々の方法を提供する。
その一つとして本発明は、ここで開示される少なくとも一種の抗腫瘍ペプチドを、標的とする腫瘍細胞または該腫瘍細胞を含む組織に供給することを特徴とする、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を提供する。
本方法では、目的（標的）の腫瘍細胞或いは組織に適当量の抗腫瘍剤を投与することにより、標的腫瘍細胞の増殖を抑制（阻害）することができる。
＜配列表フリーテキスト＞
配列番号８４ 合成ペプチド
配列番号８７ 合成ペプチド
配列番号８８ 合成ペプチド
配列番号８９ 合成ペプチド
配列番号９０ 合成ペプチド
配列番号９１ 合成ペプチド
配列番号９２ 合成ペプチド
配列番号９３ 合成ペプチド
その一つとして本発明は、ここで開示される少なくとも一種の抗腫瘍ペプチドを、標的とする腫瘍細胞または該腫瘍細胞を含む組織に供給することを特徴とする、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を提供する。
本方法では、目的（標的）の腫瘍細胞或いは組織に適当量の抗腫瘍剤を投与することにより、標的腫瘍細胞の増殖を抑制（阻害）することができる。
＜配列表フリーテキスト＞
配列番号８４ 合成ペプチド
配列番号８７ 合成ペプチド
配列番号８８ 合成ペプチド
配列番号８９ 合成ペプチド
配列番号９０ 合成ペプチド
配列番号９１ 合成ペプチド
配列番号９２ 合成ペプチド
配列番号９３ 合成ペプチド
以下、本発明の好適な実施形態を説明する。なお、本明細書において特に言及している事項（例えば、抗腫瘍ペプチドの一次構造や鎖長）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えばペプチド合成、ポリヌクレオチド合成、ペプチドを成分とする薬剤組成物の調製に関するような一般的事項）は、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、衛生学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
本明細書において「腫瘍」とは、広義に解釈される用語であり、癌腫及び肉腫を含む腫瘍一般をいう。また、「腫瘍細胞」とは、そのような腫瘍を形成する細胞であって、典型的には周辺の正常組織とは無関係に異常に増殖を行うに至った細胞（所謂がん化した細胞）をいう。
また、本明細書において「人為的に合成されたペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみで独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造されるペプチド断片をいう。
本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されない。従ってアミノ酸残基数が１０程度までのオリゴペプチド或いはそれ以上のアミノ酸残基から成るポリペプチドも本明細書における「抗腫瘍ペプチド」に包含される。
本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
また、本明細書において「人為的に合成されたペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみで独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造されるペプチド断片をいう。
本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されない。従ってアミノ酸残基数が１０程度までのオリゴペプチド或いはそれ以上のアミノ酸残基から成るポリペプチドも本明細書における「抗腫瘍ペプチド」に包含される。
本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
また、本明細書において所定のアミノ酸配列（即ち（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列、（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列、（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列）に対して「部分的な改変が施されたアミノ酸配列（改変アミノ酸配列）」とは、当該所定のアミノ酸配列が有する特徴的機能または作用を損なうことなく、１個または数個（例えば５個以下、好ましくは１，２又は３個程度）のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加（挿入）されて形成されたアミノ酸配列をいう。例えば、１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えばネイティブなＮＬＳ関連部分アミノ酸に含まれる塩基性アミノ酸残基を別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列）、或いは、所定のアミノ酸配列について１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列等は、本明細書でいう「部分的な改変が施された配列（改変アミノ酸配列）」に包含される典型例である。
また、本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー（核酸）を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのＤＮＡフラグメント及びＲＮＡフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖（全長）がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
また、本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー（核酸）を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのＤＮＡフラグメント及びＲＮＡフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖（全長）がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
ここで開示されるペプチドは、腫瘍細胞に対し細胞毒性（細胞障害性）を誘発し得るｐ５３タンパク質Ｎ末端側に存在するＭＤＭ２結合領域（ドメイン）から選択した少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成るアミノ酸配列と、細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列と、ＮＬＳを構成するアミノ酸配列とを含む。
ここで（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列としては、ｐ５３タンパク質の上記ＭＤＭ２結合領域（ドメイン）から選択した少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成るアミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。）であればよい。ヒト由来ｐ５３タンパク質のＮ末端から第１２位〜第２６位までのアミノ酸配列、具体的には第１２位から第２６位までのアミノ酸残基がＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）である配列から選択した少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成るアミノ酸配列（若しくはその改変アミノ酸配列）を好ましく採用することができる。
例えばヒトｐ５３タンパク質の第１２位（配列番号８２のＮ末端（左端）のプロリン）から第２０位（セリン）までのアミノ酸配列（合計９アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列、同第１７位（配列番号８２ではグルタミン酸）〜第２６位（配列番号８２のＣ末端（右端）のロイシン）までのアミノ酸配列（合計１０アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列、同第１２位〜第２６位までのアミノ酸配列（即ち配列番号８２に示される全１５アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列が好適例として挙げられる（上記非特許文献１及び２参照）。
ここで（ａ）ｐ５３関連部分アミノ酸配列としては、ｐ５３タンパク質の上記ＭＤＭ２結合領域（ドメイン）から選択した少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成るアミノ酸配列（該配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を包含する。）であればよい。ヒト由来ｐ５３タンパク質のＮ末端から第１２位〜第２６位までのアミノ酸配列、具体的には第１２位から第２６位までのアミノ酸残基がＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）である配列から選択した少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成るアミノ酸配列（若しくはその改変アミノ酸配列）を好ましく採用することができる。
例えばヒトｐ５３タンパク質の第１２位（配列番号８２のＮ末端（左端）のプロリン）から第２０位（セリン）までのアミノ酸配列（合計９アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列、同第１７位（配列番号８２ではグルタミン酸）〜第２６位（配列番号８２のＣ末端（右端）のロイシン）までのアミノ酸配列（合計１０アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列、同第１２位〜第２６位までのアミノ酸配列（即ち配列番号８２に示される全１５アミノ酸残基）若しくはその改変アミノ酸配列が好適例として挙げられる（上記非特許文献１及び２参照）。
（ｂ）膜通過関連部分アミノ酸配列としては、いわゆる細胞膜通過ドメイン(タンパク質導入ドメイン：Protein Transduction Domain)を構成するアミノ酸配列であればよい。多くの好適な細胞膜通過ドメイン（ペプチド断片）が知られているが、それらのうちの好適な幾つかの例を配列番号８３〜８７に示した。配列番号８３は、ＨＩＶのＴＡＴに含まれるタンパク質導入ドメインのアミノ酸配列を示している。配列番号８４は、前記ＴＡＴを改変したタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ４）のアミノ酸配列を示している。配列番号８５〜８６は、ショウジョウバエ（Drosophila）の変異体AntennapediaのＡＮＴの関連アミノ酸配列を示している。配列番号８７は、１１個のアルギニン残基から成るポリアルギニンである。なお、ポリアルギニンは１１個の残基に限定されず、例えば７〜１０個のアルギニン残基から成るポリアルギニンであり得る。また、１２個以上のアルギニン残基が連続して配列していてもよい（即ち１１×Ｒ＋数個のＲ）。
（ｃ）ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列としては、従来、各種の生物やウイルスから発見されたネイティブなＮＬＳの何れかを選択し、その配列のまま利用することができる。具体例として配列番号１〜配列番号８１にそれぞれ示されるＮＬＳが挙げられる。例えば、ＳＶ４０（Simian virus 40）由来のＮＬＳを好適に使用し得る。
特に限定するものではないが、塩基性アミノ酸残基の含有率が高いものが好ましい。例えば、４０％以上（更に好ましくは５０％以上）のアミノ酸残基が塩基性アミノ酸残基（リジン及び／又はアルギニン）であるものが好適である。５〜２５個程度のアミノ酸残基で１単位を構成するＮＬＳが好適である。例えば、ＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１）、ＲＶＨＰＹＱＲ（配列番号２）、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）、ＧＫＫＲＳＫＡ（配列番号５）、ＲＧＲＲＲＲＱＲ（配列番号７）、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）及びＰＲＲＲＫ（配列番号２６）のような５アミノ酸残基以上で構成されるＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を１単位又は２単位以上含むペプチドが好ましい。なお、ＲＫＲＲ（配列番号２７）のような、１単位が４アミノ酸残基以下である場合には、同種又は異なるＮＬＳと組み合わせ、全体で５アミノ酸残基以上となるアミノ酸配列を設計することが好ましい。すなわち、１単位が４アミノ酸残基以下のＮＬＳを２単位以上（典型的には２単位、３単位又は４単位）含むＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を設計するとよい。例えばＮＬＳとしてＲＫＲＲ（配列番号２７）を選択した場合、その配列を二単位タンデムに繋いだ８アミノ酸残基から成る配列（即ちＲＫＲＲ＋ＲＫＲＲ）をＮＬＳ関連部分アミノ酸配列とすることができる。２単位又は３単位以上のＮＬＳを含むようにＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を設計する場合、好ましくは、これらＮＬＳがペプチド鎖中で隣接して配置されるように設計する。この場合、隣接する一方のＮＬＳのＣ末端アミノ酸と他方のＮＬＳのＮ末端アミノ酸とが直接結合した形態が好ましい。或いは、隣接する二つのＮＬＳの間にリンカーとして１〜数個程度のアミノ酸残基（例えば１〜数個のグリシン残基）が介在したものもＮＬＳ関連アミノ酸配列として好ましい。
特に限定するものではないが、塩基性アミノ酸残基の含有率が高いものが好ましい。例えば、４０％以上（更に好ましくは５０％以上）のアミノ酸残基が塩基性アミノ酸残基（リジン及び／又はアルギニン）であるものが好適である。５〜２５個程度のアミノ酸残基で１単位を構成するＮＬＳが好適である。例えば、ＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１）、ＲＶＨＰＹＱＲ（配列番号２）、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）、ＧＫＫＲＳＫＡ（配列番号５）、ＲＧＲＲＲＲＱＲ（配列番号７）、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号２０）及びＰＲＲＲＫ（配列番号２６）のような５アミノ酸残基以上で構成されるＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を１単位又は２単位以上含むペプチドが好ましい。なお、ＲＫＲＲ（配列番号２７）のような、１単位が４アミノ酸残基以下である場合には、同種又は異なるＮＬＳと組み合わせ、全体で５アミノ酸残基以上となるアミノ酸配列を設計することが好ましい。すなわち、１単位が４アミノ酸残基以下のＮＬＳを２単位以上（典型的には２単位、３単位又は４単位）含むＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を設計するとよい。例えばＮＬＳとしてＲＫＲＲ（配列番号２７）を選択した場合、その配列を二単位タンデムに繋いだ８アミノ酸残基から成る配列（即ちＲＫＲＲ＋ＲＫＲＲ）をＮＬＳ関連部分アミノ酸配列とすることができる。２単位又は３単位以上のＮＬＳを含むようにＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を設計する場合、好ましくは、これらＮＬＳがペプチド鎖中で隣接して配置されるように設計する。この場合、隣接する一方のＮＬＳのＣ末端アミノ酸と他方のＮＬＳのＮ末端アミノ酸とが直接結合した形態が好ましい。或いは、隣接する二つのＮＬＳの間にリンカーとして１〜数個程度のアミノ酸残基（例えば１〜数個のグリシン残基）が介在したものもＮＬＳ関連アミノ酸配列として好ましい。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドでは、好ましい抗腫瘍活性（腫瘍細胞の増殖抑制活性）を発揮し得る限りにおいて、ペプチド鎖中におけるｐ５３関連部分アミノ酸配列、膜通過関連部分アミノ酸配列及びＮＬＳ関連部分アミノ酸配列の存在位置は特に限定されない。ペプチド鎖のＮ末端側から順に、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列：ｐ５３関連部分アミノ酸配列：膜通過関連部分アミノ酸配列と配置されたペプチドが好ましい。
ペプチド鎖中においてこれら３種の部分アミノ酸配列は相互に隣接して連なる形態でもよく、或いは、隣接する二つの部分アミノ酸配列間にリンカーとして１〜数個程度のアミノ酸残基（例えば１〜数個のグリシン残基）が介在した形態でもよい。
ペプチド鎖中においてこれら３種の部分アミノ酸配列は相互に隣接して連なる形態でもよく、或いは、隣接する二つの部分アミノ酸配列間にリンカーとして１〜数個程度のアミノ酸残基（例えば１〜数個のグリシン残基）が介在した形態でもよい。
本発明によって提供される抗腫瘍ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されているものが好ましい。アミノ酸残基（典型的にはペプチド鎖のＣ末端アミノ酸残基）のカルボキシル基のアミド化により、ペプチドの構造安定性（例えばプロテアーゼ耐性）を向上させ得る。
また、ここで開示される抗腫瘍ペプチドとしては、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下（好適には５０以下、特に好ましくは３０以下）であるものが望ましい。このような鎖長の短いペプチドは、化学合成が容易であり、容易に抗腫瘍ペプチドを提供することができる。なお、ペプチドのコンホメーション（立体構造）については、使用する環境下で抗腫瘍活性を発揮する限りにおいて、特に限定されるものではないが、免疫原（抗原）になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。かかる観点から、抗腫瘍剤に適用する抗腫瘍ペプチドとしては、直鎖状であり比較的低分子量（典型的には１００以下（好適には５０以下、特に好ましくは３０以下）のアミノ酸残基数）のものが好適である。また、ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、抗腫瘍活性を失わない限りにおいて、上記（ａ）（ｂ）（ｃ）の３種の部分アミノ酸配列に含まれないアミノ酸残基を含み得る（例えば上記リンカーとしてのアミノ酸残基）。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドのうちペプチド鎖の比較的短いものは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethoxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、PerSeptive
Biosystems社、Applied Biosystems社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、PerSeptive
Biosystems社、Applied Biosystems社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて抗腫瘍ペプチドを生合成してもよい。このアプローチは、ペプチド鎖の比較的長いポリペプチドを製造する場合に好適である。すなわち、所望する抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のＤＮＡを合成する。そして、このＤＮＡと該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物（哺乳類）細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物（哺乳類）細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
例えば、宿主細胞内で効率よく大量に生産させるために融合タンパク質発現システムを利用することができる。すなわち、目的の抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子（ＤＮＡ）を化学合成し、該合成遺伝子を適当な融合タンパク質発現用ベクター（例えばノバジェン社から提供されているｐＥＴシリーズおよびアマシャムバイオサイエンス社から提供されているｐＧＥＸシリーズのようなＧＳＴ(Glutathione S-transferase)融合タンパク質発現用ベクター）の好適なサイトに導入する。そして該ベクターにより宿主細胞（例えば大腸菌）を形質転換する。得られた形質転換体を培養して目的の融合タンパク質を調製する。次いで、該タンパク質を抽出及び精製する。次いで、得られた精製融合タンパク質を所定の酵素（プロテアーゼ）で切断し、遊離した目的のペプチド断片（設計した抗腫瘍ペプチド）をアフィニティクロマトグラフィー等の方法によって回収する。このような従来公知の融合タンパク質発現システム（例えばアマシャムバイオサイエンス社により提供されるＧＳＴ／Ｈｉｓシステムを利用し得る。）を用いることによって、本発明の抗腫瘍ペプチドを製造することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の東洋紡績（株）から入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein synthesis kit）が市販されている。
従って、上述のようにして、利用する３種の部分アミノ酸配列（ｐ５３関連部分アミノ酸配列、膜通過関連部分アミノ酸配列、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列）をひとたび決定し、ペプチド鎖を設計しさえすれば、そのアミノ酸配列に従って無細胞タンパク質合成システムによって目的の抗腫瘍ペプチドを容易に合成・生産することができる。例えば、日本の（株）ポストゲノム研究所のピュアシステム（登録商標）に基づいて本発明の抗腫瘍ペプチドを容易に生産することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の東洋紡績（株）から入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein synthesis kit）が市販されている。
従って、上述のようにして、利用する３種の部分アミノ酸配列（ｐ５３関連部分アミノ酸配列、膜通過関連部分アミノ酸配列、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列）をひとたび決定し、ペプチド鎖を設計しさえすれば、そのアミノ酸配列に従って無細胞タンパク質合成システムによって目的の抗腫瘍ペプチドを容易に合成・生産することができる。例えば、日本の（株）ポストゲノム研究所のピュアシステム（登録商標）に基づいて本発明の抗腫瘍ペプチドを容易に生産することができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造（合成）することができる。すなわち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、ＤＮＡ合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド（一本鎖）を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖ＤＮＡを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段（典型的にはＰＣＲ）を採用して目的の二本鎖ＤＮＡを得ることができる。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、ＤＮＡの形態であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗腫瘍ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
本発明によると、新規なアミノ酸配列の抗腫瘍ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。例えば、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下（好ましくは５０以下、特に好ましくは３０以下）であって、配列番号１〜８１のいずれかで示されるＮＬＳ関連部分アミノ酸配列、配列番号８２で示されるｐ５３関連部分アミノ酸配列及び配列番号８３〜８７のいずれかで示される膜通過関連部分アミノ酸配列を含むペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む（又はそれら配列から実質的に構成された）人為的に設計されたポリヌクレオチドが提供される。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、ＤＮＡの形態であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗腫瘍ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
本発明によると、新規なアミノ酸配列の抗腫瘍ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。例えば、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下（好ましくは５０以下、特に好ましくは３０以下）であって、配列番号１〜８１のいずれかで示されるＮＬＳ関連部分アミノ酸配列、配列番号８２で示されるｐ５３関連部分アミノ酸配列及び配列番号８３〜８７のいずれかで示される膜通過関連部分アミノ酸配列を含むペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む（又はそれら配列から実質的に構成された）人為的に設計されたポリヌクレオチドが提供される。
好適な本発明の抗腫瘍ペプチドは少なくとも一種の腫瘍細胞に対して高い増殖抑制（阻害）活性を有する。このため、抗腫瘍剤の有効成分として好適に使用し得る。なお、抗腫瘍剤に含有される抗腫瘍ペプチドは、抗腫瘍活性を損なわない限りにおいて、塩の形態であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る該ペプチドの酸付加塩を使用することができる。或いは、抗腫瘍活性を有する限り、他の塩（例えば金属塩）であってもよい。
抗腫瘍剤は、有効成分である抗腫瘍ペプチドの他、使用形態に応じて医薬（薬学）上許容され得る種々の担体（媒体）を含み得る。希釈剤、賦形剤等としてペプチド医薬において一般的に使用される担体（媒体）が好ましい。抗腫瘍剤の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。また、抗腫瘍剤に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料、等が挙げられる。
抗腫瘍剤の形態に関して特に限定はない。例えば、典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、抗腫瘍ペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の薬剤（組成物）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。
抗腫瘍剤の形態に関して特に限定はない。例えば、典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、抗腫瘍ペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の薬剤（組成物）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。
本発明によって提供される抗腫瘍剤は、従来のペプチド製剤と同様、その形態及び目的に応じた方法や用量で使用することができる。例えば、液剤として、静脈内、筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内への注射によって患者(即ち生体)の患部（典型的には悪性腫瘍組織）に所望する量だけ投与することができる。或いは、錠剤等の固体形態のものは経口投与することができる。経口投与の場合は、消化管内での消化酵素分解を抑止すべくカプセル化や保護（コーティング）材の適用が好ましい。
また、本発明の抗腫瘍ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、いわゆる遺伝子治療に使用する素材として用い得る。例えば、抗腫瘍ペプチドをコードする遺伝子（典型的にはＤＮＡセグメント、或いはＲＮＡセグメント）を適当なベクターに組み込み、目的とする部位に導入することにより、常時、生体（細胞）内で本発明に係る抗腫瘍ペプチドを発現させることが可能である。従って、本発明の抗腫瘍ペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡセグメント、ＲＮＡセグメント等）は、腫瘍（特に悪性腫瘍）の増大や組織・細胞のがん化を防止し或いは進行を抑制する薬剤として有用である。
以下、本発明に関する実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
＜実施例１：ペプチド合成＞
サンプルペプチドとして配列番号８８に示される全３５アミノ酸残基のペプチド（ＰＫＫＫＲＫＶ−Ｇ−ＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ−Ｇ−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ）を後述するペプチド合成機を用いて製造した。
このペプチドは、Ｎ末端側にＮＬＳ関連部分アミノ酸配列としてＳＶ４０（Simian virus 40）由来のＮＬＳ配列（ＰＫＫＫＲＫＶ：配列番号４）を有し、リンカー（ヒンジ部）として１個のグリシン残基を挟んでそのＣ末端側にｐ５３関連部分アミノ酸配列であるＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）を有し、更にリンカー（ヒンジ部）として１個のグリシン残基を挟んでそのＣ末端側に細胞膜通過ドメインであるポリアルギニン（ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ：配列番号８７）を有している。
サンプルペプチドとして配列番号８８に示される全３５アミノ酸残基のペプチド（ＰＫＫＫＲＫＶ−Ｇ−ＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ−Ｇ−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ）を後述するペプチド合成機を用いて製造した。
このペプチドは、Ｎ末端側にＮＬＳ関連部分アミノ酸配列としてＳＶ４０（Simian virus 40）由来のＮＬＳ配列（ＰＫＫＫＲＫＶ：配列番号４）を有し、リンカー（ヒンジ部）として１個のグリシン残基を挟んでそのＣ末端側にｐ５３関連部分アミノ酸配列であるＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）を有し、更にリンカー（ヒンジ部）として１個のグリシン残基を挟んでそのＣ末端側に細胞膜通過ドメインであるポリアルギニン（ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ：配列番号８７）を有している。
また、対照ペプチドとして、配列番号８９に示される全２７アミノ酸残基のペプチド（ＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ−Ｇ−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ）も同様にペプチド合成機を用いて製造した。
このペプチドは、Ｎ末端側にＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を含んでおらず、Ｎ末端側に配置されるｐ５３関連部分アミノ酸配列と１個のグリシン残基（リンカー）を挟んでそのＣ末端側に配置される細胞膜通過ドメインとから構成される。
なお、サンプルペプチド及び対照ペプチドのＣ末端アミノ酸のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）はいずれもアミド化（−ＣＯＮＨ２）されている。
このペプチドは、Ｎ末端側にＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を含んでおらず、Ｎ末端側に配置されるｐ５３関連部分アミノ酸配列と１個のグリシン残基（リンカー）を挟んでそのＣ末端側に配置される細胞膜通過ドメインとから構成される。
なお、サンプルペプチド及び対照ペプチドのＣ末端アミノ酸のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）はいずれもアミド化（−ＣＯＮＨ２）されている。
上記ペプチドは、市販のペプチド合成機（アプライドバイオシステム社製品 ４３３Ａ）を用いて固相合成法（Ｆｍｏｃ法）により合成した。なお、縮合剤としてＨＡＴＵ（Applied Biosystems社製品）を使用し、固相合成法に用いた樹脂及びアミノ酸はNOVA biochem社から購入した。アミノ酸配列のＣ末端をアミド化するために固相担体として「Rink Amide resin (100〜200 mesh)」 を使用した。
而して、上記ペプチド合成機の合成プログラムに準じて脱保護基反応及び縮合反応を反復して樹脂に結合するFmoc−アミノ酸からペプチド鎖を伸長していき、目的の鎖長の合成ペプチドを得た。具体的には、２０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド(DMF)（ペプチド合成用グレード、関東化学（株）製品）によって、アミノ酸のアミノ保護基であるFmocを切断除去し、ＤＭＦで洗浄し、Fmoc−アミノ酸(-OH)各４ｅｑを反応させ、ＤＭＦで洗浄する操作を反復した。そして、ペプチド鎖の伸長反応が全て終了した後、２０％ピペリジン／ＤＭＦによりFmoc基を切断し、ＤＭＦ、メタノールの順で上記反応物を洗浄した。
而して、上記ペプチド合成機の合成プログラムに準じて脱保護基反応及び縮合反応を反復して樹脂に結合するFmoc−アミノ酸からペプチド鎖を伸長していき、目的の鎖長の合成ペプチドを得た。具体的には、２０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド(DMF)（ペプチド合成用グレード、関東化学（株）製品）によって、アミノ酸のアミノ保護基であるFmocを切断除去し、ＤＭＦで洗浄し、Fmoc−アミノ酸(-OH)各４ｅｑを反応させ、ＤＭＦで洗浄する操作を反復した。そして、ペプチド鎖の伸長反応が全て終了した後、２０％ピペリジン／ＤＭＦによりFmoc基を切断し、ＤＭＦ、メタノールの順で上記反応物を洗浄した。
固相合成後、合成したペプチド鎖を樹脂と共に遠沈管に移し、エタンジオール１．８ｍＬ、m-クレゾール０．６ｍＬ、チオアニソール３．６ｍＬ及びトリフルオロ酢酸２４ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。その後、ペプチド鎖に結合していた樹脂を濾過して除去した。
次いで、濾液に冷却エタノールを加え、氷冷水で冷却してペプチド沈澱物を得た。その後、遠心分離（2500rpmで５分間）によって上澄みを廃棄した。沈殿物に冷ジエチルエーテルを新たに加えて十分に撹拌した後、上記と同じ条件で遠心分離を行った。この撹拌と遠心分離の処理を計３回反復して行った。
次いで、濾液に冷却エタノールを加え、氷冷水で冷却してペプチド沈澱物を得た。その後、遠心分離（2500rpmで５分間）によって上澄みを廃棄した。沈殿物に冷ジエチルエーテルを新たに加えて十分に撹拌した後、上記と同じ条件で遠心分離を行った。この撹拌と遠心分離の処理を計３回反復して行った。
得られたペプチド沈殿物を真空乾燥し、高速液体クロマトグラフ（Waters 600：Waters社製品）を用いて精製を行った。
具体的には、プレカラム（日本ウォーターズ（株）製品、Guard-Pak Delta-pak C18 A300）及びＣ１８逆相カラム（日本ウォーターズ（株）製品、XTerra（登録商標）カラム、MS C18、5μm、4.6×150mm）を使用し、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液と０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液との混合液を溶離液に用いた。即ち、溶離液に含まれる上記トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液の分量を経時的に増大させつつ（容積比で１０％から８０％への濃度勾配を設ける）、１．５ｍＬ／分の流速で上記カラムを用いて３０〜４０分間の分離精製を行った。なお、逆相カラムから溶離したペプチドは紫外線検出器（490E Detector：Waters社製品）を用いて波長：２２０ｎｍで検出され、記録チャート上にピークとして示される。
また、溶離した各ペプチドの分子量をPerSeptive Biosystems社製のVoyager DE RP（商標）を用いてMALDI-TOF/MS（Matrix-Assisted Laser Desorption Time of Flight Mass Spectrometry：マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型−質量分析)に基づいて決定した。その結果、目的のペプチド（サンプルペプチド及び対照ペプチド）が合成・精製されていることが確認された。
具体的には、プレカラム（日本ウォーターズ（株）製品、Guard-Pak Delta-pak C18 A300）及びＣ１８逆相カラム（日本ウォーターズ（株）製品、XTerra（登録商標）カラム、MS C18、5μm、4.6×150mm）を使用し、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液と０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液との混合液を溶離液に用いた。即ち、溶離液に含まれる上記トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液の分量を経時的に増大させつつ（容積比で１０％から８０％への濃度勾配を設ける）、１．５ｍＬ／分の流速で上記カラムを用いて３０〜４０分間の分離精製を行った。なお、逆相カラムから溶離したペプチドは紫外線検出器（490E Detector：Waters社製品）を用いて波長：２２０ｎｍで検出され、記録チャート上にピークとして示される。
また、溶離した各ペプチドの分子量をPerSeptive Biosystems社製のVoyager DE RP（商標）を用いてMALDI-TOF/MS（Matrix-Assisted Laser Desorption Time of Flight Mass Spectrometry：マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型−質量分析)に基づいて決定した。その結果、目的のペプチド（サンプルペプチド及び対照ペプチド）が合成・精製されていることが確認された。
＜実施例２：合成ペプチドの抗腫瘍活性評価試験（１）＞
上記実施例１で得られた２種類のペプチドについて、骨肉腫（osteosarcoma）細胞の樹立細胞株（cell line）を用いて抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）を調べた。
供試骨肉腫細胞として、以下の３種のセルラインを使用した。
（１）．ＨＯＳ（Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation, Osaka, Japan)より入手）。
（２）．ＭＧ−６３（the Cell Resource Center for Biomedical Research (Tohoku University, Sendai, Japan)より入手）。
（３）．Ｓａｏｓ−２（RIKEN BRC CELL BANK (Riken, Ibaragi, Japan)より入手）。
これら骨肉腫細胞は５％ＣＯ２、３７℃条件下の加湿インキュベータ内で培養した。なお、ＨＯＳの培養には１０％ＦＢＳ及び非必須アミノ酸を含むＭＥＭ（Eagle's minimal essential）培地を用いた。ＭＧ−６３の培養には１０％ＦＢＳを含むＭＥＭ培地を用いた。Ｓａｏ−２の培養には１０％ＦＢＳを含むＭｃＣｏｙ５Ａ培地を用いた。
上記実施例１で得られた２種類のペプチドについて、骨肉腫（osteosarcoma）細胞の樹立細胞株（cell line）を用いて抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）を調べた。
供試骨肉腫細胞として、以下の３種のセルラインを使用した。
（１）．ＨＯＳ（Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation, Osaka, Japan)より入手）。
（２）．ＭＧ−６３（the Cell Resource Center for Biomedical Research (Tohoku University, Sendai, Japan)より入手）。
（３）．Ｓａｏｓ−２（RIKEN BRC CELL BANK (Riken, Ibaragi, Japan)より入手）。
これら骨肉腫細胞は５％ＣＯ２、３７℃条件下の加湿インキュベータ内で培養した。なお、ＨＯＳの培養には１０％ＦＢＳ及び非必須アミノ酸を含むＭＥＭ（Eagle's minimal essential）培地を用いた。ＭＧ−６３の培養には１０％ＦＢＳを含むＭＥＭ培地を用いた。Ｓａｏ−２の培養には１０％ＦＢＳを含むＭｃＣｏｙ５Ａ培地を用いた。
而して、平底９６ウェルプレートの各ウェルに、ほぼ均等な細胞数（約１×１０５cells）となるように対数増殖期の細胞を播種し、各ペプチド濃度（０μＭ：コントロール、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）でインキュベーションを行った。インキュベーション開始から６時間経過時点でウェル中の培地をペプチド非含有の新鮮培地と交換した。引き続きインキュベーションを継続し、インキュベーション開始から２４時間後、細胞生存性試験を行った。この試験には、Ｐｒｏｍｅｇａ社製品である「CellTiter-Glo（商標）Luminescent Cell Viability Assay」キットを供給元から出されているマニュアルブックに準拠して用いた。そしてルミノメーターで各ウェルの発光量（ＲＬＵ）を測定した。このキットでは細胞数に応じて発光シグナルが生成されるため、発光量の比較により抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）を評価することができる。結果をサンプルペプチドについては図１に、対照ペプチドについては図２に示す。グラフの縦軸は発光量（ＲＬＵ×１０００）、横軸は供試骨肉腫細胞種である。各細胞種の４つのヒストグラムは左からペプチド濃度が０μＭ（コントロール）、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭの場合での結果を示す。
これらグラフから明らかなように、対照ペプチドと比較して上記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を備えるサンプルペプチドには顕著な抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。
これらグラフから明らかなように、対照ペプチドと比較して上記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を備えるサンプルペプチドには顕著な抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。
＜実施例３：合成ペプチドの抗腫瘍活性評価試験（２）＞
上記実施例２と同様の抗腫瘍活性評価試験を、神経膠種（glioma）細胞の樹立細胞株であるＵ８７を用いて行った。また、上記骨肉腫細胞と同様、５％ＣＯ２、３７℃条件下の加湿インキュベータ内で培養した。なお、Ｕ８７の培養には１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地を用いた。
上記実施例２と同様の抗腫瘍活性評価試験を、神経膠種（glioma）細胞の樹立細胞株であるＵ８７を用いて行った。また、上記骨肉腫細胞と同様、５％ＣＯ２、３７℃条件下の加湿インキュベータ内で培養した。なお、Ｕ８７の培養には１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地を用いた。
而して、６ウェルプレートの各ウェルにほぼ均等な細胞数（約１×１０４cells）となるように指数関数的増殖期の細胞を播種し、サンプルペプチドを所定の濃度（０μＭ（コントロール）、１μＭ、５μＭ、１０μＭ）となるように添加してインキュベーションを行った。インキュベーション開始から１日（２４時間）、２日（４８時間）、３日（７２時間）、６日（１４４時間）経過時点でいくつかのウェルから細胞を回収し、細胞数を市販の細胞計数装置を用いて計測した。結果を図３に示す。
グラフの縦軸は計測された細胞数（×１０４）であり、横軸はインキュベーション時間（日）を表す。図中の菱形のプロットがペプチド濃度０μＭ（コントロール区）、四角プロットがペプチド濃度１μＭ、三角プロットがペプチド濃度５μＭ、×のプロットがペプチド濃度１０μＭの結果を示す。
このグラフから明らかなように、上記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を備えるサンプルペプチドにはＵ８７神経膠種細胞に対しても顕著な抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。特に１０μＭの濃度では、腫瘍細胞の増殖をほぼ完全に阻害することができた。
このグラフから明らかなように、上記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列を備えるサンプルペプチドにはＵ８７神経膠種細胞に対しても顕著な抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。特に１０μＭの濃度では、腫瘍細胞の増殖をほぼ完全に阻害することができた。
以上、本発明の具体例を詳細に説明したがこれらは例示にすぎず、特許請求の範囲を限定するものではない。上記サンプルペプチドの他、種々のアミノ酸配列のペプチドが本発明により提供される。
例えば、上記サンプルペプチドのアミノ酸配列の改変配列として配列番号９０〜９３に示す種々のペプチドが抗腫瘍ペプチドとして提供される。
簡単に説明すれば、配列番号９０に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）から二つのリンカー（計２箇所のグリシン残基）を外した改変アミノ酸配列であり、１単位ずつのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列、ｐ５３関連部分アミノ酸配列および膜通過関連部分アミノ酸配列のみから成る抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９１に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のＮ末端のアミノ酸残基であるプリンをアルギニンに置換した改変ＮＬＳ配列を含むアミノ酸配列から成る抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９２に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のｐ５３関連部分アミノ酸配列を、ヒトｐ５３タンパク質の第１２位（プロリン）から第２０位（セリン）までの短いアミノ酸配列（合計９アミノ酸残基）に換えた抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９３に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のｐ５３関連部分アミノ酸配列を、ヒトｐ５３タンパク質の第１７位（グルタミン酸）から第２６位（ロイシン）までの短いアミノ酸配列（合計１０アミノ酸残基）に換えた抗腫瘍ペプチドである。
例えば、上記サンプルペプチドのアミノ酸配列の改変配列として配列番号９０〜９３に示す種々のペプチドが抗腫瘍ペプチドとして提供される。
簡単に説明すれば、配列番号９０に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）から二つのリンカー（計２箇所のグリシン残基）を外した改変アミノ酸配列であり、１単位ずつのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列、ｐ５３関連部分アミノ酸配列および膜通過関連部分アミノ酸配列のみから成る抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９１に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のＮ末端のアミノ酸残基であるプリンをアルギニンに置換した改変ＮＬＳ配列を含むアミノ酸配列から成る抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９２に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のｐ５３関連部分アミノ酸配列を、ヒトｐ５３タンパク質の第１２位（プロリン）から第２０位（セリン）までの短いアミノ酸配列（合計９アミノ酸残基）に換えた抗腫瘍ペプチドである。
また、配列番号９３に示すペプチドは、上記サンプルペプチド（配列番号８８）のｐ５３関連部分アミノ酸配列を、ヒトｐ５３タンパク質の第１７位（グルタミン酸）から第２６位（ロイシン）までの短いアミノ酸配列（合計１０アミノ酸残基）に換えた抗腫瘍ペプチドである。
Claims (12)
- 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドであって、該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；
が含まれており、
該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下である、抗腫瘍ペプチド。 - 前記ｐ５３関連部分アミノ酸配列として、ＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のペプチド。
- 前記膜通過関連部分アミノ酸配列として、連続する７〜１１個のアルギニン残基から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のペプチド。
- 前記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列として、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のペプチド。
- ペプチド鎖のＮ末端側に前記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列が配置され、そのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に前記ｐ５３関連部分アミノ酸配列が配置され、そのｐ５３関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に前記膜通過関連部分アミノ酸配列が配置されている、請求項１〜４のいずれかに記載のペプチド。
- 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドであって、該ペプチドのペプチド鎖には以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；
が含まれており、該ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下である抗腫瘍ペプチドと、
薬学的に許容され得る担体と、
を含む、抗腫瘍剤。 - 前記ペプチドは、前記ｐ５３関連部分アミノ酸配列としてＰＰＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（配列番号８２）から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗腫瘍剤。
- 前記ペプチドは、前記膜通過関連部分アミノ酸配列として連続する７〜１１個のアルギニン残基から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗腫瘍剤。
- 前記ペプチドは、前記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列としてＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号４）から構成されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗腫瘍剤。
- 前記ペプチドは、ペプチド鎖のＮ末端側に前記ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列が配置され、そのＮＬＳ関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に前記ｐ５３関連部分アミノ酸配列が配置され、そのｐ５３関連部分アミノ酸配列よりもＣ末端側に前記膜通過関連部分アミノ酸配列が配置されている、請求項６〜９のいずれかに記載の抗腫瘍剤。
- 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制し得る抗腫瘍ペプチドを製造する方法であって、
以下の３種のアミノ酸配列：
（ａ）ｐ５３タンパク質のＭＤＭ２結合ドメインを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも９個の連続するアミノ酸残基から成る、ｐ５３関連部分アミノ酸配列；
（ｂ）細胞膜通過ドメインを構成するアミノ酸配列から成る、膜通過関連部分アミノ酸配列；および
（ｃ）核移行性シグナル（ＮＬＳ）を構成するアミノ酸配列から成る、ＮＬＳ関連部分アミノ酸配列；
が含まれるペプチド鎖を設計すること、
および
前記設計したペプチド鎖を合成すること、
を包含する方法。 - ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下となるように該ペプチド鎖を設計する、請求項１１に記載の方法。
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