JP5218843B2 - 抗菌ペプチド及びその利用 - Google Patents
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Description
本願は2006年9月14日に出願された日本国特許出願第2006−249284号に基づく優先権を主張しており、この出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
一方、本発明者等は、このような自然界に抗菌ペプチドとして存在しているものを単離するアプローチとは全く異なるアプローチで人工的な抗菌ペプチドの開発に成功した。
即ち、本発明者等は、本来は細胞内で核に移行する種々のポリペプチド中に存在する部分的な配列である核移行性配列(nuclear localization signal sequence:以下、NLSという)に着目し、種々の生物種やウイルスから単離されたNLSをペプチド鎖に有する合成抗菌ペプチドを開発した。詳しくは、国際公開第WO03/91429号を参照されたい。
即ち、本発明者は、上記目的のために、種々のアミノ酸配列を解析し、白血病阻害因子受容体(leukemia inhibitory factor receptor:以下、LIFRという)として同定されている受容体タンパク質に着目した。そして、その一部のドメインであるサイトカイン結合ドメイン(cytokine binding domain:CBD)に含まれる部分アミノ酸配列(EMBOジャーナル (The EMBO Journal)、20巻7号、2001年、pp.1692−1703; FEBSレターズ (FEBS Letters)、579巻、2005年、pp.4317−4323; 及びジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(The Journal of Biological Chemistry)、278巻26号、2003年、pp.23285−23294参照)とNLSとから成るペプチド鎖がグラム陰性細菌に対して高い抗菌活性を奏し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
以下の白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列:
DFX1TX2X3X4X5LKWX6
(ここで、X1及びX2は互いに独立して或いは共通してS又はFであり、X3はT又はSであり、X4はL又はIであり、X5はY,H,Q,L又はTであり、X6はN又はSである。)又は該LIFR由来アミノ酸配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列から成るLIFR関連アミノ酸配列と、
を有する。好ましくは、該ペプチド鎖の全アミノ酸残基数が50以下である。
本明細書において「抗菌ペプチド」とは、少なくとも一種の細菌に対して抗菌活性を示す複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されない。アミノ酸残基数が10程度までのオリゴペプチド或いはそれ以上のアミノ酸残基から成るポリペプチドも本明細書における抗菌ペプチドに包含される。
本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のN末端アミノ酸及びC末端アミノ酸を包含する用語である。なお、本明細書においては、アミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した1文字表記(但し配列表では3文字表記)で表す。
本明細書において所定のアミノ酸配列(即ちNLS或いはLIFR由来のアミノ酸配列)に対して「部分的な改変が施されたアミノ酸配列(改変アミノ酸配列)」とは、当該所定のアミノ酸配列を備える抗菌ペプチドが有する抗菌性を損なうことなく、当該所定のアミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加(挿入)されることによって形成されたアミノ酸配列をいう。例えば、1個または複数個(典型的には2個または3個)のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換(conservative amino acid replacement)によって生じた配列(例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列)、或いは、所定のアミノ酸配列に1個又は複数個(一般には2〜3個程度)のアミノ酸残基が付加(挿入)された配列等は、本明細書でいう「部分的な改変が施された配列(改変アミノ酸配列)」に包含される典型例である。
このような構成のペプチドは、本発明を特徴付けるアミノ酸配列(NLS関連アミノ酸配列とLIFR関連アミノ酸配列)のみから構成されるためにペプチド鎖が短く、化学合成によって容易に製造することができる。
(a)DFSTSTLYLKWN(配列番号84);
(b)DFSTSTIHLKWN(配列番号85);
(c)DFSTSTLQLKWN(配列番号86);
(d)DFFTSSLLLKWN(配列番号87);
(e)DFSTFTLTLKWS(配列番号88);
のうちのいずれかの配列を有する。
これら特定のLIFR関連アミノ酸配列を有することにより、グラム陽性細菌はもとよりグラム陰性細菌に対しても高い抗菌活性を有する。
(a)PKKKRKV(配列番号4);
(b)RKKKRKV(配列番号82);
(c)RIRKKLR(配列番号43);
のうちのいずれかの配列を有する。
これらNLS関連アミノ酸配列は7アミノ酸残基から成る短いNLS(a及びc)又は改変NLS(b)であるものの高い抗菌活性を発揮し得る。また、本態様の抗菌ペプチドは、NLS関連アミノ酸配列がコンパクトであることからペプチド鎖が短くなり、化学合成によって容易に製造し得る。
少なくとも5個の連続するアミノ酸残基から成る部分アミノ酸配列であって、少なくとも1単位の核移行性配列(NLS)又は該NLSに部分的な改変が施されたアミノ酸配列から成るNLS関連アミノ酸配列を決定すること(選択すること)、
以下の白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列:
DFX1TX2X3X4X5LKWX6
(ここで、X1及びX2は互いに独立して或いは共通してS又はFであり、X3はT又はSであり、X4はL又はIであり、X5はY,H,Q,L又はTであり、X6はN又はSである。)又は該LIFR由来アミノ酸配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列から成るLIFR関連アミノ酸配列を決定すること(選択すること)、
前記決定(選択)したNLS関連アミノ酸配列と、前記決定(選択)したLIFR関連アミノ酸配列とを有するペプチド鎖を設計すること、および、
前記設計したペプチド鎖を合成すること、
を包含する。
かかる構成の方法によると、上述した特性の本発明の抗菌ペプチドを好適に製造することができる。
例えば、好ましい一態様では、NLS関連アミノ酸配列とLIFR関連アミノ酸配列とから実質的に構成され、LIFR関連アミノ酸配列がNLS関連アミノ酸配列のC末端側に隣接して配置されるようにペプチド鎖を設計する。このような構成のペプチド鎖は本発明を特徴付けるアミノ酸配列のみから構成されるためにペプチド鎖が短くなり得、化学合成によって容易に製造することができる。
上述のとおり、本発明によって提供されるNLS関連アミノ酸配列及びLIFR関連アミノ酸配列を含む抗菌ペプチドは、グラム陽性細菌はもとよりグラム陰性細菌に対しても高い抗菌活性を発揮し得る。従って、ここで開示される抗菌剤は、グラム陰性細菌の抗菌(殺菌又は静菌)目的に好適な抗菌剤である。
全アミノ酸残基数が50以下の抗菌ペプチドを主成分とする抗菌剤が好ましい。このような鎖長の短いペプチド(即ち比較的低分子量の抗菌ペプチド)を含む抗菌剤は取扱いが容易であり、生体内及び/又は生体外での利用に好適な抗菌剤となり得る。また、使用する抗菌ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されているものが好ましい。アミノ酸残基(典型的にはペプチド鎖のC末端アミノ酸残基)のカルボキシル基のアミド化により、抗菌ペプチドの構造安定性(例えばプロテアーゼ耐性)を向上させ得る。
本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー(核酸)を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのDNAフラグメント及びRNAフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖(全長)がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成(即ち遺伝子工学に基づく生産)によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
ここで開示される好ましいポリヌクレオチドの例として、本明細書中のいずれかの配列番号に示されるアミノ酸配列(または該配列に部分的な改変が施された配列)をコードするヌクレオチド配列及び/又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含むか或いはそれら配列により実質的に構成されるポリヌクレオチドが挙げられる。
ここで開示されるペプチドは、NLS関連アミノ酸配列及びLIFR関連アミノ酸配列が組み込まれた一次構造又は当該二つの配列のみから成る一次構造であり得る。典型的には、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数に対するNLS関連アミノ酸配列及びLIFR関連アミノ酸配列の占める割合が50個数%以上であり、この割合が70個数%以上であることが好ましく、90個数%以上が更に好ましい。
なお、本発明の抗菌ペプチドとしては、全てのアミノ酸残基がL型アミノ酸であるものが好ましいが、抗菌活性を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部又は全部がD型アミノ酸に置換されているものであってもよい。また、抗菌性を失わない限り、ペプチド鎖を構成する個々のアミノ酸残基が種々の修飾(例えば、C末端アミノ酸のカルボキシル基のアミド化、N末端アミノ酸のアミノ基のアシル化)を受けたものであってもよい。例えば、ペプチド鎖のN末端アミノ酸残基がアシル化(アセチル化)された抗菌ペプチドによると、高い抗菌活性と低い溶血作用の両立を実現し得る。
また、ペプチドのコンホメーション(立体構造)については、使用する環境下で抗菌性を発揮する限りにおいて、特に限定されるものではないが、免疫原(抗原)になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。かかる観点から、薬学的組成物(抗菌用途)に適用する抗菌ペプチドとしては、直鎖状であり比較的低分子量(典型的にはアミノ酸残基数:17〜30、例えばアミノ酸残基数:19〜20)のものが好適である。
一方、RKRR(配列番号27)のような、1単位が4アミノ酸残基以下である場合には、同種又は異なるNLSと組み合わせ、全体で5アミノ酸残基以上となるアミノ酸配列を設計するとよい。すなわち、1単位が4アミノ酸残基以下のNLSを2単位以上(典型的には2単位、3単位又は4単位)含むNLS関連アミノ酸配列を設計するとよい。例えばNLSとしてRKRR(配列番号27)を選択した場合、その配列を二単位タンデムに繋いだ8アミノ酸残基から成る配列(RKRRRKRR)をNLS関連アミノ酸配列とすることができる。
また、2単位又は3単位以上のNLSを含むようにNLS関連アミノ酸配列を設計する場合、好ましくは、これらNLSがペプチド鎖中で隣接して配置されるように設計する。この場合、隣接する一方のNLSのC末端アミノ酸と他方のNLSのN末端アミノ酸とが直接結合した形態が好ましい。或いは、隣接する二つのNLSの間にリンカーとして1〜数個程度のアミノ酸残基が介在したものもNLS関連アミノ酸配列として好ましい。
即ち、ここで開示されるペプチドはLIFR関連アミノ酸配列として、以下の配列:
DFX1TX2X3X4X5LKWX6
を有する。配列中のX1及びX2は互いに独立して或いは共通してS又はFである。また、配列中のX3はT又はSであり、X4はL又はIであり、X5はY,H,Q,L又はTであり、X6はN又はSである。
かかるLIFR関連アミノ酸配列として選択して使用し得る好例として、配列番号84〜88で示す各配列が挙げられる。配列番号84に示すアミノ酸配列は、ヒト由来LIFRの有するサイトカイン結合ドメインの一つであるCBD1(cytokine binding domain 1)に含まれる部分アミノ酸配列である。CBD1は、CNTF(Ciliary neurotrophic factor)等のサイトカインの結合に関与するドメインとして知られており、該部分アミノ酸配列はCNTFの結合やシグナリングに関与しているものと考えられている(FEBSレターズ (FEBS Letters)、579巻、2005年、pp.4317−4323)。また、配列番号85〜88に示す配列は、動物種は異なるがいずれもLIFR中に含まれる配列であり、配列番号84に示すアミノ酸配列の相同(ホモロジー)配列(配列モチーフ)として認識される。
或いは、これらネイティブなLIFR由来アミノ酸配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列であってもよい。そのような改変配列の好適例として、1個若しくは数個のアミノ酸残基が同類置換された配列が挙げられる。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物(哺乳類)細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗菌ペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的の抗菌ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型DNA(即ち抗菌ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片)を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物(ATP、RNAポリメラーゼ、アミノ酸類等)を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット(例えば、日本の東洋紡績(株)から入手可能なPROTEIOS(商標)Wheat germ cell-free protein synthesis kit)が市販されている。
従って、上述のようにしてひとたび抗菌ペプチドのアミノ酸配列を決定・設計しさえすれば、そのアミノ酸配列に従って無細胞タンパク質合成システムによって目的の抗菌ペプチドを容易に生産することができる。例えば、日本の(株)ポストゲノム研究所のピュアシステム(登録商標)に基づいて本発明の抗菌ペプチドを容易に生産することができる。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、DNAの形態であってもよく、RNA(mRNA等)の形態であってもよい。DNAは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖(センス鎖)であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖(アンチセンス鎖)であってもよい。
本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗菌ペプチド生産のための組換え遺伝子(発現カセット)を構築するための材料として使用することができる。
例えば、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が50以下(好ましくは30以下)であって、配列番号89〜95のいずれかで示されるアミノ酸配列或いは該アミノ酸配列に部分的な改変が施されたアミノ酸配列を有するペプチド(又は該アミノ酸配列から成るペプチド)をコードするヌクレオチド配列及び/又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む(又はそれら配列から実質的に構成された)天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチドが提供される。
抗菌ペプチドの他、抗菌剤に含まれる担体又は副次的成分(典型的には用途に応じて薬学的に許容され得るもの)としては、抗菌剤の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、水(典型的には蒸留水、生理食塩水その他の緩衝液)、種々の有機溶媒、種々の緩衝液その他充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、賦形剤、色素、香料等が挙げられる。
なお、抗菌ペプチド(主成分)及び種々の担体(副成分)を材料にして種々の形態の薬剤(組成物)を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修,Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。
ここで開示されるNLS関連アミノ酸配列及びLIFR関連アミノ酸配列を含む抗菌ペプチドは、比較的高い濃度のカチオン、塩類(例えば塩化ナトリウム)或いは血清のような有機物が存在する系においても高い抗菌活性を維持し得る。従って、ここで開示される抗菌剤は、カチオン、塩類や血清等が存在する系(場)での使用に特に好適である。例えば、本発明によって提供される抗菌剤は、液剤として、静脈内、筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内への注射或いは灌腸によって患者に投与することができる。
或いは、錠剤等の固体形態のものは経口投与することができる。また、衛生陶器表面の消毒(殺菌)や食品の防腐目的に使用する場合は、比較的多量(例えば1〜100mg/ml)の抗菌ペプチドを含有する液剤を対象物の表面に直接スプレーするか、或いは、当該液剤で濡れた布や紙で対象物の表面を拭くとよい。これらは例示にすぎず、従来のペプチド系抗生物質やペプチドを構成成分とする農薬、医薬部外品等と同じ形態、使用方法を適用することができる。
例えば、放射線治療を受けているガン患者やエイズ患者にとって、細菌感染症の予防及び治療は重大な関心事である。ここで開示される抗菌ペプチドは、感染症の原因たる細菌(例えば黄色ブドウ球菌のようなグラム陽性細菌、病原性大腸菌のようなグラム陰性細菌)に対して高い抗菌作用を示し得る。このため、本発明の抗菌ペプチドは、抗菌剤の主成分として有用である。
また、培養細胞や培養組織に対して、本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチドを遺伝子治療に使用する素材として用いることができる。例えば、本発明の抗菌ペプチドをコードする遺伝子(典型的にはDNAセグメント又はRNAセグメント)を適当なベクターに組み込み、目的とする培養組織に導入することにより、常時或いは所望する時期に培養組織(細胞)内で本発明に係る抗菌ペプチドを発現させることが可能である。従って、本発明によって提供される本発明の抗菌ペプチドをコードするポリヌクレオチド(DNAセグメント、RNAセグメント等)は、培養組織の細菌感染を防止する薬剤として有用である。
計11種類のペプチド(サンプル1〜11)を後述するペプチド合成機を用いて製造した。表1には、これら合成ペプチドのアミノ酸配列を列挙している。
具体的には、サンプル1,2及び7の「DFSTSTLYLKWN」はヒト由来LIFRのCBD1に含まれる第147位(Asp)〜第158位(Asn)の12アミノ酸残基から成る部分アミノ酸配列である。また、サンプル3の「DFSTSTIHLKWN」はイヌ由来LIFRの対応する部位のアミノ酸配列である。また、サンプル4の「DFSTSTLQLKWN」はラット由来LIFRの対応する部位のアミノ酸配列である。また、サンプル5の「DFFTSSLLLKWN」はマウス由来LIFRの対応する部位のアミノ酸配列である。また、サンプル6の「DFSTFTLTLKWS」はニワトリ由来LIFRの対応する部位のアミノ酸配列である。
一方、サンプル8〜11は比較対象のためのサンプルである。即ち、表示されるように、サンプル8はLIFR関連アミノ酸配列のみから成るペプチドであり、サンプル9〜11はNLS関連アミノ酸配列のみから成るペプチドである。
なお、いずれのサンプルも、C末端アミノ酸のカルボキシル基(−COOH)はアミド化(−CONH2)されている。
而して、上記ペプチド合成機の合成プログラムに準じて脱保護基反応及び縮合反応を反復して樹脂に結合するFmoc−アミノ酸からペプチド鎖を伸長していき、目的の鎖長の合成ペプチドを得た。具体的には、20%ピペリジン/ジメチルホルムアミド(DMF)(ペプチド合成用グレード、関東化学(株)製品)によって、アミノ酸のアミノ保護基であるFmocを切断除去し、DMFで洗浄し、Fmoc−アミノ酸(-OH)各4eqを反応させ、DMFで洗浄する操作を反復した。そして、ペプチド鎖の伸長反応が全て終了した後、20%ピペリジン/DMFによりFmoc基を切断し、DMF、メタノールの順で上記反応物を洗浄した。
次いで、濾液に冷却エタノールを加え、氷冷水で冷却してペプチド沈澱物を得た。その後、遠心分離(2500rpmで5分間)によって上澄みを廃棄した。沈殿物に冷ジエチルエーテルを新たに加えて十分に撹拌した後、上記と同じ条件で遠心分離を行った。この撹拌と遠心分離の処理を計3回反復して行った。
具体的には、プレカラム(日本ウォーターズ(株)製品、Guard-Pak Delta-pak C18 A300)及びC18逆相カラム(日本ウォーターズ(株)製品、XTerra(登録商標)カラム、MS C18、5μm、4.6×150mm)を使用し、0.1%トリフルオロ酢酸水溶液と0.1%トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液との混合液を溶離液に用いた。即ち、溶離液に含まれる上記トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液の分量を経時的に増大させつつ(容積比で5%から60%への濃度勾配を設ける)、1.5mL/分の流速で上記カラムを用いて30〜40分間の分離精製を行った。なお、逆相カラムから溶離したペプチドは紫外線検出器(490E Detector:Waters社製品)を用いて波長:220nmで検出され、記録チャート上にピークとして示された。
また、溶離した各ペプチドの分子量をPerSeptive Biosystems社製のVoyager DE RP(商標)を用いてMALDI-TOF/MS(Matrix-Assisted Laser Desorption Time of Flight Mass Spectrometry:マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型−質量分析)に基づいて決定した。その結果、目的のペプチドが合成・精製されていることが確認された。
上記得られた合成ペプチド(サンプル1〜11)について、グラム陰性細菌(大腸菌:E. coli IFO 3972)及びグラム陽性細菌(黄色ブドウ球菌:S. aureus FDA209P)に対する抗菌活性(最小阻止濃度:MIC)を96穴(well)マイクロプレートを用いた液体培地希釈法により求めた。
即ち、先ず滅菌蒸留水で最高試験濃度の40倍の濃度の薬剤(各サンプルペプチド)溶液を調製し、次いでペプチド濃度が200〜0.78μMの範囲内のいずれかとなるようなMHB培地(DIFCO社製品「ミューラーヒントンブロス(Mueller Hinton Broth)」)をそれぞれ作製した。
一方、37℃で18時間培養した寒天平板(DIFCO社製品「ミューラーヒントン寒天(Mueller Hinton Agar)」)上の被験菌体をループで掻き取り、滅菌生理食塩水に懸濁した。2×107cells/mL相当に調整した菌液5μLを、上記マイクロプレートの各ウェルに充填されている所定濃度のペプチドを含有するMHB培地にそれぞれ接種した(試験菌数:約1×106cells/mL)。接種後、37℃の恒温器内で培養を開始し、24時間後の濁度により菌発生の有無を調べた。その計測時における菌による濁度の増加が認められない最小ペプチド濃度(即ち薬剤濃度)を本実施例におけるMIC(単位:μM)と定めた。結果を表2に示す。なお、表中の結果において不等号(>)が付されているものは、その数値濃度においてペプチドが溶解しなかったものであり、正確な抗菌活性は求められなかった。
上記結果から、本発明に係る抗菌ペプチドは、比較的高濃度のカチオンを含むMHBであっても高い抗菌活性を維持し得ることが確かめられた。従って、本発明の抗菌ペプチドは、血清のような種々のカチオン(または塩類)が比較的大量に存在する系(例えば血液中)での用途に好適である。
Claims (8)
- 天然に存在しない人為的に設計された抗菌ペプチドであって、ペプチド鎖中に、
配列番号1〜81のうちから選択された核移行性配列(NLS)、又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについて1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
配列番号84〜88のうちから選択された白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列、又は該LIFR部分アミノ酸配列について1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
を有し、
全アミノ酸残基数が50以下である、抗菌ペプチド。 - 配列番号1〜81のうちから選択された核移行性配列(NLS)、又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについて1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
配列番号84〜88のうちから選択された白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列、又は該LIFR部分アミノ酸配列について1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
から実質的に構成され、
前記LIFR部分アミノ酸配列又は該LIFR部分アミノ酸配列についての前記改変配列は、前記NLS又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについての前記改変配列のC末端側に隣接して配置される、請求項1に記載の抗菌ペプチド。 - 前記NLS又は該NLSについての前記改変配列として、以下のアミノ酸配列:
(a)PKKKRKV(配列番号4);
(b)RKKKRKV(配列番号82);
(c)RIRKKLR(配列番号43);
のうちのいずれかの配列を有する、請求項1又は2に記載の抗菌ペプチド。 - 請求項1〜3のいずれかに記載の抗菌ペプチドと、薬学的に許容され得る担体とを含む抗菌剤。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の抗菌ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び/又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、天然に存在しない人為的に設計されたポリヌクレオチド。
- 少なくとも1種の細菌に対して抗菌性を有する天然に存在しない抗菌ペプチドの製造方法であって、
配列番号1〜81のうちから選択された核移行性配列(NLS)、又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについて1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
配列番号84〜88のうちから選択された白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列、又は該LIFR部分アミノ酸配列について1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
を有するペプチド鎖を設計すること、
および、
前記設計したペプチド鎖を合成すること、
を包含する、抗菌ペプチド製造方法。 - 前記ペプチド鎖として、全アミノ酸残基数が50以下であるペプチド鎖を設計する、請求項6に記載の方法。
- 配列番号1〜81のうちから選択された核移行性配列(NLS)、又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについて1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
配列番号84〜88のうちから選択された白血病阻害因子受容体(LIFR)由来の部分アミノ酸配列、又は該LIFR部分アミノ酸配列について1〜数個のアミノ酸残基が置換、欠失及び/又は付加されて形成された改変配列と、
から実質的に構成され、
前記LIFR部分アミノ酸配列又は該LIFR部分アミノ酸配列についての前記改変配列が前記NLS又は配列番号1〜5、7、9〜23、25、28〜30、33〜55、57〜81のうちから選択された該NLSについての前記改変配列のC末端側に隣接して配置されるようにペプチド鎖を設計する、請求項6又は7に記載の方法。
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