JPWO2008102889A1 - 基質濃度の測定方法および測定装置、ならびに基質濃度測定用試薬 - Google Patents

Abstract

本発明は、基質から生成させた過酸化水素の量に基づいて、基質濃度を測定する方法・試薬・装置に関する。本発明では、過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤が添加される。抑制剤としては、アジ化ナトリウムのようなジアド化合物や亜硝酸ナトリウムのような亜硝酸化合物が使用される。本発明ではさらに、塩化ナトリウムや塩化カリウムのような支持電解質を添加してもよい。

Description

本発明は、グルコースなどの基質を測定するための方法、装置および試薬に関するものである。

グルコース濃度を測定する方法としては、酵素電極法と呼ばれる方法がある。この方法は、試料中のグルコース濃度に相関した情報を、試料に接触させた電極に出力させ、この出力に基づいてグルコース濃度を演算する方法である。その一例として、酵素によってグルコースを酸化して生成される過酸化水素から電極において電子を取り出して、そのときに電極において測定される電流値に基づいてグルコース濃度を演算する方法がある（たとえば特許文献１参照）。

グルコース濃度を測定する場合、試料としては血液が使用されることがあるが、血球の溶血が生じた場合には、全血を用いる場合および血清あるいは血漿を用いる場合のいずれにおいても、試料中にヘモグロビンが含まれることとなる。

しかしながら、ヘモグロビンは、過酸化水素と反応しやすいものであるため、試料中にヘモグロビンが含まれていると、過酸化水素と電極との反応が阻害されてしまう。そのため、ヘモグロビン存在下では、ヘモグロビンが過酸化水素と反応した分だけ、電極の出力が低値化する傾向にあり、高い測定精度を得ることが困難となる。

また、血球の溶血を防止することにより試料中にヘモグロビンが含まれてしまうことを回避することも可能ではないが、その場合には、血液の輸送・保存および前処理段階について細心の注意を払う必要があり、煩わしい作業を強いられるばかりか、検体によって溶血のし易さにバラツキがあるため、現実的ではない。

特公平７−３７９９１号公報

本発明は、煩雑な作業を必要とすることなく、血液などの試料中におけるグルコースなどの基質の濃度を測定する際の阻害物質の影響を抑制し、測定精度を向上させることを課題としている。

本発明の第１の側面においては、基質から生成させた過酸化水素の量に基づいて、基質濃度を測定する方法であって、過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤を共存させる基質濃度の測定方法が提供される。

本発明の第２の側面においては、基質から生成させた過酸化水素濃度を測定するための過酸化水素電極を備えた濃度測定装置であって、過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤が供給されるように構成されている、濃度測定装置が提供される。

本発明の第３の側面においては、基質から生成させた過酸化水素の量に基づいて、基質濃度を測定するための試薬であって、過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤を含んでいる、基質濃度測定用試薬が提供される。

抑制剤としては、たとえば阻害物質としてのヘモグロビンをメト化するものが使用される。ヘモグロビンをメト化する物質としては、たとえばアジド化合物、亜硝酸塩、フェリシアン化塩、過酸化塩、および過マンガン酸塩から選択される少なくとも一種が使用される。

アジド化合物としては、たとえばアジ化ナトリウム、４−ドデシルベンゼンスルフォニルアジド、４−アセチルアミノベンゼンスルフォニルアジド、ジフェニルリン酸アジド、アジ化鉄、アジ化水素、アジ化鉛、アジ化水銀、アジ化銅、あるいはアジ化銀が使用される。測定系におけるアジド化合物の濃度は、０．００１〜１．０００ｗｔ％とするのが好ましく、さらに好ましくは０．０１０〜０．１００ｗｔ％とされる。

亜硝酸塩としては、たとえば亜硝酸ナトリウムおよび亜硝酸カリウムを使用することができる。フェリシアン化塩としては、たとえばフェリシアン化カリウム、過酸化塩としては、たとえば過酸化バリウム、過マンガン酸塩としては、たとえば過マンガン酸カリウムが使用される。抑制剤として例示した塩を用いる場合、測定系における抑制剤の濃度は、たとえば０．００１〜１．０００ｗｔ％とするのが好ましく、さらに好ましくは０．０１０〜０．１００ｗｔ％とされる。

本発明では、支持電解質をさらに共存（添加）させるのが好ましい。支持電解質としては、たとえば塩化ナトリウムまたは塩化カリウムが使用される。好ましくは、支持電解質として、塩化ナトリウムが使用される。支持電解質の濃度は、０．０１０〜２．０００ｗｔ％とするのが好ましく、さらに好ましくは０．０５０〜０．５００ｗｔ％とされる。

基質としては、たとえばグルコース、あるいはラクテートを挙げることができる。基質はまた、たとえば血液、尿あるいは唾液などの生化学的試料に含まれるものである。

本発明の方法および装置では、過酸化水素の量は、たとえば酵素電極法により測定される。

以下においては、本発明について、図面を参照しつつ説明する。

図１に示した濃度測定装置１は、試料調製機構２において調整された試料を、測定機構３において測定するように構成されたものである。

試料調製機構２は、検体から試料を調製するためのものであり、ノズル２０、試薬ボトル２１、および希釈混合槽２２を備えている。

ノズル２０は、希釈混合槽２２に対して検体を供給するためのものである。検体としては、たとえば血液、尿、あるいは唾液などの生化学的試料およびその希釈液が用いられる。試料として血液を使用する場合には、全血および血漿あるいは血清のいずれをも使用することができる。

試薬ボトル２１は、検体を希釈し、あるいは希釈混合槽２２を洗浄するための試薬を保持したものである。この試薬ボトル２１は、配管２３を介して希釈混合槽２２に接続されている。配管２３の途中には、ポンプ２４が設けられており、ポンプ２４の動力により、試薬ボトル２１の試薬が希釈混合槽２２に供給されるように構成されている。

試薬としては、希釈液および抑制剤を含むものが使用される。

希釈液としては、たとえば緩衝液が用いられる。緩衝液としては、基質の反応ｐＨを目的とする範囲に調整できるものであればよく、たとえばリン酸塩類を使用することができる。試薬における緩衝剤の濃度は、たとえば０．０００１〜０．１０００Ｍとされる。

抑制剤は、基質としての過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するためのものである。阻害物質がヘモグロビンである場合には、抑制剤としては、ヘモグロビンをメト化する化合物、たとえばアジド化合物、亜硝酸塩、フェリシアン化塩、過酸化塩、および過マンガン酸塩から選択される少なくとも一種が使用される。

アジド化合物としては、たとえばアジ化ナトリウム（ＮａＮ_３）、アジ化ナトリウム、４−ドデシルベンゼンスルフォニルアジド、４−アセチルアミノベンゼンスルフォニルアジド、ジフェニルリン酸アジド、アジ化鉄、アジ化水素、アジ化鉛、アジ化水銀、アジ化銅、あるいはアジ化銀が使用される。試薬におけるアジド化合物の濃度は、たとえば０．００１〜１．０００ｗｔ％、好ましくは０．０１０〜０．１００ｗｔ％とされる。

亜硝酸塩としては、たとえば亜硝酸ナトリウムおよび亜硝酸カリウムを使用することができる。フェリシアン化塩としては、たとえばフェリシアン化カリウム、過酸化塩としては、たとえば過酸化バリウム、過マンガン酸塩としては、たとえば過マンガン酸カリウムが使用される。抑制剤として例示した塩を用いる場合、測定系における抑制剤の濃度は、たとえば０．００１〜１．０００ｗｔ％とするのが好ましく、さらに好ましくは０．０１０〜０．１００ｗｔ％とされる。

試薬はさらに、支持電解質を含んでいてもよい。支持電解質としては、たとえば塩化ナトリウムあるいは塩化カリウムを使用することができる。試薬における支持電解質の濃度は、たとえば０．０１０〜２．００ｗｔ％、好ましくは０．０５０〜０．５００ｗｔ％とされる。

希釈混合槽２２は、検体を希釈して試料を調整する場を提供するためのものである。希釈反応層２２には、ノズル２０により検体が供給され、試薬ボトル２１から試薬が供給されるように構成されている。この希釈混合槽２２は、攪拌子２５を収容しており、スターラ２６によって攪拌子２５を回転させることにより、検体と試薬とが混合される。希釈混合槽２２はさらに、配管２７を介して測定機構３の酵素電極３０に接続されている。配管２７の途中にはポンプ２８が設けられており、ポンプ２８の動力により、測定機構３に希釈混合槽２２において調製された試料が酵素電極３０に供給されるように構成されている。

測定機構３は、酵素電極３０、電源３１および電流値測定部３２を有している。

酵素電極３０は、試料における基質との電子授受量に応じた電気的物理量を出力するものである。この酵素電極３０は、図２に示したように、たとえば基質選択透過膜３３、酵素固定化膜３４、過酸化水素選択透過膜３５および過酸化水素電極３６を有している。

基質選択透過膜３３は、酵素固定化膜３４に対して試料中の基質を選択的に供与するためのものである。基質選択透過膜３３は、基質の種類に応じて選択されるが、公知の種々のものを使用することができる。

酵素固定化膜３４は、基質を酸化して過酸化水素を生成させるためのものであり、酸化酵素を含んだものとして構成される。本発明で用いる酸化酵素は、基質の種類に応じて選択される。ここで、濃度測定装置１での測定対象となる基質としては、グルコースあるいはラクテートを挙げることができ、酸化酵素としては、グルコースオキシダーゼあるいはラクテートオキシダーゼを挙げることができる。

過酸化水素選択透過膜３５は、過酸化水素電極３６に対して過酸化水素を選択的に供与するためのものである。過酸化水素選択透過膜３５としては、たとえばアセチルセルロース系あるいはポリアリルアミン系のものを使用することができる。

過酸化水素電極３６は、供与された過酸化水素量、すなわち基質の濃度に応じた電気的信号を出力するものである。このような過酸化水素電極３６としては、たとえば陽極３７として白金、陰極３８として銀を採用したものを使用することができる。

図１に示した電源３１は、酵素電極３０（過酸化水素電極３６）に対して電圧を印加するためのものである。電源３１としては、たとえば直流電源が使用され、酵素電極３０（過酸化水素電極３６）に対する印加電圧は、たとえば０．１〜１．０Ｖに設定される。

電流値測定部３２は、過酸化水素電極３６と過酸化水素との間の電子授受量を電流値として測定するためのものである。電流値測定部３２における電流値の測定は、断続的に行なわれ、その測定間隔は、たとえば５０〜２００ｍｓｅｃとされる。

次に、濃度測定装置１における動作について、全血中のグルコースを測定する場合を例にとって、説明する。

全血中のグルコース濃度を測定する場合には、希釈混合槽２２に対して全血および試薬が供給される。希釈混合槽２２に対する全血の供給は、ノズル２０を用いて行なわれ、その供給量は、たとえば４〜２０μＬに設定される。一方。希釈混合槽２２に対する試薬の供給は、ポンプ２４を利用して行なわれ、その供給量は、たとえば全血量の１００倍程度とされる。

濃度測定装置１においては、全血および試薬が供給された場合には、攪拌子２５により希釈混合槽２２が攪拌される。このとき、試薬の供給量が全血の供給量の１００倍程度とされることから、希釈混合槽２２における緩衝液のｐＨ、抑制剤および支持電解質の濃度は、実質的に試薬におけるｐＨおよび濃度に維持される。その後、ポンプ２８を用いて調製された試料を酵素電極３０に供給する。

酵素電極３０では、グルコースが基質選択透過膜３３を透過して酵素固定化膜３４に供与される。酵素固定化膜３４においては、下記反応式（１）に示したように、酸化酵素（グルコースデヒドロゲナーゼ）のグルコースが酸化されてグルコン酸と過酸化水素が生成される。過酸化水素は、過酸化水素選択透過膜３５を透過して過酸化水素電極３６に供与される。過酸化水素電極３６では、電源３１による電圧の印加によって、下記反応式（２）が生じて、過酸化水素が陽極３７に電子を供与して酸素と水素イオンに分解される。このとき、陽極３７に供与された電子によって陽極３７と陰極３８の間に電流が流れ、そのときの電流が電流値測定部３２において測定される。一方、陰極３８では、陽極３７からの電子により、下記反応式（３）に示した反応が生じて水が生成される。

ここで、陽極３８においては、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）の還元反応が生じるが、希釈混合槽２２にオキシヘモグロビン（Fe（II））が存在していると、下記反応式（４）に示したように、陽極反応と、デオキシヘモグロビン（オキシＨｂ（Fe（II）））からメト化ヘモグロビン（メト化Ｈｂ（Fe（III）））への酸化反応とが競合する。

このような競合反応が生じた場合には、本来、陽極３７において消費されるべき過酸化水素がデオキシヘモグロビンによって消費されるため、電流値測定部３２において測定される電流値は本来得られるべき値よりも低値化する。とくに、血球を含む試料においては、グルコン酸が生成されることにより血球膜近傍のｐＨが低下する傾向がある。そのため、ｐＨの低下にともない、オキシヘモグロビンが酸素を放出してデオキシヘモグロビンに変化し、グルコースの酸化反応の進行に伴って、デオキシヘモグロビンの生成量が大きくなるものと考えられる。その結果、グルコースの酸化反応の進行（グルコン酸の生成）に伴って、陽極３７における過酸化水素の酸化反応を阻害するデオキシヘモグロビンが生成され、測定される酸化電流が真値よりも小さくなるものと考えられる。

その一方で、試料にアジド化合物や亜硝酸塩のような酸化物を抑制剤として共存させておくと、下記反応式（５）に示したように、デオキシヘモグロビン（Fe（II））からメト化ヘモグロビン（Fe（III））への酸化反応が抑制剤の酸化作用によって生じる。

そのため、試料に抑制剤を共存させておくことで、過酸化水素がデオキシヘモグロビンと反応することが抑制される。その結果、濃度測定装置１では、電流値測定部３２において測定される電流値の低値化を抑制することができるとともに測定される応答電流値のバラツキを抑制することができる。これにより、濃度測定結果が低値化することを回避するとともに再現性を向上させることができるため、測定精度および測定信頼性を向上させることができる。

このような効果は、阻害物質がデオキシヘモグロビンである場合、あるいは基質がグルコースである場合に限らず、基質によって過酸化水素が生成されるとともに、過酸化水素と陽極とを反応させて基質濃度を測定する他の系においても得ることができる。

また、試薬に塩化ナトリウムなどの支持電解質を含ませておけば、反応槽２０におけるイオン強度を高くすることができる。そのため、電流値測定部３２において得られる酸化電流を安定化させることが可能となる。その結果、支持電解質を含ませておくことによって、測定再現性をさら向上させることが可能となる。

本発明は、上述の実施の形態には限定されず、種々に変更可である。たとえば、酵素電極を希釈混合槽に固定した構成とし、バッチ式で基質濃度を測定するようにしてもよい。

また、図３に示した濃度測定装置１のように、希釈混合槽を省略し、試薬ボトル２１の試薬を酵素電極３０に連続的に供給するとともに、インジェクションバルブ４から検体や試料を注入するような構成であってもよい。

本実施例では、過酸化水素電極を用いて試料中のグルコース濃度を測定する場合に、アジ化ナトリウムが応答値に与える影響について検討した。

（試料）
試料としては、グルコース濃度を１００ｍｇ／ｄＬに調整した全血を使用した

（試薬）
試薬としては、「６１Ｈ」（アークレイ株式会社製）にＮａＣｌを０．２３４ｗｔ％となるように添加した試料１、および試料１にＮａＮ_３を０．０２ｗｔ％となるようにさらに添加した試料２を、それぞれ１００倍希釈したものを反応槽へ供給した。

（応答値の測定）
応答値は、アダムス グルコース ＧＡ−１１７（アークレイ株式会社製）を用いて、反応槽に試料および試薬を供給したときに、ＧＯＤ固定化過酸化水素電極において得られ酸化電流として測定した。過酸化水素電極に対する印加電圧は６５０ｍＶとし、応答電流の測定間隔は５０ｍｓｅｃとした。応答電流は、反応槽に対して試料および試薬を供給して一定時間保持した後に、試料および試薬を入れ替えてさらに試料および試薬を一定時間保持する操作を１セットとし、合計３セットについて連続的に測定した。各セットの間については、反応槽および配管を一定時間洗浄した。応答電流値の測定結果については、電圧値に換算したものとして、試料１については図４に、試料２については図５に示した。

図４および図５を比較すれば分かるように、ＮａＮ_３を添加していない試料１については応答値の最大値が小さくなっているとともに明確なピークもなく最大値がバラつく結果となった。これは、グルコースを酸化した際に生成した過酸化水素が、ヘモグロビンと反応することによって、過酸化水素電極において測定される過酸化水素の量が少なくなって低値化しているものと考えられる。

一方で、ＮａＮ_３を添加した試料２については、試料１よりも最大値が大きい上に、応答値のタイムコースも安定している。すなわち、試料２では、ＮａＮ_３が添加されることにより、ヘモグロビンとＮａＮ_３が反応し、過酸化水素電極において測定される過酸化水素の量が少なくなることが抑制されているものと考えられる。

したがって、反応系にＮａＮ_３を添加することにより、応答値が大きくなるとともにその最大値が安定するため、測定精度および再現性が改善されることが伺える。

本実施例では、過酸化水素電極を用いて試料中のグルコース濃度を測定する場合に、アジ化ナトリウムおよび亜硝酸ナトリウムが応答値に与える影響について検討した。

（試料）
試料としては、グルコース濃度を１００ｍｇ／ｄＬに調整した全血を使用した

（試薬）
試薬としては、「６１Ｈ」（アークレイ株式会社製）にＮａＣｌを０．２３４ｗｔ％となるように添加した試料３、試料３にＮａＮ_３を０．０２ｗｔ％となるようにさらに添加した試料４を、および試料３に亜硝酸Ｎａを０．０２ｗｔ％となるようにさらに添加した試料５を、それぞれ１００倍希釈したものを反応槽へ供給した。

（応答値の測定）
応答値は、アダムス グルコース ＧＡ−１１７（アークレイ株式会社製）を用いて、反応槽に試料および試薬を供給したときに、ＧＯＤ固定化過酸化水素電極において得られ酸化電流として測定した。過酸化水素電極に対する印加電圧は６５０ｍＶとし、応答電流の測定間隔は５０ｍｓｅｃとした。応答電流は、反応槽に対して試料および試薬を供給して一定時間攪拌した後に攪拌を停止するとともに、この一連の動作において連続的に測定した。応答電流値の測定結果については、電圧値に換算したものとして、試料３については図６Ａに、試料４については図６Ｂに、試料５については図６Ｃにそれぞれ示した。

図６Ａから分かるように、ＮａＮ_３および亜硝酸ナトリウムを添加していない試料３は、攪拌の停止後からしばらくしてから感度が低下した。これは、デオキシヘモグロビン（オキシＨｂ（Fe（II）））からメト化ヘモグロビン（メト化Ｈｂ（Fe（III）））への酸化反応が進行し、過酸化水素の陽極反応が阻害されているためのである考えられる。

一方、図６Ｂから分かるようにＮａＮ_３を添加した試料４は、今回測定した範囲では攪拌の停止後も感度が上昇し、図６Ａから分かるように亜硝酸ナトリウムを添加した試料５は、今回測定した範囲では攪拌の停止後に感度が一定値に漸近する傾向にあった。すなわち、ＮａＮ_３や亜硝酸ナトリウムを添加した場合には感度の低下はなく、ＮａＮ_３や亜硝酸ナトリウムによって、デオキシヘモグロビン（オキシＨｂ（Fe（II）））からメト化ヘモグロビン（メト化Ｈｂ（Fe（III）））への酸化反応が抑制されているものと考えられる。

本実施例では、試薬におけるＮａＣｌが応答値に与える影響について検討した。

試薬としては、試料６として「６１Ｈ」（アークレイ株式会社製）、および試料６にＮａＣｌを０．２３４ｗｔ％となるように添加した試料７を用いた。

試料としては、０．９ｗｔ％のＮａＣｌを含む生理食塩水を、試薬６または試薬７で１００倍に希釈したものを用いた。

応答値の測定は、実施例１と同様にして行なった。応答値の測定結果は、電圧値に換算した値として、試料６については図７に、試料４については図８に示した。

図７および図８から分かるように、ＮａＣｌを添加していない試料６では、応答値が不安定であるのに対して、ＮａＣｌを添加した試料７では応答値が安定している。すなわち、ＮａＣｌには、応答電流値のベースを安定させる作用があるものと考えられる。

したがって、試薬中にＮａＣｌを添加することにより、応答値を安定させ、測定精度および再現性が改善されるものと考えられる。

本発明に係る濃度測定装置の概略構成を模式的に示した断面図である。 図１に示した濃度測定装置における酵素電極の概略構成を模式的に示した断面図である。 本発明に係る濃度測定装置の他の例を説明するための配管図である。 実施例１において、アジ化ナトリウムを添加せずに全血の応答電流を測定したときの結果を示すグラフである。 実施例１において、アジ化ナトリウムを添加して全血の応答電流を測定したときの結果を示すグラフである。 図６Ａは実施例２において抑制剤を添加せずに応答電流値を測定したときの結果を示すグラフであり、図６Ｂは実施例２において抑制剤としてアジ化ナトリウムを添加して全血の応答電流を測定したときの結果を示すグラフであり、図６Ｃは実施例２において抑制剤として亜硝酸ナトリウムを添加して全血の応答電流を測定したときの結果を示すグラフである。 実施例３において、塩化ナトリウムを添加せずに生理食塩水の応答電流を測定したときの結果を示すグラフである。 実施例３において、塩化ナトリウムを添加して生理食塩水の応答電流を測定したときの結果を示すグラフである。

１ 濃度測定装置
３６ 過酸化水素電極

Claims (25)

1. 基質から生成させた過酸化水素の量に基づいて、基質濃度を測定する方法であって、
   過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤を共存させる、基質濃度の測定方法。
2. 上記阻害物質は、ヘモグロビンであり、
   上記抑制剤は、ヘモグロビンをメト化するものである、請求項１に記載の基質濃度の測定方法。
3. 上記抑制剤は、アジド化合物である、請求項２に記載の基質濃度の測定方法。
4. 上記アジド化合物は、アジ化ナトリウムである、請求項３に記載の基質濃度の測定方法。
5. 上記アジド化合物の濃度は、０．００１〜１．０００ｗｔ％である、請求項３に記載の基質濃度の測定方法。
6. 上記抑制剤は、亜硝酸塩、フェリシアン化塩、過酸化塩、および過マンガン酸塩から選択される少なくとも一種である、請求項２に記載の基質濃度測定方法。
7. 上記抑制剤は、亜硝酸ナトリウム、フェリシアン化カリウム、過酸化バリウム、および過マンガン酸カリウムから選択される少なくとも一種である、請求項６に記載の基質濃度の測定方法。
8. 支持電解質をさらに共存させる、請求項１に記載の基質濃度の測定方法。
9. 上記支持電解質は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである、請求項８に記載の基質濃度の測定方法。
10. 上記支持電解質の濃度は、０．０１〜２．００ｗｔ％である、請求項８に記載の基質濃度の測定方法。
11. 基質から生成させた過酸化水素濃度を測定するための過酸化水素電極を備えた濃度測定装置であって、
    過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤が供給されるように構成されている、基質濃度の測定装置。
12. 上記抑制剤として、上記阻害物質であるヘモグロビンをメト化するものを供給するように構成されている、請求項１１に記載の基質濃度の測定装置。
13. 上記化合物は、アジド化合物である、請求項１２に記載の基質濃度の測定装置。
14. 上記アジド化合物は、アジ化ナトリウムである、請求項１３に記載の基質濃度の測定装置。
15. 上記抑制剤は、亜硝酸塩、フェリシアン化塩、過酸化塩、および過マンガン酸塩から選択される少なくとも一種である、請求項１２に記載の基質濃度の測定装置。
16. 上記抑制剤は、亜硝酸ナトリウム、フェリシアン化カリウム、過酸化バリウム、および過マンガン酸カリウムから選択される少なくとも一種である、請求項１５に記載の基質濃度の測定装置。
17. 支持電解質がさらに供給されるように構成されている、請求項１１に記載の基質濃度の測定装置。
18. 基質から生成させた過酸化水素の量に基づいて、基質濃度を測定するための試薬であって、
    過酸化水素と阻害物質とが反応するのを抑制するための抑制剤を含んでいる、基質濃度測定用試薬。
19. 上記阻害物質は、ヘモグロビンであり、
    上記抑制剤は、ヘモグロビンをメト化するものである、請求項１８に記載の基質濃度測定用試薬。
20. 上記抑制剤は、アジド化合物である、請求項１９に記載の基質濃度測定用試薬。
21. 上記アジド化合物は、アジ化ナトリウムである、請求項２０に記載の基質濃度測定用試薬。
22. 上記抑制剤は、亜硝酸塩、フェリシアン化塩、過酸化塩、および過マンガン酸塩から選択される少なくとも一種である、請求項１９に記載の基質濃度測定用試薬。
23. 上記亜硝酸塩は、亜硝酸ナトリウム、フェリシアン化カリウム、過酸化バリウム、および過マンガン酸カリウムから選択される少なくとも一種である、請求項２２に記載の基質濃度測定用試薬。
24. 支持電解質をさらに含んでいる、請求項１８に記載の基質濃度測定用試薬。
25. 上記支持電解質は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである、請求項２４に記載の基質濃度測定用試薬。
    

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