JPS6359881A

JPS6359881A - 生澱粉分解酵素生産菌

Info

Publication number: JPS6359881A
Application number: JP61202874A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Kanda; 聡神田; Masaaki Hamachi; 浜地　正昭; Takemitsu Honma; 本馬　健光; Yataro Nunokawa; 布川　弥太郎
Original assignee: OOZEKI SYUZO KK; Ozeki Sake Brewing Co Ltd
Current assignee: OOZEKI SYUZO KK; Ozeki Sake Brewing Co Ltd
Priority date: 1986-08-28
Filing date: 1986-08-28
Publication date: 1988-03-15
Anticipated expiration: 2009-11-09
Also published as: JPH0687775B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は蒸煮工程なしに生の澱粉を分解する新規酵素の
生産菌に関し、この酵素により、醸造工程の省力化およ
び省エネルギーや農産物の未Ｘｌｌ用澱粉のエネルギー
的回収か可能とζろ。

従来の技術および問題点従来、澱粉の糖化工程は、必ず澱粉の蒸煮によるα化工
程を要す。一部で生澱粉分解作用の強い粘化酵素を用い
て無蒸煮アルコール発酵を試みているが、またパイロッ
トプラントの段階にある。

このような事情に鑑８、本発明者らは、好適な生澱粉分
解酵素を得るー・く鋭ひ研究した。その拮果、ある種の
新規な糸状菌が優れた生澱粉分解酵素を生産することを
見出し、本発明を完成するにいたった。

問題点を解決するための手段本発明は、新規な生澱粉分解酵素生産菌、ベニツリウム
・ラノ′スム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍ　　ｌａｎｏｓｕ
ｍ）ＯＣＲ−１を提供し、これにより、生澱粉の無蒸煮
糖化工程の実現を目差すものである。

本発明の新規糸状菌は、次のような菌学的性質を有する
ものである。

（１）生育状態 ■ツアペック液寒天（Ｃｚａｐｅｋ’ｓ　５ｏＩｕむｉ
ｏｎ　ａｇ、１ｒ）培地を用い、２８°Ｃ１２週間平板
培養することにより、直径４〜５Ｃ１ｌ！のコロニーを
生ずる。まｆ二、色はほとんどが白色であり、コロニー
中央部の一部で胞子形成が見られ淡緑色となる。

■麦芽エキス寒天（Ｍａｌｔ　　ｅｘｔｒａｃｔ　　ａ
ｇａｒ）培地を用い、２８°Ｃ１２週間平板培養するこ
とにより、直径４ｃｍ程度のコロニーを生じ、ヒロード
状の生育を示す。色は緑色〜灰緑色であり、非常によく
胞子を形成する。分生予病は気菌糸から生じ、最大、長
さは２００μ、巾は３μである。壁は滑面である。また
、フィアロ型分生子を作り、その完全四代が認められな
い。

■ツアペック液寒天（Ｃｚａｐｅｋ’ｓ　５ｏｌｕｔｉ
ｏｎ　ａｇａｒ）培地中の炭素源を末生澱粉（１％）に
かえ、３０℃で培滲すると、明確なハローを形成する。

（２）生理的性質 ■澱粉の加水分解性：陽性 ■酵素に対する態度　好気性 ■生育のｐＨ範囲：ｐＨ３，５〜１２ ■生育の温度範囲、１５〜３５°にれらの観察結果より、本閑は不完全菌のベニツリウム属
に属する。ペニンリは複輪生体〜非対称体であり、分生
予病は通常長く、コロニーは羊毛状、白色から後に灰緑
色となることにより、ベニツリウム・コマネ（Ｐ、　ｃ
ｏｍｍａｎｅ）系に含まれる。

この系の中には８種含まれているが、麦芽寒天培地上で
よく胞子形成すること、分生子の表面が細かな粗面であ
る二となどかみペニシリウム・ラノスム・ウェストリン
ク（Ｐｅｑｉｃｉｌｌｉｕｍ　ＩａｎｏｓｕｍＷｅｓｔ
ｌｉｎｇ）と同定され、そのペニシリウム・ラノスム０
ＣＲ−１妹を、昭和６０年１０月２３日に工業技術院微
生物工業技術研究所に微工研菌寄第８　＝１９１号（Ｐ
ＥＲＭ　　Ｐ　　８４９１）として寄託した。

本閑は次の如く分離、純化される。分離は試料の１をシ
ャーレ内にとり、その上より肉汁寒天（１３ｕｉｌｌｏ
ｎ　　ａｇａｒ）培地中の炭素源を末生澱粉（１％）に
改変した培地を流し込むことにより行なった。３０℃で
３日間インキュベートした後、コロニーの周辺に末生澱
粉が溶解している明確なハローと呼ばれる領域か形成さ
れたものを採取し、面記と同様な培地で培１もし、ハロ
ーの形成が再確認されｊコちのを分離、保存する（１次
パス菌株と称する）。

さらに、１次パス菌株について肉汁培地中の炭素源を末
生澱粉（１％）で改変した液体培地中で３０℃、５〜７
日間振盪培養し、その培地プロスを粗酵素液として生澱
粉分解活性および可溶性澱粉分解活性を測定し、可溶性
澱粉の分解速度に対する生澱粉分解速度の比（Ｒ／Ｓ比
）が２０以上のらの６株を選択し、６株の中で最もＲ／
Ｓ比の大きな株として０ＣＲ−１を選択した。Ｒ／Ｓ比
は下記のような式で与えられる。

Ｒ／Ｓ＝　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｘ１００
可溶性澱粉分解速度（生成還元糖 μｇＧｌｃ／培地ブロスｆｆ１２／ｈｒ）本発明のペニ
シリウム・ラノスム（Ｐ　ｅｎｉｃｉｌｌｕｍｌａｎｏ
ｓｕｍ）　　ＯＧ　Ｒ−１をソルビトール　１％、ＫＮ
　０３１％、ＫＨ２ＰＯ−０，５％、Ｆ　ｅ　ＣＱ３０
　、０１％、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７Ｉ（、ＯＯ，２５％
、エピクロルヒドリン架橋澱粉０．５％（ｐＨ６，０）
から成る培地を用い、ｌ　ｖｖｍ、３０°Ｃで培養する
。得られた培養液を除菌後、８０％−硫安塩析、８０％
−アセトン沈澱を順次行ない、凍結乾燥して、粗酵素粉
末を得る。

この粗酵素は、次の理化学的性質を汀する新規な生澱粉
分解酵素である。

■作用：α−アミラーゼと共に作用して生（無蒸煮）の
澱粉を加水分解しグルコースを得る。

■至適ｐＨ：ｐＨ５，０ ■ｐＨ安定性、各１）Ｈの緩衝液中で２０時間処理しｆ
こ場合、ｐ）（３〜７において９０％以上の残存活性を
示す。

■温度安定性、各温度で１０分間処理しｆコ場合、５０
℃まで安定。

各種生澱粉を基質として２００μ９−タンパク当量の粗
酵素をｐＨ５で作用させると、第１図のように加水分解
される。また、少量の生澱粉に全く不活性な市販のα−
アミラーゼ（アミラーゼＩ（−大野製薬）を添加するこ
とにより、生澱粉の加水分解が著しく促進されろ（第２
図参０．６）。

［発明の効果］本発明のペニシリウム・ラノスム（Ｐｃｎｉｃｉｌｌｕ
ｍｌａｎｏｓｕｍ）　　○ＧＲｉの生産する生澱粉分解
酵素を利用することにより、ｋ煮工程す＜シて生澱粉の
助化が可能にｔつ几。また、本酵素の場合、糊化澱ｔ＞
分解活性？二対する生澱粉分解活性の比が非；＋’＋　
ｌ−、＋“・５いことを特徴とし、研究力面でら利用が
期待されるっ次に酵素の調製σりを示す。

調製例１酵素生産３つための培養 ■ペニシリウム・ラノスム（Ｐ　、　ｌａｎｏｓｕｍ）
ＯＧ：［え−１保存スラントより、ブイヨン（ｐＩ−Ｉ
　Ｇ　、　Ｏ）の平板培地上に一白金耳接種し、３０℃
、２日間培養オろ。

・■培谷後、形成された木菌のコロニー上に殺菌水１０
でジを滴下し、菌体Ｗ、ｆ５液を作り、殺菌済みガラス
フィルター（３Ｇ−３）を用い、濾過し、胞子凶・濁液
を得る。

（の次に抱子膿度をｌＸｌ０６ｇ／ｍＱ〜ｌＸｌ０’ｇ
／、：；ｆ２、望ましくは５ｘｌＯ’個／スＱに調整１
−１これを１％エピクロルヒドリン架橋澱粉を含むブイ
ヨン培地（ｐＨ６，０）　ｌ　ＯＯ村につきＩｆｆＣ接
種し、３０°Ｃ１３日間程度振盪培養する（前培養）。

・■■にて得られた前培養培地を種とし、１″、；ソル
ビトール、１％Ｋ　Ｎ　Ｏ３，０，５％に＋（、ＰＯ，
。

０．０１　’、６ＰｅＣＱｚ、０．２５％Ｍｇ５Ｏ４７
Ｈ２０，０５％エピクロルヒドリン架橋澱粉からなるｐ
Ｈ６０の本培養培地に２０％の割合になるよう添加し、
３０　’Ｃ，Ｉ　ｖｖｍの条件下で通気培養をｉテなう
。

調製例２粗酵素粉末の調製 ■培養終了後、濾過または遠心分雛により１）２１体を
除去後、培養濾液を得る。

■培養濾液に対し、望ましくは０°Ｃに冷却下ないし５
°Ｃ以下の条件でスターラーで静かに撹ｒｌ！Ｌながら
、培捉、！！液に８０％飽和になるようにｌ？＋］形硫
安全硫安に加え塩析を行なった。

■塩析により析出したタンパクの沈澱は、１０００Ｇで
５分間遠心分離し集め、これを籏留水に溶解後、５°Ｃ
て２４時間透析を行なった。

■この透析液に対し、５°Ｃ以下で８０％アセトン処理
を行ない、再度１００００．５分間遠心分雛することに
より沈澱物を得、蒸留水に溶解後、■と同条件で６（斤
を行なった。

つろ（１液を凍結乾燥することにより招酵素粉末を得に
。該酵素粉末は面記のような理化学的性質をＹ丁してい
た。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、本発明の生産菌を用いて得みれ
た酵素の加水分解活性を示すグラフであるっ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）無蒸煮澱粉を特異的に加水分解する酵素生産菌、
ペニシリウム・ラノスム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｌａｎ
ｏｓｕｍ）ＯＧＲ−１。