JPH0687775B2 - 生澱粉分解酵素生産菌 - Google Patents

生澱粉分解酵素生産菌

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JPH0687775B2
JPH0687775B2 JP61202874A JP20287486A JPH0687775B2 JP H0687775 B2 JPH0687775 B2 JP H0687775B2 JP 61202874 A JP61202874 A JP 61202874A JP 20287486 A JP20287486 A JP 20287486A JP H0687775 B2 JPH0687775 B2 JP H0687775B2
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degrading enzyme
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聡 神田
正昭 浜地
健光 本馬
弥太郎 布川
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Ozeki Corp
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    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel

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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は蒸煮工程なしに生の澱粉を分解する新規酵素の
生産菌に関し、この酵素により、醸造工程の省力化およ
び省エネルギーや農産物の未利用澱粉のエネルギー的回
収が可能となる。
従来の技術および問題点 従来、澱粉の糖化工程は、必ず澱粉の蒸煮によるα化工
程を要す。一部で生澱粉分解作用の強い糖化酵素を用い
て無蒸煮アルコール発酵を試みているが、まだパイロッ
トプラントの段階にある。
このような事情に鑑み、本発明者らは、好適な生澱粉分
解酵素を得るべく鋭意研究した。その結果、ある種の新
規な糸状菌が優れた生澱粉分解酵素を生産することを見
出し、本発明を完成するにいたった。
問題点を解決するための手段 本発明は、新規な生澱粉分解酵素生産菌、ペニシリウム
・ライスム(Penicillum lanosum)OGR-1を提供し、こ
れにより、生澱粉の無蒸煮糖化工程の実現を目差すもの
である。
本発明の新規糸状菌は、次のような菌学的性質を有する
ものである。
(1)生育状態 ツァペック液寒天(Czapek′s solution agar)培地
を用い、28℃、2週間平板培養することにより、直径4
〜5cmのコロニーを生ずる。また、色はほとんどが白色
であり、コロニー中央部の一部で胞子形成が見られ淡緑
色となる。
麦芽エキス寒天(Malt extract agar)培地を用い、2
8℃、2週間平板培養することにより、直径4cm程度のコ
ロニーを生じ、ビロード状の生育を示す。色は緑色〜灰
緑色であり、非常によく胞子を形成する。分生子柄は気
菌糸から生じ、最大、長さは200μ、巾は3μである。
壁は滑面である。また、フィアロ型分生子を作り、その
完全世代が認められない。
ツァペック液寒天(Czapek′s solution agar)培地
中の炭素源を米生澱粉(1%)にかえ、30℃で培養する
と、明確なハローを形成する。
(2)生理的性質 澱粉の加水分解性:陽性 酵素に対する態度:好気性 生育のpH範囲:pH3.5〜12 生育の温度範囲:15〜35℃ これらの観察結果より、本菌は不完全菌のペニシリウム
属に属する。ペニシリは複輪生体〜非対称体であり、分
生子柄は通常長く、コロニーは羊毛状、白色から後に灰
緑色となることにより、ペニシリウム・コマネ(P.comm
ane)系に含まれる。
この系の中には8種含まれているが、麦芽寒天培地上で
よく胞子形成すること、分生子の表面が細かな粗面であ
ることなどからペニシリウム・ラノスム・ウエストリン
グ(Penicillium lanosum Westling)と同定され、その
ペニシリウム・ラノスムOGR-1株を、昭和60年10月23日
に工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第8491
号(FERM P-8491)として寄託した。
本菌は次の如く分離、純化される。分離は試料の適量を
シャーレ内にとり、その上より肉汁寒天(Buillon aga
r)培地中の炭素源を米生澱粉(1%)に改変した培地
を流し込むことにより行なった。30℃で3日間インキュ
ベートした後、コロニーの周辺に米生澱粉が溶解してい
る明確なハローと呼ばれる領域が形成されたものを採取
し、前記と同様な培地で培養し、ハローの形成が再確認
されたものを分離、保存する(1次パス菌株と称す
る)。
さらに、1次パス菌株について肉汁培地中の炭素源を米
生澱粉(1%)で改変した液体培地中で30℃、5〜7日
間振盪培養し、その培地ブロスを粗酵素液として生澱粉
分解活性および可溶性澱粉分解活性を測定し、可溶性澱
粉の分解速度に対する生澱粉分解速度の比(R/S比)が2
0以上のもの6株を選択し、6株の中で最もR/S比の大き
な株としてOGR-1を選択した。R/S比は下記のような式で
与えられる。
本発明のペニシリウム・ラノスム(Penicillum lanosu
m)OGR-1をソルビトール1%、KNO31%、KH2PO40.5
%、FeCl30.01%、MgSO4・7H2O0.25%、エピクロルヒド
リン架橋澱粉0.5%(pH6.0)から成る培地を用い、1vv
m、30℃で培養する。得られた培養液を除菌後、80%−
硫安塩析、80%−アセトン沈澱を順次行ない、凍結乾燥
して、粗酵素粉末を得る。
この粗酵素は、次の理化学的性質を有する新規な生澱粉
分解酵素である。
作用:α−アミラーゼと共に作用して生(無蒸煮)の
澱粉を加水分解しグルコースを得る。
至適pH:pH5.0 pH安定性:各pHの緩衝液中で20時間処理した場合、pH
3〜7において90%以上の残存活性を示す。
温度安定性:各温度で10分間処理した場合、50℃まで
安定。
各種生澱粉を基質として200μg−タンパク当量の粗酵
素をpH5で作用させると、第1図のように加水分解され
る。また、少量の生澱粉に全く不活性な市販のα−アミ
ラーゼ(アミラーゼK−天野製薬)を添加することによ
り、生澱粉の加水分解が著しく促進される(第2図参
照)。
[発明の効果] 本発明のペニシリウム・ラノスム(Penicillum lanosu
m)OGR-1の生産する生澱粉分解酵素を利用することによ
り、蒸煮工程なくして生澱粉の糖化が可能になった。ま
た、本酵素の場合、糊化澱粉分解活性に対する生澱粉分
解活性の比が非常に高いことを特徴とし、研究方面でも
利用が期待される。
次に酵素の調製例を示す。
調製例1 酵素生産のための培養 ペニシリウム・ラノスム(P.lanosum)OGR-1保存スラ
ントより、ブイヨン(pH6.0)の平板培地上に一白金耳
接種し、30℃、2日間培養する。
培養後、形成された本菌のコロニー上に殺菌水10mlを
滴下し、菌体懸濁液を作り、殺菌済みガラスフィルター
(3G-3)を用い、濾過し、胞子懸濁液を得る。
次に胞子濃度を1×106個/ml〜1×107個/ml、望まし
くは5×106個/mlに調整し、これを1%エピクロルヒド
リン架橋澱粉を含むブイヨン培地(pH6.0)100mlにつき
1ml接種し、30℃、3日間程度振盪培養する(前培
養)。
にて得られた前培養培地を種とし、1%ソルビトー
ル、1%KNO3、0.5%KH2PO4、0.01%FeCl3、0.25%MgSO
47H2O、0.5%エピクロルヒドリン架橋澱粉からなるpH6.
0の本培養培地に20%の割合になるよう添加し、30℃、1
vvmの条件下で通気培養を行なう。
調製例2 粗酵素粉末の調製 培養終了後、濾過または遠心分離により菌体を除去
後、培養濾液を得る。
培養濾液に対し、望ましくは0℃に冷却下ないし5℃
以下の条件でスターラーで静かに攪拌しながら、培養濾
液に80%飽和になるように固形硫安を徐々に加え塩析を
行なった。
塩析により析出したタンパクの沈澱は、1000Gで5分
間遠心分離し集め、これを蒸留水に溶解後、5℃で24時
間透析を行なった。
この透析液に対し、5℃以下で80%アセトン処理を行
ない、再度1000G、5分間遠心分離することにより沈澱
物を得、蒸留水に溶解後、と同条件で透析を行なっ
た。
透析液を凍結乾燥することにより粗酵素粉末を得た。
該酵素粉末は前記のような理化学的性質を有していた。
【図面の簡単な説明】
第1図および第2図は、本発明の生産菌を用いて得られ
た酵素の加水分解活性を示すグラフである。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】無蒸煮澱粉を特異的に加水分解する酵素生
    産菌、ペニシリウム・ラノスム(Penicillum lanosum)
    OGR-1。
JP61202874A 1986-08-28 1986-08-28 生澱粉分解酵素生産菌 Expired - Lifetime JPH0687775B2 (ja)

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JPS6359881A JPS6359881A (ja) 1988-03-15
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