SU933704A1 - Штамм плесневого гриба aSpeRGILLUS oRyZae-3-продуцент @ -амилазы - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к ферментной отрасли микробиологической промьпиленнбстн и может быть использовано в хлебопекарной , спиртовой и других област х народного Хоз йства.

Известен р д штаммов - продуцентов с -амилазы, образующих комплекс амилолитических ферментов как при поверхностном так и при глубинном культивировании .

Известен; штамм AspetgiltBus 3-9-15 активный продуцент д -амилазы, который используетс  дл  получени  ферментного препарата Амилоризина 2.1С. Активность (,-амилазы 25 ед/мл культуральной жидкости ijНедостатком данного штамма  вл етс  невысока  активность продуцируемого фермента.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предлагаемому  вл етс  штамм Ofvlae 74О-А2 - продуцент

Ot-амилазы. Акгивносгьо -Амилазы 200,0 ец/г сухого вещества .

Недостатком известного  вл етс  нестабилы1а   активность о -амилазы при культивировании его в производственных услови х и повышенна  восприимчивость к инфекции.

Цель изобретени  - получение высокоактивного , стабильного, устойчивого штамма - гфодуцента амилазы.

Предлагаемый штамм ОУ 9ВДе-3  вл етс  активным продуцентом 0,-амилазь. Штамм хранитс  в коллекции культур промьшдленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коплетспнопный номер Н -115. По активности накоплени  амилолитнческ х ферментов он превышает активность известного и отвечает требовани м современного производства дл  получени  из.него:фермектно1-о препарата Амилоризина П-10Х высшей категории качества.

Предлагаемый штамм получен в результате двух ступенчатой селекции с при3 менением мутагенов физической и химич кой природы. На первом этапе селекции используют в качестве мутагена нитрозогуанидин (НГ) в концентрации 2ОО /м на втором этапе - НГ в комбинации с ультрафиолетовыми лучами (УФ-лучи): доза 25 10 эрг/см. В результате многочисленных проверок амилолитической активности вьщелен мутант Ав | efgi Ви% oVVicie -3. Он не только активно синтезирует ci-вмилазу, но и стабильно сохран ет эти свойства в течение 2 лет. Штамм имеет следующие характерист ки, . Морфологи . Мицелий сильно разветвлен , с поперечными перегородками, с мелким зернистым включением. Ширина клеток мицели  2-5 мк. Конидиеносцы длинные, кверху расшир ющиес  и. прини мающие грушевидную форму. Ширина конидиеносцев 8-12,5 м. Диаметр головки конидиеносцев 12,5-25,5 мк, но чаще всего встречаютс  конидиеносцы 18-2О мк. Конидии ровные, мелкие, (блест щие, диаметр конидий 1,5-2,5 м Культурально-б охимические тфианак Среда сусло-агйр. Бела , пушиста  колони  с ровными кра ми. Диаметр колонии 3-4 см на 5 сут роста. Обратна  сторона колонии гладка . Срюда Чапека. Пушиста  колони  белого цвета с неровными кра ми. Диаметр колонии 2-3 см. ,На обратной стороне колонии едва заметна  радиальна  складчатость. . Картофельный агар. Бела  пушиста  колони  с неровными кра ми. Диаметр колонии 2-3 см. Складчатость на обратной стороне колонии отсутствует. Морковный агар. Бела  пушист а  колони , рост очень интенсивный, обратна  сторона колонии отличаетс  сильной радиальной складчатостью. Диаметр колонии 6-7 см. I . Сишгетическа  агаризованна  среда. Мелка  колони , пушиста , серого цвета Диаметр колонии 1-1,5 см. Складчатос oTcyTCTBiyeT. Нитраты восстанавливает. Температурные границы развити : при 2О°С - рост замедленный; ЗО - рост хороший; 40 - рост есть; 50 - рост слабый. Физиологические свойства. РОСТ на молоке. Растет хорошо, молоко цептонизирует. 44 Рост на ломтиках картофел . Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета. Желатину не разжижает. Маннит, сорбит , декстрины, крахмал, глюкозу, галактозу , арабинозу, ксилозу, рамнозу, актозу, сахарозу потребл ет, при этом 1ц)оисходит закисление среды. При мер. Получение ферментного 1фепарата. Амилсфизина П 10Х при использовании штамма Aspergittus-o tc e-V 1Ч)одуденгга о,-амилазы в поверхностных услови х. Дл  получени  ферментного препарата Амилоризина П 10Х используют штамм .OjVxae - продуцент с -амилазы при культивировании его в поверхностных услови х. Выращивание поверхностной 1риб ной культуры провод т в растительных . камерах на среде из пшеничных отрубей с содержанием в них 19% крахмала и с начальной влажностью .57-58%. Посевной спсррвый материал дл  засева растительных камер готов т следуюшим образом. Колбу на 750 мл с пшеничными отруб ми с толщиной сло  1,7 см и влажностью 30% засевают суспензией конидий гриба, вз той из пробирки с сусло-агаром Выращивают плесневый гриб в этой колбе 5 сут в термостате до обиль.ного спсфообразовани ., ;затем из этой культуры готов т спсровую суспензИю . В отделении чистых культур этой споровой суспензией засевают посевные . кюветы со стерильными отруб ми дл  по-, лучени  посевного материала, который в свою очередь идет дл  засева раститель- ньрс камер На одну растительную камеру расходуют ЗОО кг сухих пшеничных отрубей. Дл  засева одной растительной камеры используют 4 кюветы посевного материала с количеством спор, равным 0,68 « 10 на грамм. При выращивании гриба темп атура в камере . Продолжительность культивировани  36 ч. Начальна  влажность питательной среды дл  растительных камер 59%, конечна  влажность готовой культуры гриба 34%. Эту сьфую культуру подвергают экстрагированию водопроводной водой при . Количество воды в экстракторе 4ОО% по отношению к весу воздушносухой культуры. Содержание сухих веществ в экстрактсре колеблютс  от 5 до 5,8%. Продолжительность экстрагировани  12 ч. Осаждение препарата 1фовод т спирт на установке непрерьюного действи  1ф концекграции его в смеси, 4%. Перед осаждением спирт и экстракт грибной культуры охлаждают до . Температура смесиспирта и экстракта не превьшает 15 С. Осадок отдел ют в кларификаторе. Влажность сьфого 60%. Сушку препарата осуществл ют в су.& лимационной сушилке КС-30 14ч. Препарат представл ет собой порошо светло-серого цвета. Активность препарата по оС-амилазе 2750 ед/г. Полученный препарат А мидориаин П 10Х соответствует высшей категории качества./ Испытани  в производственных усло . ви х показывают, что штамм устой 1ив к посторонней микрофлоре. 04 Ожидаема  экономическа  эффективность от 1фименени  полученного штаммамутанта - 1фодвиента d -амилазы составл ет 31186 руб. Фор м у л а в 3 о б ре ;г ен и   Штамм плесневого гриба Aspeng-ttCus 0 vzoe-3 (коллекци  культур щ омышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный номер Г-115) - (фодуцент о6 амштазы. Источники ив()сфмац и, прин тые во внимание 1фи экспертизе 1.Калу|  нц К. А. и Голгер Л. И. Микробные ферментные препараты. М., Пищева  промьшшенность, 1979, . 8-13. 2.Там же, с. 8-9.

Claims (1)

1. Фор м у л а в з о δ р е_рт е*н и я

   Штамм плесневого гриба Asperg'itCus oryzoe-З (коллекция культур промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный номер Г-115). -<продуцент -амилазы.