JPS59162878A - グルコアミラ−ゼの製造法 - Google Patents
グルコアミラ−ゼの製造法Info
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- JPS59162878A JPS59162878A JP3844883A JP3844883A JPS59162878A JP S59162878 A JPS59162878 A JP S59162878A JP 3844883 A JP3844883 A JP 3844883A JP 3844883 A JP3844883 A JP 3844883A JP S59162878 A JPS59162878 A JP S59162878A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はグルコアミラーゼの製造法に関する。
更に詳しくは、グルコアミラーゼ産生能を有するロドス
ボリディウム属に属する赤色酵母を用いるグルコアミラ
ーゼの製造法に関する。
ボリディウム属に属する赤色酵母を用いるグルコアミラ
ーゼの製造法に関する。
グルコアミラーゼ（Ｅ Ｃ３，２，１，３）は、アミロ
グルコシダーゼとも呼ばれ、アミロース、アミロペクチ
ン、グリコーゲン、デキストリン等のα−１，４グルコ
シド結合を有する多糖に作用し、その非還元末端からグ
ルコース単位に切断していく酵素として知られている。
グルコシダーゼとも呼ばれ、アミロース、アミロペクチ
ン、グリコーゲン、デキストリン等のα−１，４グルコ
シド結合を有する多糖に作用し、その非還元末端からグ
ルコース単位に切断していく酵素として知られている。
従来、グルコアミラーゼを産生ずる微生物として糸状菌
のリゾープス属及びアスペルギルス属に属する菌株が知
られており、特にリゾニプス・プレ？ −（Ｒ，ｄｅｌ
ｅｍａｒ ） 、リゾープス・ニベウス（Ｒ，ｎ１ｖｅ
ｕｓ） 、リゾープス・ジャバニカス（Ｒ，ｊａ−νａ
ｎｉｃｕｓ ） 、アスペルギルス・ニガー（Ａ、ｎｉ
ｇｅｒ ）及びアスペルギルス・アワモリ （Ａ、ａｗ
ａｍｏｒｉ ）等がグルコアミラーゼ産生能の高い菌株
として知られている。そして又酵母菌又は酵母類似菌の
エンドミコプシス属、及びエンドミセス属に属する菌株
も強力なグルコアミラーゼ産生菌として知られている。
のリゾープス属及びアスペルギルス属に属する菌株が知
られており、特にリゾニプス・プレ？ −（Ｒ，ｄｅｌ
ｅｍａｒ ） 、リゾープス・ニベウス（Ｒ，ｎ１ｖｅ
ｕｓ） 、リゾープス・ジャバニカス（Ｒ，ｊａ−νａ
ｎｉｃｕｓ ） 、アスペルギルス・ニガー（Ａ、ｎｉ
ｇｅｒ ）及びアスペルギルス・アワモリ （Ａ、ａｗ
ａｍｏｒｉ ）等がグルコアミラーゼ産生能の高い菌株
として知られている。そして又酵母菌又は酵母類似菌の
エンドミコプシス属、及びエンドミセス属に属する菌株
も強力なグルコアミラーゼ産生菌として知られている。
本発明者は、酒造用糖化酵素を得る目的で広（自然界よ
りグルコアミラーゼ産生能の高い酵母菌株をスクリーニ
ングすることを試みた。そして鋭意研究した結果、澱粉
工場周辺の土壌よりグルコアミラーゼ産生能の高い酵母
の１菌株を見い出すことに成功した。
りグルコアミラーゼ産生能の高い酵母菌株をスクリーニ
ングすることを試みた。そして鋭意研究した結果、澱粉
工場周辺の土壌よりグルコアミラーゼ産生能の高い酵母
の１菌株を見い出すことに成功した。
そして本菌株について菌学的性質を検討した結果、赤色
酵母の１種であるロドスポリディウム（Ｒｈｏｄｏｓｐ
ｏｒｉｄｉｕｍ）属に属することがわかった。
酵母の１種であるロドスポリディウム（Ｒｈｏｄｏｓｐ
ｏｒｉｄｉｕｍ）属に属することがわかった。
これまで酵母菌又は酵母類似菌でグルコアミラーゼを産
生ずる菌株として、前記したエンドミコプシス属、エン
ドミセス属に属する菌株の他にもサツカロミセス・セレ
ビゼー（Ｓ、ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ；ジャーナル
・オプ・バクテリオロジー（Ｊ、Ｂａｃｔｅｒ−ｉｏｌ
、）第 １３８巻１０２２〜１０２５頁（１９７９）
、リポミセス・コノネンコアン（Ｋ、ｋｏｎｏｎｅｎｋ
ｏａｎ ） ；ヨーロソビアン・ジャーナル・オブ・
アプライド・マイクロビオロジカル・バイオテクノロジ
ー（Ｅｕｒ、Ｊ。
生ずる菌株として、前記したエンドミコプシス属、エン
ドミセス属に属する菌株の他にもサツカロミセス・セレ
ビゼー（Ｓ、ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ；ジャーナル
・オプ・バクテリオロジー（Ｊ、Ｂａｃｔｅｒ−ｉｏｌ
、）第 １３８巻１０２２〜１０２５頁（１９７９）
、リポミセス・コノネンコアン（Ｋ、ｋｏｎｏｎｅｎｋ
ｏａｎ ） ；ヨーロソビアン・ジャーナル・オブ・
アプライド・マイクロビオロジカル・バイオテクノロジ
ー（Ｅｕｒ、Ｊ。
＾ｐｐ１．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ１
．）第１１巻２４１〜２５０頁（１９７９） 、サツカ
ロミセス・シアスタテイカス（Ｓ、ｄｉａｓｔａｔｉｃ
ｕｓ ） ｉジャーナル・オブ・インストラクチュア
ル・ブリュワーリー（Ｊ、 Ｉｎ５ｔ、Ｂｒｅｗ、）第
８７巻２４４〜２４７頁（１９８１）等が知られている
が、ロドスポリディウム属に属する菌株でグルコアミラ
ーゼ産生能を有することの報告はなく、かつ適当な栄養
培地で本菌株を培養し、培養物から採取されるグルコア
ミラーゼは、酒造用糖化酵素としてのみならずブドウ糖
製造用酵素としての用途も期待できることを知り本発明
を完成したものである。
．）第１１巻２４１〜２５０頁（１９７９） 、サツカ
ロミセス・シアスタテイカス（Ｓ、ｄｉａｓｔａｔｉｃ
ｕｓ ） ｉジャーナル・オブ・インストラクチュア
ル・ブリュワーリー（Ｊ、 Ｉｎ５ｔ、Ｂｒｅｗ、）第
８７巻２４４〜２４７頁（１９８１）等が知られている
が、ロドスポリディウム属に属する菌株でグルコアミラ
ーゼ産生能を有することの報告はなく、かつ適当な栄養
培地で本菌株を培養し、培養物から採取されるグルコア
ミラーゼは、酒造用糖化酵素としてのみならずブドウ糖
製造用酵素としての用途も期待できることを知り本発明
を完成したものである。
次に本菌株の菌学的性質について述べる。
ａ、各培地における生育状態
本菌株は麦芽汁寒天培地又はＭＹ寒天培地においてよく
生育し、その細胞形態は大きさが２．５μ×５μであり
、楕円形をなしている。増殖の形態は多極出芽であり、
そして偽菌糸又は真菌糸を形成するが２週間の生育にお
いてもｂａ Ｉ Ｉ ｉｓ ｔｏｓｐｏｒｅ（射出胞子
）は観察されなかった。又、麦芽汁寒天培地、ＭＹ寒天
培地、オートミール寒天培地において分裂子を形成しな
いがｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅ （テリオスボア） 、ｃｌ
ａｍｐ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ （クランプコネクショ
ン）をオートミール寒天培地上で形成子る、ｂ、各生理
的性質 ■硝酸塩の同化 （＋） ■ビタミンの要求性 （−） ■デンプン様物質の生成（−） ■アルブチンの分解性 （＋） ■カロチノイドの生成 （＋） 生成色素はα−カロチンである。
生育し、その細胞形態は大きさが２．５μ×５μであり
、楕円形をなしている。増殖の形態は多極出芽であり、
そして偽菌糸又は真菌糸を形成するが２週間の生育にお
いてもｂａ Ｉ Ｉ ｉｓ ｔｏｓｐｏｒｅ（射出胞子
）は観察されなかった。又、麦芽汁寒天培地、ＭＹ寒天
培地、オートミール寒天培地において分裂子を形成しな
いがｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅ （テリオスボア） 、ｃｌ
ａｍｐ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ （クランプコネクショ
ン）をオートミール寒天培地上で形成子る、ｂ、各生理
的性質 ■硝酸塩の同化 （＋） ■ビタミンの要求性 （−） ■デンプン様物質の生成（−） ■アルブチンの分解性 （＋） ■カロチノイドの生成 （＋） 生成色素はα−カロチンである。
■尿素の分解 （＋）
■グルコース、シュークロースの発酵性がない。
Ｃ６各種糖類の資化性
グルコース 士 ガラクトース ＋し＝ソルボ
ース ＋ シュークロース＋マルトース ＋
セロビオース ＋トレハロース 士 ラク
トース −メリビオース − ラフィノース
＋メレジトース ＋ イヌリン ＋可溶性澱
粉 十 〇−キシロース ＋Ｄ−リポース
＋ Ｌ−ラムノース −エタノール ＋
グリセロール ＋Ｃ弱＞エリスリトール−リビトール
＋（弱）イノジット − Ｄ−マニトール
士ガラクチトール＋ α−メチル−Ｄ−Ｄ−グ
ルチトール＋ グルコシド ＋サリシン
＋ ＤＬ乳酸 −コハク酸 ＋（弱）
クエン酸 −以上の結果、特にカロチノイド色素を
生成すること及び射出胞子が形成されないこと等より本
菌株はＴｈｅ Ｙｅａｓｔ第２版（１９７１） ８０
３〜８１４頁の記載に基づき、ロドスボリディウム属に
属することがわかり、本菌株をＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄ
ｉｕｍ ｓｐ、 Ｊ −５Ｂと命名した。そして本菌株
はＦ ＥＲＭ −Ｐ Ｎａ ６９４８として工業技術院
微生物研究所に寄託されている。
ース ＋ シュークロース＋マルトース ＋
セロビオース ＋トレハロース 士 ラク
トース −メリビオース − ラフィノース
＋メレジトース ＋ イヌリン ＋可溶性澱
粉 十 〇−キシロース ＋Ｄ−リポース
＋ Ｌ−ラムノース −エタノール ＋
グリセロール ＋Ｃ弱＞エリスリトール−リビトール
＋（弱）イノジット − Ｄ−マニトール
士ガラクチトール＋ α−メチル−Ｄ−Ｄ−グ
ルチトール＋ グルコシド ＋サリシン
＋ ＤＬ乳酸 −コハク酸 ＋（弱）
クエン酸 −以上の結果、特にカロチノイド色素を
生成すること及び射出胞子が形成されないこと等より本
菌株はＴｈｅ Ｙｅａｓｔ第２版（１９７１） ８０
３〜８１４頁の記載に基づき、ロドスボリディウム属に
属することがわかり、本菌株をＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄ
ｉｕｍ ｓｐ、 Ｊ −５Ｂと命名した。そして本菌株
はＦ ＥＲＭ −Ｐ Ｎａ ６９４８として工業技術院
微生物研究所に寄託されている。
本菌株を培養しグルコアミラーゼを生産するに際し、使
用する栄養培地としてはトウモロコシ、大麦、小麦、コ
メ等の穀粉又はそれらの澱粉、ジャガイモ、サツマイモ
、クビカオ等の芋頻澱粉、デキストリン、オリゴ糖、二
糖頻、単糖類等の各種！ＭＩ類、及び穀物を加工する際
に得られる小麦赳、白糠、米糠等の穀物廃物などを適宜
組み合せて用いる。そして更に又、ペプトン、キナコ、
大豆ミール、コーンステイープリカー、塩安、硫安、硝
安等の有機、無機窒素源及びリン酸二カリ、硫酸マグネ
シラμ、リン酸−カリウム等の無機塩、及び酵゛母エキ
ス、麦芽エキス等の微量栄養素を随時添加するのもよい
。培養方法としては、通気攪拌もしくは振盪培養による
液体培養、或いは小麦飯等を用いての固体培養方法を行
うことができる。
用する栄養培地としてはトウモロコシ、大麦、小麦、コ
メ等の穀粉又はそれらの澱粉、ジャガイモ、サツマイモ
、クビカオ等の芋頻澱粉、デキストリン、オリゴ糖、二
糖頻、単糖類等の各種！ＭＩ類、及び穀物を加工する際
に得られる小麦赳、白糠、米糠等の穀物廃物などを適宜
組み合せて用いる。そして更に又、ペプトン、キナコ、
大豆ミール、コーンステイープリカー、塩安、硫安、硝
安等の有機、無機窒素源及びリン酸二カリ、硫酸マグネ
シラμ、リン酸−カリウム等の無機塩、及び酵゛母エキ
ス、麦芽エキス等の微量栄養素を随時添加するのもよい
。培養方法としては、通気攪拌もしくは振盪培養による
液体培養、或いは小麦飯等を用いての固体培養方法を行
うことができる。
培養条件として液体培養の場合、初発ｐＨは４〜７の範
囲で２０〜４０℃で２〜７日間通気攪拌もしくは振盪培
養を行えばよく、固体培養の場合、水分含量３０〜７０
％の小麦麩を用い２０〜４０℃で２〜７日間培養を行え
ばよい。培養終了後、培養物からグルコアミラーゼ含有
液を採取するには液体培養の場合は濾過、遠心分離等の
手段にで行う。固体培養の場合には、水又は各種塩溶液
にて抽出する。
囲で２０〜４０℃で２〜７日間通気攪拌もしくは振盪培
養を行えばよく、固体培養の場合、水分含量３０〜７０
％の小麦麩を用い２０〜４０℃で２〜７日間培養を行え
ばよい。培養終了後、培養物からグルコアミラーゼ含有
液を採取するには液体培養の場合は濾過、遠心分離等の
手段にで行う。固体培養の場合には、水又は各種塩溶液
にて抽出する。
該含有液中の粗グルコアミラーゼは通常の精製手段即ち
アルコール分画、塩析、塩基性陰イオン交換クロマトグ
ラフィー等を適宜組ろ合せて更に精製することができる
。
アルコール分画、塩析、塩基性陰イオン交換クロマトグ
ラフィー等を適宜組ろ合せて更に精製することができる
。
次に栄養源を小麦麩及び米糠の組み合せによる液体培地
でＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、、Ｊ −５Ｂ
Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎａ ６９４８を培養してグル
コアミラーゼ含有液を得、次いで硫安塩析、ＤＥＡＥ−
セルロースカラムクロマトグラフィー処理して得られた
部分精製グルコアミラーゼの酵素化学的性質について記
す。
でＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、、Ｊ −５Ｂ
Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎａ ６９４８を培養してグル
コアミラーゼ含有液を得、次いで硫安塩析、ＤＥＡＥ−
セルロースカラムクロマトグラフィー処理して得られた
部分精製グルコアミラーゼの酵素化学的性質について記
す。
（１）作 用
穀類、芋頻の各種澱粉に作用し、よくグルコースを生成
し、かつイソマルトース、イソマルトトリオース等の転
移糖を生成しない。又、生澱粉（小麦澱粉、デュラム種
）にも作用しグルコースを生成する。
し、かつイソマルトース、イソマルトトリオース等の転
移糖を生成しない。又、生澱粉（小麦澱粉、デュラム種
）にも作用しグルコースを生成する。
（２）基質特異性
アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、デキスト
リン等のα−１，４グルコシド結合を有する多糖に作用
する。
リン等のα−１，４グルコシド結合を有する多糖に作用
する。
（３）至適ｐＨ
０，４ｍＱの各緩ｉｉ液に０．１−の酵素溶液及び０．
５ｍｌの２％可溶性澱粉を加え、４０°Ｃ１１０分反応
させて本酵素の至適ｐＨを求めたところｐＨ４〜６付近
であった（第１図に示す）。なおｐＨ２，２〜８．０の
範囲はマンキルパイン（ＭａｃＩＩνａｉｎ ）緩衝液
を用い、ｐＨ８，０〜１０の範囲はコルソフ（Ｋｏｌｔ
ｈｏｆｆ）氏緩衝液を用いた。
５ｍｌの２％可溶性澱粉を加え、４０°Ｃ１１０分反応
させて本酵素の至適ｐＨを求めたところｐＨ４〜６付近
であった（第１図に示す）。なおｐＨ２，２〜８．０の
範囲はマンキルパイン（ＭａｃＩＩνａｉｎ ）緩衝液
を用い、ｐＨ８，０〜１０の範囲はコルソフ（Ｋｏｌｔ
ｈｏｆｆ）氏緩衝液を用いた。
（４）安定ｐＨ範囲
本酵素の安定ｐＨを、ｐＨ１〜２の範囲は塩酸カリ緩衝
液で、ｐ）ｌ ２．２〜８．０の範囲はＭａｃｌｌｖａ
ｉｎ緩衝液で、ｐＨ８，０〜１０の範囲はＫｏｌ ｔｈ
ｏｆｆ氏緩衝液でそれぞれ測定した。その結果、本酵素
はｐｌ＋４〜７の範囲では３０℃、２４時間放置しても
安定であることがわかった（第２図に示す）。
液で、ｐ）ｌ ２．２〜８．０の範囲はＭａｃｌｌｖａ
ｉｎ緩衝液で、ｐＨ８，０〜１０の範囲はＫｏｌ ｔｈ
ｏｆｆ氏緩衝液でそれぞれ測定した。その結果、本酵素
はｐｌ＋４〜７の範囲では３０℃、２４時間放置しても
安定であることがわかった（第２図に示す）。
（５）至適温度
本酵素ｉｇ液０．１ｍｌに０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐｉ４
５．０）を０．４−加え、各温度にて１０分間反応せし
め本酵素の至適温度を求めた。その結果、本酵素の至適
温度は５０℃付近であった（第３図に示す）。
５．０）を０．４−加え、各温度にて１０分間反応せし
め本酵素の至適温度を求めた。その結果、本酵素の至適
温度は５０℃付近であった（第３図に示す）。
（６）温度安定性
本酵素溶液０．１ｍｌにＯ，１Ｍ酢酸緩衝液（ｐ）Ｉ５
．０）を０．４−加え、各温度に１０分放置後、急冷し
、残存する活性を測定することにより本酵素の温度安定
性を求めたところ、本酵素は４７℃、１０分処理した場
合でも安定であった（第４図に示す）。
．０）を０．４−加え、各温度に１０分放置後、急冷し
、残存する活性を測定することにより本酵素の温度安定
性を求めたところ、本酵素は４７℃、１０分処理した場
合でも安定であった（第４図に示す）。
（７）阻害剤等の影響
■本酵素に対する各種金属イオン（１０〜３Ｍ）の影響
について表１に示す。
について表１に示す。
表１
■本酵素に対する各種阻害剤（１０−３Ｍ）の影響につ
いて表２に示す。
いて表２に示す。
表１．２より明らかのように本酵素はＮ−ブロモサクシ
イミド、■ｎ０４で顕著に阻害され、Ｆｅ３＋、Ｃｕ２
＋、及びＨｇ ２＋、モノヨード酢酸、ＥＤＴＡで若干
阻害されるものの、他の金属イオンではほとんど阻害さ
れなかった。
イミド、■ｎ０４で顕著に阻害され、Ｆｅ３＋、Ｃｕ２
＋、及びＨｇ ２＋、モノヨード酢酸、ＥＤＴＡで若干
阻害されるものの、他の金属イオンではほとんど阻害さ
れなかった。
更に以上の性質を有する本酵素は、培養物から採取して
ｉＭられる粗酵素の状態においても、５％可溶性澱粉に
作用させ、経時的に分解生成する糖類をペーパークロマ
トグラフィーＧトて検討した結果、イソマルトース及び
イソマルトトリオース等の生成はみられず、かつ生成糖
もグルコースが大部分でありオリゴ糖の生成はほとんど
みられないので、従って、本菌株のＲｈｏｄｏｓｐｏｒ
ｉｄｉｕｍ ｓｐ、Ｊ−５ＢＦＥＲＭ−ＰＩＶｋ１６９
４Ｂはグルコアミラーゼ産生能の高い菌株であることが
判明した。それ故に本菌株を使用し、生産されるグルコ
アミラーゼはブドウ糖製造用として最適なものである。
ｉＭられる粗酵素の状態においても、５％可溶性澱粉に
作用させ、経時的に分解生成する糖類をペーパークロマ
トグラフィーＧトて検討した結果、イソマルトース及び
イソマルトトリオース等の生成はみられず、かつ生成糖
もグルコースが大部分でありオリゴ糖の生成はほとんど
みられないので、従って、本菌株のＲｈｏｄｏｓｐｏｒ
ｉｄｉｕｍ ｓｐ、Ｊ−５ＢＦＥＲＭ−ＰＩＶｋ１６９
４Ｂはグルコアミラーゼ産生能の高い菌株であることが
判明した。それ故に本菌株を使用し、生産されるグルコ
アミラーゼはブドウ糖製造用として最適なものである。
更に、生澱粉分解作用を有するので将来の省エネ゛ルギ
一対策用としても期待されうるものである。
一対策用としても期待されうるものである。
以下に、本発明を実施例につき説明する。なお本発明で
用いたアミラーゼ活性測定法は次の通りである。１％の
澱粉溶液にグルコアミラーゼを４０°Ｃで１０分間作用
させたのち、生成した還元力をソモギー法で定量して
Ｌ８ａ＋ｇのグルコース相当の還元力を示すときの酵素
活性を１．０１．Ｕとした。
用いたアミラーゼ活性測定法は次の通りである。１％の
澱粉溶液にグルコアミラーゼを４０°Ｃで１０分間作用
させたのち、生成した還元力をソモギー法で定量して
Ｌ８ａ＋ｇのグルコース相当の還元力を示すときの酵素
活性を１．０１．Ｕとした。
実施例Ｉ
Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、 Ｊ −５Ｂ
Ｆ Ｅ ＲＭ −Ｐ Ｎ。
Ｆ Ｅ ＲＭ −Ｐ Ｎ。
６９４８をＭＹ寒天斜面培地上で３７℃、２日間増殖さ
せ、その１白金耳をあらかじめ５０（７容三角フラスコ
に小麦鯨５％、米糠０．５％からなる培地１００飢（ρ
１１５．５）を入れ１１０℃、２０分間オートクレーブ
殺菌して得られる培地に接種し、３０″Ｃで毎分１６０
回転の振盪条件で４日間培養した。培養液を遠心分離し
て得られた上滑のグルコアミラーゼ活性は１５８１．Ｕ
であった。
せ、その１白金耳をあらかじめ５０（７容三角フラスコ
に小麦鯨５％、米糠０．５％からなる培地１００飢（ρ
１１５．５）を入れ１１０℃、２０分間オートクレーブ
殺菌して得られる培地に接種し、３０″Ｃで毎分１６０
回転の振盪条件で４日間培養した。培養液を遠心分離し
て得られた上滑のグルコアミラーゼ活性は１５８１．Ｕ
であった。
実施例２
トウモロコシ粉１０％からなる培地５（７（ｐｔｌ ５
．５）を５００ｍＪ’容の坂ロフラスコに入れ、 １１
０℃、２０分殺菌した後、あらかじめＲｈｏｄ’ｏｓｐ
ｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、Ｊ−５ＢＦＥＲＭ−ｐＨｈ６９
４８をＭＹ寒天斜面培地上で２日間増殖させておいたも
のの１白金耳を接種し、毎分１２０回転の振盪培養機に
て３０°Ｃ４日間培養した。
．５）を５００ｍＪ’容の坂ロフラスコに入れ、 １１
０℃、２０分殺菌した後、あらかじめＲｈｏｄ’ｏｓｐ
ｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、Ｊ−５ＢＦＥＲＭ−ｐＨｈ６９
４８をＭＹ寒天斜面培地上で２日間増殖させておいたも
のの１白金耳を接種し、毎分１２０回転の振盪培養機に
て３０°Ｃ４日間培養した。
培養終了後、全培養液を５０ｍ１とし、その濾液番こつ
いてグルコアミラーゼ活性を測定したところ１３４１、
Ｕ／−であった。
いてグルコアミラーゼ活性を測定したところ１３４１、
Ｕ／−であった。
実施例３
実施例１に準してＲｈｏ＜Ｉｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓ
ｐ、Ｊ ５ ＢＦＥＲＭ−Ｐ隘６９４８を培養し、次
いで培養液を濾過して得られるグルコアミラーゼ含有液
８帽番こ対し４１ｇの硫酸アンモニウムを加え、生ずる
沈澱を集め、少量の水に溶解後透析し、更にＤＥＡＥ−
セルロースカラムクロマトグラフィーＧこて処理し、カ
ラムに未吸着区分を集めグルコアミラーゼ活４生含有液
５０−を得た。こうして得られた部分精製り゛ルコアミ
ラーゼ活性は２００ ｒ、ＩＪ／＋ｎｌ！であった。
ｐ、Ｊ ５ ＢＦＥＲＭ−Ｐ隘６９４８を培養し、次
いで培養液を濾過して得られるグルコアミラーゼ含有液
８帽番こ対し４１ｇの硫酸アンモニウムを加え、生ずる
沈澱を集め、少量の水に溶解後透析し、更にＤＥＡＥ−
セルロースカラムクロマトグラフィーＧこて処理し、カ
ラムに未吸着区分を集めグルコアミラーゼ活４生含有液
５０−を得た。こうして得られた部分精製り゛ルコアミ
ラーゼ活性は２００ ｒ、ＩＪ／＋ｎｌ！であった。
実施例４
２５ｆｆ容ジヤーフプーメンターに小麦髄３００ｇ、ジ
ャガイモ澱粉１００ｇ及び水１０４を加えた後、２ｋｇ
／ｃＪの加圧下で４０分間蒸煮殺菌し３０°Ｃ＋こ冷却
した培養培地に、あらかじめ５０師容の坂ロフラスコ３
本のそれぞれにジャガイモ澱粉１％、酵母エキス０．５
％からなる培地１００艷を入れＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉ−
ｄｉｕｍｓｐ、Ｊ−５Ｂ ＦＥＲＭ Ｐｔｋ６９４
８を３０°Ｃ１２日間培養したものを接種し、３０°Ｃ
１６５時間通気攪拌培養を行った。培養液を濾過してグ
ルコアミラーゼ含有液８．５℃を得た。この含有液のグ
ルコアミラーゼ活性は１５０１．Ｕ／ｒｎｅであった。
ャガイモ澱粉１００ｇ及び水１０４を加えた後、２ｋｇ
／ｃＪの加圧下で４０分間蒸煮殺菌し３０°Ｃ＋こ冷却
した培養培地に、あらかじめ５０師容の坂ロフラスコ３
本のそれぞれにジャガイモ澱粉１％、酵母エキス０．５
％からなる培地１００艷を入れＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉ−
ｄｉｕｍｓｐ、Ｊ−５Ｂ ＦＥＲＭ Ｐｔｋ６９４
８を３０°Ｃ１２日間培養したものを接種し、３０°Ｃ
１６５時間通気攪拌培養を行った。培養液を濾過してグ
ルコアミラーゼ含有液８．５℃を得た。この含有液のグ
ルコアミラーゼ活性は１５０１．Ｕ／ｒｎｅであった。
実施例５
１００ｉ容三角フラスコに可溶性澱粉２％、ポリペプト
ン０．７％、Ｋ’）＋２ ＰＯ４０，１％、衿ｇｓＯ４
・７Ｈ２００，０５％、酵母エキス０２０１％、米糠（
１，５％からなる培地３０−を分注し、１１０℃、２０
分殺菌後、あらかしめスラントに植え継いだＲｈｏｄｏ
ｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ。
ン０．７％、Ｋ’）＋２ ＰＯ４０，１％、衿ｇｓＯ４
・７Ｈ２００，０５％、酵母エキス０２０１％、米糠（
１，５％からなる培地３０−を分注し、１１０℃、２０
分殺菌後、あらかしめスラントに植え継いだＲｈｏｄｏ
ｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ。
Ｊ−５Ｂ ＦＥＲＭ−ＰＮＱ、６９４８の１白金耳を
接種し、３０℃で毎分１６０回転の通気攪拌培養を行Ｇ
１．５日間培養した。培養液を濾過してゲルコア′ミラ
ーゼ活性９０１．ｌ／ ｍｌ！を含有する液２５ｍ１！
を得た。
接種し、３０℃で毎分１６０回転の通気攪拌培養を行Ｇ
１．５日間培養した。培養液を濾過してゲルコア′ミラ
ーゼ活性９０１．ｌ／ ｍｌ！を含有する液２５ｍ１！
を得た。
実施例６
小麦Ｗｉ ４００ｇに水４００艷を加え混和した後２Ｃ
容三角フラスコ４個に入れ、その各々に１２０’Ｃ１３
０分殺菌後、あらかじめ５００ ｍｌ！容坂ロフラスコ
に可溶性銀粉１％、酵母エキス０．５％からなる培地１
．００ｍｆｆ１にＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ
、 Ｊ ５ Ｂ Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎ１１６９４
８の１白金耳を接種し２日間振盪培養したもの１０ｒｎ
ｐ、を加え、３０℃、４日間静置培養した。
容三角フラスコ４個に入れ、その各々に１２０’Ｃ１３
０分殺菌後、あらかじめ５００ ｍｌ！容坂ロフラスコ
に可溶性銀粉１％、酵母エキス０．５％からなる培地１
．００ｍｆｆ１にＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ
、 Ｊ ５ Ｂ Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎ１１６９４
８の１白金耳を接種し２日間振盪培養したもの１０ｒｎ
ｐ、を加え、３０℃、４日間静置培養した。
培養終了後、それぞれの三角フラスコに４００ｍ１ずつ
の水を加え、よく攪拌後培養物を濾過し、濾液を集め合
計１５００−のグルコアミラーセ含有液を得た。
の水を加え、よく攪拌後培養物を濾過し、濾液を集め合
計１５００−のグルコアミラーセ含有液を得た。
この含有液は１ｇＭ当り １９０１．ｔｌのグルコアミ
ラーゼが含まれていた。
ラーゼが含まれていた。
第１図、第２図、第３図及び第４図は本発明のＲｈｏｄ
ｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、 Ｊ −５Ｂ Ｆ Ｅ
ＲＭ Ｐ 隔、 ６９４８を培養して得られるグル
コアミラーゼの至適ｐｔ＋曲線、ｐＨ安定曲線、至適温
度曲線及び温度安定曲線をそれぞれ示すものである。 特許出願人 天野製薬株式会社 第１図 ２ ４ ６８ 第 ２ 図 ７１ ６ ８ １０Ｈ 第 ３１図 ３０ ５０ ７０ ９
０温度（０Ｃ） 第４図 ４０ ４５ ５０ ６０ ７０ ８０ 温 度（０ｃ）
ｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ、 Ｊ −５Ｂ Ｆ Ｅ
ＲＭ Ｐ 隔、 ６９４８を培養して得られるグル
コアミラーゼの至適ｐｔ＋曲線、ｐＨ安定曲線、至適温
度曲線及び温度安定曲線をそれぞれ示すものである。 特許出願人 天野製薬株式会社 第１図 ２ ４ ６８ 第 ２ 図 ７１ ６ ８ １０Ｈ 第 ３１図 ３０ ５０ ７０ ９
０温度（０Ｃ） 第４図 ４０ ４５ ５０ ６０ ７０ ８０ 温 度（０ｃ）
Claims (1)
- グルコアミラーゼ産生能を有するロドスボリディ′ウム
属に属する酵母を栄養培地で培養し、培養物からグルコ
アミラーゼを採取することを特徴とするグルコアミラー
ゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3844883A JPS59162878A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | グルコアミラ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3844883A JPS59162878A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | グルコアミラ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59162878A true JPS59162878A (ja) | 1984-09-13 |
| JPH0357747B2 JPH0357747B2 (ja) | 1991-09-03 |
Family
ID=12525566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3844883A Granted JPS59162878A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | グルコアミラ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59162878A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5053246A (en) * | 1990-03-30 | 1991-10-01 | The Goodyear Tire & Rubber Company | Process for the surface treatment of polymers for reinforcement-to-rubber adhesion |
| CN103275952A (zh) * | 2012-12-23 | 2013-09-04 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种中温酸性淀粉酶amy-8及其基因和应用 |
-
1983
- 1983-03-08 JP JP3844883A patent/JPS59162878A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5053246A (en) * | 1990-03-30 | 1991-10-01 | The Goodyear Tire & Rubber Company | Process for the surface treatment of polymers for reinforcement-to-rubber adhesion |
| CN103275952A (zh) * | 2012-12-23 | 2013-09-04 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种中温酸性淀粉酶amy-8及其基因和应用 |
| CN103275952B (zh) * | 2012-12-23 | 2014-09-24 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种中温酸性淀粉酶amy-8及其基因和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0357747B2 (ja) | 1991-09-03 |
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