JPS6344883A - 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の属する技術分野］ 本発明は、新規な酵素ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８お
よびその製造法に関する。

［従来の技術とその問題点］ ヒアルロニダーゼは酸性ムコ多糖の一種であるヒアルロ
ン酸を分解する能力を有する酵素の総称であり、動物組
織およびある種の微生物の培養物中にその存在が知られ
ている。

動物由来のヒアルロニダーゼとしては、例えば、牛や羊
の率丸から抽出・分離されたものが研究用試薬として市
販されおり、また、微生物由来のヒアルロニダーゼとし
ては、例えば、ストレプトマイセスーヒアルロリティカ
ス・ノブ・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙ
ａｌｕｒｏｌｙｔｉｃｕｓ　ＮＯＶ、　ＳＰ、）の培養
物から分離されたものが研究用試薬として市販されてい
る。

一方、ヒアルロニダーゼのある種のものは、皮下注射に
おける薬剤の吸収拡散促進剤として使用されており、ま
た、内科領域においては心筋梗塞の治療剤として利用す
ることが検討されている。

従来、微生物由来のヒアルロニダーゼとしてはストレプ
トマイセス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコツ
カス属、プロピオニバクテリウム属、ペプトストレプＩ
・コツカス属由来のヒアルロニダーゼが知られている。

本発明者等は種々研究の結果、従来のヒアルロニダーゼ
とは種々の点で性質の異なる新規なヒアルロニダーゼＳ
Ｄ−６７８をストレプトコッカス壷ディスガラクチ４　
ｘ　（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｄｙｓｇａｌａｃｔ
ｉａｅ）の培養物中に見出し、鋭意研究の結果、本発明
を完成した。

［発明の構成］ ■、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の性質について： 本発明のヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は次のような理
化学的性質を有する。

ａ）作用： エンドβ−ヘキソサミニダーゼ ｂ）基質特異性： ヒアルロン酸およびコンドロイチンを分解し、コンドロ
イチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸
、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびケラト硫酸を分解せず
。

ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８はヒアルロン酸に特異性
が高く、ヒアルロン酸を基質としたときの活性値を１０
０％とすると、コンドロイチンを基質としたときの相対
活性値は約３％である。

Ｃ）至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲： イ）至適ＰＩ（：ＰＨ５，８〜６．６ 各種ｐＨにおけるヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の酵素
活性を後記の力価測定法において、加える緩衝液を各種
ｐＨの酢酸緩衝液、リン酸緩衝液又はトリス−マレイン
酸緩衝液に代えて測定した。ヒアルロニダーゼＳＤ−６
７８の至適ｐＨは５．８〜６．６である。

口）安定ｐＨ：ｐＨ５、０〜９’、　０ヒアルロニダー
ゼＳＤ−６７８をｐＨ３、０〜１０．０の各種ｐｌ（の
エチレンジアミン−酢酸緩衝液中、３７℃で１５分間放
置し′た後、後記の力価測定法に従ってその残存活性を
測定した。ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８はｐＨ５、０
〜９　、０（７）範囲で安定である。

ｄ）力価測定法： ヒアルロン酸にヒアルロニダーゼＳＤ−６７８を３７℃
で作用させたとき、１分間に１マイクロモル（ＩＬｍｏ
ｌｅ）の２−アセトアミド−２−デオキシ−３−０−（
β−Ｄ−グルコー４−エネビラノシルウロン酸）−Ｄ−
グルコース（以下「Δｄ　１−ＨＡＪと記す）を遊離さ
せる酵素量（力価）が１単位である。

詳しくは、本酵素はヒアルロン酸又はコンドロイチンの
β−へキソサミニド結合を分解するリアーゼ（脱離酵素
）である。

ヒアルロン酸に本酵素を作用させると、ヒアルロン酸か
ら不飽和三糖であるΔｄｉ−ＨＡを遊離させる。それゆ
え、ヒアルロン酸と本酵素を３７℃で反応させ、反応物
中のΔｄｉ−ＨＡをＭｏｒｇａｎ−Ｅｌｓｏｎ法で測定
することにより力価を測定する。

詳細な力価測定法は以下に記す。

［ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の力価測定法］（イ）
ヒアルロン酸溶液の調製 ヒアルロン酸ナトリウム０．２ｇを水 に溶解し、全量を１００４とする。

（ロ）リン酸緩衝液の調製 リン酸水素二ナトリウム（Ｎａ２　ＨＰＯ４・１２Ｈ２
０）６．６２ｇとリン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２Ｐ
Ｏ２ｍ　２Ｈ２０）１１．３２．ｇおよび牛血清アルブ
ミン０．２ｇを水に溶解し、全量をｔｏｏ。

−とする。

（ハ）ホウ酸カリウム溶液の調製 ホウ酸カリウム（Ｋ２　Ｂ４０７・ ４　Ｈ２０）　５　ｇを水に溶解し、２Ｍの水酸化カリ
ウム水溶液でｐＨを９．０に調整した後、全量を１００
ｍ／とする。

（ニ）ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液の調製 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド １６ｇを酢酸９５−と塩酸５ＷＩＪの混液に溶解する。

（ホ）反応および測定 上記ヒアルロン酸溶液０．２５−に上 記リン酸緩衝液０．２５−を加えて撹拌した後、ヒアル
ロニダーゼＳＤ−６７８の試料溶液０．１４を加えて撹
拌し、 ３７℃で１０分間反応させる。反応後、直ちにｌＯＯｏ
Ｃで１分間加熱した後、氷水中で冷やし、上記ホウ酸カ
リウム溶液０．５ｍ／を加えて撹拌し、ＺｏｏｏＣで７
分間加熱する。加熱後、氷水中で冷やし、これに酢酸５
ｗＪと上記ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液２
−を加えて撹拌し、３７℃で２０分間放置した後、比色
計を用いて５８５ｎｍにおける吸光度を測定する。

ｅ）作用適温の範囲： 至適温度：３７℃付近 作用温度：２０〜５０℃ ヒアルロニダーゼ５Ｉ）−６７８を前記の力価測定法の
反応温度を所定の温度に変えて１０分間反応させ、それ
ぞれの温度での酵素活性を測定した１ヒアルロニダーゼ
ＳＤ−６７８の至適温度は３７℃付近であり、作用適温
の範囲は２０〜５０℃である。

ｆ）ｐ）ｌ、温度などによる失活の条件：１）ヒアルロ
ニダーゼＳＤ−６７８をｐＨ４，５のエチレンジアミン
−酢酸緩衝液中、３７℃で１５分間放置することにより
約８０％失活する。

ｉｉ　）ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８をｐＨ７，２の
リン酸Ｍ衝液中、８０℃で３０分間放置することにより
約１００％失活する。

１ｉｉ）ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８を５０ｍＭの亜
硫酸ナトリウム、システィン又はメルカプトエタノール
を含むｐＨ６、５のリン酸緩衝液中、３７℃で１０分間
放置することにより約１００％失活する。

ｇ）阻害および安定化： １）各種金属の塩化塩をヒアルロニダーゼＳＤ−６７８
に加えて、前記の力価測定法で活性を測定したところ、
５０ｍＭの金属イオン濃度での主な阻害金属イオンはＦ
ｅ２＋、Ｃｕ　”＋、Ｐｂ’２”、Ｈｇ２＋−？ｌ’、
これらは９０％以上阻害する。また、Ｚｎ２＋は約８０
％、Ｃｄ２＋は約４０％阻害する。

ｉｉ　）ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８５単位を０．０
５Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１６　、２）　　１ｄに溶解し
た液およびヒアルロニダーゼＳＤ−８７８５単位と牛血
清アルブミン０．２５ｍｇ又はゼラチン０．２５ｍｇと
を０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６、２）　１ｍ／に溶
解した液を４℃に５日間放置し、その残存活性を測定す
るとき、牛血清アルブミン又はゼラチンを添加した液の
残存活性は約９５％であるが、無添加の液の残存活性は
約２５％であり、ヒアルロニダーゼＳＤ＝６７８は牛血
清アルブミン又はゼラチンの添加により安定化する。

ｈ）分子量 セファアクリルＳ−２００を用いたゲルろ過法でヒアル
ロニダーゼＳＤ−６７８の分子量を測定した。

ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８のゲルろ過法テノ分子量
は１２５．ＯＯＯ±１０．’０００である。

ｉ）電気泳動による移動度 結晶構造の解析および元素分析は、ヒアルロニダーゼＳ
Ｄ−６７８が結晶化されていないので実施できない。そ
こで、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の電気泳動での移
動度を４１１１定した。

セルロースアセテート膜を支持体として１．０．０５Ｍ
トリス−マレイン酸緩衝液（ｐＨ６，０）を用いて、０
　、５　ｍＡ／　ａｍで３σ分間通電してヒアルロニダ
ーゼＳＤ−６７８（１）電気泳動を行い、陽極側に泳動
される牛血清アルブミンの移動度を＋１．０とするとき
、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の移動度ハへ　＋０．
３である。

本発明に用いる微生物としては、ストレプトコッカス・
ディスガラクティエに属する菌株であれば如何なるもの
でもよい。かかる菌株としては、ｌＩＤ６７８号として
東京大学医科学研究所に寄託されているものが挙げられ
る。

また、微生物としては、ストレプトコッカスｅディスガ
ラクチイエを、例えば、ｘｔｌｌｉＩ、γ線、紫外線等
の照射処理、又は、エチルメタンスルホネート、ニトロ
ングアニジン等の薬剤処理、形質転換、形質導入、接合
、遺伝子操作等の通常用いられる菌株変異処理方法によ
ってヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の生産能を高めたも
のを用いてもよい。

従来のヒアルロニダーゼとの比較： ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は前記したような理化学
的性質を有している。

従来からヒアルロニダーゼは動物の組織やある種の微生
物の培養物中にその存在が知られている。

動物由来のヒアルロニダーゼはいずれも加水分解酵素で
あり、ヒアルロン酸に作用して４糖又は６糖を生成する
ことから、リアーゼであるヒアルロニダーゼＳＤ−６７
８とはその作用の点で異なっている。

一方、微生物由来のヒアルロニダーゼで、その理化学的
性質が検討されているヒアルロニダーゼとしては、スト
レプトマイセス・ヒアルロリイティカス・ノボ・エスピ
ー、ストレプトマイセス・コガネイエンスＮｏ、ｊ３２
３１、スタフィロコッカス争アウレウス、ペプトストレ
ブトコッヵス・エスピー８４Ｈ１４Ｓ、　プロピオニバ
クテリウム・アクネス又はストレプトコッカス・ピオゲ
ネスの産生ずるヒアルロニダーゼがある。

ここで、これらの微生物由来のヒアルロニダーゼとヒア
ルロニダーゼＳＤ−６７８の性質を比較して表に示す。

従来から知られている微生物由来のヒアルロニダーゼは
、ヒアルロン酸のβ−へキンサミニド結合を分解するリ
アーゼであり、作用の点ではいずれも共通している。

しかし、ストレプトマイセス、ペブトストレプトコッカ
スおよびプロピオニバクテリウム由来のヒアルロニダー
ゼとヒアルロニダーゼＳＤ−６７８とは基質特異性、至
適ｐＨ１分子量などの点でその性質が異なる。また、ス
タフィロコッカス由来のヒアルロニダーゼとは至適ＰＨ
や分子量の点でその性質が異なる。

ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８とストレプトコッカス・
ピオゲネスのヒアルロニダーゼとは分子量が異なり、ヒ
アルロニダーゼＳＤ−６７８（７）方が分子量が大きい
。また、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の至適ｐＨ範囲
は広く、使用に際し有利である。更に、ストレプトコッ
カス・ピオゲネスのヒアルロニダーゼは酸化剤に対して
は不安定であるが、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は酸
化剤に対してほとんど影響を受けないので、酸化剤存在
下でヒアルロン酸を分解するときは本酵素の方が適して
いる。他方、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は還元剤に
よって失活するが、ストレプトコッカス争ピオゲネスの
ヒアルロニダーゼは還元剤によって安定化することが知
られている。

次にヒアルロニダーゼＳＤ−６７８とストレプトコッカ
ス・ピオゲネスのヒアルロニダーゼの抗血清を作成し、
血清学的性質を調べた。

［抗血清の調製］ ヒアルロニダーゼ５Ｏ−６７８又はストレプトコッカス
拳ピオゲネス由来のヒアルロニダーゼをそれぞれ１００
単位生理的食塩液０．５ｄに溶解し、等量の完全アジュ
バントと混合して懸濁液を作成し、家兎の皮下に０．２
ｗＪずつ５ケ所に皮下注射をした。この操作を１週間間
隔で３回行った後、２週間後にそれぞれに家兎から全血
採血し、血清を分離して、それぞれのヒアルロニダーゼ
の抗血清を得た。

［抗血清との反応］ ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８１単位又はストレプＩ・
コツカス・ピオゲネス由来のヒアルロニダーゼ　１単位
を０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，２）０．５＋＋１
／に溶解し、この液にそれぞれの抗血清０．５＋＋ｔｌ
を加えて攪拌し、室温に１５分間放置した後、前記力価
測定法でその力価を測定した。対照として正常家兎血清
を用いて同様に測定した。

ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の抗血清はヒアルロニダ
ーゼＳＤ−６７８の酵素活性を阻害したが、正常家兎血
清およびストレプトコッカス・ピオゲネス由来のヒアル
ロニダーゼの抗血清は全く酵素活性を阻害しなかった。

一方、ストレプトコッカス・ピオゲネス由来のヒアルロ
ニダーゼの抗血清はストレプトコッカス・ピオゲネス由
来のヒアルロニダーゼの酵素活性を阻害したが、ヒアル
ロニダーゼＳＤ−６７８の抗血清および正常家兎血清で
はその酵素活性は全く阻害されなかった。

このようにヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の諸性質につ
いて、この出願前の公知のヒアルロニダーゼと比較検討
した結果１本発明のヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は従
来より公知の一物由来のヒアルロニダーゼおよび微生物
由来のヒアルロニダーゼとは種々の点で質的に相異して
いる新規な゛ヒアルロニダーゼであることが判明した。

一方、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の生産菌であるス
トレプトコッカス・ディスガラクティエは動物の皮膚な
どから分離される細菌であり、人に対する病原性はほと
んどないことが知られており、ヒアルロニダーゼＳＤ−
６７８の生産に際しては一般的な設備を使用できる。他
方、ストレプトコッカス−ピオゲネスは人に対して病原
性を有するので、そのヒアルロニダーゼ生産に際しては
、充分に注意する必要がある。

なお、ストレプトコッカス・ディスガラクティエＩ　Ｉ
Ｄ−６７８又はストレプトコッカス・ピオゲネスｌＩＤ
−７１５をそれぞれ血液寒天培地（極東製薬部）に接種
して、３７℃で１晩培養した後、滅菌処理した酵母エキ
ス２％、ベプトン０．５％、リン酸水素二カリウム０．
４％、グルコース２％（ｐＨ７、２）　１００ｔｄ力ラ
ナル液体培地に菌を２白金耳接種し、３７℃で２４時間
振盪培養を行い、得られた培養物を遠心分離して培養上
清を得た。この培養上清のヒアルロニダーゼ活性を前記
の力価測定法で測定したところ、ストレプトコッカス・
ディスガラクティエの培養上清の粗酵素活性は２３０単
位であり、ストレプトコッカス・ピオゲネスｌＩＤ−７
１５の培養上清の粗酵素活性の約６０倍であった。

このよう＆４このヒアルロニダーゼ５０７−６７８はス
トレプトコッカス・、ピオゲネス由来のヒアルロニダー
ゼより製造がしやすく、かつ、生産性がよい。

ＩＩ　、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の製造法につい
て： 本発明のヒアルロニダーゼ５Ｏ−６７８は、例えば、ス
トレプトコッカス・ディスガラクティエを培地に培養し
、得られる培養物からヒアルロニダーゼＳＤ−６７８を
分離・精製することにより製造される。

培養方法は一般的微生物培養方法に準ずれば、いずれの
方法でもよいが１通常は液体培地による振盪又は撹拌培
養法が有利である。

培養に用いる培地としては、ストレプトコッカス・ディ
スガラクティエが栄養源として利用できる培地成分であ
ればよい。

例えば、炭素源としては、グルコース、マンノース、ｉ
ａ粉、糖蜜、液化澱粉、グリセリン等を用いることがで
きる。

また、窒素源としては、例えば肉エキス、酵母エキス、
ペプトン、カゼイン加水分解物、ゼラチン、コーンミー
ル、大豆粉、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素等を用しζることができる。

また、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム
、塩化カリウム、炭醜カルシウム、塩化マンガン、塩化
マグネシウム、硫酸ナトリウム等の各種無機塩類も必要
に応じて添加できる。

一方、ヒアルロニダーゼ５Ｉ）−６７８誘導物質として
ヒアルロン酸、コンドロイチン又は部分的に脱硫酸化し
たコンドロイチン硫酸を培地に添加することにより、ヒ
アルロニダーゼＳＤ−６７８の生産能を高めることがで
きる。

しかし、ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は還元剤によっ
て失活するので、培地中に還元剤を添加することは好ま
しくない。

上記したような培地成分は適宜組合せても、また培地途
中で添加してもよい。

また、培養中発泡の著しい時には、例えば大豆油、亜麻
仁油等の植物油、オクチルアルコール等の高級アルコー
ル類、シリコン化合物等の消泡剤を適宜添加すればよい
。

培養温度は３７℃前後が適当であり、培養時間は１０〜
３０時間が適当である。

培養容量の増大に従って適宜種培養を行うと好結果が得
られる。

以上述べた培養条件は使用菌株の特性に応じてそれぞれ
最適の条件を選択して適用される。

このようにして培養し、得られた培養物からヒアルロニ
ダーゼＳＤ−６７８を分離精製する。

ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８は主に培養物中の菌体外
に含有されている、ので、ろ過、遠心分離等の手段によ
り、培養物を菌体と培養液に分離し、一般酵素の精製法
によりヒアルロニダーゼＳＤ−６７８を精製すればよい
。　　　、即ち、減圧濃縮、凍結乾燥、透析、硫安分別
、限外ろ過、遠心分離、イオン交換体を使用するクロマ
トグラフィー、ゲルろ過、有機溶媒を使用する分別沈殿
等の酵素の分離、精製手段を単独あるいは任意に組み合
わせて、また必要に応じて反復して用いることにより培
養ろ液からヒアルロニダーゼＳＤ−６７８が分離、精製
、採取される。

［発明の実施例］ 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではな
い。

実施例１ スＩ・レプトコッ力スｅディスガラクチイエＩ　ＩＤ−
６７８株をウマ血液寒天培地（極東製薬製）に接種して
、３７℃で１晩培養した。

次に、酵母エキス２％、ペプトン０．５％、リン酸水素
二カリウム０．４％、グルコース２％（ｐＨ７、２）か
らなる培地溶液を５００ｄ容坂ロフラスコ４木にそれぞ
れ１００−入れ、１２１℃で１５分間加圧滅菌した。こ
のフラスコに前記培養菌をそれぞれ２白金耳接種し、３
７℃で１０時間培養した。

別に上記と同じ組成の培地溶液２０１を３０１のジャー
ファーメンタ−に入れ、１２１℃で２０分間滅菌した後
、別に滅菌した１％ヒアルロン酸ナトリウム溶液２文を
無菌的に加えた後、前記の４木のフラスコ培養液を加え
て３７℃で１２時間ｊ８養した。途中、培地ｃｙ）ｐＨ
は、３Ｎ　　ＮａＯＨ溶液を適宜加えて中性に保つ。

このようにして得られた培養液をラジオライト（昭和化
学工業製）をろ過助剤に用いてろ別し、ろ液を得た。こ
のろ液を１０℃まで水冷し、７０％飽和硫安濃度になる
ように硫安を加えて、撹拌した後、液温を１０℃に保ち
ながら２時間放置した。

この塩析で生じた沈殿物を遠心分離して集め、０．０２
５Ｍ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７、８）５０ｍｌに溶解
した後、同じ緩衝液１５文に対して２０時間透析した。

次に、この掖をＤＥＡＥ−セルロースを充填したカラム
を通過させ、カラムを０．０２５Ｍ）リス−塩酸緩衝液
で洗浄した後、０．２Ｍ　　ＮａＣ１を含む０．０２５
Ｍ）リス−塩酸緩衝液で溶出して、溶出液を集め、濃縮
した後、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５、８）に対し
て２０時間透析した。この液をＰｈｏｓｐｈｏ−セルロ
ースを充填したカラムに通過させ、０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐ）１５　、８）でよく洗浄した後、０．０５Ｍ
のｐＨ５，８とｐＨ７、０のリン酸緩衝液を用いてｐＨ
グラジェント溶出を行い、目的物を含む両分を集め２０
−まで濃縮した。この液をセファアクリルＳ−３００（
’ファルマシア社製）を充填したカラムでゲルろ過を行
い、目的物の溶出される両分を集めて凍結乾燥して、粉
末ヒアルロニダーゼＳＤ−６７８１２＋＊ｇを得た。

こうして得たヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の比活性を
力価測定法に従って測定したところ１．５００単位／■
ｇであった。

［発明の効果］ 本発明によれば、新規なヒアルロニダーゼを提供するこ
とができる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質： 作用： エンドβ−ヘキソサミニダーゼ 基質特異性： ヒアルロン酸およびコンドロイチンを分解し、コンドロ
   イチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸
   、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびケラト硫酸を分解せず
   。 至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲： 至適ｐＨ　ｐＨ５．８〜６．６ 安定ｐＨ　ｐＨ５．０〜９．０ 作用適温の範囲： 至適温度：３７℃付近 作用適温の範囲：２０〜５０℃ ｐＨ、温度などによる失活の条件： ｉ）ｐＨ４．５のエチレンジアミン−酢酸緩衝液中、３
   ７℃で１５分間放置することにより約８０％失活する。 ｉｉ）ｐＨ７．２のリン酸緩衝液中、８０℃で３０分間
   放置することにより約１００％失活する。 ｉｉｉ）５０ｍＭの亜硫酸ナトリウム、システイン又は
   メルカプトエタノールを含むｐＨ６．５のリン酸緩衝液
   中、３７℃で１０分間放置することにより約１００％失
   活する。 阻害および安定化： ｉ）Ｆｅ＾２＾＋、Ｃｕ＾２＾＋、Ｐｂ＾２＾＋および
   Ｈｇ＾２＾＋により阻害される。 ｉｉ）牛血清アルブミン又はゼラチンを加えることによ
   り安定化する。 分子量： １２５，０００±１０，０００（セファアクリルＳ−２
   ００によるゲルろ過法） 電気泳動による移動度： セルロースアセテート膜を支持体として、 ０．０５Ｍトリスーマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を
   用いて、０．５ｍＡ／ｃｍで３０分間通電して電気泳動
   を行い、陽極側に泳動される牛血清アルブミンの移動度
   を＋１．０とするときの移動度は＋０．３である。 を有することを特徴とするストレプトコッカス・ディス
   ガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｄｙｓｇ
   ａｌａｃｔｉａｅ）由来のヒアルロニダーゼＳＤ−６７
   ８。
2. （２）ストレプトコッカス・ディスガラクティエ（Ｓｔ
   ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）
   又はその変異株を培地に培養し、得られた培養物からヒ
   アルロニダーゼＳＤ−６７８を分離、採取することを特
   徴とするヒアルロニダーゼＳＤ−６７８の製造法。