JPS63295598A - 生物活性グリコペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規表生物活性グリコペプチドに関する。そ
れらはエンケファリナーゼ抑制作用を有し、従って例え
ば人間または動物の医療における鎮痛剤として用いるこ
とができる。それらの調製方法が記載される。

エンカスチン類は単糖類がアミン窒素を介してアミノ酸
またはりはプチドに連結されている化合物である。Ｌ−
アミノ酸を含むこのタイープの化合物は、Ｋ、　Ｈｅｙ
ｎｓおよびＨ６Ｐａｕｌｓｅｎ（Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎ
ｎ、　Ｃｈｓｍ、　６２２　（１９５９）　１６０〜１
７４　）および１１．　Ｒｂ”ｐｅｒ　、　８．　Ｒｔ
＋’ｐｅｒおよびに、　Ｈｅｙｎｓ（０ａｒｂｏｈｙｌ
ｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１１６　（１９８！１）
　１８３〜１９５）により報告されている。Ｎ−（１−
デオキシ−β−Ｄ−フラクトピラノースー１−イル）−
Ｇ１７−　Ｇａｙ　−ＯＨおよびＮ（１−デオキシ−β
−Ｄ−フラクトピラノースー１−イル）　−Ｇ１７−８
ｅｒ−０［（などの化合物はすでにＢ　、Ｎ　、　８ｔ
ｅＰｎｅｎｌｃ。

および’Ｎ、Ｎ、　Ｂｏｒｏｄｉｎａ　、　Ｐｒ１ｋｌ
　Ｂｉｏｋｈｉｍ、　１Ｊｉｌｃｒｏ−ｂｉｏ、　１２
　（１）　（１９７６）　５〜１３　（Ｃ，Ａ、　８５
　：　１４３４２５ｈ〕に開示されている。

様々な化合物群が鎮痛活性を有するエンケファリナーゼ
阻害剤として報告されている。それらは、共通して、こ
の金属酵素のＺｎ”（これは触媒作用に本質的に関与す
る）と共に配位化介物を形成し得る脂質親和性アミノ酸
に隣接した官能基を有する。これらの官能基の例として
は、−ＢＦ！、　Ｉ（０−ＮＨ−ＣＯ−１−Ｐ（シＯ）
Ｏ［（−Ｒおよび−（！ＯＯＨ（Ｒ。

Ｌ　Ｃｈｉｐｋｉｎ、　Ｄｒｕｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆ
ｕｔｕｒｅ　１１（７）（１９８６）５９３〜６０６）
が挙げられる。また、かかる化合物がエンケファリナー
ゼのみならず細菌から単離され得る酵素サーモリジンも
阻害することもまた知られている（　Ｍ、　Ｐｏｚｓｇ
ａｙ　、　Ｃ，Ｍｉｃｈａｕｄ　。

Ｍ、　ＬｉｅｂｍａｎｎおよびＭ、　Ｏｒｌｏｗａｋｉ
　、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２５　（１９８６）　
１２９２〜１２９９　）。

従ッて１本発明の目的は、エンケファリナーゼを特異的
に阻害する化合物を見出すことにある。

この目的は、本発明に従って、一般式１日ａｃｃｈ−Ａ
−Ｂ−Ｒ（１） 〔式中、　５ａＣＯｈは単糖類残基を表わ１７％そして
そのｏｎ基は、適切表場合には１部分的にまたは完全に
置換されており。

アミノ酸の残基を表わし。

４電 Ｂは、存在しないか、豊たは　　−一またはＤ−アミノ
酸のまたは場合によってはω−置換された二官能性の酸
性または塩基性り一またはＤ−アミノ酸の残基を表わし
、そして Ｒはヒドロキシル、　　（ｃｌ−ｃ６）−アルコキシ、
場合によっては（ｃ　１−ｃ　Ｂ　）−ア＃　＊　ル、
　　（（！５−０８）　−シクロアルキル、　　（０５
り８）−へテロアル中ルまたけ（（！５ｅａ）−へテロ
アリールより成る群より選択される１または２個の同一
のまたは異なる基により置換されているアミノ基または
他の酸誘導体を表わす〕 で示される化合物またはそれらの生理学的に許容し得る
塩〔ただし化合物Ｎ−（１−デオキシ−β−Ｄ−７ラク
トピラノースー１−イル）−Ｇｌｙ　−Ｇｌｙ　−ＯＨ
およびＮ−（１−デオキシ−β−Ｄ−７ラクトピ２ノー
スー１−イル）　−Ｇ１７−８ｅｒ　−ＯＨを除く〕に
よって達成される。

特に適した塩はアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩
、生理学的に許容し得るアミン類との塩、および無機酸
および有機酸例えばＨＣＱ。

ＨＢｒ　１［２８０４、Ｈ３ＰＯ４、マレイン酸、フマ
ル酸、クエン酸、酒石酸および酢酸などとの塩類である
。

単糖類残基のＯＨ基が置換される場合、それらは、特に
（Ｃ！１−Ｃａ）−アルコキシｉたは（ｃ＋−ｃａ）−
アルキルーカルボニルにより、エーテル化またはエステ
ル化されるのが好ましい。更に、　ＯＨ基は水素（デオ
キシ糖）　、　　（ｃｌ−ｃ４）−アルキル。

およびヘテロ原子例えば０、Ｎ１日およびそれらの訪導
体により置き換えられていてもよい。

個々の場合について特に断らなければ、アルキルおよび
アルコキシは直鎖状または分枝鎖状であってよい。

ヘテロアルキルとして特に適しているのは、環式化合物
である。ヘテロアリールと同様、これらは特に、含窒素
化合物、例えばピロリジン、ビはリジンおよびピリジン
などであるとして理解されるべきである。

好ましい残基ＡおよびＢは天然α−アミノ酸（例えば、
　８ｃｈｒ”ｇｄｅｒ、　ＬＶｂｋｅ、　”Ｔｈｅ　Ｐ
ｅｐｔｌｄｅａ”。

Ｖｏｌｕｍｅ　ｌ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９６５．１
３７〜２７０　Ｎまたは”Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　
ｏｒｇａｎｉ８ｃｋＬＢｎ：　Ｏｈｅｍｉｅ”　（有機
化学の方法）第１５／１および２巻、補遺）、それらの
対掌体またはそれらの簡単な代謝物から誘導されたもの
である。それらＲブチＦ中のキラリティ中心は各々Ｒま
たは日、またはＲ，８立体配置を有していてもよい。

以下、アミノ酸はり、　５ｔｙｒｅｒ、　”Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ″（Ｗ、ｆ（、Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃ
ｏｍｐａｎｙ、　Ｒａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ。

１９７り、１４頁以降）に用いられた記号により記載す
る。Ｄ−アミノ酸の残基である場合には、これらの記号
の前に記号“Ｄ”を付し、立体配置記号のない残基はＬ
立体配置を有する。

８ａｃｃｈは１例えば、トリオース、ケトロース。

またはアルドペントース、アルドヘキソース。

ケト・クンドース、ケトヘキソース、デオキシアルドー
スおよびアミノアルドース、および立体異性体、特にＤ
−またはＬ−単糖類例えばリボース（Ｒ１’ｂ）、アラ
ビノース（Ａｒａ）、キシロース（Ｘｙｌ）　、　　リ
キソース（Ｌ７Ｘ）　ｓフコース（Ａｌｌ）、アルドロ
ース（Ａｘｔ）、グルコース（Ｇｌｃ）、マンノース（
Ｍａｎ）、グロース（Ｇｕｌ　）、イＶ−ス（Ｉｄｏ）
、ガラクトース（Ｇａｌ）　、グロース（Ｔａ１）、エ
リトロース（Ｗｒｙ）、トレオース（Ｔｈｒ）、プシコ
ース（Ｐｓｉ）　、フラクトース（Ｆｒｕ）　、ソルボ
ース（９ｏｒ）　。

タガトース（Ｔａｇ）　ｈ　キシルロース（Ｘｙｕ　）
、フコース（Ｆｕｃ）　、ラムノース（Ｒｈａ　）、オ
リボース（０１１）　、オリオース（Ｏｌｏ）　、　　
ミカロース（Ｍｙｃ）。

ロビサミン（ＲＮ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｇｌ
ｃｉｉＡｃ）、　Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｇａｌ
ＮＡｃ）。

Ｎ−アセチルマンノサミン（ＭａｎｉＡｃ　）　　およ
びそれらの合成誘導体例えばデオキシ−、アミノ−。

アセトアミド−、ハロケ゛ノー、好ましくはプロモーま
たはヨード”−１糖またはイノシトールなどから誘導さ
れたフラノシルまたはピラノシル基であってもよい。５
ａｃｃｈはα体またはβ体のいずれでもよいが、β体で
あるのが好ましく。

また単糖類誘導体の形であってもよい。

式Ｉの好ましいグリコにプチドは。

５ａｃｃｈがアルドヘキソースまたはケトヘキソース捷
たはそｈらの誘導体の残基であり、Ａが工１ｅ　、　Ｐ
ｈｅ　、Ｌｅｕ　、　Ｖａｌ、Ｔｈｒ　、　Ｓｅｒ　％
Ｇｌｙ。

ａｙｓ　、　Ａｈａ　ｔ　タｉｄヘキサヒドロフェニル
グリシン（Ｈｈｐ）　（各、々Ｌ体または９体である）
を表わすか、または（Ｂが存在しないときは）９体の前
記残基のいずれかを表わし。

Ｂが存在しないかまたけＡｓｐ、　Ａｓｘ　、　Ｇｌｕ
　、　Ｇｌｘ　、　８ｅｒ　、　Ｔｈｒまたはｆｌｙ　
（各々５体または９体である）を表わしそして Ｒがヒドロキシルまたは−ＮＨ（）を表わすもの。

およびそれらの生理学的に許容し得る塩（化合物Ｎ−（
１−デオキシ−β−Ｄ−フラクトピラノースー１−イル
）　−Ｇｕｙ　−Ｇａｙ−ＯＨおよびＮ−（１−デオキ
シ−β−Ｄ−７ラクトピラノースー１−イル）　−（ｌ
ｙ　−８ｅｒを除く）である。

式１〔式中、　１３ａｃｃｈはフラクトシルまたはその
誘導体を表わし、 Ａは工１ｅ　％Ｐｈｅ　、　Ｌｅｕ　、　Ｖａｎ　、Ｏ
ｙｓ、ＡｌａまたはＨｈｐ　（各々５体または９体であ
る）であるか、または（Ｂが存在しないときは）９体の
前記残基のいずれかを表わし。

Ｂは存在しないかまたはＡｓｐ　、　Ａｓｘ　、　Ｇｌ
ｕまたは８ｅｒ　（各々５体または９体である）であり
。

そして Ｒはヒドロキシルを表わす〕のグリコぼブチｒおよびそ
れらの生理学的に許容し得る塩が特に好ましい。

更に１％に好ましいのは、式■〔式中８ａｃｃｈは７ラ
クトシルまたはその誘導体であり。

Ａは工１ｅ　、Ｌｅｕ　、　Ｖａｌ、ＣｙｅまたはＦｌ
ｈｐ　（各々９体である）を表わし、 ＢはＡｓｐ　、　Ａｅｘ　、　Ｇｌｕまたは日ｏｒ　（
各々５体または９体である）を表わし、そして Ｒはヒドロキシルを表わす〕 のグリコにブチＶおよびそれらの生理学的に許容し得る
塩である。

特に１次のグリコはブチＶを挙げることができる： し１１３ Ｍ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
工１ｅ　−Ａｓｐ　−ＯＦ！ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｄ−工ｍｅ　−Ａｓｐ　−０１ｌＮ−（１−デオキシフ
ラクトピラノース−１−イル）　−Ｖａｌ−Ａｓｐ　−
０Ｈ Ｎ−（１−デオ午シフラクトピラノースー１−イル）　
−Ｄ　−Ｖａｎ　−Ａｓｐ　−ＯＨエンカスチンＡＤ ｎ−（ｔ−デオキシフラクトピラノース−１−イル）　
−Ａｌａ　−Ａ１３１）　−０ＥＩエンカスチンＩｌｌ
ｌｔ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
工１θ−Ｇｌｕ　−ＯＨ エンカスチンｖＥ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）　
−Ｖａｌ　−Ｇｌｕ　−ＯＨ エンカスチンムＥ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）　
−Ａｌａ　−Ｇｌｕ　−ＯＨ エンカスチン＠Ｖ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）　
−Ｄ　−Ｖａｌ−ＯＦ！ 本発明は更に、 ａ）　　ストレフトマイセス−アルバス（ｓｔｒｅｐｔ
ｏ〒θｅａｌｂｕｓ）（ＡＴＣＣ２１８３８）、および
その変異株および突然変異株を、栄養培地中で、式１〔
式中ＧａｃｃｈはＮ−（１−デオキシフラクトピラノー
ス−１−イル）残基を表わし、ＡはＡｌａ　。

Ｌｓｕ、Ｖａｌまたは工１ｅを表わし、ＢはＡｓｐ　’
ｌたはＧ４ｕを表わし、そしてＲはヒｒロキシルを表わ
す〕で示される化合物が培譬液中に蓄積するまで培養し
、そして適切な場合には、ｂ）それを巣離し、精製しそ
して誘導体に導くことより成る式夏の化合物の製造方法
に関する。

炭素源および窒素源、および慣用の無機塩を含む栄養溶
液中で、ストレプトマイセス・アルバス　ＡＴＣＣ２１
８３８ｔｒｉ　、　特にエンカスチンより、エンカスチ
ンＶＤ％エンカスチンＡＤ、エンカスチンエＥ１エンカ
スチンＶＫおよびエンカスチンＡＲ全生産する。

もちろん、　ＡＴＣ（３２１８３８株に代えてその変異
株および突然変異株をそれらがこれらの化合物のうちの
少くとも一つを合成する限シ用いることもできる。この
タイプの突然変異株け、自体既知の方法で、物理的作用
体例えば放射線照射。

例えば紫外線またはＸ線照射、または化学的変異原物質
例えばエチルメタンスルホネー）（ＥＭＳ）または２−
ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノ７　（ＭＯＢ）
などＫよシ発生させることができる。

好気的発酵に適しかつ好ましい炭素源は可同化炭水化物
および糖アルコール例えばグルコース、ラクトースまた
はＤ−マンニ）−ル、オ！び炭水化物含有天然物例えば
麦芽エキス、および油脂である。適切な含窒素栄養物質
としては。

アミノ酸、はプチドおよびタンノξり質、およびそれら
の分解生成物５例えばＲコドンまたはトリプトン、更に
は肉エキス、粉砕種子１例えばコーン、小麦、ビーンズ
、大豆、またはコドン・プラント（ｃｏｔｔｏｎ　ｐｌ
ａｎｔ）、アルコール生産時の蒸留残渣、肉粉、または
酵母エキス、およびアンモニウム塩および硝酸塩などが
挙げられる。

栄養溶液が含有し得る他の無機塩の例としては、アルカ
リ金属またはアルカリ土類金属の塩化物、炭酸塩、硫酸
塩または燐酸塩、あるいは微量元素例えば鉄、亜鉛、コ
・２ルトおよびマンガンなどが挙げられる。

エンカスチン類の生産は、栄養溶液の総重量に基づき、
０．１〜１５％の栄養物質成分例えば大豆粉、大豆油お
よびマンニトール（特に各０．１〜３％）を含有する栄
養溶液中で行うと特に満足のいく結果が得られる。発酵
は、好気的Ｋ。

すなわち１例えば振盪フラスコまたは発酵槽中で振盪ま
たは攪拌しながら、そして適切な場合には空気または酸
素を導入しながら、液内培養で行われる。発酵は、約１
８〜３５℃、好ましくは約２５〜３０℃、特に２８〜３
０℃の温度範囲で行うことができる。−範囲は６〜８．
有利には６．５〜ｚ５とするのがよい。これらの条件下
では、培養液のエンケファリナーゼ抑制作用は、一般に
６〜１５日後には相当なものとなる。

培養は、数段階で行うのが有利である。すなわち、まず
液体栄養培地中で一以上の予備培養液を調製し、次に実
際の生産培地である１例えば容量比１：１０の主培養液
に移す。予備培養液は例えば胞子形成された菌糸体を栄
養溶液に移しそしてそれを約８０〜４００時間増殖させ
ることによシ得られる。胞子形成された菌糸体は、菌株
を固体または液体栄養培地１例えば酵母／麦芽寒天で約
１２日間増殖させることにより得ることができる。

発酵の進行は、培養液の−または菌子体の容量により、
または生物活性を試験することによシモニターすること
ができる。エンカスチン類は菌子体中および培養Ｐ液の
両方に存在する。

しかしながら、エンカスチン類の主要量は、一般的に培
養Ｐ液中に存在する。

前記化合物は、生成物の化学的、物理的および生物学的
性質を考慮して、既知の方法１例えばイオン交換体１分
子ふるい、吸着樹脂および逆相支持体を用いたクロマト
グラフィ、溶媒沈殿、逆浸透などにより培地から単離さ
れる。

水性相を菌糸体から、例えば−過または遠心分離により
分離し、そしてエンカスチン類を関連の相から単離し精
製するのも有利である。

好ましい方法は、脂肪を培養ｐ液からブタノールで抽出
除去し、そして水性相を真空濃縮することより成る。そ
の水性濃縮液を２〜５倍量のメタノールで希釈し、そし
て遠心分離して沈殿した高分子量物質を除去する。その
水−メタノール性上清を次に、まず強取性イオン交換体
。

例えば［Ｆ］Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｗｘ２、で処理して塩
基性物質を単離し１次いで陰イオン交換体１例えば■Ａ
ｍｂｓｒｌｉｔθＩＲＡ−６８で処理してそこから両性
物質を単離する。後者の両分がエンカスチン類を含有し
ている。分子ふるい、例えば■５ｅｐｈａｄ＠ｘＧ−１
５，を用いて塩を除去１．た後、分取用ＨＰＩ、Ｏを例
えば逆相ＲＰ−４８を用いて行うことにより個々のエン
カスチン成分が得られる。

しかしながら、それらエンカスチン類を別法で（合成的
に）製造することもできる。すなわち、本発明は。

ａ）遊離Ｎ−末端アミノ基を有するアミノ酸を遊離Ｃ−
末端カルボキシル基を有するアミノ酸と縮合させ、適切
な場合には、適切な場合に官能基を保護するために一時
的に導入された一つ以上の保護基を除去し。

ｂ）そのジはブチドを、または遊離Ｎ−末端アミノ基を
有するアミノ酸を、アノマー中心に遊離ヒドロキシル基
を有する単糖類と縮合させ、適切な場合には、適切な場
合に官能基を保護するために一時的に導入された一つ以
上の保護基を除去し、 Ｃ）得られるＮ−グリ・コシドを、適切な場合にはＡｍ
ａｄｏｒｉ転位反応により、Ｎ−置換イソ−糖アミンに
変え。

そして得られるエンカスチンを、適切な場合には、その
生理学的に許容し得る塩またはその誘導体に変えること
より成る（更にこれらの反応順序を相互に変更すること
も、またｂ）でアミノ酸を用いるときはａ）を省略する
とともできる）式１の化合物の更なる製造方法に関する
。

しかしながら、自体既知のその他の方法も糖ＷＨ−！：
ブチド結合の形成に適している。

保護基および合成手法の選択は、アミノ酸の性質および
立体配置、および結合条件の性質によって決まる。

本発明方法によるジペプチド製置のためのアミノ酸の縮
合は、ｋ、プチド化学の常法によ）。

好ましくは混合無水物法により、活性エステル、アジド
を経由して、Ｔｏるいはカルボジイミド法により、＠に
反応速度を高めラセミ化を防止する物質例えば１−ヒｒ
ロキシーペンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロΦシスクシン
イミド、３−ヒドロキシ−４−オキソ−５，４−ジヒド
ロ−１，２，３−ベンゾトリアジンまたはＮ−ヒｒロキ
シー５−ノルボルネン−２，３−’）カルホキシイきド
などを添加して、そしてまた１−ヒＶロキシベンゾトリ
アゾールの活性化誘導体、または燐酸。

ホスホン酸およびホスフィン酸の無水物を用いることに
より、−１ｏ℃〜反応混合物の沸点、好ましくは一５℃
〜４０℃の反応温度で行われる。

これに適した溶媒はりメチルホルムアミド。

ジメチルアセトアミ）−′、ヘキサメチル燐酸トリアミ
Ｆｓ　Ｈ−メチルピロリＦ７またはりメチルスルホキシ
ドである。成分の溶解度が許す場合には、メチレンクロ
ライドま九はクロロホルムなどの溶媒を用いることもで
きる。前述の方法は１例えばＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ−Ｇ
ｒｏｓｓ＋　ニーＴｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”。

Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　’Ｖｏ１．　ｌ、　
（１９７９）　　などに記載されている。

グリコジル基を前記アミノ酸またはジはプチド上に縮合
させるために１反応に関与しないカルボキシル基および
その他の官能基を予め適当に保護しておくことができる
。この目的に対して特に適しているととが判明している
保護基は接触水素添加によシ除去できるもの、例えばベ
ンジル（ＯＢＺＱ）またはｐ−ニトロベンジル（ＯＭｍ
Ｑ）エステルなどである。その他の適切な保護基は、例
えば、　Ｈｕｂｂｕｃｈ、　Ｋｏｎｔａｋｔｅ　Ｍｅｒ
ｃｋ　３　（１９７９）第１４〜２３頁およびＢｕｌｌ
ｅｅｂａｃｈ、　ＫｏｎｔａｋｔｅＭｅｒｃｋ　１　（
１９８０）第２３〜３５頁などに記載されている。

炭水化物化学において慣用される保護基は。

例えば、（Ｃ１−０１（１）−アシル保護基例えば（ｃ
ｌ−ｃ６）−アルカノイル（例えばアセチル、トリクロ
ロアセチル、およびトリフルオロアセチル）％ベンゾイ
ルまたはｐ−ニトロベンゾイル、および場合によシ修飾
されたメチル、メチルオキシメチル、ベンジル、テトラ
ヒドロピラニル、ベンジリデン、イソプロピリデンまた
はトリチル基などであるとして理解されるべきであるが
、この場合、アシル保護基が好ましく、４！にアセチル
（Ａｃ　）基が好ましい。

エンカスチン類の合成は、二つの多官能性反応成分（炭
水化物およびアミノ酸またはジはブチド）を連結するこ
とより成る。両者を選択的にブロックしそして脱ブロッ
クできなければならない。グリコジル成分中のアノマー
中心を遊離させ、また官能化できなければならず、そし
てアミノ酸成分中、連結に必要なアミン基だけを脱ブロ
ックすることができる。意図するグリコシド結合のタイ
プ（１，２−シス−または１，２−トランスーグリコシ
ド）に応じて、グリコジル成分中のヒドロキシルまたは
アミノ基をブロックするのに適した保護基を導入し、ま
た適切な場合には、二つの可能なアノマーのうちの一方
だけを立体選択的に生じる連結工程反応条件を設定する
重要がある。

Ｎ−（１−デオキシプラク１−スー１−イル）−Ｌ−ア
ミノ酸の合成は既に数次にわたシ報告されている（例え
ａ’、　Ｈ，Ｒ６ｐｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　０ａｒｂｏ　
−ｂ７ｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｓａｒｃｈ、　　１１６　　
（ｆ９８３）　　１８５〜１９５参照）。

これは、未置換反応成分を水または水／メタノールに溶
解し、そして各種緩衝剤または添加剤例えばピロ亜硫酸
ナトリウムなどと共に加熱するというものである。収率
は出発物質の性質によって異なるが、平均２０％である
。

驚くべきことに、ｍと遊離アミノ基を有するアミノ酸ま
たははブチドとの反応を第二または第三級の脂肪族また
は芳香族含窒素化合物１例えばピリジン、ジメチルアミ
ノピリジン　Ｕ−（ｃ　１−ｃ　Ｂ　）−アｋ　Ｑ　Ａ
／　＋−およびトリー（ｃｌりｓ）　−アルキルアミン
ｈ　　（Ｃ！ｄ−０１２）−アリール−（ａｌ−ａｓ）
−アルキルアミン、トリス（ｔｒｉｇ）緩衝剤、ジメチ
ルホルムアミドまたはイミダゾールなどの存在下に、す
なわち触媒作用の下に行うと、目的とするＡｍａｄｏｒ
ｉ生成物を極めて良好な収率で。

すなわち場合によっては９ＯＮ以上の収率で得ることが
できることを見出し九。使用される溶媒は、ピリジン、
水、水性メタノール、メタノール、エタノール、ジメチ
ルスルホキシド（ＷＯ）など、およびそれらの混合物な
どであるが、無水ピリジンまたは後者と無水メタノール
、　ＤＭＳＯおよびその他の溶媒との混合物が好ましい
。反応温度は広い範囲にわたシ変えることができる。

可能な温度は０℃〜２５０Ｃである。しかしながら室温
〜１２０℃の温度を用いるのが好ましい。

反応時間は温度に依存し、また数秒〜数日の範囲である
。典型的な反応は６５℃で２時間行われる。実質的反応
は、当初無色の反応成分が黄金色に呈色することで示さ
れる。その反応を続けると、反応混合物は褐色を一段と
深め、収率は低下する（　Ｍａｉｌｌａｎｄ反応）。

反応成分としては、未置換アルデヒドまたはケト基を有
する未保護のまたは部分的に誘導体化された糖、および
遊離アミノ基を有する未保護のまたは誘導体化されたア
ミノ酸およびはプチドを用いることができる。適当な糖
は全て既知であり１例えばトリオース、テトロース、は
ントース、ヘキソース、ヘプトース、デオキシ糖などで
ある。

ＡｍａｄＯｒｉ転位（Ｗｅｙｇａｎｄ／Ｈ１１ｇｅｔａ
ｇ、Ｏｒｇａｎｉ−ｓｃｈｃｈｅｍｉｓｃｈｅ　Ｋｘｐ
ｅｒ１ｍｅｎｔｉｅｒｋｕｎｓｔ″（有機化学実験技術
）　Ｊ、Ａ、　Ｂａｒｔｈ−Ｖｅｒｌａｇ　Ｌｅｉｐｚ
ｉｇ　（１９６４）９８０参照）は、Ｎ−グリコシｒを
１０分間〜１０日間（好ましくは０．５〜３日間）、０
０〜２００℃の温度（特に４０〜７０℃）に放置し１次
いで（適切な場合には共沸蒸留によシ）水を除去し、次
いで再び放置し、Ｎ−置換インー糖アミンを乾燥するこ
とによって行われる。

本発明によるエンケファリナーゼ阻害剤は。

特に痛みを伴う症状例えば歯痛、仙痛に伴う痛み、熱ま
たは酸に起因する痛み、ストレスにより生じる痛みおよ
び癌末期の痛み治療に極めて重要である。更に１式！の
エンケファリナーゼ阻害剤は精神的ストレス状態の治療
にも適している。

例えに痛覚および不安状態により、いわゆるオピエート
受容体との相互作用によってこれらの刺激作用を抑える
内生エンケファリン類が速かに放出されることが知られ
ている。しかしながら、エンケファリン類は、それらの
神経伝達物質としての“機能には適切であるが、エンケ
ファυ／Ｉ！＃異的ペプチダーゼ、特に酵素エンケファ
リナーゼ（ＥＣ５，４，２４，１１）により不活性はプ
チドに速かに分解される。従ってこの分解が式ｉのエン
ケファリナーゼ阻害剤によシ阻害される結果、内因的に
放出されたエンケファリン類はオピエート受容体に対す
る作用、従って痛みおよび不安の抑制作用をより長期に
わたり示すことができる。

本発明の基礎を表す化合物の特異的性質は。

エンケファリナーゼによるエンケファリン類の分解を阻
害するだけでなく固有の鎮痛作用を有することによって
更に特徴付けられる。従って、式１によシ特徴付けら、
れるエンケファリナーゼ阻害剤がオピエート受容体に対
し直接作用している可能性もあるように思われる。

エンケファリナーゼ・アッセイ エンカスチン類のエンケファリナーゼ阻害剤用は１文献
に知られ、例えばＲＯｑｕｅｓ、　Ｂ、Ｐ、　ｅｔａｌ
、（Ｌｉｆｅ　８ａｉｅｎｃｅｓ　（１９８２）、　１
７４９〜１７５２　）により報告されている方法により
測定した。使用された酵素は自体既知の方法（Ｍｕｍｆ
ｏｒｄ、　Ｒ，Ａ、ｅｔａｌ、　１９８２．　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　Ｂｉｇｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、１
０９゜１３０ｈ１３０９　］によりラット腎臓から可溶
化したエンケファリナーゼ調製物であった。本発明化合
物によるエンケファリナーゼの５０％阻害。

すなわち、工０５０値は、一連の濃度を用いて既知の方
法忙より測定し、そして本発明による阻害剤を室温で６
０分間酵素と共にプレインキユベートシてから基質の添
加により酵素反応を開始させた。阻害剤が存在し壜い場
合に阻害されまい反応が生ずることのチェックを適宜行
った。

イル）−Ｄ−’Ｖａ１ １五　　Ｎ−（１−デオキシタガトース−１−五２Ｘ１
０−フィル）　−Ｖａｌ−Ａｓｐ １４、　　　Ｎ−（１−デｔ＊シフ５り）−ス−１！Ｌ
４Ｘ１０−’イル）−Ｄ−工１ｅ エンカスチン類は、単独または組合せで、非経口的に（
ＬＶ、、ｓ、ｃ、、　ｉ、ｍ、　）ｔたは経口的に。

生理学的に許容し得る媒質と共に投与することができる
。投与されるべき用量は、一般にα１〜１０１Ｉｆ／Ｋ
ｆである。

実施例　１ 発酵によるエンカスチン類の採取（２，Ｏｏ’Ｑ　Ｑ）
発酵により本発明の二ンケ７アリナーゼ阻害剤を採取す
るために生産細菌であるストレプトマイセス・アルバス
ＡＴＯＯ２１８３８を（微生物学における常法に従って
）この菌株の凍結乾燥胞子を用いて培養した。培養は最
初、滅菌ベトリ皿内の固体栄養培地上で行った。個々の
コロニーを次いで更に傾斜培養管内で培養し、そしてこ
れより１発酵に必要外胞子を大量生産するためにＲｏｕ
ｘびん内で培養を行った。

固体栄養培地継代培養用寒天培地二 デキストリン　　　　　　　　　　１５．Ｏｆ／Ｑスク
ロース　　　　　　　　　　　　２．Ｏｆ／Ｑ肉エキス
　　　　　　　　　　　　　１．０　　ｆ／Ｑ酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　２．Ｏｆ／Ｑ塩化ナトサナ
トリウム　　　　　　　α５　　ｆ／ＱＫ２ＥＩＰＯ４
０，５ｔ／Ｑ ＦｅＳＯａ−７Ｈ２０Ｑ、０１　ｆ／　Ｑ寒天　　　　
　　　　　　　　　　　２．Ｑ　　ｆ／ＱｐＨ７，３ １２０℃で２０分間滅菌 ３０℃で９日間インキュベーション。

１個のＲｏｕｘびんからすすぎ出した胞子を１００−の
滅菌水に取り、そして第一の液中培養による栄養生殖的
な予備増、殖段階（作業容量１．２ｇ）のための接種物
として用いた。

予備段階培地： 可溶性デンプン　　　　　　　　　　４．Ｏｆ／Ｑグル
コース　　　　　　　　　　　　　１．ｏｙ／Ｑカゼイ
ン−はプトン　　　　　　　　１．ｏｔ／Ｑコーンスチ
ープリカ−〇、４ｆ／悲 大豆粉　　　　　　　　　　　　　　ＣＬ４ｆ／Ｑ（Ｎ
Ｈ４）２８０４　　　　　　　　　　　　０．８　ｔ／
ＱｐＨａ３ １２０℃で２０分間滅菌 １８℃で２日間インキュベーション １５０　ｒｐｍおよび振幅５３で振盪装置作動。

４８時間後、このようにして得られた第−予備培養液（
前記参照）を含む１個のＦｅｒｎｂａＣｈびんの内容物
を前記予備培地（前記参照）をもう−変周いつつ第二予
備培養（２０［［）のための接種物として用いた。滅菌
時間は３０分とした。インキュベーションは、５ｍ／秒
の周速度で攪拌しつつ％またα１　ｖｖｍの通気速度を
もって２８℃で４８時間続けた。

この第二予備培養の内容物を２００Ｑの主発酵培地のだ
めの接種物として用いた。

主発醪培地： ビーナツツ粉　　　　　　　　　　　３０．Ｏｆ／Ｑコ
ーンスチープ、固体　　　　　　　１αＯｆ／Ｑコーン
スターチ　　　　　　　　　　２　Ｑ、Ｏｆ／Ｑデキス
トリン　　　　　　　　　　　４０．Ｑ９７ｇ（ＮＨ４
）２Ｅ？ｏｎ　　　　　　　　　　　　　　５．Ｏｆ／
　ＱＭｑＥｏ４・７Ｈ２０５，Ｏｆ／Ｑ Ｃａｔ：！Ｏｓ　　　　　　　　　　　　　　　　ａ　
Ｑ　ｆ’／　Ｑｐ）Ｉ　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　４８１２０℃で５０分間滅菌。

主発酵は、４ｍ／秒の周速度で攪拌し麦がらそして０．
６　ｖｖｍの通気速度をもって２８℃で行った。本発明
の阻害剤の生産は４日後に始まり、１０〜１２日後に最
大となった。発酵が最大に達した後１発酵槽から収穫し
た。式■のエンカスチン複合体の収量は５〜１０μｆ／
Ｉ−（培養溶液）であった。

実施例　２ 培養溶液からのエンカスチン類の単離 フィルタープレスを用いて実施例１の２，０００ｔの発
酵溶液から菌体塊を除去し、そして清澄液体を各６００
Ｑのｎ−ブタノールを用いて２回抽出した。脱脂された
水相を次に落下型薄膜蒸発器で１５０Ｑまで真空濃縮し
１次いでこの濃縮液を６００ｔのメタノールで希釈した
。この結果得られる淡色綿状沈殿を遠心分離によｔ沈降
させ、そして傾瀉した。水−メタノール性上清を再び真
空濃縮し乾燥して１８Ｋｆの褐色粘着性塊を得た。次に
７０Ｑの■ｎｏｖｅｘ　５０　’ｖｔｘ　２　（Ｅｌｌ
ｆｆｉ）陽イオン交換体への吸１着を水性媒質中で行い
。

その負荷された交換体を純水で洗浄し、そして阻害剤を
α５Ｍ水酸化アンモニウム溶液を用いて脱着した。ヱン
ケファリナーゼ阻害性を示す溶出液を集めそして凍結乾
燥した（３．５に９）。同様の手ｊ＠で７０Ｑの■Ａ！
＋ｂｅｒｌｉｔｅ工ＲＡ−６８陰イオン交換体にかけて
両性化合物をこれより分離した。この場合には、エンカ
スチン類はα５Ｍ酢酸で溶出した。阻害活性を有する溶
出液を凍結乾燥して３２０ｆの乾燥物を得た。■５ｅｐ
ｈａｄθＸＧ−１５でのゲルクロマトグラフィにかけそ
して活性物質を凍結乾燥して３０りの粗製エンカスチン
複合体を得た。

実施例　３ エンカスチン成分の分画 実施例２の如くして得られた物質１５０ηを１−の水に
溶解し、そしてその溶液をＲＰ−１８逆相シリカゲルで
充填されたスチールカラム（内側寸法五２ｃｍＸ２５α
）にかけた。溶出はまずα０５Ｘ強度トリフルオロ酢酸
（ＴＩＰＡ）を用いて行い１次いで４０分間のランニン
グ時間後、０．０５％強度ＴＦＡ中のアセトニトリルの
直線濃度勾配を用いて行った。カラムからの溶出液は２
〇−における紫外線吸収の測定によりモニターした。

多数のはつきシと（シャープに）分離された物質が溶出
中にカラムから溶出され、そしてこれらの各々を個別に
集めた。それらを凍結乾燥しそして検査した。ピーク２
．５．４．５．７．８．１１．１３．１６．１８および
２１がエンケファリナーゼ阻害活性を有していることが
判明した。

ピーク３（保持時間５分８秒）は、エンカスチンＡＤを
含有した。アミノ酸分析により１等モル量のアラニンと
アスパラギン酸の存在が確認された。ＦＡＢマススＲク
トルによ〕測定された分子量は３６６であり、その相当
する分子式はＣＩ！１Ｈ２２Ｎ２０１０であった。上述
の構造は、２Ｄ４ＪＲ測定によシ決定された。

ピーク４（保持時間５分２１秒）は、少量の分子量３９
４を有するエンカスチンＶＤ（分子式０１５Ｅ！２６Ｎ
２０１０に相当する）を与えた。第１図はエンカスチン
ＶＤ（７）　２７　ｏ　ＭＨｇｌｔＨ−ＮＭＲｘ　−？
　Ｉ　）　ルを示す。

ピーク７（保持時間７分２０秒）は、分子量３８０、分
子式Ｃ１ｎＨ２４Ｎ２０１ｏのエンカスチンＡＰを含有
した。

ピーク１１（保持時間８分１０秒）は、分子量４０８．
０１６Ｈ２８Ｎ２０ｆＯを有し、そしてアミノ酸Ｖａｌ
およびＧｌｕを有するエンカスチンＶＢを与え、そして
ピーク１３（保持時間１８分４０秒）は。

分子量４０８、Ｃ１５Ｈ２８Ｎ２０１０を有し、工１ｅ
およびＡｓｐをアミノ酸として有するエンカスチンＩＤ
を与えた。ピーク１６（、保持時間２２分）は分子量４
２２、ｃｉ　７ａｓｒｙ２ｏ１ｏのエンカスチン類Ｅを
含有した。

実施例　４ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
イソロイシルアスパラギン酸の合成５０ｆの無水Ｄ−グ
ルコースを１．２Ｑのメタノールに３２のインロイシル
−アスパラギン酸と共に溶解し、そして２００岬のＮａ
　Ｈｅ　Ｏ５を添加した。その混合物を次に２時間還流
加熱した。次いで生じた水をブタノールと共に蒸留する
ことによって除去し、そしてその反応混合物をメタノー
ルで希釈しそして再び２時間加熱した。反応完了後、そ
の溶液から溶媒を真空除去し、そして残留物を３００−
の水にとって、　ＱＡＥｌｉ−■８ｅｐｈａ−ｄｓｘ　
Ａ−２５で充填された６０〇−容クロマトグラフイーカ
ラム（直径５個）にかけた。過剰のグルコースが初留に
所在したが、酢酸濃度勾配（０〜０．５　Ｍ　）を用い
てＮ−（１−デオキシフラクトピラノースー１−イル）
−イソロイシルアスパラギン酸を選択的に得ることがで
きた。カラムからのこれらの溶出液を集め凍結乾燥した
。

収量：　７２０”Ｆの白色無定形粉末。

Ｉ　Ｅｌ−ＮＭＲスはクトル（ｐＴ）ｍ〕：４．４３：
　２．６９：　　２Ｊ８：　五８４：１．９３：　１．
５０：　１．２６：　０．９３および０．８９　　およ
び分子のはプチド部分に起因して五９３：　Ｘ９１：　
３．７９：五６６；五６５：　３．１７：および３ｊ４
（阻害剤のグリカン部よシ）（天然エンカスチンＸＤ化
合物のシグナルに相当）。

”Ｃ！ＮＭＲスペクトル（ｐｐｍ）　：　５４Ａ５：　
４Ｑ、４９：　６６．７９：　３７．１３：　２Ａ１２
：　１４Ａ１および１１７５　（はブチド部分）および
９＆５５：　７０．９１：　７Ｑ、４［１：　６９．９
６：　６４８７および５五４３（グリカン部分）。

赤外線吸収スはクトルは、　　３４００　、２９２０　
、２８６０　。

１５？５．１４００および１０８０口　に吸収帯を示す
。

実施例　５ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
フェニルアラニルーアス／！！？キン酸の合成 ２００１１Ｐのフェニルアラニル−アスパラギン酸ｔ−
１，５ｆのＤ−グルコースと共に１００−のメタノール
に懸濁し、２０１９のＭａＨＯＯ３を添加し、そしてそ
の混合物を２時間沸騰させた。次にその反応混合物を、
実施例４に記載した如くに、更に処理しＱＡＩＣ％ｅｐ
ｈａａｅｘ　Ａ−２５カラム（１，８ｃ＋＋＋Ｘ２３　
ｃｍ、　６０ｍ）で精製し１次いで塩を除去した。

２６８１のＭ−（１−デオキシフラクトピラノース−１
−イル）−フェニルアラニル−アスパラギン酸が得られ
た。

エンカスチンＦＤの２７０ＭＨｇ　ＩＨ−ＮＭＲスはク
トル（Ｄ２０）：五０３：　２．９６：五６５：五８１
；五９４；五９９；五６７：　３８４：五１７：　３０
８：　７．５６：　４．４３：　２．７１：訪１ｉ’Ｐ
Ｉｌ。

実施例　６ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
イソロイシル−セリンの合成 ２００岬のイソロイシル−セリンを１．５ｆのＤ−グル
コースと反応させ、そして反応生成物を実施例５に記載
したとおり精製した。１２′ｑのＮ−（１−デオキシフ
ラクトピラノース−１−イル）　−Ｉｃｅ　−Ｂｅｒ−
ＯＨが生成した。その構造は化学的および分光学的検査
により確認された。

エンカスチンエ日の２７０ＭＨｚ　　’Ｈ−ＮＭＲＸＩ
クトル（Ｄ２０）　：五３８：　　五３４；　　五８５
：　　五９８：　　４．１５：　４．０９：　　五８２
：　４．４５：４．００　：　　工９５：　五９７：　
　２．１５：　　１．０８：　　１．７９：　　１．４
！ｌ：　　１．０６　ｐｐｍ０実施例　７ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
インロイシル−アスパラギンの合成３０ＯＮｌのインロ
イシルーアスノぞラギンを１．５２のＤ−グルコースと
反応させ、そして反応生成物を実施例５に記載の如く精
製した。９０ＭＩのＭ−（１−デオキシ７ラクトピラノ
ースー１−イル）　−ｘｌｓ−ム８ｎが生成された。

２７０　ＭＨＭＩ　Ｈ−ＮＭＲスはクトル（Ｄ２０）　
　は次のエンカスチンエＮＫ４１Ｆ有なシグナルを示す
：　ＸＯＳ：４．０７：五９５：　１７９：　４．０８
および五７８　ｐｐｍおよび五６０：　１．８９：　１
．５３：　１．２８：α９７；および０．９３　ｐｐｍ
更には４．５４：　２Ｊ４および２．６９　ｐｐｍ　。

実施例　８ Ｎ−（１−デオキシ７ラトピラノースー１−イル）−パ
リルーアスノラギン酸の合成 実施例５に記載の如＜、１５０９のパリルーアスノソラ
ギン酸と１２のガラクトースと反応させ、そして精製し
た。２２ＩＩＰの■−（１−デオキシタガトビ２ノース
−１−イル）−パリルーアス／ぞラギン酸が得られた。

Ｄ２０中で測定した２７０ＭＨＩ！　１Ｈ−ＮＭＲＸＪ
クトルは次のシグナルを示す：五１６：五１７：　４．
０２：五９１：　２．／ｉ８：工６６；および易６　ｐ
ｐｍおよび２ノ３：　２．２２：　１．０９および１．
０５　ｐｐｍ更に４．５６：　２Ｂ１および２，６０　
ｐｐｍ　０実施例　９ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｄ−バリンの合成 １０ｆの無水Ｄ−バリンおよび７５Ｆの無水Ｄ−グルコ
ースを５００−の乾燥メタノール。

１００−のりメチルスルホキシドおよび１５０−のピリ
ジンの混合物に溶解し、そしてその溶液を２．５時間還
流煮沸した。この時間後、蜂蜜色の反応溶液を回転蒸発
器で真空濃縮して、メタノールおよび反応中に生じた水
を除去した。なおもピリジンを含有するその濃縮液を水
分を排除しつつ室温に一夜放置して反応を完了させた。

生成物は、反応混合物を水に溶解し、その−を水酸化ナ
トリウム溶、液で９に調節し、そしてその溶液をｐＨ９
で平衡させて調製された％ｖ−日ｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆ
Ｆカラム（５ｃｌＲ×５０ｃＩｆＩ）にかけることによ
シ精製した。次にそのイオン交換体をまずα１％酢酸ア
ンモニウム溶液（ｐＨ９，０）で洗浄し、次いでα２Ｍ
酢酸濃度勾配を適用した。

カラムからの溶出液を画分として集め、それら面分を個
別に検査し九。５．３〜５．５の…を有する両分が新た
に合成された阻害剤を純粋な形で含■ 有した。それらを合一し乾燥した。　Ｅｌｅｐｈａｄｅ
ｘＧ−１５分子ふるいを用いて塩を除去し塩不含生成物
を得た。水−メタノールから結晶化させて７ｆのＮ−（
１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−Ｄ−バ
リンを得た。融点１２５〜１２６℃。

実施例　１Ｏ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｄ−インロイシンの合成 ４０−のメタノールと１０−のピリジンとの乾燥混合物
を５００ｑの無水グルコースと共に１００１１１Ｐの乾
燥Ｄ−インロイシンに添加し、そして実施例９と同様で
おるがよシ小容のクロマトグラフィーカラムを用いて１
反応および精製を行った。最終生成物の結晶化により１
１０岬のＮ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−
イル）−Ｄ−インロイシンヲ得り。

融点１４２〜１４４℃。

実施例　１１ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｄ−パリルーアスノぞラギン酸の合成３００−のピリジ
ンと３Ｑのメタノールを１０ｆのＤ−ノｚリルーアスパ
ラギン酸および５Ｃ１ｆの無水Ｄ−グルコースに添加し
、そしてその攪拌混合物を２．５時間沸騰させた。この
間に反応成分は徐々に溶解し、そして反応混合物は黄金
色を呈した。反応完了後、その混合物を真空濃縮し、そ
して実施例９の記載の如く更に処理した。凍結乾燥によ
シ１３．５りの無定形Ｎ−（１−デオキシフラクトピラ
ノース−２−イル）−り一パリルーアスパラギン酸を得
た。第２図はエンカスチンＤ（ＶＤ）の２７０　ＭＨｚ
　Ｉ　Ｆｌ−ＮＭＲスはクトル（Ｄ２０）を示す。

実施例　１２ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｔ）−イソロイシルーアスノぐラギン酸の合成 実施例１０の記載と同様にして、１ｆのＤ−インロイシ
ルーアスノでラギン酸を１００−のメタノールおよび１
ｐ−のピリジン中で５２のＤ−グルコースと反応させ、
精製した。凍結乾燥により７９０”９の純粋な無定形物
質が得られた。

エンカスチンＣＤ）よりの２７０　ＭＨ；３１Ｈ−４１
ＭＲスはクトル（Ｄ２０）を第５図に示す。

実施例　１３ モノーｔｅｒｔ−ブチルＮ−（１−デオキシフラクトピ
ラノース−１−イル）−イソロイシル−アスパルテート
の合成 実施例１１の記載と同様にして、７ｆのモノ−ｔａｒｔ
−ブチＡイソロイシルーアスパルテートの反応および精
製を行った。得られた凍結乾燥生成物は５．８Ｆの無定
形モノ−ｔａｒｔ−ブチルＮ−（１−デオキシフラクト
ピラノース−１−イル）−イソロイシル−アスパルテー
トであった。

エンカスチンより一０ｔＢｕの工Ｒスぼクトルヲ第４図
に示す。

実施例　１４ Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル）−
Ｄ−ヘキサヒドロフェニルグリシル−アスパラギン酸の
合成 実施例１０の記載と同様にして、３００岬のＤ−ヘキサ
ヒドロフェニルグリシルーアスノξラギン酸（Ｄ−Ｅｉ
ｈｐ−Ａｓｐ　）を１．５ｆのグルコースと反応させた
。２６０ｒａｙの無定形上−（１−デオキシフラクトピ
ラノース−１−イル）　−Ｄ　−Ｈｈｐ　−Ａｌｌｉｐ
が得られた。

その工ＲスＲクトルを第５図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例３で得たエンカスチンＶＤ（Ｆｒｕ−
Ｖａｌ−Ａ８Ｐ　）のＩ　Ｅｉ−ＮＭＲスはクトルであ
り；第２図は、実施例１１で得たエンカスチン（Ｄ）Ｖ
Ｄ　（Ｆｒｕ−Ｄ−’７ａｌ−Ａｓｐ）のＩ　Ｈ−ＮＭ
Ｒスはクトルであり　　； 第３図は、実施例１２で得たエンカスチン（Ｄ）より（
Ｆｒｕ−Ｄ−工１ｅ−Ａｓｐ）のＩ　Ｈ−ＮＭＲスペク
トルであり： 第４図は、実施例１゜５で得たエンカスチンより一０ｔ
Ｂｕ　（Ｆｒｕ−工１ｅ−Ａｓｐ−ＯｔＢｕ　）　　の
工Ｒスズクトルであり； 第５図は、実施例１４で得た（　Ｆｒｕ−Ｄ−Ｈｈｐ−
Ａｓｐ　）の工Ｒスはクトルである。 Ｉ　Ｆｌ−ＮＭＲスはクトルはＤ２０中２７０　Ｍｎ２
で測定した。 工ＲスぼクトルはＫＢｒディスク中で測定されたＦＴＩ
Ｒ（フーリエ変換赤外線）吸収スにクトルである。 特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名 手　　続　　補　　正　　書 昭和６３年５月２５日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I Ｓａｃｃｈ−Ａ−Ｂ−Ｒ（ I ） 〔式中、Ｓａｃｃｈは単糖類残基を表わし、そしてその
   ＯＨ基は、必要な場合には部分的にまたは完全に置換さ
   れており、 Ａは、中性Ｌ−またはＤ−アミノ酸の残基を表わし、ま
   たは、Ｂが存在しないときは中性Ｄ−アミノ酸の残基を
   表わし、 Ｂは、存在しないか、または中性Ｌ−またはＤ−アミノ
   酸の、または場合によつてはω−置換された二官能性の
   酸性または塩基性Ｌ−またはＤ−アミノ酸の残基を表わ
   し、そしてＲはヒドロキシル、（Ｃ＿１〜Ｃ＿８）−ア
   ルコキシ、場合によつては（Ｃ＿１〜Ｃ＿８）−アルキ
   ル、（Ｃ＿５〜Ｃ＿８）−シクロアルキル、（Ｃ＿５〜
   Ｃ＿８）−ヘテロアルキルまたは（Ｃ＿５〜Ｃ＿８）−
   ヘテロアリールより成る群より選択される１または２個
   の同一のまたは異なる基により置換されているアミノ基
   または他の酸誘導体を表わす〕 で示される化合物またはその生理学的に許容し得る塩〔
   ただし化合物Ｎ−（１−デオキシ−β−Ｄ−フラクトピ
   ラノース−１−イル）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＮ
   −（１−デオキシ−β−Ｄ−フラクトピラノース−１−
   イル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−ＯＨを除く）。 ２）Ｓａｃｃｈがアルドヘキソースまたはケトヘキソー
   スまたはそれらの誘導体の残基であり、ＡがＩｌｅ、Ｐ
   ｈｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｃｙ
   ｓ、Ａｌａまたはヘキサヒドロフエニルグリシン（Ｈｈ
   ｐ）（各々Ｌ体またはＤ体である）を表わすか、または
   （Ｂが存在しないときは）Ｄ体の前記残基のいずれかを
   表わし、Ｂが存在しないかまたはＡｓｐ、Ａｓｘ、Ｇｌ
   ｕ、Ｇｌｘ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＧｌｙ（各々Ｌ体ま
   たはＤ体である）を表わし、そして Ｒがヒドロキシルまたは▲数式、化学式、表等がありま
   す▼を表わす請 求項１に記載の式 I の化合物およびその生理学的に許
   容し得る塩（ただし化合物Ｎ−（１−デオキシ−β−Ｄ
   −フラクトピラノース−１−イル）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
   ＯＨおよびＮ−（１−デオキシ−β−Ｄ−フラクトピラ
   ノース−１−イル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒを除く）。 ３）Ｓａｃｃｈがフラクトシルまたはその誘導体を表わ
   し、 ＡがＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、Ａｌａ
   またはＨｈｐ（各々Ｌ体またはＤ体である）であるか、
   または（Ｂが存在しないときは）Ｄ体の前記残基のいず
   れかを表わし、 Ｂが存在しないか、またはＡｓｐ、Ａｓｘ、Ｇｌｕまた
   はＳｅｒ（各々Ｌ体またはＤ体である）であり、そして Ｒがヒドロキシルを表わす請求項１または２記載の式
   I の化合物およびその生理学的に許容し得る塩。 ４）Ｓａｃｃｈがフラクトシルまたはその誘導体を表わ
   し、 ＡがＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ＣｙｓまたはＨｈｐ（各
   各Ｄ体である）を表わし、 ＢがＡｓｐ、Ａｓｘ、ＧｌｕまたはＳｅｒ（各々Ｌ体ま
   たはＤ体である）を表わし、そして Ｒがヒドロキシルを表わす、請求項１〜３のいずれかに
   記載の式 I の化合物、およびその生理学的に許容し得
   る塩。 ５）Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル
   ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｓｐおよびその生理学的に許容し得
   る塩。 ６）Ｎ−（１−デオキシフラクトピラノース−１−イル
   ）−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｓｐおよびその生理学的に許容し得
   る塩。 ７）Ａ） ａ）ストレプトマイセス・アルバス（Ｓｔｒｅｐｔｏ−
   ｍｙｃｅｓ　ａｌｂｕｓ）（ＡＴＣＣ２１８３８）およ
   びその変異株および突然変異株を栄養培地中で、式 I 〔式中ＳａｃｃｈはＮ−（１−デオキシフラクトピ
   ラノース−１−イル）残基を表わし、ＡはＡｌａ、Ｌｅ
   ｕ、ＶａｌまたはＩｌｅを表わし、ＢはＡｓｐまたはＧ
   ｌｕを表わし、そしてＲはヒドロキシルを表わす〕で示
   される化合物 が培養液中に蓄積するまで培養し、そして 必要な場合には、 ｂ）それを単離し、精製し、そして誘導体に導くことよ
   り成るか、 またはＢ） ａ）遊離Ｎ−末端アミノ基を有するアミノ酸を遊離Ｃ−
   末端カルボキシル基を有するア ミノ酸と縮合させ、必要な場合には、必要 によつて官能基を保護するために一時的に 導入された一つ以上の保護基を除去し、 ｂ）そのジペプチドを、または遊離Ｎ−末端アミノ基を
   有するアミノ酸を、アノマー中 心に遊離ヒドロキシル基を有する単糖類と を縮合させ、必要な場合には、必要によつ て官能基を保護するために一時的に導入さ れた一つ以上の保護基を除去し、 ｃ）得られるＮ−グリコシドを、必要な場合にはＡｍａ
   ｄｏｒｉ転位反応により、Ｎ−置換イソ−糖アミンに変
   え、 そして得られるエンカスチンを、必要な場合には、その
   生理学的に許容し得る塩またはその誘導体に変える（更
   にこれらの反応順序を相互に変更することも、またｂ）
   でアミノ酸を用いるときはａ）を省略することもできる
   ）ことより成る 式 I で示される化合物の製造方法。 ８）医薬として用いるための請求項１〜６のいずれかに
   記載の式 I の化合物。 ９）痛みを伴う症状を治療する医薬として用いるための
   請求項１〜６のいずれかに記載の式 I の化合物。 １０）請求項１〜６のいずれかに記載の式 I の化合物
   またはその生理学的に許容される塩を含有して成る薬学
   的組成物。 １１）式 I の化合物、またはその生理学的に許容し得
   る塩を、生理学的に許容し得るビヒクルおよび必要な場
   合には、更に添加剤、補助剤および／または保存剤と共
   に、適当な剤型に変えることより成る請求項１０に記載
   の組成物の製造方法。