JP3026862B2 - 新規アントラサイクリン化合物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗腫瘍作用を有する新規
なアントラサイクリン系化合物に関する。さらに詳しく
は、下記式

【０００２】

【化１０】

【０００３】式中、Ｒは水素原子またはダウノサミニル
基を表わす、で示される化合物およびその塩並びにそれ
らの製造法に関する。

【０００４】

【従来の技術および課題】抗腫瘍作用をもつアントラサ
イクリン系の化合物として、従来、ダウノマイシン（米
国特許第３，６１６，２４２号明細書参照）及びアドリ
アマイシン（米国特許第３，５９０，０２８号明細書参
照）が知られており、これらの化合物は臨床的に広く用
いられているが、心毒性、骨髄抑制作用等の重篤な副作
用があるため、抗腫瘍剤として決して満足できるもので
はない。

【０００５】 そのため、かかる副作用が少なく且つ抗
腫瘍作用の優れた薬剤の開発が強く望まれており、従来
から、酸酵法、微生物変換法、化学合成法等の各種の手
段で創製されたアントラサイクリン系化合物が幾つか提
案されている。例えば、アクラシノマイシンＡ及びＢ
（特公昭５１−３４９１４号公報参照）、ロドマイシン
群抗生物質（特開昭５６−１５２９９号公報参照）、４
−Ｏ−テトラヒドロピラニルアドリアマイシン（特公昭
５７−１３５５８号公報参照）等がその例である。さら
にまた、ダウノマイシン及びアドリアマイシンの誘導体
についてはＴｏｐｉｃｓ ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ． １２、１０２〜２７
９頁（Ｅｌｌｉｓ Ｈｏｒｗｏｏｄ Ｌｉｍｉｔｅｄ
発行）及びＴｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｎｔ
ｉｔｕｍｏｒＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， Ｖｏｌ．
１、６３〜１３２頁（Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅ
ｎｃｅ 発行）に紹介されている。

【０００６】抗腫瘍剤としてのアントラサイクリン系抗
生物質には、前記の如く各種の類縁化合物が提案され、
その中には既に臨床的にも使用されているものや治験中
のものもある。しかしながら、それらは毒性、抗腫瘍作
用のいずれの面でも充分に満足できるものではない。

【０００７】しかも抗腫瘍剤は試験管内試験及び動物実
験の成績が必ずしもヒト癌に対する制癌作用と直接相関
しないことが多く、多角的な研究が要求される。そのた
め抗腫瘍剤として一応の評価がなされているアントラサ
イクリン系抗生物質についても、臨床薬としてさらに有
効な新薬の開発が強く望まれているというのが実情であ
る。

【０００８】一方、一般的にアントラサイクリン系抗生
物質は、４位の水酸基をメチル化するとその毒性が低下
するといわれており、微生物変換による特異的な４−Ｏ
−メチル化についてはすでに知られている（特開平３−
１７０９３号公報参照）。しかしβ−ロドマイシノング
リコシドあるいはβ−ロドマイシノンにおいては、４−
Ｏ−メチル化と同時に９位のエチル基を１−ヒドロキシ
エチル基に変換することは従来知られていない。

【０００９】本発明者らは、アントラサイクリン系抗生
物質は一般に４位の水酸基をメチル化すると毒性が低下
するという現象があることに着目し、各種のアントラサ
イクリン系化合物の４−Ｏ−メチル化について鋭意研究
を行なっている程度で、ストレプトマイセス属に属する
或る種の微生物がβ−ロドマイシノンまたはβ−ロドマ
イシノングリコシドの４−Ｏ−メチル化と同時に９位の
エチル基を１−ヒドロキシエチル基に変換する能力を有
することを見い出し、該微生物を用いることにより、低
毒性で且つ抗腫瘍作用に優れた前記式（Ｉ）の化合物を
製造することに成功し、本発明を完成するに至った。

【００１０】

【発明の開示】本発明により提供される前記式（Ｉ）の
化合物には次の２種の化合物が包含される。

【００１１】

【化１１】

【００１２】（以下、この化合物をＭＣ−７と称する）

【００１３】

【化１２】

【００１４】 本発明の式（Ｉ）の化合物のうち、ＭＣ
−７は、塩基性のアミノ糖を含有するため、薬理学的に
許容しうる酸付加塩の形で存在することができ、そのよ
うな酸付加塩の例には、硫酸、塩酸、硝酸などの無機酸
との塩；酢酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマール
酸、マレイン酸、プロピオン酸、リンゴ酸、シュウ酸、
ステアリン酸、リノレイン酸、ラウリルスルホン酸なで
の有機酸との塩；グルタミン酸、アスパラギン酸等のア
ミノ酸との塩；パントテン酸塩、アスコルビン酸塩等が
挙げられる。

【００１５】本発明の前記式（Ｉ）の化合物は、それ自
体優れた抗腫瘍活性を有し抗腫瘍剤としての有用性が期
待されるのみならず、糖鎖の結合、低分子又は高分子活
性物質との結合等の化学的修飾を施しさらに活性の高い
誘導体を合成するための中間体としても有用である。

【００１６】本発明の前記式（Ｉ）の化合物のうちＭＣ
−７は例えば、下記式

【００１７】

【化１３】

【００１８】で示される化合物を基質とし、４−Ｏ−メ
チル化と同時に９位のエチル基を１−ヒドロキシエチル
基に水酸化する能力（以下、４Ｍ９Ｈ化能と称する）を
有する微生物を培養することにより製造することができ
る。

【００１９】出発原料として使用される上記式（ＩＩ）
の化合物、すなわちオキサノマイシンは、例えば、オキ
サノマイシン生産菌として提案されているストレプトミ
セス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）
Ｄ７８８、ＲＰＭ−５（ＦＥＲＭ Ｐ−７７０３，ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−８１１）を培養することにより調製するこ
とができる（特開昭６１−３３１９４号公報参照）。

【００２０】 また、４Ｍ９Ｈ化能を有する微生物は、
例えば、ストレプトミセス属に属するダウノマイシン、
カルミノマイシン又はバウマイシン類及びその類縁化合
物を生産する能力を有する微生物菌株（これは新たに土
壌から分離した菌株であってもよく、或いは公知菌株で
あってもよい）を、変異源として例えば紫外線又はＮ−
メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）を用いる通常の変異処理に付し、そしてアントラサ
イクリン系色素非生産性で且つ前記式（ＩＩ）の化合物
の４Ｍ９Ｈ化能を有する変異菌株を単離することにより
取得することができる。

【００２１】そのような４Ｍ９Ｈ化能を有する微生物変
異菌株の具体例には、特開昭３−１７０９３号公報に記
載されたアントラサイクリン系抗生物質ＭＣ−１および
ＭＣ−４を製造するためのストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｄ７８８、ＤＫＮ
−１菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６４３）などが挙げられ
る。

【００２２】以下に上記ストレプトミセス・エスピーＤ
７８８、ＤＫＮ−１菌株の菌学的性状を示す。

【００２３】（ｉ） 形態 分枝した基中菌糸より、直線状の気中菌糸を伸長し、輪
生枝は認められない。成熟した胞子鎖は１０ヶ以上の胞
子の連鎖が認められ胞子の大きさは０．６〜０．８×
０．９〜２．５ミクロン位で胞子の表面は平滑である。
子のう胞子、硬毛胞子などは認められない。

【００２４】（ｉｉ） 各種培地における生育状態 下記第１表に示す。色の記載について（ ）内に示す標
準はＨ．Ｄ．Ｔｒｅｓｎｅｒ ＆ Ｅ．Ｊ．Ｂａｃｋｕ
ｓ著、Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｃｏｌｏｒ Ｗｈｅｅｌｓ
ｆｏｒ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｔａｘｏｎｏｍ
ｙ （Ｊ．Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．， １１
巻、３３５〜３３８頁、１９６３年）を用い、補足的に
日本色彩研究所出版の「色の標準」を用いた。

【００２５】

【表１】

【００２６】（ｉｉｉ） 生理的性質 （１）生育温度範囲（イースト、麦芽寒天培地を使用、
ｐＨ６．０で２０℃、２８℃、３３℃、３７℃、４２℃
の各温度で実験）：２０℃〜３７℃までは生育が認めら
れた。

【００２７】（２）ゼラチンの液化（グルコース、ペプ
トン、ゼラチン培地を使用し、２０℃で培養）：陽性 （３）スターチの加水分解（スターチ、無機塩寒天培
地）：陽性 （４）脱脂牛乳の凝固及びペプトン化：僅かに凝固及び
ペプトン化は陽性 （５）メラニン様色素の生成（トリプトン、イーストエ
キス、鉄寒天培地）：陽性 （ｉｖ） 各種炭素源の利用性（プリドハム、マドリー
ブ寒天培地上）＊： Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ± シユクローズ ± イノシトール ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラフイノース ± Ｄ−マンニツト ± ＊ ＋は良く生育 ±僅かに生育 本発明の式（Ｉ−ａ）の化合物、すなわちＭＣ−７は、
上記の４Ｍ９Ｈ化能を有する微生物を用いて、例えば、
次のようにして式（ＩＩ）の化合物から直接製造するこ
とができる。

【００２８】先ず、ＹＳ寒天斜面培地で培養しそして約
６〜７℃で保存された上記４Ｍ９Ｈ化能を有する菌株、
例えばＤＫＮ−１菌株を、例えば炭素源としてデンプ
ン、グリセリン、グルコース、マルトーズなど；窒素源
として大豆粉、肉エキス、酵母エキス、ペプトン、コー
ンスチープリカー、綿実粕、魚粉などの窒素含有有機物
及び／又は硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸
ナトリウム或いはリン酸アンモニウムなどの無機体窒
素；及び無機塩類よりなる培地に接種し、２５〜３５
℃、好ましくは約２８℃で１〜５日間、好ましくは約３
日間振盪又は撹拌培養を行い、これに基質として前記式
（ＩＩ）の化合物のメタノール溶液を最終濃度が１０〜
５００μｇ／ｍｌ、好ましくは約５０μｇ／ｍｌとなる
ように添加し、更に１〜３日間、好ましくは約１日間振
盪培養を続けて微生物変換を完結せしめる。なお、酸酵
中の発泡を抑制するため、消泡剤としてアデカノール
（旭電化工業社製）、シリコーン（信越化学工業社製）
等を適宜添加することができる。

【００２９】この培養物よりＭＣ−７を採取するには、
例えば培養液を菌体と濾液に分離し、菌体及び濾液から
該化合物を含有する粗色素の抽出、精製を行う。抽出は
例えばアセトン、メタノール、クロロホルム、酢酸エチ
ル、トルエン、薄い鉱酸、酸性緩衝液等を用いて行なう
ことができる。精製はシリカゲル、交叉結合デキストラ
ンゲル［例えば、セファテックスＬＨ−２０（ファルマ
シア社製）］、弱酸性イオン交換樹脂、その他合成吸着
樹脂［例えば、ＨＰ−２０（三菱化成社製）］等を用い
るカラム及び薄層クロマトグラフィー、適当な溶媒を用
いた液体クロマトグラフィー及び向流分配法等の常法を
適宜組み合わせることにより有利に行うことができる。

【００３０】また、本発明の前記式（Ｉ）の化合物のう
ち、ＭＣ−７は、例えば下記式

【００３１】

【化１４】

【００３２】で示されるβ−ロドマイシノンを基質と
し、４−Ｏ−メチル化、９位のエチル基の１−ヒドロキ
シエチル基への水酸化及び１位のダウノサミニル化を同
時に行う能力を有する微生物を培養することによっても
製造することができる。

【００３３】そのような能力を有する微生物の具体例に
は、上記の微生物ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｄ７８８、ＤＫＮ−１菌
株（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６４３）が挙げられる。基質の
添加量、添加法、培養法および生成物の精製法は、上記
と同様とすることができる。

【００３４】上記の方法で出発原料として使用されるβ
−ロドマイシノンはそれ自体既知の化合物であり、例え
ば以下に揚げる文献に記載の方法に準じて製造すること
ができる。

【００３５】（１） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ，３９（７）、９０２〜９０９、１９８
６ （Ｏｘａｕｎｏｍｙｃｉｎ） （２） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３６（８）、１０８０〜１０８３、１９８３（Ｄｉ
ｔｒｉｓａｒｕｂｉｃｉｎｓ Ａ、Ｂａｎｄ Ｃ） （３） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，４０（１）、１１６〜１２１、１９８７（Ａ４４７
Ｃ ａｎｄ Ｄ） （４） Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ．，（１
０）、９４９〜９５３、１９８８ （５） Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１１３（９）、２９７６
〜２９９３、１９８０ （６） Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，９６、１３５６〜１３７
２、１９６３ かくして得られる本発明の式（Ｉ−ａ）の化合物（ＭＣ
−７）は、必要に応じて、それ自体既知の方法により、
前述した如き無毒性の酸と適当な溶媒中で反応させ、凍
結乾燥するか、又は酸付加塩が僅かしか溶けない溶媒を
用いて沈殿させる方法等により酸付加塩に変えることが
できる。

【００３６】一方、本発明の前記式（Ｉ−ｂ）の化合物
は、上記の如くして製造される式（Ｉ−ａ）の化合物
（ＭＣ−７）を、通常の加水分解に付すことにより製造
することができる。例えば、式（Ｉ−ａ）の化合物を希
塩酸に溶解し、加熱して加水分解した後、生成する式
（Ｉ−ｂ）の化合物をクロロホルム、酢酸エチル、トル
エン、クロロホルム−メタノール混液等の有機溶媒で抽
出することにより製造することができる。上記の加水分
解は一般に約８０〜１００℃、好ましくは８０℃付近の
温度で約０．５〜２時間行なうことができる。

【００３７】かくして得られる式（Ｉ−ｂ）の化合物
は、前述した如く、アントラサイクリン系抗生物質の合
成中間体または微生物学的変換の前駆体として有用であ
る。

【００３８】例えば、“Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”， ｅｄ．ｂｙ
Ｐ．Ｇ．Ｓａｍｍｅｓ， Ｖｏｌ．２， Ｅｌｌｉｓ
Ｈｏｒｗｏｏｄ， Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ， Ｅｎｇｌ
ａｎｄ， ９９〜２３９（１９７８）の記載の方法に準
じてグリコシル化することにより種々のアントラサイク
リングリコシド類に誘導することができ、かかるグリコ
シド誘導体は該文献の記載例からも明らかなごとく、Ａ
環が飽和したナフタセンジオン骨核を有する構造上の特
徴から、優れた制癌剤を示す蓋然性が高い。

【００３９】本発明の式（Ｉ−ａ）の化合物は以下に示
す試験によって明らかなとおり、優れた抗腫瘍活性を有
しており、抗腫瘍剤としての有用性が期待される。

【００４０】マウス白血病Ｌ１２１０培養細胞に対する
増殖及び核酸合成阻害作用 ２０％子牛血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬
社製）にＬ１２１０細胞を５×１０⁴ヶ／ｍｌ接種し、
これに本発明の被験化合物を最終濃度０．００５〜１
０．０μｇ／ｍｌになるように添加し、３７℃にて炭酸
ガス培養器中（３．５％炭酸ガス混入空気）で２日間培
養し、無添加の対照区に対する５０％増殖阻害濃度を求
めた。更に、上記のＬ１２１０培養細胞を１０％子牛血
清を含むＲＰＭＩ１６１０培地へ５×１０⁵ヶ／ｍｌと
なるように懸濁し、３７℃にて炭酸ガス培養器中で１時
間培養を行った後、本発明の化合物を０．１〜１００μ
ｇ／ｍｌになるように添加し、１５分後更に¹⁴Ｃ−ウリ
ジン（０．０５μＣ／ｍｌ）または¹⁴Ｃ−チミジン
（０．０５μｇ／ｍｌ）を添加して、直ちに３７℃で６
０分間培養した。

【００４１】 次いで、培養液に冷１０％トリクロロ酢
酸（ＴＣＡ）を添加して反応を中止すると同時に、酸不
溶物として培養細胞を沈殿させた。冷５％ＴＣＡにて沈
殿物を２回洗浄した後、ギ酸に溶解、放射活性を測定し
た。かくして、無添加対照区に対する放射能取込み率か
ら５％取込み阻害を生ずる濃度を求めた。第２表にその
結果を示す。

【００４２】

【表２】 次に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

【００４３】

【実施例１】ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｄ７８８，ＤＫＮ−１（微工
研菌寄第１０６４３号）のＹＳ（０．３％酵母エキス、
１％可溶性デンプン、１．５％寒天、ｐＨ７．２）斜面
培養より一白金耳を採り、下記の種母培地１００ｍｌを
分注殺菌した５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、２８
℃、ロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ）にて、２日
間振盪培養して種母を作成した。

【００４４】種母培地 可溶性デンプン ０．５％ グルコース ０．５％ 大豆粉（エスサンミート、味の素社製） １．０％ 酵母エキス ０．１％ 食塩 ０．１％ 第二リン酸カリ ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．１％ 水道水 ｐＨ７．４（殺菌前） 次いで、下記組成の生産培地５０ｍｌを分注殺菌した５
００ｍｌ容三角フラスコに上記種母培養液１ｍｌ添加接
種した。

【００４５】生産培地 可溶性デンプン ５．０％ マルトーズ ３．０％ 乾燥酵母 ２．０％ 綿実粕 ２．０％ 魚粉 １．０％ 酵母エキス ０．２％ 食塩 ０．１％ 硫酸マグネシウム（７含水物） ０．１％ 炭酸カルシウム ０．２％ ミネラル溶液＊ ０．０５％ 水道水 ｐＨ７．０（殺菌前） ＊ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ２．８ｇ、ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ
０．４ｇ、ＭｎＣｌ₂・４Ｈ₂Ｏ ３．２ｇ、ＺｎＳＯ
₄・２Ｈ₂Ｏ ０．８ｇを蒸留水５００ｍｌに溶解した。

【００４６】１７０本のフラスコを用意し、２８℃で３
日間培養（２２０ｒｐｍ）したのち、これに基質として
オキサノマイシン（５ｍｇ／ｍｌ）を、フラスコ当り
０．５ｍｌ（基質量２．５ｍｇ）ずつ添加し、１日間培
養を継続した。

【００４７】培養液を回収し遠心操作にて菌体を分取し
た。これにアセトン５ｌを加え３０分間撹拌抽出したの
ち、濾過してアセトン抽出液を得た。およそ１．５ｌま
で濃縮したのち４Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを８．０に
調整し３ｌのクロロホルムで抽出した。この抽出液をお
よそ１００ｍｌまで濃縮し、過剰のｎ−ヘキサンを加え
て沈殿化した。沈殿物を減圧下で乾燥し、１２０ｍｇの
粗粉末を得た。

【００４８】得られた粗粉末全量をシリカゲル（Ｗａｋ
ｏｇｅｌ Ｃ−２００、２５ｇ）のカラム（Φ１６．５
ｍｍ）に吸着させ、クロロホルム−メタノール（１０：
１）及びクロロホルム−メタノール−水（１００：１
０：０．２〜１００：３０：０．５）の混液で順次溶出
させた。１００：３０：０．５の位置で溶出するＭＣ−
７を含有する分画を集め濃縮乾固した。次いで、乾固物
を少量のクロロホルム−メタノール混液（１０：１）に
溶解し、分取用薄層シリカゲルプレート（ＰＦ₂₅₄、メ
ルク社製）１０枚の下端から約２０ｍｍの位置に帯状に
吸着させ、クロロホルム−メタノール−水−酢酸−濃ア
ンモニア水の混液（１１０：５０：５：１：１）で展開
させた。ＭＣ−７のバンドをかき取りクロロホルム−メ
タノール混液（５：１）で溶出させ、水とトルエンを１
０ｍｌずつ加えて混合した。水層を分離しｐＨを８．０
に調整したのち、クロロホルム１０ｍｌで抽出した。飽
和食塩水５ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水したの
ち濃縮した。濃縮液に過剰のイソプロピルエーテルを添
加し、沈殿化したのち、乾燥してＭＣ−７を１１ｍｇ得
た。

【００４９】ＭＣ−７物質の物理化学的性状 （１）性状 赤褐色粉末 （２）融点 １８７〜１８９℃（分解） （４）ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ５４５（Ｍ^＋） （５）紫外及び可視部吸収スペクトル （６）赤外吸収スペクトル

【００５０】

【実施例２】実施例１で得られたＭＣ−７粉末の８ｍｇ
を０．１Ｎ塩酸に溶解し、８５℃にて１時間加水分解し
たのち、アグリコンをクロロホルム−メタノール（１
０：１）で抽出した。抽出液を水で洗浄後、濃縮し、過
剰のｎ−ヘキサンを加えて沈殿化し、乾燥してＭＣ−７
のアグリコン３ｍｇを得た。

【００５１】ＭＣ−７のアグリコン物質の物理化学的性
状 （１）性状 赤褐色粉末 （２）融点 ２４５〜２４８℃（分解） （４）ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ４３９（Ｍ＋Ｎａ） （５）紫外及び可視部吸収スペクトル （６）赤外吸収スペクトル

【００５２】

【実施例３】ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｄ７８８，ＤＫＮ−１（微工
研菌寄第１０６４３号）のＹＳ（０．３％酵母エキス、
１％可溶性デンプン、１．５％寒天、ｐＨ７．２）斜面
培養より一白金耳を採り、下記する種母培地１００ｍｌ
を分注殺菌した５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、２
８℃、ロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ）にて、２
日間振盪培養して種母を作成した。

【００５３】種母培地 可溶性デンプン ０．５％ グルコース ０．５％ 大豆粉（エスサンミート、味の素社製） １．０％ 酵母エキス ０．１％ 食塩 ０．１％ 第二リン酸カリ ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．１％ 水道水 ｐＨ７．４（殺菌前） 次いで、下記組成の生産培地５０ｍｌを分注殺菌した５
００ｍｌ容三角フラスコに上記種母培養液１ｍｌ添加接
種した。

【００５４】生産培地 可溶性デンプン ５．０％ マルトーズ ３．０％ 乾燥酵母 ２．０％ 綿実粕 ２．０％ 魚粉 １．０％ 酵母エキス ０．２％ 食塩 ０．１％ 硫酸マグネシウム（７含水物） ０．１％ 炭酸カルシウム ０．２％ ミネラル溶液＊ ０．０５％ 水道水 ｐＨ７．０（殺菌前） ＊ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ２．８ｇ、ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ
０．４ｇ、ＭｎＣｌ₂・４Ｈ₂Ｏ ３．２ｇ、ＺｎＳＯ
₄・２Ｈ₂Ｏ ０．８ｇを蒸留水５００ｍｌに溶解した。

【００５５】１５０本のフラスコを用意し、２８℃で３
日間培養（２２０ｒｐｍ）したのち、これに基質として
β−ロドマイシノン（５ｍｇ／ｍｌ）を、フラスコ当り
０．５ｍｌ（基質量２．５ｍｇ）ずつ添加し、１日間培
養を継続した。

【００５６】培養液を回収し遠心操作にて菌体を分取し
た。これにアセトン５ｌを加え３０分間撹拌抽出したの
ち、濾過してアセトン抽出液を得た。およそ１．５ｌま
で濃縮し、１ｌのクロロホルムで洗浄したのち４Ｎ水酸
化ナトリウムでｐＨを８．０に調整し３ｌのクロロホル
ムで抽出した。この抽出液をおよそ１００ｍｌまで濃縮
し、過剰のｎ−ヘキサンを加えて沈殿化した。沈殿物を
減圧下で乾燥し、８０ｍｇの粗粉末を得た。

【００５７】得られた粗粉末全量をシリカゲル（Ｗａｋ
ｏｇｅｌ Ｃ−２００、２５ｇ）のカラム（Φ１６．５
ｍｍ）に吸着させ、クロロホルム−メタノール（１０：
１）及びクロロホルム−メタノール−水（１００：１
０：０．２〜１００：３０：０．５）の混液で順次溶出
させた。１００：３０：０．５で溶出されたＭＣ−７を
含有する分画を集め濃縮乾固した。次いで、乾固物を少
量のクロロホルム−メタノール混液（１０：１）に溶解
し、分取用薄層シリカゲルプレート（ＰＦ₂₅₄、メルク
社製）８枚の下端から約２０ｍｍの位置に帯状に吸着さ
せ、クロロホルム−メタノール−水−酢酸−濃アンモニ
ア水の混液（１１０：５０：５：１：１）で展開させ
た。ＭＣ−７のバンドをかき取りクロロホルム−メタノ
ール混液（０：１）で溶出させ、水とトルエンを１０ｍ
ｌずつ加えて混合した。水層を分離しｐＨを８．０に調
整したのち、クロロホルム１０ｍｌで抽出した。飽和食
塩水５ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水したのち濃
縮した。濃縮液に過剰のイソプロピルエーテルを添加
し、沈殿化したのち、乾燥してＭＣ−７を７ｍｇ得た。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 29/00 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 岡本 六郎 神奈川県藤沢市花の木２−18 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07C 50/36 C12P 1/00 - 41/00 C07H 15/252 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 【化１】 式中、Ｒは水素原子またはダウノサミニル基を表わす、
   で示される化合物およびその塩。
2. 【請求項２】 アントラサイクリン系抗生物質の４−Ｏ
   −メチル化と同時に９位のエチル基を１−ヒドロキシエ
   チル基に水酸化する能力を有するストレプトミセス属に
   属する微生物を、式 【化２】 で示される化合物を含む培地で培養し、培養物から 【化３】 で示される化合物を採取し、そして必要に応じて、上記
   式（Ｉ−ａ）の化合物を加水分解して式 【化４】 で示される化合物に変えることを特徴とする請求項１に
   記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法。
3. 【請求項３】 アントラサイクリン系抗生物質の４−Ｏ
   −メチル化、９位のエチル基の１−ヒドロキシエチル基
   への水酸化および１位のダウノサミニル化を同時に行な
   う能力を有するストレプトミセス属に属する微生物を、
   式 【化５】 で示される化合物を含む培地で培養し、培養物から 【化６】 で示される化合物を採取し、そして必要に応じて、上記
   式（Ｉ−ａ）の化合物を加水分解して式 【化７】 で示される化合物に変えることを特徴とする請求項１記
   載の式（Ｉ）の化合物の製造方法。
4. 【請求項４】 式 【化８】 で示される化合物を加水分解することを特徴とする式 【化９】 で示される化合物の製造方法。