JP4542874B2 - フルクトシルジペプチド又はその塩 - Google Patents

Description

本発明は皮膚の老化防止又は改善効果や、発毛抑制効果を有する皮膚外用剤に関する。

しわ、たるみ、はりの減少等の皮膚老化は、加齢、乾燥、酸化、太陽光（紫外線）等の因子により引き起こされ、皮膚真皮におけるコラーゲンやエラスチンの減少、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類の減少、紫外線による細胞の損傷等により認知される。しかし、しわ発生防止等については、例えば、コラーゲン配合化粧料では充分な効果は得られていない。また、紫外線との関連性から紫外線照射により生じた皮膚の老化について種々研究されているが、未だに紫外線吸収剤、紫外線防御剤に代わる化粧料は開発されていない。

また、美的外観から特に手足等における体毛は無い方が好ましいとする傾向が高まり、各種の体毛除去方法、例えば、シェーバー、抜毛器等を用いる機械的除去方法、脱毛剤を用いた体毛を毛根から抜去する方法、除毛剤を用いてその化学的作用により体毛を除去する方法等が利用されている。しかしながら、これらの体毛除去方法は、皮膚に対して物理的又は化学的刺激を伴い、かつ、体毛除去の持続性には限界がある。そこで、体毛除去処理の軽減化が望まれている。

一方、フルクトシルジペプチド類は、例えばＦｒｕ−Ｉｌｅ−ＡｓｐやＦｒｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ等がエンケファリナーゼ阻害活性を有し、鎮痛剤となり得ることが報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかしながら、しわ発生等の皮膚老化を防止したり、発毛抑制作用を示すフルクトシルジペプチド類はこれまでに報告されていない。
特許第２６１０６４６号公報

本発明は、しわの発生等の皮膚老化の防止又は改善効果や、発毛抑制効果等を有する皮膚外用剤を提供することを目的とする。

本発明者は特定のフルクトシルジペプチド又はその塩が優れたしわの予防改善効果、発毛抑制効果等を有し、皮膚老化防止や発毛抑制を目的とした皮膚外用剤として有用であることを見出した。

すなわち本発明は、下記一般式（１）：
Ｆｒｕ−Ａ−Ｂ−Ｒ （１）
〔式中、Ｆｒｕはフルクトシル残基、Ａはバリン残基又はイソロイシン残基を示し、Ｂはチロシン残基、フェニルアラニン残基、バリン残基又はイソロイシン残基を示し、Ｒはヒドロキシ基又はメトキシ基を示す。〕
で表されるフルクトシルジペプチド又はその塩を提供するものである。

また本発明は、フルクトシルジペプチド又はその塩を含有する皮膚外用剤、発毛抑制剤及びしわ予防改善剤を提供するものである。

本発明の皮膚外用剤によれば、しわ発生等の皮膚老化の防止又は改善を図ることができ、また発毛が抑制され、体毛除去処理が軽減化できる。

本発明の一般式（１）で表されるフルクトシルジペプチドにおいて、Ｆｒｕはフルクトシル残基を示す。当該フルクトシル残基は、Ｄ体又はＬ体、α体又はβ体のいずれでもよく、フラノース型、ピラノース型のいずれでも良い。溶液中では、α体、β体、フラノース型、ピラノース型が相互に変換しあうので、それらの混合物となる。例えば、水中では、β−ピラノース型（６７％）、β−フラノース型（１２％）、α−フラノース型（１５％）、α−ピラノース型（６％）の混合物となる。

Ａはバリン残基（Ｖａｌ）又はイソロイシン残基（Ｉｌｅ）、Ｂはチロシン残基（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン残基（Ｐｈｅ）、バリン残基（Ｖａｌ）又はイソロイシン残基（Ｉｌｅ）の各アミノ酸残基を示すが、Ａ−Ｂの好ましい組合せとしては、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ等が挙げられる。
尚、各アミノ酸残基の立体配置は、Ｄ体、Ｌ体の何れでもよいが、Ｌ体であるのが好ましい。

上記フルクトシルジペプチドの塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アミン塩、アミノ酸塩、酸付加塩等が挙げられ、好ましくはアルカリ金属塩又はアミノ酸塩である。
また、上記フルクトシルジペプチド又はその塩は、水和物の形態であってもよい。

本発明のフルクトシルジペプチドのうち、特に好ましい化合物としては、次のようなものを例示できる。
Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＨ（化合物Ａ）、Ｆｒｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＯＨ（化合物Ｂ）、Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ（化合物Ｃ）、Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＣＨ₃
（化合物Ｄ）、Ｆｒｕ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−ＯＨ（化合物Ｅ）、Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ（化合物Ｆ）。

本発明のフルクトシルジペプチド又はその塩は、ショウガ科（Zingiberaceae）のショ
ウガ（Zingiber officinale Roscoe）から抽出・分離できる他、化学合成によっても製造することもできる。
ショウガからの抽出・分離は、ショウガの根茎を抽出して得られる抽出物をクロマトグラフで分離精製することにより製造すればよい。抽出に用いる溶剤としては水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ピリジン類等が挙げられ、これらは混合物としても用いることができる。
分離精製に使用するクロマトグラフとしては、三菱化学製のＨＰ−２０等の吸着剤、ＯＤＳ等の逆相クロマト、シリカゲル等の順相クロマト、ファルマシア社製のSephadex LH-20等のゲルろ過クロマトグラフ、陽イオンまたは陰イオン交換クロマト等が挙げられる。これらのクロマトグラフは、組み合わせても良く、単独で用いても良い。

また、本発明のフルクトシルジペプチドを合成により製造する場合は、対応するジペプチドとグルコースとを塩基性条件下、脱水縮合することにより製造することができる。

斯くして得られる本発明のフルクトシルジペプチド又はその塩は、後記実施例に示すように、紫外線の照射によるしわの発生抑制若しくはしわの改善効果（しわの外観を薄くする、しわを減少させる、消失させる、しわを目立たなくする、しわを消滅し得る等）を有し、また発毛抑制効果を有する。従って、本発明のフルクトシルジペプチド又はその塩は、化粧品、医薬部外品、医薬品等として使用可能な皮膚外用剤、発毛抑制、しわ予防改善剤（以下、これらを「皮膚外用剤等」という）とすることができる。
本発明のフルクトシルジペプチド又はその塩の、皮膚外用剤等への配合量は、０．０００００１〜０．０１重量％（以下、単に「％」で示す）、特に０．０００１〜０．００１ ％が好ましい。

また、本発明の皮膚外用剤等に、角化改善剤を配合することにより、さらにしわの発生等の皮膚の老化防止又は発毛抑制効果等を向上させうる。この角化改善剤としては、スフィンゴシン誘導体等が挙げられる。

本発明の皮膚外用剤等は、上記成分の他に、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種任意成分、例えば保湿剤、粉体、ゲル化剤、増粘剤、界面活性剤、乳化剤、抗炎症剤、抗酸化剤、pH調整剤、キレート剤、防腐剤、増粘剤、色素、香料や、紫外線吸収剤、紫外線防御剤、コラーゲン等の既存の皮膚老化防止・改善剤、既存の発毛抑制剤等を適宜配合し、使用形態に応じて常法に従って製造することができる。

本発明の皮膚外用剤等は、その使用形態において、薬用皮膚外用剤と化粧料とを包含する。薬用皮膚外用剤としては、例えば薬効成分を含有する各種軟膏剤を挙げることができる。軟膏剤としては、油性基剤をベースとするもの、水中油型又は油中水型の乳化系基剤をベースとするもののいずれでもよい。油性基剤に特に制限はなく、例えば植物油、動物油、合成油、脂肪酸、及び天然、合成のグリセライド等が挙げられる。薬効成分に特に制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、収斂剤、ホルモン剤等を必要に応じて適宜使用することができる。

また、化粧料としては、ローション状、乳液状、クリーム状、軟膏状、スティック状、有機溶媒や精製水等による溶液状、パック状、ゲル状、エアゾール状等の形態を挙げることができる。すなわち、化粧料としては、ローション、オイルエッセンス、Ｏ／Ｗ型又はＷ／Ｏ型のクリーム、パック、ファンデーション、皮膚洗浄剤、トニック、浴用剤、エアゾール等として使用することができる。

製造例１
ショウキョウを細切し、その１００ｋｇに２０体積％エタノール１０００Ｌを加え、室温で６時間攪拌，浸漬した。これを濾過し、ショウキョウ抽出液を得た。このショウキョウ抽出液を減圧濃縮し、懸濁液５０．５ｋｇを得た。この懸濁液をセライトろ過し、濃縮物５０．０ｋｇを得た。この濃縮物を、三菱化学社製ダイアイオンＨＰ−２０を５０Ｌ用いて、水画分（２５０Ｌ）、１０％ＥｔＯＨ画分（２５０Ｌ）、４０％ＥｔＯＨ画分（２５０Ｌ）、ＥｔＯＨ画分（２５０Ｌ）に分画した。１０％ＥｔＯＨ画分、４０％ＥｔＯＨ画分をそれぞれ濃縮し、それぞれ５６２ｇ（Ａ１）、４４４ｇ（Ｂ１）を得た。それぞれをエタノール２５Ｌに懸濁させた後ろ過し、エタノール可溶物を得た。このエタノール可溶物を減圧濃縮し、それぞれ３３０ｇ（Ａ２）、３１５ｇ（Ｂ２）を得た。（Ｂ２）３回に分け、１０５ｇをシリカゲル２．５ｋｇ：溶離液（酢酸エチル：メタノール：水：酢酸＝９：１：０：０→３．５：１：０：０→１４：４：１：０．１（Ｂ３）→９：５：１．２：０．１２）で分画した。（Ｂ３）を濃縮し、７５．１ｇ（Ｂ４）を得た。（Ｂ４）をＹＭＣ社製ＯＤＳ−Ａ（６０Ｓ−１５０）２．５ｋｇ，溶離液（０．１％ＴＦＡ／５％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ→０．１％ＴＦＡ／１０％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ→０．１％ＴＦＡ／１５％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ→０．１％ＴＦＡ／２０％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ）で分画した。０．１％ＴＦＡ／１０％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏで溶出した画分を濃縮し、２２
ｇを得た（Ｂ５）。０．１％ＴＦＡ／１５％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏで溶出した画分を濃
縮し、３５ｇを得た（Ｃ５）。（Ｂ５）をアマシャムファルマシア社製Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０（溶離液１０％ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ）で精製、濃縮し２．５ｇ得た（Ｂ６）。
（Ｂ６）をアマシャムファルマシア社製ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（溶離液ＭｅＯＨ）で精製、濃縮し２．５ｇ得た（Ｂ６）。（Ｂ６）を山善社製ウルトラパック水系ＯＤＳ（３００／５０ｍｍＩ．Ｄ．４０ｍｍ）溶離液０．１％ＴＦＡ／８％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ→０．１％ＴＦＡ／２０％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏで分画し、１１ｍｇを得た（Ｂ７）。（Ｂ７）をＹＭＣ社製ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｈｙｄｒｏｓｈｅｒｅ Ｃ１８ ＳＨ−３４３２５０／２０ｍｍＩ．Ｄ．５ｍｍ溶離液０．１％ＴＦＡ／８％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏで精製し、
化合物Ｂ（Ｆｒｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＯＨ）６ｍｇを得た。（Ｃ）を（Ｂ５）→（Ｂ６）→（Ｂ７）→Ｂと同様に精製し、化合物Ｃ（Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ）５ｍｇを得た。（Ａ２）をＢ、Ｃと同様に精製し、化合物Ａ（Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＨ）３０ｍｇ、化合物Ｄ（Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＣＨ₃）１３ｍｇ、化合物Ｅ（Ｆｒｕ−Ｉ
ｌｅ−Ｖａｌ−ＯＨ）４ｍｇ、化合物Ｆ（Ｆｒｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ）５ｍｇをそれぞれ得た。

製造例２
（１）化合物Ａの合成
Ｌ−バリル−Ｌ−チロシン（国産化学製）１．０１ｇ（３．６ｍｍｏｌ）、グルコース９．０８ｇ（５０ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム６０ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ）、メタノール３５０ｍＬを１Ｌナスフラスコに入れ、２時間加熱環流した。溶媒を留去後、エタノール１００ｍＬで共沸脱水した。乾固した固体に、メタノール３５０ｍＬを加え溶解させ、さらに２時間加熱環流した。溶媒を留去後、水１０００ｍＬに溶解した。この溶液を、三菱化学社製ダイアイオンＨＰ−２０を５００ｍＬ用いて、水画分（５０００ｍＬ）、２０％エタノール画分（１０００ｍＬ）に分画した。２０％エタノール画分を濃縮し、化合物Ａ（０．７２ｇ）を得た。

（２）化合物Ｂの合成
化合物ＡのＬ−バリル−Ｌ−チロシンをＬ−イソロイシル−Ｌ−チロシン（国産化学製）に代え同様に合成を行ない、化合物Ｂ（０．３６ｇ）を得た。

（３）化合物Ｃの合成
化合物ＡのＬ−バリル−Ｌ−チロシンをＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン（国産化学製）に代え同様に合成を行ない、化合物Ｃ（０．６２ｇ）を得た。

（４）化合物Ｅの合成
化合物ＡのＬ−バリル−Ｌ−チロシンをＬ−イソロイシル−Ｌ−バリル（国産化学製）に代え同様に合成を行ない、化合物Ｅ（１．１０ｇ）を得た。

（５）化合物Ｆの合成
化合物ＡのＬ−バリル−Ｌ−チロシンをＬ−バリル−Ｌ−イソロイシル（国産化学製）に代え同様に合成を行ない、化合物Ｆ（０．２５ｇ）を得た。

（６）化合物Ｄの合成
化合物Ａ２０ｍｇをメタノール２ｍＬに溶解し、トリメチルシリルジアゾメタン（東京化成工業製）０．３ｍＬを加え室温下攪拌した。溶媒を留去後、ＹＭＣ社製ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｈｙｄｒｏｓｈｅｒｅ Ｃ１８ ＳＨ−３４３ ２５０／２０ｍｍＩ．Ｄ．５ｍｍ溶離液０．１％ＴＦＡ／８％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏで精製し、化合物Ｄ（１３ｍｇ）を
得た。

試験例１ マウスによる発毛抑制試験
生後６週齢のＣ３Ｈマウス１群５匹の背部毛を、電気バリカン及び電気シェーバーを用い、皮膚を傷つけないように２×４cm²にわたり剃毛した。剃毛部位に試料を１日２回１００μＬずつ４週間にわたり塗布した。試料は、被験物質を溶媒（８０％エタノール）に溶解して表２に示す濃度に調製した。対照群には溶媒のみを塗布した。３週間後、再生毛を観察するために、剃毛部分を一定倍率で撮影し、画像解析装置を用いて再生毛面積比（再生毛面積／剃毛面積）を対照群と比較した。発毛抑制率は、対象群の再生毛面積比を１００としたときの相対値（％）で示した。結果を表２に併せて示す。

表２より、本発明のフルクトシルジペプチドには、優れた発毛抑制効果が認められた。

試験例２ マウスによるしわの予防改善試験
Hr-1（Skh-1）ヘアレスマウスとICRマウスより自家交配により作製したヘアレスマウス（Hr-1/ICR） を用い、その背中前面にＵＶＢを照射して、６．５週後より、ＵＶＢ照射を継続しながらサンプルを塗布した。サンプルは、化合物Ａ（１００−１ｐｐｍ、３ ｄｏｓｅ）、化合物Ｅ及び化合物Ｆ（１ｐｐｍ）を用い、１日２回（午前中ＵＶＢ照射したその直後及び午後の２回）、各マウスに１回１００μＬ、６週間塗布した（Ｎ数；コントロール：９匹、化合物Ａ：各７匹、化合物Ｅ，化合物Ｆ：各６匹）。熟練した研究者１名がしわの状態を観察し、以下に示すしわスコア評価法（文献：Bissett DL, Hannon DP, Orr TV.: An animal model of solar-aged skin: histological, physical, and visible changes in UV-irradiated hairless mouse skin. Photochem. Photobiol, 1987; 46: 367-378. Tramposch KM, Nair X, Gendimenico GJ, Tetrault GB, Chen S, Kiss I. Whiting G, Bonney RJ. The pharmacology of a novel topical retinoid, BMY 30123: comparison with tretinoin. J Pharm Pharmacol. 1992; 44: 379-386.）に準じた方法によりしわスコアを求めた。結果を表３に示す。

＜しわスコア＞
スコア１：しわが無い
スコア２：わずかにある
スコア３：しわがある
スコア４：はっきりとしたしわがある
スコア５：かなり深いしわがある

表３より、本発明のフルクトシルジペプチドには、有意なしわ改善効果が認められた。

Claims (2)

1. 下記一般式（１）：
   Ｆｒｕ−Ａ−Ｂ−Ｒ （１）
   〔式中、Ｆｒｕはフルクトシル残基を示し、Ａ−ＢはＶａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ又はＶａｌ−Ｐｈｅを示し、Ｒはヒドロキシ基又はメトキシ基を示す。〕
   で表されるフルクトシルジペプチド又はその塩を含有する発毛抑制剤。
2. 下記一般式（１）：
   Ｆｒｕ−Ａ−Ｂ−Ｒ （１）
   〔式中、Ｆｒｕはフルクトシル残基を示し、Ａ−ＢはＶａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ又はＶａｌ−Ｉｌｅを示し、Ｒはヒドロキシ基又はメトキシ基を示す。〕
   で表されるフルクトシルジペプチド又はその塩を含有するしわ予防改善剤。