HU198953B - Process for producing glycopeptides and amino acid derivatives having enkephalinase inhibition, as well as pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents

Process for producing glycopeptides and amino acid derivatives having enkephalinase inhibition, as well as pharmaceutical compositions comprising same Download PDF

Info

Publication number
HU198953B
HU198953B HU882061A HU206188A HU198953B HU 198953 B HU198953 B HU 198953B HU 882061 A HU882061 A HU 882061A HU 206188 A HU206188 A HU 206188A HU 198953 B HU198953 B HU 198953B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
asp
preparation
deoxy
formula
compounds
Prior art date
Application number
HU882061A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT47600A (en
Inventor
Laszlo Vertesy
Peter Schindler
Herbert Kogler
Hans-Wolfram Fehlhaber
Francaise Delevallee
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19873713873 external-priority patent/DE3713873A1/de
Priority claimed from DE19873739376 external-priority patent/DE3739376A1/de
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of HUT47600A publication Critical patent/HUT47600A/hu
Publication of HU198953B publication Critical patent/HU198953B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C07K9/003—Peptides being substituted by heterocyclic radicals, e.g. bleomycin, phleomycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/47—Streptomyces albus

Description

A találmány új, (1) általános képletű, enkefalinázgátló hatású glikopeptidek előállítására vonatkozik. A találmány tárgyához továbbá az ezeket a glikopeptideket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására is tartozik. A vegyületeket az alábbiakban enkasztinoknak is nevezzük.
Az enkasztinok olyan vegyűletek, amelyekben egy monoszacharid egy amin-nitrogén atomon keresztül egy aminosawal vagy egy dipeptiddel kapcsolódik. Hasonló, L-aminosavakat tartalmazó vegyületeket ír le K. Heyns és H. Paulsen (Liebigs Ann. Chem. 622 (1959) 160—174) és H. Röper, S. Röper és K. Heyns (Carbohydrate Research 116 (1983) 183— 195). Β. N. Stepanenko és N.N. Borodina, Prikl. Biokhim. Mikrobio. 12 (1) (1976) 5-13 /C.A. 85: 143+25 h/ irodalmi helyről ismertek a következő vegyűletek: N-(l-dezoxi-0-D-fruktoptranóz-l-il)-Gly-Gly-OH és N-(l-dezoxi-0-D-fruktopiranóz-l-il)-Gly-Ser-OH.
Analget ikusan hatásos enkefalináz inhibitorokként már különböző vegyületosztályokat megneveztek. Ezekre jellemző, hogy egy lipofil aminosawal szomszédos helyzetben funkcionális csoportjuk van, amely ennek a metallo enzimnek a katalízisben résztvevő Zn2 + ionjával koordinációs vegyületté alakulhat. Ilyen funkciós csoportok például: -SH, HO-NH-CO-, -P( = O)OH-R és -COOH (R.E. Chipkin, Drugs of the Future 11 (7) (1986), 593-606). Ismert továbbá, hogy ezek a vegyűletek nemcsak az enkefalinázt gátolják, hanem a baktériumokból izolálható termolizin enzimet is (M. Pozsgay, C. Michaud, M. Liebmann és M. Orlowski, Biochemistry 25 (1986) 1292-1299).
A találmány feladata olyan vegyületeknek az előállítása, amelyek specifikusan enkefalináz gátló hatásúak.
Ezt a feladatot úgy oldottuk meg, hogy előállítottuk az (I) általános képletű vegyületeket — a képletben
Sacch jelentése N-(l-dezoxifruktopiranóz-l-il)-, N-(l-dezoxitagatopiranóz-l-il)-, N-(l,6-didezoxifruktofuranóz- 1-il)-, N-(hidroxi-acetοη-3-il)- vagy N-(l-dezoxixilulóz-l-il)-csoport,
A jelentése L- vágy D-formájú Alá, Val, íle, Phe, Leu vagy hexahidrofenilglicinil (Hhp), azzal a megszorítással, hogy amennyiben B jelentése kémiai kötés, ezek az aminosav-maradékok mindig D-formában vannak jelen,
B jelentése kémiai kötés vagy L- vagy D-formájú Asn, Asp, Asp-mono-ÍCj-Cfij-alkilészter, Glu, Ser vagy Trp és
R jelentése hidroxilcsoport.
A találmány leírásában az aminosavakra az L. Styrer, Biochemistry (W. H. Freeman & Company, San Francisco, 1972 14. oldal) irodalmi helyen megnevezett szimbólumokat alkalmazzuk. Ezen szimbólumok elé a D jelzést teszczük, ha egy D-aminosav maradékról van szó. A konfiguráció-szimbólum nélküli csoportok Lkonfigurácíót jelentenek.
A fenti vegyűletek közül különösen kiemeljük a következő glikopeptideket:
Enkastin ID, Enkastin (D)ID (1) képletű vegyület
N-(ldezoxi-fruktopiranóz-l-il)-Ile-Asp-OH
N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-D-IIe-Asp-OH
Enkastin. VD, Enkastin (D)VD (2) képletű vegyület
N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-Val-Asp-OH
N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-tl)-D-Val-Asp-OH
Enkastin AD (3) képletű vegyület
N-(l-Dezoxi-fruktopÍranóz-l-il)-Ala-Asp-OH
Enkastin IE (4) képletű vegyület
N-(l-Dezoxi-fruktopÍranóz-l-il)-Ile-Glu-OH
Enkastln VE (5) képletű vegyület
N-(l-Dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-Val-Glu-OH
Enkastin AE (6) képletű vegyület
N-(l-Dezoxi-Fruktopiranóz-l-il)-Ala-GluOH
Enkastin (D)V (7) képletű vegyület
N-(l-Dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-D-Val-OH
A vegyületeket a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy
a) azon (I) általános képletű vegyűletek előállítására, amelyekben
Sacch jelentése N-(l-dezoxifruktopiranóz-l-il)-csoport,
A jelentése Alá, Val, He,
B jelentése Asp vagy Glu és
R jelentése hidroxilcsoport, a Streptomyces albus ATCC 21838. deponálási számú mikroorganizmust vagy ennek variánsát vagy mutánsát tápközegben tenyésztjük, majd a kapott vegyületeket elkülönítjük és kívánt esetben tisztítjuk, vagy
b) egy N-terminálisan szabad aminosavat tartalmazó A-R jelentésű aminosavat vagy A-B-R jelentésű dipeptidet az anomer centrumban szabad hidroxilcsoportot tartalmazó Sacch jelentésű monoszachartdnak megfelelő aldózzal kondenzálunk, és az igy kapott N-glikozidot Amadori-átrendezésnek alávetve N-szubsztituált izocukoraminná alakítjuk.
A Streptomyces albus ATCC 31838. ismert mikroorganizmus, amelyet főleg a salinomicin antibiotikum termelésére alkalmaznak. A Streptomices albus tulajdonságai Berge/s Manual of Determinative Bacteriology (Williams and Wilkins, Baltimore) c. könyv 754. oldalán találhatók, eddig nem volt ismert, hogy ugyanez a törzs kisebb koncentrációban enkasztinokat is termel.
Szénforrást, nitrogénforrást, valamint a szokásos szervetlen sókat tartalmazó tápoldatban a Streptomyces albus (ATCC 21838) többek között az Enkasatin ID-t, Enkasztin VD-t, Enkasztin AD-t, Enkasztin IE-t, Enkasztin VE-t valamint Enkasztin AE-t termeli.
Az ATCC 21838. törzs helyett természetesen ezek mutánsait és variánsait is alkalmazhatjuk,
HU 198953 Β amennyiben ezek legalább a felsorolt vegyületek egyikét szintetizálják. Ilyen mutánsokat ismert módon fizikai eszközökkel, például besugárzással, így UV vagy röntgen-sugárzással vagy kémiai mutagénekkel, így például etán-szulfonsav-metil-észterrel (etil-metil-szulfonáttal, EMS) vagy 2-hidroxi-4-metoxi-benzofenonnal (MOB) állíthatjuk elő.
Az aerob fermentációhoz előnyös szénforrásként megfelelőek az asszimilálható szénhidrátok és cukoralkoholok, így a glükóz, laktóz vagy Dmannit, valamint szénhidrát tartalmú természetes termékek, így maláta extraktum, olajok és zsírok. Nitrogén-tartalmú tápanyagként szóba jöhetnek az aminosavak, peptidek és proteinek, valamint ezek bomlástermékei, így peptonok vagy tripionok, továbbá húskivonatok, őrölt magvak, például kukoricamag, búza, bab, szója vagy gyapot őrlemények, alkoholgyártásból származó desztillációs maradékok, húsliszt, éiesztőkivonat, ammóniumsók, nitrátok. A tápoldatban szervetlen sóként alkalmazhatunk például alkálifémvagy alkáliföldfém-kloridot, -karbonátot, -szulfátot vagy -foszfátot vagy nyomelemeket, így például vasat, cinket, kobaltot és mangánt.
Az enkasztin-képzés különösen jól zajlik olyan tápoldatban, amely a teljes tápoldat tömegére vonatkoztatva 0,1 — 15% tápanyagot tartalmaz, így például szójalisztet, szójaolajat és mannitot, különösen 0,1 - 3% mennyiségben,
A fermentálást aerob körülmények között végezzük, így például szubmerz körülmények között állandó rázás vagy keverés közben, rázóiombikban vagy fermentorban, adott esetben levegő vagy oxigén bevezetése közben. A fermentálás hőmérséklete 18-35 °C, előnyösen 25 - 30 °C, különösen 28 — 30 °C. A pH-tartomány 6 — 8, előnyösen 6,5-7,5. Ilyen körülmények között a fermentié általában 6-15 nap múlva jelentős enkefalináz-gátló hatást mutat.
A tenyésztést előnyösen több lépcsőn keresztül folytatjuk, vagyis először egy vagy több tenyészetet állítunk elő folyékony tápközegben, majd ezeket a tulajdonképpeni termelő közegbe, a főtenyészetbe, például 1:10 térfogatarányban átoltjuk. Az előtenyészetet például úgy állíthatjuk elő, hogy tápoldatba micéliumot oltunk, és körülbelül 80 — 400 órán keresztül növekedni hagyjuk. Az átoltáshoz szükséges micéliumot úgy állítjuk elő, hogy a törzset körülbelül 12 napig szilárd vagy folyékony táptalajon, például élesztő- maláta-agar táptalajon növekedni hagyjuk.
A fermentáció menetét ellenőrizhetjük a tenyészet pH-értéke vagy a tnicélium térfogat alapján, vagy a biológiai aktivitás meghatározásával. Mind a micélium, mind a szűrlet tartalmazza az enkasztint. Az enkasztin fő tömege azonban a szőriéiben található.
Az említett vegyületeket a tápközegből ismert módon a termék kémiai, fizikai és biológiai tulajdonságát tekintetbe véve izoláljuk, így például ioncserélőn, molekulaszitán, abszorpciós gyantán és fordított fázisú hordozóanyagon kromatografáljuk, oldószerrel kicsapjuk, reverzozmózisosan vagy egyéb módszerrel izoláljuk.
Előnyös, ha a micéliumot például szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk a vizes fázistól, és az enkasztint az egyes fázisokból izoláljuk és tisztítjuk.
Előnyös, ha a szűrletet zsírtalanítás céljából butanollal extraháljuk, és a vizes fázist vákuumban bepároljuk. A kétszeres-ötszörös mennyiségű metanollal hígított vizes koncentrátumból centrifugálással elválasztjuk a kivált nagy molekulájú anyagokat. A vizes-metanolos felülúszót erősen savas ioncserélővel, így például Dowex 50 WX 2-vel először a bázikus, majd anioncserélőve 1, így például Amberlite IRA-68-cal az amfoter anyagokat izoláljuk. Ebben a frakcióban találhatók az enkasztinok. Sótalanítás után molekulaszitával, így például Sephadex G-15-tel, preparatív HPLC-vel, például fordított fázisú RP-18-cal az egyes enkasztin-komponenseket kinyerjük.
Az N-(l-dezoxi-fruktóz-l-il)-L-aminosavak szintézisét már többször leírták (például H. Röper és munkatársai, Carbohydrate Research, 116 (1983) 183 — 195). Ebben az esetben a helvettesítetlen reagenseket oldják fel vízben vagy víz — metanolban, és különböző pufferokkal vagy adalékokkal, például nátrium-piroszulfittal melegítik. A kitermelés a kiindulási anyag fajtájától függően átlagosan 20%.
Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy ha a cukrokat szabad aminocsoportot tartalmazó sminosavakkal vagy peptidekkel a kívánt Amadóri-termékké alakítjuk, és az átalakítást szekunder vagy tercier, alifás vagy aromás nitrogéntartalmú vegyületek katalízisével, például piridin, dimetil-amino-piridin-, di-(l —8 szénatomos alkil)- és tri-(l —8 szénatomos alkil)-amin, 6—12 szénatomos aril-(l —8 szénatomos alkil)amin, trisz-puffer, dimetil-formamid, imidazol katalízisével végezzük, akkor nagyon jó kitermelést érünk el, azaz 90% feletti kitermelést.
Oldószerként felhasználhatunk piridint, vizet, vizes metanolt, metanolt, etanolt, dimetil-szulfoxidot (DMSO) vagy ezeknek egyéb keverékeit, előnyösen azonban vízmentes piridint alkalmazunk, vagy vízmentes metanollal, DMSO-val vagy egyéb oldószerrel alkotott elegyét. A reakció hőmérsékletét széles tartományban változtathatjuk. A lehetséges hőmérséklet 0-250 °C. Előnyösen azonban szobahőmérséklet — 120 C közötti hőmérsékleten dolgozunk. A hőmérséklettől függően a reakció időtartama néhány másodperctől néhány napig tarthat. Egy tipikus reakciókeveréknél a reakció hőmérséklete 65 ”C, és 2 óráig tart. A majdnem kvantitatív átalakítás arról ismerhető fel, hogy az eredetileg színtelen reakcióelegy aranysárgára színeződik. Ha a reakció tovább zajlik, akkor a reakcióelegy sötétebbé váló barna színű lesz, amely a kitermelés kárára megy (Mailland-reakció).
Az Amadori-átrendeződés (Weygcnt/Hilgetag, Organisch-chemische Experimentierkunst, J. A. Barth-Verlag Leipzig (1964) 980) az N-glikozid 10 perces - 10 napos állása során megy végbe - előnyösen 0,5-3 nap, 0 °C - 200 °C hőmérsékleten, különösen 40 — 70 ’C hőmérsék-31
HU 198953 Β leien. Utána a vizet eltávolítjuk, adott esetben azeotrópos desztillációval, a reakcióelegyet ismét állni hagyjuk, és végül az N-helyettesített ízo-cukoramint szárítjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított enkefalináz-inhibitorok különösen előnyösek főleg különböző fájdalmak, így például fogfájás, krónikus fertőzéssel összefüggő fájdalmak kezelésére, hő vagy sav hatására fellépő fájdalom kezelésére, stressz hatására létrejött fájdalom, valamint rákos megbetegedések végső stádiumának kezelésére. Ezen kívül az (I) általános képletű enkefalináz-inhibitorokat alkalmazhatjuk lelki feszültség kezelésére.
Ismert, hogy például a fájdalom-érzéskor és félelemkor, aggódáskor endogén enkefalinok gyors kiválása történik, amelyek az úgynevezett opiát-receptorokkal történő kölcsönhatásban elnyomják ezeket az izgalmi hatásokat. Az enkefalinok azonban neuroközvetítői szerepüknek megfelelően enkcfalinra fajlagos peptidázok, különösen az enkefalináz enzim hatására gyorsan inaktív peptidekké bomlanak. Az (I) általános képletű enkefalináz inhibitorok gátolják ezt a bomlást, aminek következtében az endogén módon kivált enkefalinok az opiát-receptorokra kifejtett hatásukat és így fájdalom-, illetve félelemelnyomó hatásukat hosszabb időn keresztül kifejthetik.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek különleges tulajdonságaira még jellemző, hogy nemcsak az enkefalináz által történő enkefalin lebomlást gátolják, hanem saját analgetikus hatásuk is van. fgy az (I) általános képlettel meghatározott enkefalináz-inhibitorok az opiát-receptorokra közvetlenül is kifejthetik hatásukat.
Enkefalináz-vlzsgálat
Az enkaszlinok enkefalináz-gátló hatásait irodalomból ismert módszerrel állapítottuk meg /Roques, Β. P. és munkatársai (Life Sciences (1982), 1749 -1752)/. Enzimként irodalomból ismert módszerrel (Mumford, R.A. és munkatársai 1982, Biochem. Biophys, Rés. Commun. 109,1303-1309) patkány veséből kioldott enkefalináz-készítményt alkalmaztunk. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek által elért 50%-os enkefalináz gátlást, azaz az ICsQ-értéket, ismert módszerrel koncentráció-sorral határoztuk meg, amikoris az inhibitorokat 60 percig enzimmel szobahőmérsékleten előinkubáltuk. Az előinkubálás a szubsztrátum adagolása előtt, az enzim reakció elindítása előtt történt. Gátlás nélküli reakciókhoz megfelelő kontroll vizsgálatokat végeztünk inhibitor alkalmazása nélkül.
Enkefalináz-gátlás
IC50 (mól/1)
1. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 1,3.10‘9
-D-Val-Asp
2. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 1,8.109
-D-Ilc-Asp
3. N-(l-dczoxifruktóz-l-il)- 1,8.10‘9
-Ile-Asp
4. N-(l-dczoxifruktóz-l-il)-Val-Asp 6,3.10*’
5. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Phe-Glu 5,6.10-®
6. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Val-Glu 3,4.10-®
7. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ile-Asp 3,4.10-®
8. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ile-Glu 5,6.10·8
9. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ile-Asp(OtBu) 7,0.10*8
10. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Hhp-Asp 7,5.10-®
ti. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Ile-Ser 2,1. W7
12. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-Val 2,3.10’7
13. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-Val-Asp 3,2. ΙΟ’7
14. N-(l-dezoxifruktóz-l-il)- 3,4. ΙΟ’7
-D-Ile
Az enkasztinokat adagolhatjuk önmagában vagy kombinációban parenterálisan vagy orálisan, fiziológiailag elfogadható közegben. Az adagoláshoz felhasznált dózis 0,1 —10 mg/kg.
1. példa
Enkaszlinok fermentációs kinyerése (20001)
Az enkafalináz-inhibitorok fermentációs kinyeréséhez a Streptomyces albus ATCC 21838 törzs fagyasztva szárított tartós formáját tenyésztettük. A tenyésztést először steril Petri-csészében szilárd táptalajon végeztük. Az elkülönült telepeket ezután ferde csövekben tovább tenyésztettük, majd ezekből a tenyészetekből a spórák fermentációhoz szükséges tömegtermelését Roux-lombikokban elvégeztük.
Agarközeg szilárd táptalajhoz:
Dextrin 15,00 g/1
Nádcukor 2,00 g/1
Hús-extraktum 1,00 g=/l
Élesztő-extraktum 2,00 g/1
Konyhasó 0,50 g/1
FeSO4.7M2O 0,01 g/1
k2hpo4 0,50 g/1
Agar-Agar 2,00 g/1
pH-érték 7,3
Sterilizálás: 120 °C, 20 perc
Inkubálás: 30 ’C, 9 nap
Egy Roux lombikban kiülepedett spórákat 100 ml steril vízzel szuszpendáljuk, és ezt oltóanyagként használjuk fel az első süllyesztett vegetatív-fermcntációs előfokozathoz (térfogat: 1,2 liter).
Az előfokozatban alkalmazott tömeg:
Oldható keményítő 4,0 g/1
Glükóz 1,0 g/1
Kazein-pepton 1,0 g/1
Corn steep liquor
(Sigma, München, NSZK) 0,4 g/1
Szójaliszt . 0,4 g/1
(NH4)2SO4 0,8 g/1
HU 198953 Β pH-érték 8,3
Sterilizálás: 120 ’, 20 perc
Inkubálás: 18 ”C, 2 nap rázógép: 150 ford/perc és cm amplitúdó
Az így kapott tenyészetet 48 órával Később a
200 liter térfogatú második előtenyészet oltóanyagaként használjuk fel. A második előtenyészet szintén az előfokozat tápközegén nő. A sterilizálási idő 30 perc. A tenyészetet 28 °C-on, 0,1 wm levegőztetés! arány mellett, 5 m/sec kerületi sebességgel végzett keverés közben inkubáljuk.
Az így kapott tenyészettel a 2000 liter térfogatú termelő közeget oltjuk be.
A termelő tenyészet tápoldata
Földimogyoróliszt 30,0 g/l
Cornsteep solids
(gyártja: Sigma, NSZK) 10,0 g/l
Kukoricakeményítő 20,0 g/l
Dextrin 40,0 g/l
(NH4)2SO4 5,0 g/l
MgSO4.7H2O 5,0 g/l
CaCO3 8,0 g/l
pH-érték 6,8
Sterilizálás 120 “C, 50 perc
A termelő tenyészetet 28 °C-on, 0,6 wm levegőztetést arány mellett 4 m/sec kerületi sebességgel végzett keverés közben fermentáljuk.
Az inhibitorok keletkezése 4 nap múlva indul meg, koncentrációjuk 10-12 nap múlva eléri a maximumot. A fermentációs maximum elérése után a fermentálást megszakítjuk. Ilyenkor a tenyészlé literenként 5 — 10 pg enkasztin-komplexet tartalmaz.
2. példa
Az enkasztin izolálása a fermentléből
Az 1. példa szerint előállított 2000 liter fermentléből szűrőpréssel elválasztjuk a sejttömeget, majd a tiszta folyadékot kétszer 600 - 600 liter n-butanollal extraháljuk. Az így kapott vizes fázist vákuumban esőáramú bepárlóban 150 literre betöményítjük, és az így kapott koncentrátumot 600 liter metanollal meghígítjuk. Ekkor világos, pelyhes csapadékot kapunk, amelyet centrifugálással leválasztunk és eldobunk. A vizes metanolos felülúszót ismét vákuumban bepároljuk és megszárítjuk. 18 kg barna, ragadós anyagot kapunk. Vizes közegben 70 liter kationcserélőn (Dowex 50 WX 2 /savas forma/) adszorbeáljuk, náajd az ioncserélőt tiszta vízzel mossuk és az inhibitort 0,5 mól ammónium-hidroxid oldattal deszorbeáljuk. Az enkefalináz-gátló hatású eluátumot összegyűjtjük és fagyasztva szárítjuk (3,5 kg). Ebből a termékből analóg munkafolyamattal 70 liter anioncserélőn (amberlite IRA-68) az amfoter vegyületeket elválasztjuk. Az enkasztinokat 0,5 mól ecetsavval eluáljuk. Az inhibitor eluátumot fagyasztva szárítjuk, így 320 g száraz terméket kapunk. Ezután Sephadex G-15 gélkromatográfiával, valamint az aktív anyag fagyasztva szárításával 30 g enkasztín-nyersterméket nyerünk.
3. példa
Az enkasztin komponensek elkülönítése
A 2. példa szerint kapott anyag 150 mg-ját 1 ml vizben feloldjuk és fordított fázisú Kieselgél (RP 18) adszorbenssel töltött 3,2 x 25 cm belső méretű acélkolonnára visszük. Az oszlopot először 0,05%-os trifluorecetsawal 40 percen keresztül eluáljuk, ezt követően 0,05%-os trifluorecetsawal lineáris acetonitril-gradienst alkalmazunk. A kolonnából távozó folyadékot 200 nm hullámhossznál végzett ultraibolya abszorpció méréssel ellenőrizzük. Az oszlopról egymástól élesen elkülönülő anyagok egész sorát eluáljuk. A megfelelő frakciókat kiílön-külön összegyűjtjük, majd fagyasztva szárítjuk, majd vizsgáljuk. A 2., 3., 4., 5., 7., 8., 11., 13., 16., 18. és 21. csúcsok anyagai enkefalinázzal szemben gátló hatást mutatnak.
Az egyes csúcsok szárított anyagával végzett mérések eredményeit az alábbiakban ismertetjük
3. csúcs: (retenciós idő: 6 perc 8 másodperc): Az enkasztin AD-t tatalmaz. Aminosav analízis alapján ekvimoláris mennyiség analínt és aszparaginsavat tartalmaz. Az FAB-tömegspektrum alapján molekulatömege 366, összegképlet: CijHjjNjOid x A 2D-NMR vizsgálat alapján a már megadott szerkezetet kapjuk.
4. csúcs: (retenciós idő: 5 perc 21 másodperc): kis mennyiségű enkasztin VD-t tartalmaz, amelynek molekulatömege 394, összegképlete C15H26N2O10. Az 1. ábra az enkasztin VD lH-NMR-spektrumát mutatja.
7. csúcs: (retenciós idő: 7 perc 20 másodperc): az enkasztin AE-t tartalmazza, molekulatömeg 380, összegképlete Ct4H24N2Oto.
11. csúcs: (retenciós idő: 8 perc 10 másodperc): az enkasztin VE-t tartalmazza, molekulatömeg 408, összegképlete U^Hig^On), amely a valin és a glutamin aminosavakat tartalmazza.
13, csúcs (retenciós idő: 18 perc 40 másodperc): az enkasztin ID-t tartalmazza, molekulatömeg 408, összegképlete CtfH^NjOio, amely az He és Asp aminosavakat tartalmazza.
16. csúcs: (retenciós idő: 22 perc): az enkasztin ΙΕ-t tartalmazza, molekulatömeg 422, összegképlet C17H30N2O10.
4. példa n-(l-dezoxí-fruktopiran6z-l-il)-izoleucil-aszparaginsav előállítása g vízmentes D-glükóz és 3 g izoleucil-aszparaginsav 1,2 liter metanollal készített oldatához 200 mg _ nátrium-hidrogén-karbonátot adunk. Az elegyet 2 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt melegítjük. A reakcióban keletkezett vizet butanollal ledesztilláljuk, majd a metanollal hígított reakcióelegyet még egyszer 2 órás át melegítjük. A kapott oldatból az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a 300 ml vízben felvett maradékot 5 cm átmérőjű, 600 ml térfogatú, QAE-Sephadex A - 25 adszorbenssel töltött oszlopra visszük. Az átfolyó oldószerben a felesleges glükóz található. Az N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparaginsavat 0 mól/1 koncentrá-5I ciótól lineárisan 0,5 mól/1 koncentrációig emelkedő vizes ecetsav-gradienssel szelektíven lemossuk az oszlopról. A savas eluátumokat összegyűjtjük és fagyasztva szárítjuk.
Kitermelés: 720 mg fehér, amorf por.
’H-NMR spektrum (ppm): 4,43, 2,69, 2,48, 3,84, 1,93,. 1,50, 1,26, 0,93 és 0,89 (a molekula peptidészterei);
3,93, 3,91, 3,79, 3,66, 3,65, 3,17 valamint 3,14 (az inhibitor glükózrészei).
,3C-NMR-spektrum (ppm): 54,63, 40,49, 66,79, 37,13, 26,12, 14,61 és 11,75 (peptidrészek), valamint 96,55, 70,91, 70,40, 69,96, 64,87 és 53,43 (glükózrészek).
IR-spektrum sávok: 3400, 2920, 2860, 1595, 1400 és 1080 cm1.
5. példa
Az N-( 1 -dezoxi-fruktopiranóz- l-il)-fenil-alanil-aszparaginsav előállítása
200 mg fenil-alanil-aszparaginsavat 1,5 g Dglükózzal 100 ml metanolban szuszpendálunk, majd hozzáadunk 20 mg nátrium-hidrogénkarbonátot, és a reakcióelegyet 2 órán keresztül forráspontig melegítjük. Ezután a reakcióelegyet a
4. példa szerinti módon tovább feldolgozzuk, és QAE-Sephadex kolonnán A-25 (1,8 cm x 23 cm, 60 ml) tisztítjuk, majd sótalanítjuk. íly módon 26 mg N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-il)-fenilalanil-aszparaginsavat kapunk. Az enkasztin FD 270 MHz- H-NMR-spektruma: 3,03, 2,96, 3,65, 3,81, 3,94, 3,99, 3,67, 3,84, 3,17, 3,08, 7,36, 4,43, 2,71, 2,51 ppm.
6. példa
Az N-(l-dezoxi-fruktopiranóz-l-íI)-izoIeuciI-szerin szintézise
200 mg izoleucil-szerint 1,5 g D-glükózzal az
5. példa szerinti módon átalakítjuk, és a reakcióterméket tisztítjuk. Az fgy kapott 12 mg N-(l-dezoxifruktóz-í-Íl)-Ile-Ser-OH szerkezetét kémiailag és spektroszkópikusan megállapítottuk.
Az enkasztin IS 270 MHz-'H-NMR spektruma (D2O): 3,38, 3,34, 3,85, 3,98, 4,15, 4,09, 3,82, 4,45, 4,00, 3,95, 3,97, 2,15, 1,08, 1,79, 1,43, 1,06 ppm.
7. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparagin szintézise
300 ml izoleucil-aszparagint és 1,5 g D-glükózt az 5.‘ példa szerinti módon átalakítunk, és a reakcióterméket tisztítjuk. így 90 mg N-(l-dezoxifruklóz-l-il)-Ile-Asn-t kapunk.
Az enkasztin IN 270 MHz-'H-NMR-spektruma (D2O): 3,05, 4,07, 3,95, 3,79, 4,08 és 3,78 ppm, valamint 3,60,1,89, 1,53, 1,28, 0,97 és 0,93 ppm, valamint 4,54,2,84 és 2,69 ppm.
8. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-valíl-aszparaginsav szintézise
150 mg valil-aszparaginsavat 1 g galaktózzal az 5. példa szerinti módon átalakítunk és tisztítünk. íly módon 22 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-valil-aszparaginsavat kapunk.
D2O-ban mért MHz 'H-NMR-spektrum; 3,16, 3,17, 4,02, 3,91, 2,68, 3,6 és 3,86 ppm, valamint 2,63, 2,22,1,09 és 1,05 ppm, valamint 4,56, 2,81 és 2,60 ppm.
9. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valin szintézise g vízmentes D-valint 75 g vízmentes D-glükózzal 500 ml száraz metanol, 100 ml dimetil-szulfoxid, valamint 150 ml piridin elegyében feloldunk, majd a reakcióelegyet 2,5 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt melegítjük. Az így kapott mézszínű reakcióoldatot rotációs bepárlóban vákuumban töményítjük, így a metanolt és a reakció során keletkező vizet eltávolítjuk. A még pilidint tartalmazó koneentrátumot nedvesség kizárása közben szobahőmérsékleten 1 éjszakán keresztül állni hagyjuk, így a reakció teljessé válik.
A terméket úgy tisztítjuk, hogy a reakcióelegyet vízben feloldjuk, az oldat pH-ját nátriumhidroxiddal 9-re beállítjuk, és az oldatot pH = 9re beállított és egyensúlyba hozott QAE-Sepharose FF-oszlopra (5 cm x 50 cm) visszük. Az ioncserélőt először 0,1%-os ammónium-acetát oldattal (pH = 9,0) mossuk, majd 100% 0,1%-os ammónium-acetát-oldatról 100% 0,2 mólos ecetsavig változó gradienssel eluáljuk.
Az eluátumot frakciókban összegyűjtjük, és az egyes frakciókat vizsgáljuk. Az 5,3-5,5 pH-jú frakciók a tiszta, újonnan szintetizált inhibitort tartalmazzák. Ezeket összeöntjük és szárítjuk. A sótalanítást Sephadex G -15 molekulaszitával végezzük, és így előállítjuk a sómentes terméket. Víz-metanol elegyből 7 g N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valint kristályosítunk. Op.: 125 -126 °C.
10. példa
N-(1 -dezoxifr uktóz- 1-il)-D-izoleucin szintetizálása
100 mg száraz D-izoleucint 300 mg vízmentes glükózzal, 40 ml metanol és 10 ml piridin vízmentes elegyével összekeverjük, a 9. példa szerint átalakítjuk és tisztítjuk, de a tisztítás során kisebb térfogatú kolonnát alkalmazunk. A végterméket kristályosítjuk, így 110 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-izoIeucint kapunk. Op.: 142—144°C.
11. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valil-aszparaginsav szintézise g D-valil-aszparaginsav és 50 g vízmentes D-glükóz 300 ml piridin és 3 liter metanol elegyével készített szuszpenzióját állandó keverés közben 2,5 órán keresztül forrásponton melegítjük. Eközben a reagensek fokozatosan feloldódnak, és a reakcióelegy aranysárga színű lesz. A reakció végén az elegyet vákuumban töményftjük, és a 9. példa szerinti módon feldolgozzuk. A terméket fagyasztva szárítjuk, és így 13,5 g amorf N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-valil-aszparaginsavat kapunk.
HU 198953 Β
A 2. ábra az «nkasztin(D)VD 270 MHz *H-NMR-spektrumát (D2O) mutatja.
12. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-izoleucil-aszparaginsav szintézise g D-izoleucil-aszparaginsav és 5 g D-glükóz 100 ml metanol és 10 ml piridin elegyével készített oldatát a 10. példa szerinti módon átalakítjuk és tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 790 mg tiszta, amorf anyagot kapunk.
A 3. ábra az enkasztin (D)ID 270 MHz-'H-NMR-spektrumát mutatja.
13. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilészter sztintézise g izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilészterl all. példa szerinti módon reagáltatunk és tisztítunk. így 5,8 g amorf fagyasztva szárított terméket kapunk, amely N-(l-dezoxifrukt6z-l-il)-izoleucil-aszparaginsav-mono-terc-butilészter.
A 4. ábra az enkasztin ID-OtBu IR-spektrumát mutatja.
14. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-hexahidro-fenil-glicil-aszparaginsav szintézise
300 mg D-hexabidro-fenil-glicil-aszparaginsavat (D-Hhp-Asp) 1,5 g glükózzal a 10. példa szerinti módon reagáltatunk. íly módon 260 mg amorf N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-D-Hhp-Asp-t kapunk, amelynek IR-spektrumát az 5. ábra mutatja.
15. példa
N-(l,6-di-dezoxi-frukto-furanóz-l-il)-(D)-valil-aszparaginsav
0,5 g (D) vallil-aszparaginsavat a 9. példa szerinti módon 1 g 6-dezoxiglükózzal reagáltatunk és tisztítjuk. Fagyasztva szárítás után 314 g N-(l,6-di(dezoxi-fruktofuranóz)-l-il)-(D)-vallil-aszparaginsavat kapunk.
IC50-érték: 5,5 x IO'9 móVl.
’H-NMR-jelek: 4,36, 2,63, 2,42, 3,88, 1,59, 0,92,0,88, 4,02, 3,70, 3,20, 2,78,1,25.
16. példa
N-(hidroxi-aceton-3-il)-(D)-valil-aszparaginsav g (D) Val-As,.-t a 9. példa szerinti módon 2 g glicenrínaldehiddel reagáltatunk és tisztítjuk, azonban az ioncserélővel végzett tisztításnál a pH-érték 8. íly módon sótalanítás és fagyasztva szárítás után 130 mg N-(hidroxi-aceton-3-il)-(D)-valil-aszparaginsavat kapunk.
ICso-gátlást érték: 1,5 x 10'° mól/1. lH-NMR-jelek; 4,58, 2,82, 2,62, 3,83, 2,27,
1,09,1,04, 4,09,3,82, 3,29.
17. példa
N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-(D)-leucil-triptofán
0,6 g (D)-leucil-triptofánt a 9. példa szerinti módon 10 g (D)-glükózzal reagáltatunk és tisztítunk. Fagyasztva szárítás után 327 mg N-(l-dezoxifruktóz-l-il)-(D)-leucil-triptofánt kapunk. Az enkefalináz gátlás: IC50 - 9,5 x 10'9 mól/1.
'H-NMR-jelek: 7,77, 7,54, 7,28, 7,27, 7,21, 4,73, 3,51, 3,18, 1,19, 0,88, 0,69, 0,67, 3,98, 3,77, 3,67, 4,02, 3,72, 2,69, 2,61.
18. példa
N-(l-dezoxi-xílulóz-l-il)-(D)-valil-aszparaginsav g (D) valil-aszparaginsavat a 9. példa szerinti módon 6 g (D) xilózzal reagáltatunk és tisztítunk. íly módon 244 mg N-(l-dezoxi-xilulóz-l-il)-(D)-valil-aszparaginsavat kapunk. Az enkefalinázgátlás: IC5p = 1,4 x 10'8 mól/1. FAB tömegspektroszkópiával meghatározott móltömeg: M*H+ = 375,1337 (elemi érték: M + H+375,133951).
Az ábrák értelmezése:
1. ábra: a 3. példa szerinti enkasztin VD (Fru-Val-Asp) 'Η-NMR spektruma;
2. ábra: all. példa szerinti enkasztin (D)VD (Fru-D-Val-Asp) 'H-NMR spektruma;
3. példa: a 12. példa szerinti enkasztin (D)ID (Fru-D-IIe-Asp) ‘H-NMR spektruma;
4. ábra: a 13. példa szerinti enkasztin IDOtBu (Fru-Ile-Asp-OtBu) ‘H-NMR spektruma;
5. ábra: a 14. példa szerinti (Fru-D-Hhp-Asp) ‘H-NMR spektruma.
Az ‘H-NMR spektrumokat D2O-ban 270 MHz frekvencia mellett vettük fel. Az IR-spektrumok FT1R (Fourier-Transform-Infrarot) abszorpciós spektrumok, amelyeket KBr pirula alkalmazásával mértünk.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás (I) általános képletű glikoproteinek előállítására, az (I) általános képletben
    Sacch jelentése N-(l-dezoxifruktopiranóz-l-il)-, N-(l-dezoxitagatopiranóz-l-il)-, N-(l,6-didezoxifruktofuranóz-l-il)-, N-(hidroxi-aceton-3-il)- vagy N-(l-dezoxixilulóz-l-il)-csoport,
    A jelentése L- vagy D-formájú Alá, Val, He, Phe, Leu vagy hexahidrofenilglicinil (Hhp), azzal a megszorítással, hogy amennyiben B jelentése kémiai kötés, ezek az aminosav-maradékok mindig D-formában vannak jelen,
    B jelentése kémiai kötés vagy L- vagy D-formájú Asn, Asp, Asp-mono-(Ci-C6)-alkilészter, Glu, Ser vagy Trp és
    R jelentése hidroxilcsoport —, azzal jellemezve, hogy
    a) azon (I) általános képletű vegyűletek előállítására, amelyekben
    A jelentése Alá, Val, He,
    B jelentése Asp vagy Glu és
    R jelentése hidroxilcsoport, a Streptomyces albus ATCC 21838. deponálási számú mikroorganizmust vagy ennek variánsát vagy mutánsát tápközegben tenyésztjük, majd a kapott vegyületeket elkülönítjük és kívánt esetben tisztítjuk, hogy
    b) egy N-terminálisan szabad aminosavat tar-71
    HU 198953 Β talmazó A-R jelentésű aminosavat vagy A-B-R jelentésű dipeptidet az anomer centrumban szaluid hidroxilcsoportot tartalmazó Sacch jelentésű monoszacharidnak megfelelő aldózzal kondenzálunk, és az így kapott N-glikozidot Amadori-átrendezésnek vetjük alá.
    (Elsőbbsége: 1987.11.20.)
  2. 2. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására — az (1) általános képletben
    Sacch jelentése N-(l-dezoxifruktopiranóz-l-il)-, N-(l-dezoxitagatopiranóz-l-il)-, N-(l,6-didezoxifruktofuranóz-l-il)-, N-(hidroxi-aceton-3-il)- vagy N-(l-dezoxixilulóz-l-il)-csoport,
    A jelentése L- vagy D-formájú Alá, Val, Ile, Phe, Leu vagy hexahidrofenilglicinil (Hhp), azzal a megszorítással, hogy amennyiben B jelentése kémiai kötés, ezek az aminosav-maradékok mindig D-formában vannak jelen,
    B jelentése kémiai kötés vagy L- vagy D-formájú Asn, Asp, Asp-mono-(Ci-C6)-alkilészter, Glu, Ser vagy Trp és
    R jelentése hidroxilcsoport —, azzal jellemezve, hogy
    a) azon (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben
    A jelentése Alá, Val, Ile,
    B jelentése Asp vagy Glu és
    R jelentése hidroxilcsoport, a Streptomyces albus ATCC 21838. deponálási számú mikroorganizmust vagy variánsát vagy mutánsát tápközegben tenyésztjük, majd a keletkezett (I) általános képletű vegyületeket elkülönítjük és kívánt esetben tisztítjuk, hogy
    b) egy N-termínálisan szabad aminosavat tartalmazó A-R jelentésű aminosavat vagy A-B-R jelentésű dipeptidet az anomer centrumban szabad hidroxilcsoportot tartalmazó Sacch jelentésű monoszacharidnak megfelelő aldózzal kondenzálunk, és áz így kapott N-glikozidot Amadori-átrendezésnek vetjük alá.
    (Elsőbbsége: 1987. 04. 25.)
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás N-(l-dezoxi-fruktóz-l-il)-D-Val-Asp előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
    (Elsőbbsége: 1987.11. 20.)
  4. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás N-(l-dezoxi-fruktóz-l-d)-D-Val-Asp előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
    (Elsőbbsége: 1987.04.25.)
  5. 5. az 1. igénypont szerinti N-(l-dczoxi-fruktóz-l-il)-D-Ile-Asp előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
    (Elsőbbsége: 1987.11. 20.)
  6. 6. A 2. igénypont szerinti eljárás N-(l-dezoxi-fruktóz-l-il)-D-Ile-Asp előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
    (Elsőbbsége: 1987. 04. 25.)
  7. 7. Eljárás enkefalinázgátló hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet — a képletben Sacch, A, B és R jelentése az 1. igénypontban megadott — a gyógyszergyártásban szokásosan alkalmazott segédanyagokkal gyógyszerkészítménnyé alakítunk.
    (Elsőbbsége: 1987.11. 20.)
  8. 8. Eljárás enkefalinázgátló hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a 2. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet — a képletben Sacch, A, B és R jelentése a 2. igénypontban megadott — a gyógyszergyártásban szokásosan alkalmazott segédanyagokkal gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
HU882061A 1987-04-25 1988-04-22 Process for producing glycopeptides and amino acid derivatives having enkephalinase inhibition, as well as pharmaceutical compositions comprising same HU198953B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19873713873 DE3713873A1 (de) 1987-04-25 1987-04-25 Enkastine: neue glycopeptide mit enkephalinase-hemmender wirkung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als pharmazeutische praeparate
DE19873739376 DE3739376A1 (de) 1987-11-20 1987-11-20 Enkastine: neue glycopeptide mit enkephalinase-hemmender wirkung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als pharmazeutische praeparate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT47600A HUT47600A (en) 1989-03-28
HU198953B true HU198953B (en) 1989-12-28

Family

ID=25854960

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU882061A HU198953B (en) 1987-04-25 1988-04-22 Process for producing glycopeptides and amino acid derivatives having enkephalinase inhibition, as well as pharmaceutical compositions comprising same

Country Status (15)

Country Link
US (1) US5302582A (hu)
EP (1) EP0288897B1 (hu)
JP (1) JP2610646B2 (hu)
KR (1) KR880012643A (hu)
CN (1) CN1030766A (hu)
AU (1) AU607486B2 (hu)
DE (1) DE3883055D1 (hu)
DK (1) DK222488A (hu)
ES (1) ES2058169T3 (hu)
FI (1) FI881869A (hu)
HU (1) HU198953B (hu)
IL (1) IL86168A (hu)
NO (1) NO172351C (hu)
NZ (1) NZ224341A (hu)
PT (1) PT87306B (hu)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE184611T1 (de) * 1991-11-29 1999-10-15 Hoechst Ag Peptide mit insulinartiger wirkung
US5679769A (en) * 1994-03-15 1997-10-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of asparagine-linked glycopeptides on a polymeric solid support
DK1216707T3 (da) * 2000-12-22 2005-05-09 Pasteur Institut Fremgangsmåde til screening af ligandmolekyler, der specifikt binder til NEP-bindingsstederne for QHNPR-pentapeptidet
CN100412082C (zh) * 2003-10-16 2008-08-20 北京北医投资管理有限公司医药科技开发分公司 环糖基氨基酸及其制备方法和防治重金属中毒的用途
JP4616928B2 (ja) * 2003-11-19 2011-01-19 花王株式会社 フルクトシルジペプチド又はその塩
JP4542874B2 (ja) * 2003-11-19 2010-09-15 花王株式会社 フルクトシルジペプチド又はその塩
JP4589823B2 (ja) * 2005-06-22 2010-12-01 花王株式会社 化粧料
JP4589824B2 (ja) * 2005-06-22 2010-12-01 花王株式会社 化粧料
JP4584784B2 (ja) * 2005-06-22 2010-11-24 花王株式会社 化粧料
CN101285046B (zh) * 2007-04-09 2011-08-17 天津科技大学 一种诱变菌株白色链霉菌TUST2及利用该诱变菌株生产ε-聚赖氨酸及其盐的方法

Also Published As

Publication number Publication date
NO172351B (no) 1993-03-29
NO881778L (no) 1988-10-26
JPS63295598A (ja) 1988-12-01
KR880012643A (ko) 1988-11-28
PT87306A (pt) 1988-05-01
NO881778D0 (no) 1988-04-22
DE3883055D1 (de) 1993-09-16
CN1030766A (zh) 1989-02-01
FI881869A (fi) 1988-10-26
NZ224341A (en) 1991-05-28
US5302582A (en) 1994-04-12
EP0288897A2 (de) 1988-11-02
PT87306B (pt) 1992-08-31
ES2058169T3 (es) 1994-11-01
NO172351C (no) 1993-07-07
AU1509888A (en) 1988-10-27
AU607486B2 (en) 1991-03-07
EP0288897A3 (de) 1991-02-27
JP2610646B2 (ja) 1997-05-14
IL86168A0 (en) 1988-11-15
DK222488A (da) 1988-10-26
HUT47600A (en) 1989-03-28
DK222488D0 (da) 1988-04-22
FI881869A0 (fi) 1988-04-21
EP0288897B1 (de) 1993-08-11
IL86168A (en) 1993-04-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Naruse et al. Pumilacidin, a complex of new antiviral antibiotics production, isolation, chemical properties, structure and biological activity
CA1339348C (en) Novel glycopeptide antibiotics
EP0366060A1 (de) Glykosidase-Inhibitor Salbostatin, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung
HU198953B (en) Process for producing glycopeptides and amino acid derivatives having enkephalinase inhibition, as well as pharmaceutical compositions comprising same
JPH0641182A (ja) Ｂｂｍ−２４７８ｂ抗生物質
SAITOH et al. Pradimicins L and FL: New pradimicin congeners from Actinomadura verrucosospora subsp. neohibisca
KR100226305B1 (ko) 폴리히드록시 시클로펜탄유도체, 그의 제조방법 및 그의 치료적용도
KR920006881B1 (ko) 프리파스타틴(plipastatin)의 제조방법
KR920001448B1 (ko) Bbm-2478 항생제 착화합물
CA2138542A1 (en) New antibiotics having immunosuppressive activity, delaminomycins and processes for the production of the same
KR100271997B1 (ko) Fa-70d물질, 이를 생산하기 위한 방법 및 그 용도
DE2528984A1 (de) Bestatin und verfahren zu dessen herstellung
CH620244A5 (en) Process for the microbiological preparation of a deacylpepsidin
JP3830964B2 (ja) 海洋放線菌から単離した新規なチオデプシペプチド
EP1136488A1 (en) Sf2809-i, ii, iii, iv, v and vi substances exhibiting chymase-inhibiting activities
JP4095116B2 (ja) スクレロデルマ・テキセンスからの抗真菌性ペプチド
JP3092877B2 (ja) 新規ペプチドｓｎａ−１１５及びｓｎａ−１１５ｔ、その製造法及び新規ペプチド産生菌株
RU2120997C1 (ru) Способ получения 2-амино-4(гидроксиметил)-3а,5,6,6а-тетрагидро-4h-циклопент-[d]-оксазол-4, 5,6-триола и продуцирующие его штаммы актиномицета micromonospora и актиномицета amycolatopsis
JPH08198888A (ja) ジヒドロフェナジン誘導体
EP0721957A1 (en) Compound ge3
KR900008248B1 (ko) 생리활성물질 fa-5859의 제법
JPS60172285A (ja) 新規抗生物質ａｃ−１９７８およびその製造法
DE3739376A1 (de) Enkastine: neue glycopeptide mit enkephalinase-hemmender wirkung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als pharmazeutische praeparate
NO301488B1 (no) Polyhydroksycyklopentanderivat, fremgangsmåte til fremstilling derav, samt biologisk rene stammer av mikroorganismer som er anvendelige i fremgangsmåten
DE3713873A1 (de) Enkastine: neue glycopeptide mit enkephalinase-hemmender wirkung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als pharmazeutische praeparate

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee