JP3092877B2 - 新規ペプチドｓｎａ−１１５及びｓｎａ−１１５ｔ、その製造法及び新規ペプチド産生菌株 - Google Patents
新規ペプチドｓｎａ−１１５及びｓｎａ−１１５ｔ、その製造法及び新規ペプチド産生菌株Info
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規プロリルエンドペ
プチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５及びＳＮＡ−１１５
Ｔ、それを産生する新規微生物及びＳＮＡ−１１５及び
ＳＮＡ−１１５Ｔの製造方法に関する。本発明のプロリ
ルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５及びＳＮ
Ａ−１１５Ｔは、抗健忘剤、あるいは後天性免疫不全症
候群（エイズ）予防治療剤及び抗ＨＩＶ剤等の有効成分
として有用である。
プチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５及びＳＮＡ−１１５
Ｔ、それを産生する新規微生物及びＳＮＡ−１１５及び
ＳＮＡ−１１５Ｔの製造方法に関する。本発明のプロリ
ルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５及びＳＮ
Ａ−１１５Ｔは、抗健忘剤、あるいは後天性免疫不全症
候群（エイズ）予防治療剤及び抗ＨＩＶ剤等の有効成分
として有用である。
【０００２】
【従来の技術】近年、医療技術等の進歩に伴い、平均寿
命が伸びつつあり、老年痴呆は本人はもとよりその家
族、社会を含めた大きな問題になりつつある。これまで
の薬剤は、痴呆の周辺領域に作用するもので、これから
はより痴呆の本質にせまる薬剤が求められている。
命が伸びつつあり、老年痴呆は本人はもとよりその家
族、社会を含めた大きな問題になりつつある。これまで
の薬剤は、痴呆の周辺領域に作用するもので、これから
はより痴呆の本質にせまる薬剤が求められている。
【０００３】プロリルエンドペプチダーゼ（ＥＣ ３．
４．２１．２６）は、プロリンを含むペプチドのプロリ
ンのカルボキシル側をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖ
ｏで特異的に切断する酵素で、記憶にも関与していると
考えられている神経ペプチド、バソプレッシンを分解、
不活性化する〔日本農芸化学会誌、５８、１１４７−１
１５４（１９８４年）〕。そこで、プロリルエンドペプ
チダーゼ阻害剤が抗痴呆活性を有することが期待され、
実際、多くの合成阻害剤が、ラット、マウスを用いた実
験で抗健忘作用を示すことが報告されている〔Ｊ．Ｐａ
ｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ、１０、７３０−７３５（１
９８７）〕。さらに、近年、アルツハイマー型痴呆とプ
ロリルエンドペプチダーゼとの関係が取り沙汰され、ア
ルツハイマー患者の脳でこの酵素の活性が有意に上昇し
ているとの報告（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ、４６、９４
−９７（１９９０）〕や、Ａ４（β）−アミロイドタン
パク質のＣ末端の切出しに関与している等の報告〔ＦＥ
ＢＳ ＬＥＴＴＥＲＳ、２６０、１３１−１３４（１９
９０）〕及びβ−タンパクによる神経崩壊作用に対し
て、プロリルエンドペプチターゼが分解代謝するサブス
タンスＰの投与が有効であるとの報告〔Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｉ．８８，７２４８−７２５１
（１９９１）〕等がなされ、プロリルエンドペプチダー
ゼ阻害剤の抗健忘症薬としての期待が高まっている。特
に、これまでの阻害剤は構造が類似の合成薬がほとんど
で、合成阻害剤に関しては、構造活性相関が明らかにさ
れ〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、５５、３７−
４３（１９９１）〕、活性、体内での吸収、排泄、安定
性などが確立されつつある。その点、放線菌培養物等の
自然界から得られる阻害剤は、合成阻害剤には認められ
ないユニークな構造が期待され、阻害活性、体内での吸
収、排泄、安定性等でこれまでに認められなかったより
有利な点が望みうる。
４．２１．２６）は、プロリンを含むペプチドのプロリ
ンのカルボキシル側をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖ
ｏで特異的に切断する酵素で、記憶にも関与していると
考えられている神経ペプチド、バソプレッシンを分解、
不活性化する〔日本農芸化学会誌、５８、１１４７−１
１５４（１９８４年）〕。そこで、プロリルエンドペプ
チダーゼ阻害剤が抗痴呆活性を有することが期待され、
実際、多くの合成阻害剤が、ラット、マウスを用いた実
験で抗健忘作用を示すことが報告されている〔Ｊ．Ｐａ
ｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ、１０、７３０−７３５（１
９８７）〕。さらに、近年、アルツハイマー型痴呆とプ
ロリルエンドペプチダーゼとの関係が取り沙汰され、ア
ルツハイマー患者の脳でこの酵素の活性が有意に上昇し
ているとの報告（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ、４６、９４
−９７（１９９０）〕や、Ａ４（β）−アミロイドタン
パク質のＣ末端の切出しに関与している等の報告〔ＦＥ
ＢＳ ＬＥＴＴＥＲＳ、２６０、１３１−１３４（１９
９０）〕及びβ−タンパクによる神経崩壊作用に対し
て、プロリルエンドペプチターゼが分解代謝するサブス
タンスＰの投与が有効であるとの報告〔Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｉ．８８，７２４８−７２５１
（１９９１）〕等がなされ、プロリルエンドペプチダー
ゼ阻害剤の抗健忘症薬としての期待が高まっている。特
に、これまでの阻害剤は構造が類似の合成薬がほとんど
で、合成阻害剤に関しては、構造活性相関が明らかにさ
れ〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、５５、３７−
４３（１９９１）〕、活性、体内での吸収、排泄、安定
性などが確立されつつある。その点、放線菌培養物等の
自然界から得られる阻害剤は、合成阻害剤には認められ
ないユニークな構造が期待され、阻害活性、体内での吸
収、排泄、安定性等でこれまでに認められなかったより
有利な点が望みうる。
【０００４】さらには、痴呆症と同様に、治療の本質に
せまる薬剤の必要性がせまられている疾病にエイズがあ
り、死亡率が非常に高いにも係わらず治療法も確立され
ておらず、米国を始め多くの国で大きな社会問題になっ
ている。現在治療剤としては、アジドチミジン（ＡＺ
Ｔ）が用いられているが、骨髄抑制等の副作用が強く、
より直接的に作用し毒性の少ない薬剤が求められてい
る。最近、合成阻害剤を用いた実験で、プロリルエンド
ペプチダーゼ阻害活性とＨＩＶの細胞間感染に特有な合
胞体形成阻止活性とに相関が認められ、新たなメカニズ
ムに立脚した毒性の少ない抗ウイルス剤としても期待で
きる（特開平２−１２４８１８）。
せまる薬剤の必要性がせまられている疾病にエイズがあ
り、死亡率が非常に高いにも係わらず治療法も確立され
ておらず、米国を始め多くの国で大きな社会問題になっ
ている。現在治療剤としては、アジドチミジン（ＡＺ
Ｔ）が用いられているが、骨髄抑制等の副作用が強く、
より直接的に作用し毒性の少ない薬剤が求められてい
る。最近、合成阻害剤を用いた実験で、プロリルエンド
ペプチダーゼ阻害活性とＨＩＶの細胞間感染に特有な合
胞体形成阻止活性とに相関が認められ、新たなメカニズ
ムに立脚した毒性の少ない抗ウイルス剤としても期待で
きる（特開平２−１２４８１８）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
観点からなされたもので、微生物の発酵生産物を用い自
然界からプロリルエンドペプチダーゼ阻害物質を得るこ
とを探求した。その結果、自然界から阻害作用を有する
物質を産生する微生物を見出した。そして、この産生す
る物質を同定し、新規物質であることを確認した。さら
に、この微生物と同一の属に属する微生物の公定株を用
いてこの新規物質を生産するかどうかについて検討した
ところ特定の公定株がこの新規物質を生産することを見
出した。また、この物質の工業的に利用可能な生産方法
を見出した。本発明の物質は抗健忘剤、後天性免疫不全
症候群（エイズ）予防治療剤及び抗ＨＩＶ剤の有効成分
として利用できる。さらに、本発明では、このようにし
て得られた阻害物質に唯一存在するアルギニンのＣ末端
側をトリプシンやアルギニルエンドペプチダーゼなどの
プロテアーゼによって切断し、直鎖状とすると、この阻
害物質とは化学的性質及び生物活性において相違する新
規なプロリルエンドペプチダーゼ阻害物質が得られるこ
とを見出した。
観点からなされたもので、微生物の発酵生産物を用い自
然界からプロリルエンドペプチダーゼ阻害物質を得るこ
とを探求した。その結果、自然界から阻害作用を有する
物質を産生する微生物を見出した。そして、この産生す
る物質を同定し、新規物質であることを確認した。さら
に、この微生物と同一の属に属する微生物の公定株を用
いてこの新規物質を生産するかどうかについて検討した
ところ特定の公定株がこの新規物質を生産することを見
出した。また、この物質の工業的に利用可能な生産方法
を見出した。本発明の物質は抗健忘剤、後天性免疫不全
症候群（エイズ）予防治療剤及び抗ＨＩＶ剤の有効成分
として利用できる。さらに、本発明では、このようにし
て得られた阻害物質に唯一存在するアルギニンのＣ末端
側をトリプシンやアルギニルエンドペプチダーゼなどの
プロテアーゼによって切断し、直鎖状とすると、この阻
害物質とは化学的性質及び生物活性において相違する新
規なプロリルエンドペプチダーゼ阻害物質が得られるこ
とを見出した。
【０００６】すなわち、本発明の課題は、新規なプロリ
ルエンドペプチダーゼ阻害活性を示すペプチドを提供す
ることにある。また、本発明の他の課題は、このような
プロリルエンドペプチダーゼ阻害活性を示すペプチドを
産生する微生物を提供することにある。さらに、本発明
の課題は、このような微生物を用いてプロリルエンドペ
プチダーゼ阻害活性を示すペプチドを生産する方法を提
供することにある。
ルエンドペプチダーゼ阻害活性を示すペプチドを提供す
ることにある。また、本発明の他の課題は、このような
プロリルエンドペプチダーゼ阻害活性を示すペプチドを
産生する微生物を提供することにある。さらに、本発明
の課題は、このような微生物を用いてプロリルエンドペ
プチダーゼ阻害活性を示すペプチドを生産する方法を提
供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】まず、本発明者らは、全
国の各地方から得られる土壌を用いてプロリルエンドペ
プチダーゼ阻害物質を産生する微生物の検索を行なっ
た。その結果、神奈川県三浦半島の地表から約１ｃｍの
土壌中に存在する微生物の発酵生産物が強いプロリルエ
ンドペプチダーゼ阻害活性を示すことを見出し、この菌
を単離同定した。
国の各地方から得られる土壌を用いてプロリルエンドペ
プチダーゼ阻害物質を産生する微生物の検索を行なっ
た。その結果、神奈川県三浦半島の地表から約１ｃｍの
土壌中に存在する微生物の発酵生産物が強いプロリルエ
ンドペプチダーゼ阻害活性を示すことを見出し、この菌
を単離同定した。
【０００８】さらに、詳細に説明すると、本発明者ら
は、神奈川県三浦半島の地表から約１ｃｍの土壌を採取
し、飽和湿度状態で風乾し、６０℃で加熱し、滅菌水を
加え、超音波処理を行って微生物を抽出した。そしてこ
の抽出液を分離用培地に塗布し、培養を行って前記微生
物を単離採取した。そして、この菌を培養しその菌体産
物をＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ（Ｚは、ベンジルオキ
シカルボニル、ｐＮＡはパラニトロアニリンを意味す
る）を基質としてプロリルエンドペプチダーゼを加えて
酵素反応を行い、遊離されるｐＮＡをコントロールと比
較測定することによってプロリルエンドペプチダーゼ阻
害活性を測定した〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５４，３０２１−３０２２（１９９０）〕。その
結果、前記微生物の発酵生産物が他の地方の土壌から分
離した微生物のそれにくらべて著るしく高いプロリルエ
ンドペプチダーゼ阻害活性を示した。
は、神奈川県三浦半島の地表から約１ｃｍの土壌を採取
し、飽和湿度状態で風乾し、６０℃で加熱し、滅菌水を
加え、超音波処理を行って微生物を抽出した。そしてこ
の抽出液を分離用培地に塗布し、培養を行って前記微生
物を単離採取した。そして、この菌を培養しその菌体産
物をＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ（Ｚは、ベンジルオキ
シカルボニル、ｐＮＡはパラニトロアニリンを意味す
る）を基質としてプロリルエンドペプチダーゼを加えて
酵素反応を行い、遊離されるｐＮＡをコントロールと比
較測定することによってプロリルエンドペプチダーゼ阻
害活性を測定した〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５４，３０２１−３０２２（１９９０）〕。その
結果、前記微生物の発酵生産物が他の地方の土壌から分
離した微生物のそれにくらべて著るしく高いプロリルエ
ンドペプチダーゼ阻害活性を示した。
【０００９】そこで、この菌の菌学的性質を検索したと
ころ次のような性質をもっていることが判明した。 １）形態上の性質 走査型電子顕微鏡による観察では、気菌糸上に２個連結
した特徴的な胞子が着生している。胞子は短円筒形で、
径１．１〜１．３×長さ１．３〜１．７ミクロンの大き
さを有し、胞子表面は平滑状である。
ころ次のような性質をもっていることが判明した。 １）形態上の性質 走査型電子顕微鏡による観察では、気菌糸上に２個連結
した特徴的な胞子が着生している。胞子は短円筒形で、
径１．１〜１．３×長さ１．３〜１．７ミクロンの大き
さを有し、胞子表面は平滑状である。
【００１０】２）各種培地上の生育状態 シュクロース硝酸塩、グルコース・アスパラギン、グリ
セリン・アスパラギン（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．５）、スタ
ーチ（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．４）、チロシン（ＩＳＰ培地
Ｎｏ．７）、栄養、イースト麦芽（ＩＳＰ培地 Ｎ
ｏ．２）、オートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）およ
びペプトン・イースト鉄（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．６）の９
種の寒天培地を用いて、２７℃、３週間培養したとこ
ろ、表１に示すように、発育はイースト麦芽寒天培地及
びオートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）寒天培地が最
も優れていた。しかし、いずれの培地においても気菌糸
および基中菌糸の伸長は乏しいものであった。胞子の着
生はグリセリン・アスパラギンおよびチロシンの寒天培
地で良好で、基中菌糸はイースト麦芽およびオートミー
ルの寒天培地で培養したときに黄褐色を呈した。
セリン・アスパラギン（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．５）、スタ
ーチ（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．４）、チロシン（ＩＳＰ培地
Ｎｏ．７）、栄養、イースト麦芽（ＩＳＰ培地 Ｎ
ｏ．２）、オートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）およ
びペプトン・イースト鉄（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．６）の９
種の寒天培地を用いて、２７℃、３週間培養したとこ
ろ、表１に示すように、発育はイースト麦芽寒天培地及
びオートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）寒天培地が最
も優れていた。しかし、いずれの培地においても気菌糸
および基中菌糸の伸長は乏しいものであった。胞子の着
生はグリセリン・アスパラギンおよびチロシンの寒天培
地で良好で、基中菌糸はイースト麦芽およびオートミー
ルの寒天培地で培養したときに黄褐色を呈した。
【００１１】
【表１】 各培地における生育状態の観察 ──────────────────────────────────── 培 地 ３日 ７日 14日 21日 ──────────────────────────────────── シュクロース硝酸 − ＋− ＋ ＋ グルコース・アスパラギン − ＋− ＋ ＋ グリセリン・アスパラギン − ＋ ＋ ＋ スターチ − ＋− ＋ ＋ チロシン − ＋ ＋ ＋ 栄養 − ＋− ＋ ＋ イースト麦芽 − ＋ ＋ ＋＋ オートミール − ＋− ＋ ＋＋ ペプトン・イースト・鉄 − ＋− ＋ ＋ ──────────────────────────────────── −）非生育, ＋−）極微弱, ＋）微弱, ＋＋）弱
【００１２】３）生理的性質 ａ）生育温度；イースト麦芽寒天培地において２２−４
７℃で発育、最適温度は４０℃前後であった。（表２） ｂ）ゼラチンの液化； 陰性 ｃ）澱粉の分解； 陰性 ｄ）脱脂乳のペプトン・凝固化； 陰性 ｅ）メラニン様色素の生成； 陰性
７℃で発育、最適温度は４０℃前後であった。（表２） ｂ）ゼラチンの液化； 陰性 ｃ）澱粉の分解； 陰性 ｄ）脱脂乳のペプトン・凝固化； 陰性 ｅ）メラニン様色素の生成； 陰性
【００１３】
【表２】 生育における培養温度の影響 ──────────────────────────────────── 温 度（℃） ３日 ７日 14日 21日 ──────────────────────────────────── １７ − − − − ２２ − − ＋− ＋ ２７ − ＋ ＋ ＋＋ ３２ ＋ ＋ ＋＋ ３７ ＋ ＋＋ ４２ ＋＋ ４７ ＋＋ ５２ − − − − ──────────────────────────────────── −）非生育, ＋−）極微弱, ＋）微弱, ＋＋）弱
【００１４】４）炭素源の同化性 プリドハム・ゴッドリーブ寒天培地にＬ−アラビノー
ス、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトー
ス、シユクロース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラ
フィノース、Ｄ−マンニット、サリシンおよびＤ−ガラ
クトースの１１種を各々１％添加して観察したところ、
いずれの炭素源においてもその同化性は微弱であった。
ス、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトー
ス、シユクロース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラ
フィノース、Ｄ−マンニット、サリシンおよびＤ−ガラ
クトースの１１種を各々１％添加して観察したところ、
いずれの炭素源においてもその同化性は微弱であった。
【００１５】
【表３】 各炭素源における同化性 ──────────────────────────────────── 炭素源 ３日 ７日 14日 21日 ──────────────────────────────────── Ｌ−アラビノース − ＋− ＋− ＋− Ｄ−キシロース − ＋− ＋− ＋− Ｄ−グルコース − ＋− ＋− ＋− Ｄ−フラクトース − ＋− ＋− ＋− シュクロース − ＋− ＋− ＋− イノシトール − ＋− ＋− ＋− Ｌ−ラムノース − ＋− ＋− ＋− ラフィノース − ＋− ＋− ＋− Ｄ−マンニット − ＋− ＋− ＋− サリシン − ＋− ＋− ＋− Ｄ−ガラクトース − ＋− ＋− ＋− ──────────────────────────────────── −）非生育, ＋−）極微弱, ＋）微弱, ＋＋）弱
【００１６】５）細胞壁組成 ルシバリエ等の方法〔Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ．２０、４３５−４４３、（１９７０年）〕
により、ＳＮＡ−１１５株の菌体中の２，６−ジアミノ
ピメリン酸を分析した結果、ｍｅｓｏ型であった。（細
胞壁タイプIII型）。
ｅｒｉｏｌ．２０、４３５−４４３、（１９７０年）〕
により、ＳＮＡ−１１５株の菌体中の２，６−ジアミノ
ピメリン酸を分析した結果、ｍｅｓｏ型であった。（細
胞壁タイプIII型）。
【００１７】以上の顕微鏡学的観察および細胞壁組成の
分析結果から、ＳＮＡ−１１５株はミクロビスポラ属に
類するものと考えられ、ミクロビスポラ ｓｐ．（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｓｐ．）ＳＮＡ−１１５と命名
した。また、生理的性質をＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕ
ａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ４の記載から検索すると、ミ
クロビスポラ・ロゼア（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒ
ｏｓｅａ）に近縁のものと思われた。
分析結果から、ＳＮＡ−１１５株はミクロビスポラ属に
類するものと考えられ、ミクロビスポラ ｓｐ．（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｓｐ．）ＳＮＡ−１１５と命名
した。また、生理的性質をＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕ
ａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ４の記載から検索すると、ミ
クロビスポラ・ロゼア（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒ
ｏｓｅａ）に近縁のものと思われた。
【００１８】本発明者らは、上述した性質を有するＳＮ
Ａ−１１５株を他の公知の株と区別するため、工業技術
院微生物工業研究所に受託番号微工研菌寄第１２０９４
号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２０９４）として寄託した。本発
明におけるＳＮＡ−１１５株は前記したようにミクロビ
スポラ・ロゼアに近縁のものと思われたので、いくつか
のミクロビスポラ属の公定株を購入し、その阻害活性を
調べた。その結果、ミクロビスポラ・ロゼア ノノムラ
アンド オハラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒｏｓ
ｅａ Ｎｏｎｏｍｕｒａ ａｎｄ Ｏｈａｒａ）（ＩＦ
Ｏ １４０４４）及びミクロビスポラ・ロゼア サブス
ピーシス ノンニトリトゲネス ノノムラ アンド オ
ハラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒｏｓｅａｓｕｂｓ
ｐ．ｎｏｎｎｉｔｒｉｔｏｇｅｎｅｓ Ｎｏｎｏｍｕｒ
ａ ａｎｄ Ｏｈａｒａ）（ＩＦＯ １４０４５）に活
性が認められた。この２株の活性物質をＨＰＬＣによっ
て分析したところＳＮＡ−１１５と保持時間が一致した
ので、この２株の産生する物質はＳＮＡ−１１５と同一
であると判断される。従って、本発明におけるミクロビ
スポラｓｐ．に属しＳＮＡ−１１５産生能を有するＳＮ
Ａ−１１５産生菌にはこれらの公定株も含まれる。な
お、ＳＮＡ−１１５株は、これらの公定株と生育の仕方
が類似しているが、ＩＳＰ培地 Ｎｏ．７上での色素生
産性において相違する。
Ａ−１１５株を他の公知の株と区別するため、工業技術
院微生物工業研究所に受託番号微工研菌寄第１２０９４
号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２０９４）として寄託した。本発
明におけるＳＮＡ−１１５株は前記したようにミクロビ
スポラ・ロゼアに近縁のものと思われたので、いくつか
のミクロビスポラ属の公定株を購入し、その阻害活性を
調べた。その結果、ミクロビスポラ・ロゼア ノノムラ
アンド オハラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒｏｓ
ｅａ Ｎｏｎｏｍｕｒａ ａｎｄ Ｏｈａｒａ）（ＩＦ
Ｏ １４０４４）及びミクロビスポラ・ロゼア サブス
ピーシス ノンニトリトゲネス ノノムラ アンド オ
ハラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｒｏｓｅａｓｕｂｓ
ｐ．ｎｏｎｎｉｔｒｉｔｏｇｅｎｅｓ Ｎｏｎｏｍｕｒ
ａ ａｎｄ Ｏｈａｒａ）（ＩＦＯ １４０４５）に活
性が認められた。この２株の活性物質をＨＰＬＣによっ
て分析したところＳＮＡ−１１５と保持時間が一致した
ので、この２株の産生する物質はＳＮＡ−１１５と同一
であると判断される。従って、本発明におけるミクロビ
スポラｓｐ．に属しＳＮＡ−１１５産生能を有するＳＮ
Ａ−１１５産生菌にはこれらの公定株も含まれる。な
お、ＳＮＡ−１１５株は、これらの公定株と生育の仕方
が類似しているが、ＩＳＰ培地 Ｎｏ．７上での色素生
産性において相違する。
【００１９】そこでこのミクロビスポラ・エスピーＳＮ
Ａ−１１５株を、グルコース２％、可溶性澱粉１％、大
豆粉２．５％、肉エキス０．１％、乾燥酵母０．４％、
塩化ナトリウム０．２％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．００５％か
らなりオートクレーブで滅菌後ｐＨ７．０となるように
調整した液体培地に接種し、２７℃で好気的条件下で振
盪または撹拌下で前培養及び本培養を行い、菌体を増殖
させ、この菌体からプロリルエンドペプチダーゼ阻害物
質を単離した。この単離は、前記菌体より活性画分を有
機溶媒で抽出し、抽出物をクロロホルム：メタノール
（２：１）の溶液に懸濁し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィーに付し、吸着物をクロロホルム：メタノール
（１：１）と（１：２）の溶媒で溶出し、溶出液をセフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラムクロ
マトグラフィーに付し、メタノールで展開して活性フラ
クションを集めた。有機溶媒としては、アセトン、メタ
ノール等を用いることが好ましい。この活性フラクショ
ンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけ、
活性フラクションを濃縮凍結乾燥することによって白色
粉末を得た。
Ａ−１１５株を、グルコース２％、可溶性澱粉１％、大
豆粉２．５％、肉エキス０．１％、乾燥酵母０．４％、
塩化ナトリウム０．２％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．００５％か
らなりオートクレーブで滅菌後ｐＨ７．０となるように
調整した液体培地に接種し、２７℃で好気的条件下で振
盪または撹拌下で前培養及び本培養を行い、菌体を増殖
させ、この菌体からプロリルエンドペプチダーゼ阻害物
質を単離した。この単離は、前記菌体より活性画分を有
機溶媒で抽出し、抽出物をクロロホルム：メタノール
（２：１）の溶液に懸濁し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィーに付し、吸着物をクロロホルム：メタノール
（１：１）と（１：２）の溶媒で溶出し、溶出液をセフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラムクロ
マトグラフィーに付し、メタノールで展開して活性フラ
クションを集めた。有機溶媒としては、アセトン、メタ
ノール等を用いることが好ましい。この活性フラクショ
ンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけ、
活性フラクションを濃縮凍結乾燥することによって白色
粉末を得た。
【００２０】この白色粉末の理化学的性質を調べたとこ
ろ、次に示すような性質があった。そして、新規なペプ
チドであることが判明したので、ＳＮＡ−１１５と命名
した。
ろ、次に示すような性質があった。そして、新規なペプ
チドであることが判明したので、ＳＮＡ−１１５と命名
した。
【００２１】理化学的性質 １）分子式 Ｃ113 Ｈ142 Ｎ26Ｏ27 ２）高分解能マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ） 実験値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２２９６．０５４９ 理論値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２２９６．０６１６ ３）融点 明確な融点は示さず、２３０〜２４０℃で褐変化して分
解する。 ４）比旋光度
解する。 ４）比旋光度
【００２２】
【数１】
【００２３】５）紫外線吸収スペクトル 図１のとおり
【００２４】
【数２】
【００２５】６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 図２のとおり ７） 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ） 図３のとおり 重ジメチルスルホキシド溶液中ＴＭＳを基準物質として
測定した。 ８）13Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ） 図４のとおり 重ジメチルスルホキシド溶液中ＴＭＳを基準物質として
測定した。 ９）溶解性 メタノール、ジメチルスルホキシド、ブタノール、エタ
ノールに可溶、アセトニトリル、クロロホルム、アセト
ン、水に不溶 １０）物質の色及び性状 白色粉末 １１）薄相クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレート Ｆ２５４ Ａｒｔ．５７１
５（メルク社製） １２）アミノ酸分析 ＳＮＡ−１１５はペプチドであり、ＳＮＡ−１１５を４
Ｎメタンスルホン酸中で、９０℃、２４時間加水分解
し、アミノ酸自動分析計でアミノ酸分析を行うことによ
って、アスパラギン酸（あるいはアスパラギン）
（２）、スレオニン（１）、セリン（１）、グリシン
（３）、イソロイシン（１）、ロイシン（１）、チロシ
ン（２）、フェニルアラニン（２）、ヒスチジン
（１）、アルギニン（１）、プロリン（２）、トリプト
ファン（２）が検出された（カッコ内はモル比を表
す）。このペプチドについてエドマン分解法、ＦＡＢ−
ＭＳスペクトルのフラグメントイオンの解析、並びにＦ
ＡＢ─ＭＳリンクドスキャン法により構造を決定したと
ころ、構造式（Ｉ）に示すようなペプチドであることが
判明した。このペプチドをＳＮＡ−１１５〔プロペプチ
ン（Ｐｒｏｐｅｐｔｉｎ）と命名した。〕
測定した。 ８）13Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ） 図４のとおり 重ジメチルスルホキシド溶液中ＴＭＳを基準物質として
測定した。 ９）溶解性 メタノール、ジメチルスルホキシド、ブタノール、エタ
ノールに可溶、アセトニトリル、クロロホルム、アセト
ン、水に不溶 １０）物質の色及び性状 白色粉末 １１）薄相クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレート Ｆ２５４ Ａｒｔ．５７１
５（メルク社製） １２）アミノ酸分析 ＳＮＡ−１１５はペプチドであり、ＳＮＡ−１１５を４
Ｎメタンスルホン酸中で、９０℃、２４時間加水分解
し、アミノ酸自動分析計でアミノ酸分析を行うことによ
って、アスパラギン酸（あるいはアスパラギン）
（２）、スレオニン（１）、セリン（１）、グリシン
（３）、イソロイシン（１）、ロイシン（１）、チロシ
ン（２）、フェニルアラニン（２）、ヒスチジン
（１）、アルギニン（１）、プロリン（２）、トリプト
ファン（２）が検出された（カッコ内はモル比を表
す）。このペプチドについてエドマン分解法、ＦＡＢ−
ＭＳスペクトルのフラグメントイオンの解析、並びにＦ
ＡＢ─ＭＳリンクドスキャン法により構造を決定したと
ころ、構造式（Ｉ）に示すようなペプチドであることが
判明した。このペプチドをＳＮＡ−１１５〔プロペプチ
ン（Ｐｒｏｐｅｐｔｉｎ）と命名した。〕
【００２６】
【式３】
【００２７】本発明のプロリルエンドペプチダーゼ阻害
物質ＳＮＡ−１１５のプロリルエンドペプチダーゼ阻害
活性、殺細胞活性（ヒト鼻咽腔癌細胞ＫＢ、マウス白血
病細胞Ｌ１２１０）、抗菌活性について次のようにして
測定した。
物質ＳＮＡ−１１５のプロリルエンドペプチダーゼ阻害
活性、殺細胞活性（ヒト鼻咽腔癌細胞ＫＢ、マウス白血
病細胞Ｌ１２１０）、抗菌活性について次のようにして
測定した。
【００２８】１）プロリルエンドペプチダーゼ阻害活性 酵素阻害活性の測定法を以下に示す。０．１Ｍトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．８４ｍｌに、メタノールに
溶解した各濃度のサンプル０．０１ｍｌと、０．１Ｍト
リス緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解したフラボバクテリウ
ム由来のプロリルエンドペプチダーゼ〔生化学工業
（株）〕０．０５ｍｌ（０．１ｕｎｉｔ／ｍｌ）を加え
て混合し、３０℃で５分間保温した。これに、４０％ジ
オキサンに溶解した合成基質Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮ
Ａ（生化学工業（株））０．１ｍｌ（２ｍＭ溶液）を加
えて反応を開始し、３０℃、３０分間反応を行った。反
応終了後反応停止液（１０ｇトリトンＸ−１００／９５
ｍｌ １Ｍ 酢酸緩衝液、ｐＨ４．０）を０．５ｍｌ加
え、反応により遊離したｐ−ニトロアニリンを４１０ｎ
ｍにて比色定量した。阻害率は
酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．８４ｍｌに、メタノールに
溶解した各濃度のサンプル０．０１ｍｌと、０．１Ｍト
リス緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解したフラボバクテリウ
ム由来のプロリルエンドペプチダーゼ〔生化学工業
（株）〕０．０５ｍｌ（０．１ｕｎｉｔ／ｍｌ）を加え
て混合し、３０℃で５分間保温した。これに、４０％ジ
オキサンに溶解した合成基質Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮ
Ａ（生化学工業（株））０．１ｍｌ（２ｍＭ溶液）を加
えて反応を開始し、３０℃、３０分間反応を行った。反
応終了後反応停止液（１０ｇトリトンＸ−１００／９５
ｍｌ １Ｍ 酢酸緩衝液、ｐＨ４．０）を０．５ｍｌ加
え、反応により遊離したｐ−ニトロアニリンを４１０ｎ
ｍにて比色定量した。阻害率は
【００２９】
【数３】
【００３０】ただし、 Ａ：サンプルを加えず同量のメタノールを加えたコント
ロール反応により遊離したｐ−ニトロアニリンの４１０
ｎｍの吸光度 Ｂ：サンプルを加えた反応により遊離したｐ−ニトロア
ニリンの４１０ｎｍの吸光度
ロール反応により遊離したｐ−ニトロアニリンの４１０
ｎｍの吸光度 Ｂ：サンプルを加えた反応により遊離したｐ−ニトロア
ニリンの４１０ｎｍの吸光度
【００３１】ＳＮＡ−１１５のメタノール溶液を用いて
上記反応条件下で阻害活性を測定した結果、５０％反応
阻害濃度は、０．２ｍＭ Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ
を基質とした時２．６μｇ／ｍｌ（１．１μＭ）であっ
た。また、基質量とＳＮＡ−１１５の濃度を変えて反応
を行い、Ｄｉｘｏｎ Ｐｌｏｔにて阻害形式を調べる
と、ＳＮＡ−１１５物質は拮抗阻害を示し、図より求め
た阻害定数はＫｉ＝１．６μｇ／ｍｌ（０．７μＭ）で
あった（図５）。
上記反応条件下で阻害活性を測定した結果、５０％反応
阻害濃度は、０．２ｍＭ Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ
を基質とした時２．６μｇ／ｍｌ（１．１μＭ）であっ
た。また、基質量とＳＮＡ−１１５の濃度を変えて反応
を行い、Ｄｉｘｏｎ Ｐｌｏｔにて阻害形式を調べる
と、ＳＮＡ−１１５物質は拮抗阻害を示し、図より求め
た阻害定数はＫｉ＝１．６μｇ／ｍｌ（０．７μＭ）で
あった（図５）。
【００３２】２）殺細胞活性 細胞〔２０００個／１００μｌ／穴（ｗｅｌｌ）〕を９
６穴のマイクロプレートに播き、ヒト鼻咽腔癌細胞ＫＢ
は、ＤＭＥＭ培地（５％ＦＣＳを含む）で、マウス白血
病細胞Ｌ１２１０は、ＲＰＭＩ１６４０培地（５％ＦＣ
Ｓを含む）でそれぞれ５％ＣＯ2 下３７℃にて２４時間
培養した。これに一連の希釈系列のＳＮＡ−１１５メタ
ノール溶液５μｌを加え、７２時間培養した後、２．５
ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液１０μｌを加え、４時間さらに
培養し、ｆｏｒｍａｚａｎを生成させた。２０００ｒｐ
ｍで２分間遠心してから上清を除去した後、１００μｌ
のＤＭＳＯを加えて、イムノリーダーを用い５４０ｎｍ
の吸収を測定した。対照群の吸収に対する比率により各
検体の細胞増殖阻害活性を求めた。その結果を表４に示
す。
６穴のマイクロプレートに播き、ヒト鼻咽腔癌細胞ＫＢ
は、ＤＭＥＭ培地（５％ＦＣＳを含む）で、マウス白血
病細胞Ｌ１２１０は、ＲＰＭＩ１６４０培地（５％ＦＣ
Ｓを含む）でそれぞれ５％ＣＯ2 下３７℃にて２４時間
培養した。これに一連の希釈系列のＳＮＡ−１１５メタ
ノール溶液５μｌを加え、７２時間培養した後、２．５
ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液１０μｌを加え、４時間さらに
培養し、ｆｏｒｍａｚａｎを生成させた。２０００ｒｐ
ｍで２分間遠心してから上清を除去した後、１００μｌ
のＤＭＳＯを加えて、イムノリーダーを用い５４０ｎｍ
の吸収を測定した。対照群の吸収に対する比率により各
検体の細胞増殖阻害活性を求めた。その結果を表４に示
す。
【００３３】
【表４】
【００３４】３）抗菌活性 ＳＮＡ−１１５物質の２４種の細菌、カビ、酵母に対す
る抗菌活性を寒天平板を用いたペーパーディスク法にて
測定した。ＳＮＡ−１１５をペーパーディスク当り４０
μｇ添加し、それを各検定菌プレート上にのせ、それぞ
れの菌の最適条件下で培養した後生成した阻止円の大き
さ（ｍｍ）を表５に示す。
る抗菌活性を寒天平板を用いたペーパーディスク法にて
測定した。ＳＮＡ−１１５をペーパーディスク当り４０
μｇ添加し、それを各検定菌プレート上にのせ、それぞ
れの菌の最適条件下で培養した後生成した阻止円の大き
さ（ｍｍ）を表５に示す。
【００３５】
【表５】
【００３６】以上のように、本発明のプロリルエンドペ
プチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５は、培養細胞に対す
る殺細胞作用及び各種微生物に対する抗菌作用が著しく
弱く、特異的に高いプロリルエンドペプチダーゼ阻害活
性を示すので、抗健忘剤、抗ウイルス剤（後天性免疫不
全症候群（エイズ）予防治療剤、抗ＨＩＶ剤等）として
極めて有用である。
プチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５は、培養細胞に対す
る殺細胞作用及び各種微生物に対する抗菌作用が著しく
弱く、特異的に高いプロリルエンドペプチダーゼ阻害活
性を示すので、抗健忘剤、抗ウイルス剤（後天性免疫不
全症候群（エイズ）予防治療剤、抗ＨＩＶ剤等）として
極めて有用である。
【００３７】さらに、本発明のＳＮＡ−１１５のアルギ
ニンのＣ末端側をトリプシンやアルギニルエンドペプチ
ダーゼなどのプロテアーゼで切断し、直鎖状としたとこ
ろ、ＳＮＡ−１１５とは化学的性質及び生物活性におい
て異なる新たなプロリルエンドペプチターゼ阻害活性の
ある物質を見出し、この物質をＳＮＡ−１１５Ｔと命名
した。このＳＮＡ−１１５Ｔは、次の構造式（II) を示
し、ＳＮＡ−１１５で観察されていた抗菌活性が全く消
失してプロリルエンドペプチターゼに対する阻害活性が
特異的に高まっている。
ニンのＣ末端側をトリプシンやアルギニルエンドペプチ
ダーゼなどのプロテアーゼで切断し、直鎖状としたとこ
ろ、ＳＮＡ−１１５とは化学的性質及び生物活性におい
て異なる新たなプロリルエンドペプチターゼ阻害活性の
ある物質を見出し、この物質をＳＮＡ−１１５Ｔと命名
した。このＳＮＡ−１１５Ｔは、次の構造式（II) を示
し、ＳＮＡ−１１５で観察されていた抗菌活性が全く消
失してプロリルエンドペプチターゼに対する阻害活性が
特異的に高まっている。
【００３８】
【式４】
【００３９】次にＳＮＡ−１１５Ｔの理化学的性質を示
す。 １）分子式 Ｃ113 Ｈ144 Ｎ26Ｏ28 ２）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ） 実験値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４、図６の通り。 ３）高分解能マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ） 実験値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４．０７４０ 理論値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４．０７２２ ４）融点 明確な融点は示さず、１９０〜２００℃て褐変化して分
解する。 ５）比旋光度
す。 １）分子式 Ｃ113 Ｈ144 Ｎ26Ｏ28 ２）マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ） 実験値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４、図６の通り。 ３）高分解能マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ） 実験値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４．０７４０ 理論値 （Ｍ＋Ｈ）+ ＝２３１４．０７２２ ４）融点 明確な融点は示さず、１９０〜２００℃て褐変化して分
解する。 ５）比旋光度
【００４０】
【数４】
【００４１】６）紫外線吸収スペクトル
【００４２】
【数５】 図７の通り。
【００４３】７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 図８の通り。 ８） 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ） 図９の通り。 重ジメチルスルホキシド溶液中ＴＭＳを基準物質として
測定した。 ９）溶解性 メタノール、ジメチルスルホキシド、ブタノール、エタ
ノールに可溶 クロロホルム、アセトン、水に不溶 １０）物質の色及び性状 白色粉末 １１）薄層クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレート Ｆ２５４ Ａｒｔ．５７１
５（メルク社製） １２）アミノ酸分析 ＳＮＡ−１１５Ｔはペプチドであり、ＳＮＡ−１１５Ｔ
を４Ｎメタンスルホン酸中で、９０℃、２４時間加水分
解し、アミノ酸自動分析計でアミノ酸分析を行うことに
よって、アスパラギン酸（あるいはアスパラギン）
（２）、スレオニン（１）、セリン（１）、グリシン
（３）、イソロイシン（１）、ロイシン（１）、チロシ
ン（２）、フェニルアラニン（２）、ヒスチジン
（１）、アルギニン（１）、プロリン（２）、トリプト
ファン（２）が検出された。このペプチドについてエド
マン分解法、ＦＡＢ−ＭＳスペクトルのフラグメントイ
オンの解析、並びにＦＡＢ−ＭＳリンクドスキャン法に
より構造を決定したところ、構造式（II) に示すような
ペプチドであるこが判明した。
測定した。 ９）溶解性 メタノール、ジメチルスルホキシド、ブタノール、エタ
ノールに可溶 クロロホルム、アセトン、水に不溶 １０）物質の色及び性状 白色粉末 １１）薄層クロマトグラフィー 担体：シリカゲルプレート Ｆ２５４ Ａｒｔ．５７１
５（メルク社製） １２）アミノ酸分析 ＳＮＡ−１１５Ｔはペプチドであり、ＳＮＡ−１１５Ｔ
を４Ｎメタンスルホン酸中で、９０℃、２４時間加水分
解し、アミノ酸自動分析計でアミノ酸分析を行うことに
よって、アスパラギン酸（あるいはアスパラギン）
（２）、スレオニン（１）、セリン（１）、グリシン
（３）、イソロイシン（１）、ロイシン（１）、チロシ
ン（２）、フェニルアラニン（２）、ヒスチジン
（１）、アルギニン（１）、プロリン（２）、トリプト
ファン（２）が検出された。このペプチドについてエド
マン分解法、ＦＡＢ−ＭＳスペクトルのフラグメントイ
オンの解析、並びにＦＡＢ−ＭＳリンクドスキャン法に
より構造を決定したところ、構造式（II) に示すような
ペプチドであるこが判明した。
【００４４】本発明のプロリルエンドペプチターゼ阻害
物質ＳＮＡ−１１５Ｔのプロリルエンドペプチターゼ阻
害活性、抗菌活性について次のようにして測定した。 １）プロリルエンドペプチターゼ阻害活性 酵素阻害活性の測定法を以下に示す。０．１Ｍトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．８４ｍｌに、メタノールに
溶解した各濃度のサンプル０．０１ｍｌと、０．１Ｍト
リス緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解したフラボバクテリウ
ム由来のプロリルエンドペプチターゼ〔生化学工業
（株）〕０．０５ｍｌ（０．１ｕｎｉｔ／ｍｌ）を加え
て混合し、３０℃で５分間保温した。これに、４０％ジ
オキサンに溶解した合成基質Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮ
Ａ（生化学工業（株））０．１ｍｌ（２ｍＭ溶液）を加
えて反応を開始し、３０℃，３０分間反応を行った。反
応終了後反応停止液（１０ｇトリトンＸ−１００／９５
ｍｌ １Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ４．０）を０．５ｍｌ加
え、反応により遊離したｐ−ニトロアニリンを４１０ｎ
ｍにて比色定量した。阻害率は、
物質ＳＮＡ−１１５Ｔのプロリルエンドペプチターゼ阻
害活性、抗菌活性について次のようにして測定した。 １）プロリルエンドペプチターゼ阻害活性 酵素阻害活性の測定法を以下に示す。０．１Ｍトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．８４ｍｌに、メタノールに
溶解した各濃度のサンプル０．０１ｍｌと、０．１Ｍト
リス緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解したフラボバクテリウ
ム由来のプロリルエンドペプチターゼ〔生化学工業
（株）〕０．０５ｍｌ（０．１ｕｎｉｔ／ｍｌ）を加え
て混合し、３０℃で５分間保温した。これに、４０％ジ
オキサンに溶解した合成基質Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮ
Ａ（生化学工業（株））０．１ｍｌ（２ｍＭ溶液）を加
えて反応を開始し、３０℃，３０分間反応を行った。反
応終了後反応停止液（１０ｇトリトンＸ−１００／９５
ｍｌ １Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ４．０）を０．５ｍｌ加
え、反応により遊離したｐ−ニトロアニリンを４１０ｎ
ｍにて比色定量した。阻害率は、
【００４５】
【数６】
【００４６】ただし、 Ａ：サンプルを加えず同量のメタノールを加えたコント
ロール反応により遊離したｐ−ニトロアニリンの４１０
ｎｍの吸光度 Ｂ：サンプルを加えた反応により遊離したｐ−ニトロア
ニリンの４１０ｎｍの吸光度 ＳＮＡ−１１５Ｔのメタノール溶液を用いて上記反応条
件下で阻害活性を測定した結果、５０％反応阻害濃度
は、０．２ｍＭ Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡを基質と
した時３．０μｇ／ｍｌ（１．３μＭ）であった。ま
た、基質量とＳＮＡ−１１５Ｔの濃度を変えて反応を行
い、Ｄｉｘｏｎ Ｐｌｏｔにて阻害形式を調べると、Ｓ
ＮＡ−１１５Ｔ物質は拮抗阻害を示し、図より求めた阻
害定数はＫｉ＝１．１μｇ／ｍｌ（０．４８μＭ）であ
った（図１０）。
ロール反応により遊離したｐ−ニトロアニリンの４１０
ｎｍの吸光度 Ｂ：サンプルを加えた反応により遊離したｐ−ニトロア
ニリンの４１０ｎｍの吸光度 ＳＮＡ−１１５Ｔのメタノール溶液を用いて上記反応条
件下で阻害活性を測定した結果、５０％反応阻害濃度
は、０．２ｍＭ Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡを基質と
した時３．０μｇ／ｍｌ（１．３μＭ）であった。ま
た、基質量とＳＮＡ−１１５Ｔの濃度を変えて反応を行
い、Ｄｉｘｏｎ Ｐｌｏｔにて阻害形式を調べると、Ｓ
ＮＡ−１１５Ｔ物質は拮抗阻害を示し、図より求めた阻
害定数はＫｉ＝１．１μｇ／ｍｌ（０．４８μＭ）であ
った（図１０）。
【００４７】２）抗菌活性 ＳＮＡ−１１５Ｔの９種の細菌、カビに対する抗菌活性
を寒天平板を用いたペーパーディスク法にて測定した。
ＳＮＡ−１１５Ｔをペーパーディスク当たり４０μｇ添
加し、それを各検定菌プレート上にのせ、それぞれの菌
の最適条件下で培養した後生成した阻止円の大きさ（ｍ
ｍ）を表６に示す。同様に行ったＳＮＡ−１１５物質の
阻止円大きさも比較のために示した。
を寒天平板を用いたペーパーディスク法にて測定した。
ＳＮＡ−１１５Ｔをペーパーディスク当たり４０μｇ添
加し、それを各検定菌プレート上にのせ、それぞれの菌
の最適条件下で培養した後生成した阻止円の大きさ（ｍ
ｍ）を表６に示す。同様に行ったＳＮＡ−１１５物質の
阻止円大きさも比較のために示した。
【００４８】
【表６】
【００４９】以上のように、本発明のプロリルエンドペ
プチターゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５Ｔは、各種微生物に
対する抗菌作用が著しく減少し、特異的に高いプロリル
エンドペプチターゼ阻害活性を示すので、抗健忘剤、抗
ウイルス剤（後天性免疫不全症候群（エイズ）予防治療
剤、抗ＨＩＶ剤等）として極めて有用である。そして、
このペプチドは新規なことが判明した。
プチターゼ阻害物質ＳＮＡ−１１５Ｔは、各種微生物に
対する抗菌作用が著しく減少し、特異的に高いプロリル
エンドペプチターゼ阻害活性を示すので、抗健忘剤、抗
ウイルス剤（後天性免疫不全症候群（エイズ）予防治療
剤、抗ＨＩＶ剤等）として極めて有用である。そして、
このペプチドは新規なことが判明した。
【００５０】上記プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質
ＳＮＡ−１１５及びＳＮＡ−１１５Ｔは、常法により錠
剤、散剤、カプセル剤、注射剤、吸入剤または外用剤等
の製剤とすることができ、経口または非経口投与により
抗健忘剤もしくは抗ウイルス剤として臨床に供される。
投与量は治療すべき症状及び投与方法により左右され
る。なお、プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ
−１１５のラット急性毒性値は１０ｍｇ／ｋｇ以上（静
注）であり、ＳＮＡ−１１５Ｔのそれも同じく１０ｍｇ
／ｋｇ以上（静注）である。
ＳＮＡ−１１５及びＳＮＡ−１１５Ｔは、常法により錠
剤、散剤、カプセル剤、注射剤、吸入剤または外用剤等
の製剤とすることができ、経口または非経口投与により
抗健忘剤もしくは抗ウイルス剤として臨床に供される。
投与量は治療すべき症状及び投与方法により左右され
る。なお、プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ
−１１５のラット急性毒性値は１０ｍｇ／ｋｇ以上（静
注）であり、ＳＮＡ−１１５Ｔのそれも同じく１０ｍｇ
／ｋｇ以上（静注）である。
【００５１】次に本発明を実施例を挙げて具体的に説明
する。
する。
【実施例１】 （ＳＮＡ−１１５生産菌株の単離）神奈川県三浦半島の
地表から約１ｃｍの土壌を採取し、これを、飽和湿度状
態で、７日間室温風乾後、６０℃、１時間加熱した。こ
のようにした土壌を滅菌水で１０倍に希釈して１分間の
超音波処理を行った。これを分離用培地（グルコース
５ｇ／ｌ、ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｌ、Ｋ2 ＨＰＯ4
０．５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５ｇ／ｌ、
酵母エキス ０．５ｇ／ｌ、Ｌ−アスパラギン０．５ｇ
／ｌ、可溶性澱粉 ５ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、
寒天 １５ｇ／ｌ、ナイスタチン ５０ｍｇ／ｌ、サイ
クロヘキシミド ５０ｍｇ／ｌ、ノボビオシン ３ｍｇ
／ｌ、リファンピシン ５ｍｇ／ｌ、ｐＨ７．０に調
製）に塗布し、２７℃で培養を行い、生育する微生物を
単離した。この菌を同定したところ、前記した菌学的性
質を示した。この菌株をミクロビスポラ・エスピー Ｓ
ＮＡ−１１５株と命名し、微工研に寄託した（受託番号
微工研菌寄第１２０９４号）。
地表から約１ｃｍの土壌を採取し、これを、飽和湿度状
態で、７日間室温風乾後、６０℃、１時間加熱した。こ
のようにした土壌を滅菌水で１０倍に希釈して１分間の
超音波処理を行った。これを分離用培地（グルコース
５ｇ／ｌ、ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｌ、Ｋ2 ＨＰＯ4
０．５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５ｇ／ｌ、
酵母エキス ０．５ｇ／ｌ、Ｌ−アスパラギン０．５ｇ
／ｌ、可溶性澱粉 ５ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、
寒天 １５ｇ／ｌ、ナイスタチン ５０ｍｇ／ｌ、サイ
クロヘキシミド ５０ｍｇ／ｌ、ノボビオシン ３ｍｇ
／ｌ、リファンピシン ５ｍｇ／ｌ、ｐＨ７．０に調
製）に塗布し、２７℃で培養を行い、生育する微生物を
単離した。この菌を同定したところ、前記した菌学的性
質を示した。この菌株をミクロビスポラ・エスピー Ｓ
ＮＡ−１１５株と命名し、微工研に寄託した（受託番号
微工研菌寄第１２０９４号）。
【００５２】
【実施例２】 （ＳＮＡ−１１５の製造１）グルコース２％、可溶性澱
粉１％、大豆粉２．５％、肉エキス０．１％、乾燥酵母
０．４％、塩化ナトリウム０．２％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．
００５％からなる培地をｐＨ８．４に調整した後、５０
０ｍｌの三角フラスコにそれぞれ７０ｍｌずつ分注し、
１２０℃で２０分間殺菌した。この培地にミクロビスポ
ラ・エスピーＳＮＡ−１１５株（微工研菌寄第１２０９
４号）の斜面培地より１白金耳を接種し、２７℃で１０
日間振盪培養（２００ｒｐｍ）を行った。これを同様の
培地を含むフラスコにそれぞれ２ｍｌ接種し、２７℃で
３日間振盪培養を行った。
粉１％、大豆粉２．５％、肉エキス０．１％、乾燥酵母
０．４％、塩化ナトリウム０．２％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．
００５％からなる培地をｐＨ８．４に調整した後、５０
０ｍｌの三角フラスコにそれぞれ７０ｍｌずつ分注し、
１２０℃で２０分間殺菌した。この培地にミクロビスポ
ラ・エスピーＳＮＡ−１１５株（微工研菌寄第１２０９
４号）の斜面培地より１白金耳を接種し、２７℃で１０
日間振盪培養（２００ｒｐｍ）を行った。これを同様の
培地を含むフラスコにそれぞれ２ｍｌ接種し、２７℃で
３日間振盪培養を行った。
【００５３】この前培養液１４０ｍｌを、同様の培地１
８ｌの入った３０ｌ容のジャーファーメンターに移し、
２７℃で毎分１８リットルの無菌空気を送り３００ｒｐ
ｍの回転かき混ぜによって本培養を行った。２１２時間
後（ｐＨ５．６）、培養をやめ、遠心分離によって菌体
を集めて、湿菌体１．７５ｋｇを得た。この菌体をアセ
トンで抽出し、抽出物を凍結乾燥したところ菌体抽出物
の粉末３４．８ｇが得られ、このプロリルエンドペプチ
ダーゼ阻害活性は、５０％阻害濃度（ＩＣ50）が１５．
５μｇ／ｍｌであった。これを、クロロホルム：メタノ
ール（２：１）の溶液５０ｍｌに懸濁し、シリカゲル
（メルク社製Ｋｉｓｅｌ ｇｅｌ ６０，７０〜２３０
メツシュ）カラムクロマトグラフィー（４×３６ｃｍ）
に付し、同じ溶媒１リットルで不純物を溶出させた後、
クロロホルム：メタノール（１：１）１リットルとクロ
ロホルム：メタノール（１：２）１リットルで活性成分
を溶出させた（３．９ｇ、ＩＣ50＝２．７μｇ／ｍ
ｌ）。これを１０ｍｌのメタノールに溶解し、セファデ
ックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラムクロマト
グラフィー（３×７３ｃｍ）に付し、メタノールにて展
開して活性フラクションを集めた（３．１ｇ、ＩＣ50＝
２．４μｇ／ｍｌ）。これをメタノールに溶解し、溶離
液としてアセトニトリル−０．１％ＴＦＡ（トリフルオ
ロ酢酸）（４０：６０）を用い、カラムとしてセンシュ
ーパックＯＤＳ−５２５１−ＳＳ（２０×２５０ｍｍ）
を用い、高速液体クロマトグラフィーで２回のくり返し
分取を行った。得られたＳＮＡ−１１５物質を含む溶液
は、減圧下で濃縮し、凍結乾燥を行うことによって高純
度のＳＮＡ−１１５の白色粉末６００ｍｇを得た。ま
た、培養時間や条件によっては、ＳＮＡ−１１５は上清
にも生産される。遠心分離によって得られた上清１５リ
ットルを、等量のブタノールで３回抽出を行ない、ブタ
ノール層を濃縮後凍結乾燥したところ４６．３ｇの粉末
が得られた。以下、菌体の場合と同様の方法により、最
終的に高純度のＳＮＡ−１１５の白色粉末が得られる。
なお、精製途中のプロリルエンドペプチダーゼ阻害活性
は、基質量０．１ｍＭにて測定した場合の５０％阻害濃
度を示した。
８ｌの入った３０ｌ容のジャーファーメンターに移し、
２７℃で毎分１８リットルの無菌空気を送り３００ｒｐ
ｍの回転かき混ぜによって本培養を行った。２１２時間
後（ｐＨ５．６）、培養をやめ、遠心分離によって菌体
を集めて、湿菌体１．７５ｋｇを得た。この菌体をアセ
トンで抽出し、抽出物を凍結乾燥したところ菌体抽出物
の粉末３４．８ｇが得られ、このプロリルエンドペプチ
ダーゼ阻害活性は、５０％阻害濃度（ＩＣ50）が１５．
５μｇ／ｍｌであった。これを、クロロホルム：メタノ
ール（２：１）の溶液５０ｍｌに懸濁し、シリカゲル
（メルク社製Ｋｉｓｅｌ ｇｅｌ ６０，７０〜２３０
メツシュ）カラムクロマトグラフィー（４×３６ｃｍ）
に付し、同じ溶媒１リットルで不純物を溶出させた後、
クロロホルム：メタノール（１：１）１リットルとクロ
ロホルム：メタノール（１：２）１リットルで活性成分
を溶出させた（３．９ｇ、ＩＣ50＝２．７μｇ／ｍ
ｌ）。これを１０ｍｌのメタノールに溶解し、セファデ
ックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラムクロマト
グラフィー（３×７３ｃｍ）に付し、メタノールにて展
開して活性フラクションを集めた（３．１ｇ、ＩＣ50＝
２．４μｇ／ｍｌ）。これをメタノールに溶解し、溶離
液としてアセトニトリル−０．１％ＴＦＡ（トリフルオ
ロ酢酸）（４０：６０）を用い、カラムとしてセンシュ
ーパックＯＤＳ−５２５１−ＳＳ（２０×２５０ｍｍ）
を用い、高速液体クロマトグラフィーで２回のくり返し
分取を行った。得られたＳＮＡ−１１５物質を含む溶液
は、減圧下で濃縮し、凍結乾燥を行うことによって高純
度のＳＮＡ−１１５の白色粉末６００ｍｇを得た。ま
た、培養時間や条件によっては、ＳＮＡ−１１５は上清
にも生産される。遠心分離によって得られた上清１５リ
ットルを、等量のブタノールで３回抽出を行ない、ブタ
ノール層を濃縮後凍結乾燥したところ４６．３ｇの粉末
が得られた。以下、菌体の場合と同様の方法により、最
終的に高純度のＳＮＡ−１１５の白色粉末が得られる。
なお、精製途中のプロリルエンドペプチダーゼ阻害活性
は、基質量０．１ｍＭにて測定した場合の５０％阻害濃
度を示した。
【００５４】
【実施例３】 （ＳＮＡ−１１５の製造２）ミクロビスポラ属の公定
株、ミクロビスポラロゼア ノノムラ アンド オハラ
（ＩＦＯ １４０４４）及びミクロビスポラ ロゼア
サブスピーシス ノンニトリトゲネス ノノムラ アン
ド オハラ（ＩＦＯ １４０４５）をそれぞれ別個に実
施例２と同様の方法で予備培養及び本培養を行った。得
られた菌体を実施例２と同様に、カラムクロマトグラフ
ィー処理した後高速液体クロマトグラフィー処理を行っ
たところ、両菌体から得られる物質のパターンがＳＮＡ
−１１５のそれと一致した。
株、ミクロビスポラロゼア ノノムラ アンド オハラ
（ＩＦＯ １４０４４）及びミクロビスポラ ロゼア
サブスピーシス ノンニトリトゲネス ノノムラ アン
ド オハラ（ＩＦＯ １４０４５）をそれぞれ別個に実
施例２と同様の方法で予備培養及び本培養を行った。得
られた菌体を実施例２と同様に、カラムクロマトグラフ
ィー処理した後高速液体クロマトグラフィー処理を行っ
たところ、両菌体から得られる物質のパターンがＳＮＡ
−１１５のそれと一致した。
【００５５】
【実施例４】 （ＳＮＡ−１１５Ｔの製造）実施例２の方法によって得
られた白色粉末ＳＮＡ−１１５物質５３．８ｍｇをメタ
ノール４．５ｍｌに溶解し、これに０．１ＭＴｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）３．５ｍｌと同様の緩衝液１ｍｌ
に溶解したトリプシン（ＴＰＣＫ処理、１２８００ｕｎ
ｉｔｓ／ｍｇ、シグマ社）３ｍｇを加えて３７℃、３時
間反応を行った。この分解物をＨＰＬＣ（センシューパ
ック、ＯＤＳ−５２５１−ＳＳ、２０×２５０ｍｍの逆
相カラムとアセトニトリル：水：トリフルオロ酢酸＝３
５：６４：１の溶媒系）にて分取を行った。アセトニト
リルを減圧濃縮にて除いた後凍結乾燥を行い、２７．０
ｍｇのＳＮＡ−１１５Ｔの白色粉末を得た。この白色粉
末の理化学的性質を調べたところ、上記した性質と同一
の性質を示しました。
られた白色粉末ＳＮＡ−１１５物質５３．８ｍｇをメタ
ノール４．５ｍｌに溶解し、これに０．１ＭＴｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）３．５ｍｌと同様の緩衝液１ｍｌ
に溶解したトリプシン（ＴＰＣＫ処理、１２８００ｕｎ
ｉｔｓ／ｍｇ、シグマ社）３ｍｇを加えて３７℃、３時
間反応を行った。この分解物をＨＰＬＣ（センシューパ
ック、ＯＤＳ−５２５１−ＳＳ、２０×２５０ｍｍの逆
相カラムとアセトニトリル：水：トリフルオロ酢酸＝３
５：６４：１の溶媒系）にて分取を行った。アセトニト
リルを減圧濃縮にて除いた後凍結乾燥を行い、２７．０
ｍｇのＳＮＡ−１１５Ｔの白色粉末を得た。この白色粉
末の理化学的性質を調べたところ、上記した性質と同一
の性質を示しました。
【図１】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５の紫外線吸収スペクトル（５０μｇ／ｍｌ，Ｍｅ
ＯＨ）
１１５の紫外線吸収スペクトル（５０μｇ／ｍｌ，Ｍｅ
ＯＨ）
【図２】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）
１１５赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）
【図３】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５の 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，Ｃ2
Ｄ6 ＯＳ）
１１５の 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，Ｃ2
Ｄ6 ＯＳ）
【図４】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５の13Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，Ｃ2
Ｄ6 ＯＳ）
１１５の13Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，Ｃ2
Ｄ6 ＯＳ）
【図５】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５のプロリルエンドペプチダーゼ阻害のＤｉｘｏｎ
プロット（ただし１／Ｖは１／△４１０ｎｍを表わす）
１１５のプロリルエンドペプチダーゼ阻害のＤｉｘｏｎ
プロット（ただし１／Ｖは１／△４１０ｎｍを表わす）
【図６】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５Ｔのマススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）
１１５Ｔのマススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）
【図７】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５Ｔの紫外線吸収スペクトル（５０μｇ／ｍｌ、Ｍ
ｅＯＨ）
１１５Ｔの紫外線吸収スペクトル（５０μｇ／ｍｌ、Ｍ
ｅＯＨ）
【図８】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５Ｔの赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）
１１５Ｔの赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）
【図９】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ−
１１５Ｔの 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，Ｃ
2 Ｄ6 ＯＳ）
１１５Ｔの 1Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，Ｃ
2 Ｄ6 ＯＳ）
【図１０】プロリルエンドペプチダーゼ阻害物質ＳＮＡ
−１１５Ｔのプロリルエンドペプチダーゼ阻害のＤｉｘ
ｏｎプロット（ただし１／Ｖは１／Δ４１０ｎｍを表わ
す）
−１１５Ｔのプロリルエンドペプチダーゼ阻害のＤｉｘ
ｏｎプロット（ただし１／Ｖは１／Δ４１０ｎｍを表わ
す）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ // Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｐ 25/28 38/55 31/04 Ａ６１Ｐ 25/28 31/12 31/04 Ｃ１２Ｎ 9/99 31/12 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｎ 9/99 37/64 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 吉浜 誠 栃木県宇都宮市江曽島町1400−８ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 1/00 - 14/825 C12N 1/00 - 1/38 C12P 21/00 - 21/08 A61K 31/00 - 48/00 A61P 1/00 - 43/00 C12N 9/00 - 9/99 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (5)
- 【請求項１】 次の構造式（Ｉ）で示される新規ペプチ
ドＳＮＡ−１１５。 【式１】 ただし、８位のＡｒｇと９位のＡｓｐとのアミド結合は
解離して遊離のカルボキシル基及びアミノ基を形成し、
直鎖状の次の構造式（II) で示される新規ペプチドＳＮ
Ａ−１１５Ｔとなっていてもよい。 【式２】 - 【請求項２】 ミクロビスポラ属（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐ
ｏｒａ）に属しＳＮＡ−１１５産生能を有するＳＮＡ−
１１５産生菌を培地に培養し、得られる菌体を有機溶媒
にて抽出し、得られた有機溶媒抽出物からペプチドＳＮ
Ａ−１１５を採取することを特徴とするペプチドＳＮＡ
−１１５の製造方法。 - 【請求項３】 ＳＮＡ−１１５産生菌が、ミクロビスポ
ラ ｓｐ．（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｓｐ．）ＳＮ
Ａ−１１５（微工研菌寄第１２０９４号）、ミクロビス
ポラ・ロゼア ノノムラ アンド オハラ（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｓｐｏｒａ ｒｏｓｅａ Ｎｏｎｏｍｕｒａ ａｎ
ｄ Ｏｈａｒａ）（ＩＦＯ １４０４４）及びミクロビ
スポラ・ロゼア サブスピーシス ノンニトリトゲネス
ノノムラ アンド オハラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒ
ａ ｒｏｓｅａ ｓｕｂｓｐ．ｎｏｎｎｉｔｒｉｔｏｇ
ｅｎｅｓ Ｎｏｎｏｍｕｒａ ａｎｄ Ｏｈａｒａ）
（ＩＦＯ １４０４５）よりなる群から選択される菌で
ある請求項２記載のペプチドＳＮＡ−１１５の製造法。 - 【請求項４】 請求項２によって得られたペプチドＳＮ
Ａ−１１５をプロテアーゼで分解してＳＮＡ−１１５Ｔ
を生成し、これを採取することを特徴とするペプチドＳ
ＮＡ−１１５Ｔの製造法。 - 【請求項５】 受託番号微工研菌寄第１２０９４号（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１２０９４）であるミクロビスポラｓｐ．
（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ ｓｐ．）に属しＳＮＡ−
１１５産生能を有するＳＮＡ−１１５産生菌株。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT92912434T ATE157988T1 (de) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Neuartige prolyl-endopeptidase-inhibitoren sna- 115 und sna-115t, ihre herstellung, und hierbei verwendete stämme |
| US07/977,444 US5449750A (en) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Prolyl endopeptidase inhibitors SNA-115 and SNA-115T, and process for the production and productive strain thereof |
| PCT/JP1992/000784 WO1993000361A1 (fr) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Nouveaux inhibiteurs de propyle d'endopeptidase sna-115 et sna-115t, leur production et souche utilisee dans leur production |
| EP92912434A EP0553357B1 (en) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Novel prolyl endopeptidase inhibitors sna-115 and sna-115t, production thereof, and strain which produces said inhibitors |
| KR1019930700339A KR930701618A (ko) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | 신규 프롤릴엔도펩티다아제 저해물질 sna-115 및 sna-115t, 그 제조법 및 그 저해물질 생성균주 |
| CA002089890A CA2089890A1 (en) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Prolyl endopeptidase inhibitors sna-115 and sna-115t, production thereof, and strain which produces said inhibitors |
| DE69222142T DE69222142T2 (de) | 1991-06-20 | 1992-06-19 | Neuartige prolyl-endopeptidase-inhibitoren sna-115 und sna-115t, ihre herstellung, und hierbei verwendete stämme |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17622891 | 1991-06-20 | ||
| JP3-176228 | 1991-06-20 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05262795A JPH05262795A (ja) | 1993-10-12 |
| JP3092877B2 true JP3092877B2 (ja) | 2000-09-25 |
Family
ID=16009876
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04078262A Expired - Fee Related JP3092877B2 (ja) | 1991-06-20 | 1992-02-28 | 新規ペプチドｓｎａ−１１５及びｓｎａ−１１５ｔ、その製造法及び新規ペプチド産生菌株 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3092877B2 (ja) |
| KR (1) | KR930701618A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2149783A1 (en) * | 1993-09-21 | 1995-03-30 | Kenji Shibata | Novel peptides |
-
1992
- 1992-02-28 JP JP04078262A patent/JP3092877B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-19 KR KR1019930700339A patent/KR930701618A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05262795A (ja) | 1993-10-12 |
| KR930701618A (ko) | 1993-06-12 |
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|---|---|---|---|
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