JP3643925B2 - Ｆａ−７０ｃ１物質 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、プロテアーゼ阻害活性を有し、特に医薬として有用な新規な化合物：ＦＡ−７０Ｃ１物質及びその塩に関する。
【０００２】
【従来の技術】
細胞内で生産されるカテプシン類プロテアーゼ酵素群（カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＨ、カテプシンＳ、カテプシンＫ等）は細胞内外で様々な生理作用を担っている。例えば細胞内において、蛋白質のプロセシング、不要蛋白質の分解、細胞死等に関与し、細胞外において、例えば骨基質コラーゲン分解等の細胞外基質分解、感染細菌の消化等に関与していると考えられている。また、感染細菌は感染の際に宿主からの免疫性攻撃因子の分解のために菌体外にプロテアーゼを分泌し攻撃を免れている。
【０００３】
特にカテプシン類プロテアーゼ酵素群（カテプシンＬ、カテプシンＫ等）はコラーゲンの分解能が非常に強いことが知られており、実験動物においてもカテプシン阻害剤が著明な骨コラーゲン分解を抑制することが明らかにされた。このようなことからカテプシンＬ、カテプシンＫを特異的に阻害する物質が骨粗鬆症治療薬として有望であると考えられる（エフイービーエス レターズ(FEBS Letters),269 (1),189-193,1990）。
【０００４】
カテプシンＢは炎症、癌転移及び筋ジストロフィー症等の病因に深く関与していると言われている酵素である。近年、転移や浸潤等、癌の悪化とカテプシンＢ活性の相関関係を指摘する報告が増加している（キャンサーリサーチ(Cancer Research),52,3610-3614,1992）。
【０００５】
また、歯科領域において、歯周病は歯周局所の常在微生物によって惹起される一種の感染症と考えられており、近年、グラム陰性嫌気性細菌群が疾患の発症や進行に深く関与していることが明らかにされてきた。特にグラム陰性嫌気性桿菌Porphyromonas gingivalisは成人性歯周炎や急速進行性歯周炎において最も重要な病因菌であることが明らかにされている。当該 Porphyromonas gingivalisはトリプシン様システインプロテアーゼであるＡｒｇ−gingipain及びＬｙｓ−gingipainを菌体外に分泌し、補体成分や免疫グロブリン等を分解し、宿主の体液性免疫系の一部を破壊する。またＡｒｇ−gingipainは、歯周組織周辺の主要成分であるタイプＩコラーゲンを強力に分解することに基づいて、歯周病の病因と考えられている（日薬理誌(Folia Pharmacol.Jpn),105,345-355,1995）。
【０００６】
現在、カテプシン類プロテアーゼが関与する疾患、及び Porphyromonas gingivalisの産生するシステインプロテアーゼが関与する歯周病において、これらの酵素に対する特異的な阻害剤が求められているが、十分なものは得られていない。特に歯周病の病因たるＡｒｇ−gingipainを特異的に抑制する阻害剤は得られていないのが現状である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、カテプシン類プロテアーゼ及びＡｒｇ−gingipainに対して優れた阻害活性を有する物質を提供することを目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、天然土壌より多くの微生物を分離し、それらが生産する代謝産物について、システインプロテアーゼを阻害する物質の探索を続けていたところ、放線菌に属するＦＡ−７０株の培養物中にシステインプロテアーゼ阻害活性を有する物質が生産されていることを見出し、その活性物質を単離し、その理化学的性状及び構造を確定することにより、本発明を完成した。
【０００９】
本発明の化合物に類似する構造を有する微生物生産物としてはアンチパイン（Anti pain）（ザ ジャーナル オブ アンチバイオティクス(The Journal of Antibiotics),25,267-000,1972）が報告されているが、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、シトルリンがペプチド結合した構造を有する点で上記アンチパインとは異なる新規化合物である。また、本発明者らは、以前、本発明の化合物に類似する構造を有する微生物生産物としてＦＡ−７０Ｄ物質を報告しているが（EP0822260A1）、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質はアミノ酸組成、カテプシン類及び Arg-gingipain阻害様式の点で該ＦＡ−７０Ｄ物質とは異なる新規化合物である。
【００１０】
すなわち、本発明は下記式（１）
【００１１】
【化２】
で表される化合物及びその塩に係わるものである。尚、以下本発明において当該化合物を便宜上、「ＦＡ−７０Ｃ１物質」と称する。
【００１２】
また、本発明はストレプトマイセス属に属し、上記ＦＡ−７０Ｃ１物質を産生する能力を有する菌を培養し、得られる培養物からＦＡ−７０Ｃ１物質を採取するＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩の製造法、該ＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩を有効成分とする組成物、特に薬学的に許容される担体を含有していてもよい医薬組成物に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の式（１）の化合物の塩は、特に限定されないが、薬学的に許容される塩基性化合物を作用させた塩基塩が好ましい。この塩基性化合物としては、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩；炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属；リン酸１ナトリウム、リン酸１カリウム、リン酸２ナトリウム、リン酸２カリウム、リン酸３ナトリウム、リン酸３カリウム等のリン酸塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、シクロヘキシルアミン、ピペリジン等のアミン類；アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸が挙げられる。
【００１４】
上記式（１）のＦＡ−７０Ｃ１物質には、光学異性体が存在し、本発明はかかる異性体及びそれらの混合物を全て包含するものである。
【００１５】
また、上記式（１）のＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩は、無水の状態であってもよく、又は適当な割合で水和したものであっても良い。また、結晶形のものでも、粉末、又はアモルファス状のものであってもよい。
【００１６】
ＦＡ−７０Ｃ１物質の物理化学的性質を以下に示す。
【００１７】
（１）形状：白色粉末
（２）実験式：C27H43N9O7（Ｍ）（高分解能ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による。C27H44N9O7（Ｍ＋Ｈ）として実験値６０６．３３７３，計算値６０６．３３６４）
（３）分子量：６０５．６９（ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による）
（４）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法、
νmax (cm -1) ：３３４５，２９６５，１６５０，１５５５，１４５５，１３９５，１２０５，１１４０，７００（図１）
（５）核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシド−d6（ＤＭＳＯ−d6）溶液中３０℃で測定した４００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図２）の化学シフト値を表１に示す。
【００１８】
【表１】
（６）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルに良く溶け、エタノールに少し溶ける。クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エーテル、ヘキサンに難溶である
（７）融点：２０５℃以上で分解
（８）比旋光度：［α］20 D＝−２５．８０００
（ｃ＝３．５６ｍｇ／ｍｌ、メタノール中）
（９）呈色反応：エールリッヒ反応、坂口反応において呈色する。ニンヒドリン反応において呈色しない
（１０）紫外部吸収スペクトル：図３に示す。
【００１９】
（１１) 高速液体クロマトグラフィー：下記分析条件において保持時間（ｔR ）６．６分にピークを与える：
カラム：イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２ ５μｍ
（内径４．６mm×１５０mm，ジーエルサイエンス社製）
移動相：アセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水
（ｖ／ｖ／ｖ、２２．５：０．０５：７７．５）
流速：１ml／分
検出：２１０nm（０．０４a.u.f.s.）。
【００２０】
本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、例えば、本物質の生産能力を有する菌株（以下ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌とも称する）を以下に示すような適当な条件下で培養することによって製造することができる。
【００２１】
ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌としては、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株が挙げられる。本発明には、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌を適当な培地を用いて培養し、得られる培養物から採取、取得できる上記ＦＡ−７０Ｃ１物質及びその塩が包含される。
【００２２】
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株の一例としては、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＦＡ−７０）株が例示できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和国河北省承徳の土壌から新たに分離したストレプトマイセス属に属する菌株であり、日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号に住所を有する通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に、１９９５年７月３１日に微生物の表示、（寄託者が付した識別のための表示）「Ｓｔｒａｉｎ ＦＡ−７０」、（受託番号）「ＦＥＲＭ ＢＰ−５１８３」として寄託されている。
【００２３】
ＦＡ−７０株について、インターナショナル ジャーナル オブ システィマティック バクテリオロジー(International Journal of Systematic Bacteriology),16 (3),313-340,1960に記載の方法に準じて検討した菌学的性質は次の通りである。
【００２４】
（ａ）形態：
ＩＳＰ（インターナショナル ストレプトマイセス プロジェクト（International Streptomyces Project）規定の培地Ｎｏ．４（ＩＳＰ ４）で２７℃、１３日間培養し、観察した結果を以下に示した。
【００２５】
胞子形成菌糸の分枝法；単純分枝
胞子形成の形態；螺旋状(spirales)、胞子の形は円筒状(cylindrical)
胞子の数；１０〜５０胞子又はそれ以上
胞子の表面構造；平滑(smooth)
胞子の大きさ；０．５〜０．６×０．８〜０．９μｍ
鞭毛胞子の有無；無
胞子のうの有無；無
胞子柄の着生位置；気菌糸
菌核形成性の有無；無。
【００２６】
（ｂ）各種培地における生育状態：
各種培地における生育状態を表２に示す。分類色名は（財団法人日本色彩研究所監修，標準色彩図表Ａ，１９８１年）で示した。なお、詳細な色はコンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ(Container Corporation of America)の（ザ・カラー・ハーモニー・マニュアル(The Color Harmony Manual)，第４版，１９５８年）の色コードで（ ）内につけ加えた。
【００２７】
【表２】
（ｃ）生理的性質：
生育温度範囲；２０〜３７℃の温度範囲で良好に生育する
ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃）；陽性
ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地、２０℃）；陰性
ミルクの凝固（３７℃）；陰性
ミルクのペプトン化（３７℃）；陽性
メラニン様色素の生成；チロシン寒天（ＩＳＰ−７）培地上、トリプトン・酵母エキス（ＩＳＰ−１）培地上で陰性、ペプトン・酵母エキス・鉄寒天（ＩＳＰ−６）培地上で陽性
硫化水素の産生（ペプトン・酵母エキス・鉄寒天（ＩＳＰ−６）に０．５％酵母エキスを添加した培地）；陽性
澱粉の加水分解（スターチ・無機塩寒天、ＩＳＰ−４培地）；陽性
硝酸塩の還元（１％硝酸カリウム含有ブイヨン、ＩＳＰ−８培地）；陰性
セルロースの分解；陰性。
【００２８】
（ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴトリーブ寒天、ＩＳＰ−９培地）：
Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、イノシトール、溶性澱粉、デキストリン、グリセロール及びマルトースを利用してよく発育する。Ｌ−アラビノース、シュクロース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−ガラクトース及びサリシンは利用できない。
【００２９】
（ｅ）菌体組成：
（日本放線菌学会編，放線菌の同定実験法，６２−７０頁，１９８５年）に記載の方法に従い、全菌体中の酸加水分解物を薄層クロマトグラフィー法により分析した結果、ＬＬ−型のジアミノピメリン酸が検出された。
【００３０】
以上の菌学的性質、特に基生菌糸より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、細胞壁組成のアミノ酸がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成しない性質を有することから、本菌株はストレプトマイセス属に属することが明らかである。よって本菌株をストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＦＡ−７０）と称することとした。
【００３１】
本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、例えば、上記ＦＡ−７０株又はその変異株等のストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、ＦＡ−７０Ｃ１物質を生産する能力を有する菌を培地で培養し、培養物中に該化合物を生成せしめ、該培養物、特に培養液から本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物を分離し、更に粗抽出物からＦＡ−７０Ｃ１物質を単離、精製することにより製造することができる。
【００３２】
上記微生物の培養は原則的に一般の微生物の培養に準じて行われるが、通常液体培養による振盪培養法、通気撹拌培養法等の好気的条件下で行うのが好ましい。
【００３３】
培養に用いられる培地としては、ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、天然培地等をいずれも用いることができる。培地の炭素源としてはグルコース、シュクロース、フラクトース、グリセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティープ・リカー、有機酸等を単独又は二種以上組み合わせたものが；窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素源を単独又は二種以上組み合わせたものが用いられる。また、培地にはナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その他の重金属塩などが必要に応じて適宜添加される。
【００３４】
なお、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合物などの消泡剤を適宜培地中に添加することもできる。
【００３５】
培地のｐＨは中性付近とするのが好ましい。培養温度はＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌が良好に生育する温度、通常２０〜３７℃、特に２５〜３０℃付近に保つのがよい。培養時間は、液体振盪培養及び通気撹拌培養のいずれの場合も２〜６日間が好ましい。
【００３６】
上述した各種の培養条件は使用微生物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、またそれぞれに応じて上記範囲から最適条件を選択、調節できる。
【００３７】
培養液からのＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物の分離は、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行うことができ、例えば溶媒抽出、分配及び吸着クロマトグラフィー等の手段を単独又は二種以上を任意の順序に組み合わせて用いることができる。より詳しくは、上記培養により生産されるＦＡ−７０Ｃ１物質は主として培養濾液中に存在するので、常法に従い、まず濾過、遠心分離等を行って、培養濾液と菌体固形分とを分離し、得られたＦＡ−７０Ｃ１物質を含む培養濾液を得る。その培養濾液をダイアイオンＨＰ−２０樹脂（三菱化成（株）製）に吸着させ、精製水で樹脂を洗浄する。次いで、メタノールを用いて樹脂からＦＡ−７０Ｃ１物質の溶出を行い、次いで、減圧下に溶媒を留去すればＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗濃縮液を得ることができる。この粗濃縮液にブタノールを加えてＦＡ−７０Ｃ１物質を有機溶媒層に転溶させ溶媒を減圧下で留去し、酢酸エチルで洗浄後、溶媒を減圧下で留去すればＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物を得ることができる。
【００３８】
更に、粗抽出物からＦＡ−７０Ｃ１物質を単離、精製するためには、通常の低分子ペプチド物質の単離、精製手段、例えば活性炭、ダイアイオンＨＰ−２０、イオン系吸着樹脂などの吸着剤による種々の吸着クロマトグラフィー及びＯＤＳ−結合型シリカゲル等を用いる逆相クロマトグラフィーが使用できる。これらのうち、溶出溶媒にメタノール／水（ｐＨ２．０）の混合溶媒系を用いるダイアイオンＨＰ−２０クロマトグラフィー及びアセトニトリル／トリフルオロ酢酸の混合溶媒系を溶出に用いる逆相クロマトグラフィーが特に好ましい。また、更に精製を必要とする場合には、上記クロマトグラフィーを繰り返し行うかまたは溶出溶媒としてメタノールを用いたセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）によるゲル濾過クロマトグラフィー等を適宜組み合わせて行うことにより、高純度のＦＡ−７０Ｃ１物質を得ることができる。
【００３９】
なお、精製工程中のＦＡ−７０Ｃ１物質の確認は、本物質により阻害されるパパインの酵素活性を測定する方法と高速液体クロマトグラフィーを用いて精製されたことを検出する方法とを併用して行うのがよい。
【００４０】
酵素活性を測定する具体的方法は、実施例及び試験例中に記載する。また、試験例に示すように、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質はＡｒｇ−gingipain、並びにカテプシンＬ、Ｋ、Ｓ及びＢを阻害する活性を有している。このため、該物質はこれらの酵素の阻害剤として有用であるとともに、該酵素が関連する疾患の予防・治療剤の有効成分として有用である。
【００４１】
かかる観点から、本発明はまた、以上のようにして精製されたＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩を有効成分とする組成物を提供する。
【００４２】
当該組成物は、ＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩の上記活性に基づいて、カテプシン類プロテアーゼ、特にカテプシンＬ、Ｋ、Ｓ及びＢの阻害剤として有用である。従って、本発明の組成物は、カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢが関与する疾患の治療用又は予防用医薬組成物として有用である。また、本発明の組成物は、システインプロテアーゼ、特に Porphyromonas gingivalisが産生するＡｒｇ−gingipainの阻害剤として有用である。当該Ａｒｇ−gingipainは歯周病の病因であることから、本発明の組成物は歯周病の予防又は治療用の医薬組成物、口腔用組成物（医薬品、医薬部外品又は食品の別を問わない）として有用である。
【００４３】
ＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩を医薬組成物として使用する際の薬学的投与形態としては、目的に応じて各種の薬学的投与形態を広く採用でき、該形態としては、具体的には、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、貼付剤、エアゾール等の非経口剤を例示できる。また、口腔用組成物の形態としては、例えば歯磨剤、洗口剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤やゲル剤などの医薬品又は医薬部外品、トローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディなどの食品などが挙げられる。これら投与形態は、この分野で通常知られた慣用的な製剤方法により製剤化される。
【００４４】
錠剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【００４５】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００４６】
カプセル剤は常法に従い通常本発明化合物を上記で例示した各種の担体と混合して硬化ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。
【００４７】
経口用液体製剤を調製する場合は、本発明の有効成分に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等の担体を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が使用でき、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が使用できる。
【００４８】
注射剤として調製される場合、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに十分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、局所麻酔剤等の担体を添加し、常法により静脈内、筋肉内、皮下、皮内並びに腹腔内用注射剤を製造できる。ｐＨ調整剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸等が使用できる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が使用できる。
【００４９】
坐剤を調製する場合には、本発明の有効成分に基剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた後、常法により坐剤を製造することができる。基剤としては、例えばマクロゴール、ラノリン、カカオ油、脂肪酸トリグリセライド、ウィテップゾール（ダイナマイトノーベルズ社製）等の油性基剤を用いることができる。
【００５０】
軟膏剤を調製する場合は、本発明化合物に通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等の担体が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。基剤としては流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としてはパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
【００５１】
更に上記各製剤には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、抗酸化剤、滑沢剤などの通常医薬組成物に配合する添加剤や希釈剤等や他の薬物を含有することもできる。
【００５２】
本発明の医薬組成物中に含有されるべき本発明化合物の量としては、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常医薬製剤中０．０１〜７０重量％とするのがよい。
【００５３】
上記医薬組成物の投与方法は特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じて適宜決定される。
【００５４】
上記の各投与単位形態中に配合されるべき本発明有効成分の量は、これを適用すべき患者の症状によりあるいはその剤型等により一定ではないが、一般に投与単位形態あたり経口剤では約１〜１０００ｍｇ、注射剤では約０．１〜５００ｍｇ、坐剤では約５〜１０００ｍｇとするのが望ましい。
【００５５】
また、上記投与形態を有する薬剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別、その他の条件等に応じて適宜選択されるが、通常成人１日あたり約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に分けて投与することができる。
【００５６】
【実施例】
以下に実施例及び試験例を挙げて更に具体的に本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００５７】
実施例１ 本発明ＦＡ−７０Ｃ１物質の製造：
（ａ）培養工程
グルコース０．５％、可溶性澱粉２．４％、牛肉エキス０．３％、酵母エキス０．５％、ペプトン０．５％、コーン・スティープ・リカー０．４％、塩化コバルト０．００２％、炭酸カルシウム０．４％よりなる培地（pH７．２）１００mlを５００mlの三角フラスコに分注し、滅菌後、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０株（受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−５１８３）を一白金耳量接種し、２７℃で３日間振盪培養した（毎分２２０回、振幅７cm）。
【００５８】
次に、グリセロール２．０％、デキストリン２．０％、酵母エキス０．３％、ソイトン１．０％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地（pH７．０）を５００mlの三角フラスコに１００mlずつ分注し、滅菌（１２１℃、１５分）後、上記の種菌を２％（ｖ／ｖ）の割合で添加し、２７℃、３日間振盪培養した（毎分２２０回、振幅７cm）。
【００５９】
（ｂ）分離工程
上記工程で得られた培養液（８．５Ｌ，ｐＨ６．１）を採取し、遠心分離（３０００回転、１５分）、濾過後、得られた培養瀘液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８．０に調整し、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ−２０（三菱化成（株））樹脂（８５０ｍｇ）を加えた。１時間撹拌後、濾過により樹脂を分離し、メタノール（４２５０ｍｌ）を加え１Ｎの塩酸でｐＨ２．０に調整しながら、撹拌抽出した。同操作をさらに２回繰り返して行い、メタノール抽出画分を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．０に調整し、遠心分離で沈殿を除去した後、減圧濃縮し、メタノールを除去したＦＡ−７０Ｃ１物質を含む水溶液を得た。この水溶液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８．０に調整し、同量（ｖ／ｖ）のブタノールで３回抽出した。このブタノール抽出画分を減圧濃縮して得た固形物を酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回洗浄し、乾燥してＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物（７．２ｇ）を得た。
【００６０】
（ｃ）単離、精製工程
上記粗抽出物（４．２ｇ）をメタノール（８４ｍｌ）に溶解し、遠心分離（３０００回転、１５分）によりメタノール可溶画分と不溶部に分け、更に不溶部にメタノール（３３ｍｌ）を加え、遠心分離によりメタノール可溶画分と不溶部に分離した。メタノール可溶画分を合わせ、水（２２１３ｍｌ）を加え１Ｎの塩酸でｐＨ３．０に調整し、生じた沈殿を除去した。メタノール含有水溶液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．０に調整し、ＣＭ−セファデックスカラム（ファルマシア社製、ＣＭ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５，Ｈ+ 型、内径３．６ｃｍ×長さ３０ｃｍ）に付した。樹脂を水でよく洗浄したのち、０．１Ｍの塩化ナトリウム水溶液で樹脂からＦＡ−７０Ｃ１物質を含む画分を溶出した。その画分をダイアイオンＨＰ−２０樹脂カラム（内径２ｃｍ×長さ１５ｃｍ）に付した。水洗後、６０％メタノール水溶液（希塩酸にてｐＨ２．０に調整）で溶出する画分を集め、減圧濃縮しＦＡ−７０Ｃ１物質を含む乾燥粉末（５５５ｍｇ）を得た。
【００６１】
各工程のＦＡ−７０Ｃ１物質を含む活性画分の検出は、パパインの阻害活性を測定（バイオケミカル ジャーナル(Biochemical Journal),201,189-198,1982）することにより行った。
【００６２】
即ち、８ｍＭのジチオスレイトール、４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）０．５ｍｌ、５μＭのパパインと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル）（和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び試料を含む水溶液０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間プレインキュベーションをした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え酵素反応を停止させ、３５０ｎｍの光で励起される４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、試料を含む水溶液０．２ｍｌの代わりに、水０．２ｍｌを加え、同様に４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した：
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００。
【００６３】
得られた乾燥粉末（５００ｍｇ）をメタノールに溶解し、ゲル濾過カラム（ファルマシア社製、セファデックスＬＨ−２０、内径２ｃｍ×長さ１２７ｃｍ）に付し、メタノールで溶出した。活性画分を集め溶媒を除去し、乾燥粉末（１４５ｍｇ）を得た。得られた乾燥粉末をメタノールに溶解し、イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２カラム（ジ−エルサイエンス社製、５μｍ、内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）、移動相にアセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水（ｖ／ｖ／ｖ、２０：０．０５：８０）を用い、流速４．０ｍｌ／分で溶出する逆相高速液体クロマトグラフィーを実施した。活性画分を分取し有機溶媒を減圧留去した後、水溶液を凍結乾燥して白色粉末ＦＡ−７０Ｃ１物質（１０ｍｇ）を得た。
【００６４】
得られたＦＡ−７０Ｃ１物質の物理化学的性質を以下に示す：
（１）形状：白色粉末
（２）実験式：C27H43N9O7（Ｍ）（高分解能ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による。C27H44N9O7（Ｍ＋Ｈ）として実験値６０６．３３７３，計算値６０６．３３６４）
（３）分子量：６０５．６９（ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による）
（４）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法、
νmax (cm -1) ：３３４５，２９６５，１６５０，１５５５，１４５５，１３９５，１２０５，１１４０，７００（図１）
（５）核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシド−d6（ＤＭＳＯ−d6）溶液中３０℃で測定した４００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図２）の化学シフト値を表３に示す。
【００６５】
【表３】
（６）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルに良く溶け、エタノールに少し溶ける。クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エーテル、ヘキサンに難溶である
（７）融点：２５０℃以上で分解
（８）比旋光度：［α］20 D＝−２５．８０００
（ｃ＝３．５６ｍｇ／ｍｌ、メタノール中）
（９）呈色反応：エールリッヒ反応、坂口反応に呈色する。ニンヒドリン反応に呈色しない
（１０）紫外部吸収スペクトル：図３に示す。
【００６６】
（１１) 高速液体クロマトグラフィー：下記分析条件において保持時間（ｔR ）６．６分にピークを与える。
【００６７】
カラム：イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２ ５μｍ
（内径４．６mm×１５０mm，ジーエルサイエンス社製）
移動相：アセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水
（ｖ／ｖ／ｖ、２２．５：０．０５：７７．５）
流速：１ml／分
検出：２１０nm（０．０４a.u.f.s.）。
【００６８】
試験例１ ＦＡ−７０Ｃ１物質の酵素阻害活性の測定
カテプシンＢ及びカテプシンＬに対する阻害活性の測定はＡ，Ｊ，Ｂａｒｒｅｔｔらの方法（バイオケミカル ジャーナル(Biochemical Journal),201,189-198,1982）に従った。
【００６９】
カテプシンＢに対する阻害活性は次のようにして測定した。まず、８ｍＭのジチオスレイトール及び４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌ、５μＭのカテプシンＢと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン(２３)ラウリルエーテル）（和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び本発明の化合物を含む水溶液０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間プレインキュベーションをした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え酵素反応を停止させ、３５０ｎｍの光で励起される４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、本発明化合物を含む水溶液０．２ｍｌの代わりに、水０．２ｍｌを加え、同様に４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した；
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００。
【００７０】
カテプシンＬに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＬを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ５．５に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７１】
カテプシンＫに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＫを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ５．５に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７２】
カテプシンＳに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＳを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ７．０に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７３】
Ａｒｇ−gingipainに対する阻害活性については、Kadowakiらの方法（ザ ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー(The Journal of Biological Chemistry),269,21371-21378,1994）に従って測定した。
【００７４】
まず、５０ｍＭのＬ−システイン１００μｌ、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００μｌ、０．０５％のＢｒｉｊ３５を含む１２．３ｎＭのＡｒｇ−gingipain酵素液２０μｌ、蒸留水８０μｌ、および本発明の化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌを混合し、３７℃で５分間プレインキュベーションした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液５００μｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１０ｍＭのヨード酢酸を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）１０００μｌを加え、酵素反応を停止させ、３８０ｎｍの光で励起される４６０ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌの代わりに、ジメチルスルホキシド１００μｌを加え、同様に４６０ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した：
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００
その結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
試験例１から明らかなように、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質はＡｒｇ−gingipainを最も強く阻害した。また、当該物質はカテプシンＬ、カテプシンＫ、カテプシンＳをも強く阻害し、またカテプシンＢも１０ー6Ｍの濃度で９０％以上阻害した。
【００７６】
試験例２ Ａｒｇ− gingipain のγ−グロブリン分解に対するＦＡ−７０Ｃ１物質の阻害活性の測定
Ａｒｇ−gingipainのγ−グロブリン分解の測定は、Kadowakiらの方法（ザ ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー(The Journal of Biological Chemistry),269,21371-21378,1994）に従って行った。
【００７７】
まず、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）と１００ｍＭのシステインを２：１の割合で混ぜて調製した溶液１００μｌ、１２．３ｎＭのＡｒｇ−gingipain酵素液１００μｌ、および本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質の各濃度の水溶液１００μｌを混合し、３７℃で１０分間プレインキュベーションした。その後、１０００μｇ／ｍｌのウサギγ−グロブリン（シグマ社製）水溶液３００μｌを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。インキュベーションしたサンプルを２０μｌ取り、２ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（ペプチド研究所製）と１００ｍＭのＥＤＴＡを含む水溶液１μｌを加えて反応を停止させた。その後サンプル処理液（第一化学薬品（株）製）２０μｌを加え９７℃で５分間処理しＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。
【００７８】
処理液１０μｌを電気泳動用ゲルプレート（マルチゲル4/20、第一化学薬品（株）製）に付し、０．０２５Ｍのトリス塩酸緩衝液、０．１９２Ｍのグリシン、０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを含む泳動用緩衝液（ｐＨ８．４）中で２０ｍＡの定電圧で２時間泳動を行った。染色はページブルー８３（第一化学薬品（株）製）で行った。脱色後、写真撮影を行った。その結果を図４に示す。
【００７９】
図４の結果から明らかなように、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、Ａｒｇ−gingipainによるウサギγ−グロブリン分解を０．１μｇ／ｍｌの濃度で抑制し始め、１μｇ／ｍｌの濃度で完全に阻害した。
【００８０】
γ−グロブリンは生体の体液性免疫成分の一つである。Porphyromonas gingivalisが産生するＡｒｇ−gingipainは宿主のγーグロブリンを分解し、免疫機能を破壊し宿主の攻撃をかわし、これによってPorphyromonas gingivalisは歯周に生存することができると考えられている。上記結果で示すように、ＦＡ−７０Ｃ１物質がＡｒｇ−gingipainを阻害することは、本発明の物質が宿主の免疫機能を防御することができることを示唆している。
【００８１】
以下、本発明の組成物の処方例を記載するが、本発明は当該処方例に何ら制限されない。
【００８２】
処方例１ カプセル剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 １０ｍｇ
乳糖 ５０ｍｇ
トウモロコシデンプン ４７ｍｇ
結晶セルロース ５０ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １ｍｇ
１カプセル当たり １６０ｍｇ
上記配合割合で、常法に従いカプセル剤を調製した。
【００８３】
処方例２ 注射剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ５ｍｇ
注射用蒸留水 適量
１アンプル中 ５ｍｌ
上記配合割合で、常法に従い注射剤を調製した。
【００８４】
処方例３ 坐剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ２０ｍｇ
ウィテップゾールＷ−３５ １３８０ｍｇ
（登録商標、ダイナマイトノーベル社製）
１個当たり １４００ｍｇ
上記配合割合で、常法に従い坐剤を調製した。
【００８５】
処方例４ 練歯磨き
下記の処方からなる練歯磨きを常法に従って調製した。
【００８６】
第２リン酸カルシウム ３０.０ｍｇ
グリセリン １０.０ｍｇ
ソルビトール ２０.０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム １.０ｍｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １.５ｍｇ
カラギーナン ０.５ｍｇ
サッカリンナトリウム ０.１ｍｇ
香料 １.０ｍｇ
安息香酸ナトリウム ０.３ｍｇ
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.５ｍｇ
水 残 部
合 計 １００.００ｍｇ。
【００８７】
処方例５ 口腔用パスタ
下記の処方からなる口腔用パスタを常法に従って調製した。
【００８８】
流動パラフィン １３ ｍｇ
セタノール １０ ｍｇ
グリセリン ２５ ｍｇ
ソルビタンモノパルミテート ０.６ ｍｇ
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート ５ ｍｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０.１ ｍｇ
塩化ベンゾトニウム ０.１ ｍｇ
サリチル酸メチル ０.１ ｍｇ
サッカリン ０.２ ｍｇ
香料 ０.２５ｍｇ
ビタミンＥ ０.０５ｍｇ
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.３ ｍｇ
水 残 部
合 計 １００.００ｍｇ。
【００８９】
処方例６ チューインガム
下記の処方からなるチューインガムを常法に従って調製した。
【００９０】
炭酸カルシウム ５.０ｍｇ
エリスリトール １０.０ｍｇ
キシリトール ３８.０ｍｇ
マルチトール １２.０ｍｇ
香料 適 量
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.１ｍｇ
ガムベース 残 部
合 計 １００.０ｍｇ。
【００９１】
なお、本発明には下記の実施態様が包含される：
（１）前記式（Ｉ）で表される化合物又はその塩；
（２）化合物が光学異性体である（１）記載の化合物またはその塩；
（３）上記塩が式（１）で示される化合物の塩基塩である（１）記載の化合物の塩。
【００９２】
（４）ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、（１）又は（２）記載の化合物を生産する能力を有する菌を培地に培養し、得られる培養物から該化合物を採取することを特徴とする（１）または（２）記載の化合物又はその塩の製造法；
（５）菌が、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＦＡ−７０）株又はその変異株である（４）記載の製造法。
【００９３】
（６）（１）記載の化合物又はその塩を有効成分とする組成物；
（７）カテプシン類プロテアーゼの阻害剤である（６）記載の組成物；
（８）カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢの阻害剤である（７）記載の組成物
（９）Ａｒｇ−gingipain阻害剤である（６）記載の組成物。
【００９４】
（10）有効量の（１）記載の化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物；
（11）Ａｒｇ−gingipainが関与する疾患の治療薬である（10）記載の医薬組成物；
（12）歯周病の予防・治療薬である（11）記載の医薬組成物；
（13）カテプシン類プロテアーゼが関与する疾患の治療薬である（10）記載の医薬組成物；
（14）カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢが関与する疾患の治療薬である（13）記載の医薬組成物。
【００９５】
（15）有効量の（１）記載の化合物又はその塩を含む口腔用組成物；
（16）口腔用組成物が、歯磨剤、洗口剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤及びゲル剤からなる群から選択されるいずれかの医薬品又は医薬部外品；またはトローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディからなる群から選択されるいずれかの食品である（15）記載の口腔用組成物。
【００９６】
（17）有効量の（１）記載の化合物又はその塩を患者に適用することを特徴とする歯周病の予防・治療方法。
【００９７】
【発明の効果】
本発明のＦＡ−７Ｃ１物質は、歯周病の病因となり得るＡｒｇ−gingipainを極めて強く阻害し、また骨粗鬆症や癌の悪化（転移、浸潤）等に関連するカテプシン類プロテアーゼをも強く阻害した。このことから、本発明のＦＡ−７Ｃ１物質又はその塩は、これらの酵素が関与する各種疾患の予防・治療薬、特に歯周病の予防・治療薬として有用と考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１で得られた本発明化合物の赤外吸収スペクトル図である。
【図２】実施例１で得られた本発明化合物の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図３】実施例１で得られた本発明化合物の紫外吸収スペクトル図である。
【図４】試験例２で得られた、Ａｒｇ−gingipainによるウサギγ−グロブリン分解に対する本発明化合物の抑制効果を示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動のクロマトグラムを示す図面に代わる写真である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、プロテアーゼ阻害活性を有し、特に医薬として有用な新規な化合物：ＦＡ−７０Ｃ１物質及びその塩に関する。
【０００２】
【従来の技術】
細胞内で生産されるカテプシン類プロテアーゼ酵素群（カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＨ、カテプシンＳ、カテプシンＫ等）は細胞内外で様々な生理作用を担っている。例えば細胞内において、蛋白質のプロセシング、不要蛋白質の分解、細胞死等に関与し、細胞外において、例えば骨基質コラーゲン分解等の細胞外基質分解、感染細菌の消化等に関与していると考えられている。また、感染細菌は感染の際に宿主からの免疫性攻撃因子の分解のために菌体外にプロテアーゼを分泌し攻撃を免れている。
【０００３】
特にカテプシン類プロテアーゼ酵素群（カテプシンＬ、カテプシンＫ等）はコラーゲンの分解能が非常に強いことが知られており、実験動物においてもカテプシン阻害剤が著明な骨コラーゲン分解を抑制することが明らかにされた。このようなことからカテプシンＬ、カテプシンＫを特異的に阻害する物質が骨粗鬆症治療薬として有望であると考えられる（エフイービーエス レターズ(FEBS Letters),269 (1),189-193,1990）。
【０００４】
カテプシンＢは炎症、癌転移及び筋ジストロフィー症等の病因に深く関与していると言われている酵素である。近年、転移や浸潤等、癌の悪化とカテプシンＢ活性の相関関係を指摘する報告が増加している（キャンサーリサーチ(Cancer Research),52,3610-3614,1992）。
【０００５】
また、歯科領域において、歯周病は歯周局所の常在微生物によって惹起される一種の感染症と考えられており、近年、グラム陰性嫌気性細菌群が疾患の発症や進行に深く関与していることが明らかにされてきた。特にグラム陰性嫌気性桿菌Porphyromonas gingivalisは成人性歯周炎や急速進行性歯周炎において最も重要な病因菌であることが明らかにされている。当該 Porphyromonas gingivalisはトリプシン様システインプロテアーゼであるＡｒｇ−gingipain及びＬｙｓ−gingipainを菌体外に分泌し、補体成分や免疫グロブリン等を分解し、宿主の体液性免疫系の一部を破壊する。またＡｒｇ−gingipainは、歯周組織周辺の主要成分であるタイプＩコラーゲンを強力に分解することに基づいて、歯周病の病因と考えられている（日薬理誌(Folia Pharmacol.Jpn),105,345-355,1995）。
【０００６】
現在、カテプシン類プロテアーゼが関与する疾患、及び Porphyromonas gingivalisの産生するシステインプロテアーゼが関与する歯周病において、これらの酵素に対する特異的な阻害剤が求められているが、十分なものは得られていない。特に歯周病の病因たるＡｒｇ−gingipainを特異的に抑制する阻害剤は得られていないのが現状である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、カテプシン類プロテアーゼ及びＡｒｇ−gingipainに対して優れた阻害活性を有する物質を提供することを目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、天然土壌より多くの微生物を分離し、それらが生産する代謝産物について、システインプロテアーゼを阻害する物質の探索を続けていたところ、放線菌に属するＦＡ−７０株の培養物中にシステインプロテアーゼ阻害活性を有する物質が生産されていることを見出し、その活性物質を単離し、その理化学的性状及び構造を確定することにより、本発明を完成した。
【０００９】
本発明の化合物に類似する構造を有する微生物生産物としてはアンチパイン（Anti pain）（ザ ジャーナル オブ アンチバイオティクス(The Journal of Antibiotics),25,267-000,1972）が報告されているが、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、シトルリンがペプチド結合した構造を有する点で上記アンチパインとは異なる新規化合物である。また、本発明者らは、以前、本発明の化合物に類似する構造を有する微生物生産物としてＦＡ−７０Ｄ物質を報告しているが（EP0822260A1）、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質はアミノ酸組成、カテプシン類及び Arg-gingipain阻害様式の点で該ＦＡ−７０Ｄ物質とは異なる新規化合物である。
【００１０】
すなわち、本発明は下記式（１）
【００１１】
【化２】
【００１２】
また、本発明はストレプトマイセス属に属し、上記ＦＡ−７０Ｃ１物質を産生する能力を有する菌を培養し、得られる培養物からＦＡ−７０Ｃ１物質を採取するＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩の製造法、該ＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩を有効成分とする組成物、特に薬学的に許容される担体を含有していてもよい医薬組成物に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の式（１）の化合物の塩は、特に限定されないが、薬学的に許容される塩基性化合物を作用させた塩基塩が好ましい。この塩基性化合物としては、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩；炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属；リン酸１ナトリウム、リン酸１カリウム、リン酸２ナトリウム、リン酸２カリウム、リン酸３ナトリウム、リン酸３カリウム等のリン酸塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、シクロヘキシルアミン、ピペリジン等のアミン類；アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸が挙げられる。
【００１４】
上記式（１）のＦＡ−７０Ｃ１物質には、光学異性体が存在し、本発明はかかる異性体及びそれらの混合物を全て包含するものである。
【００１５】
また、上記式（１）のＦＡ−７０Ｃ１物質又はその塩は、無水の状態であってもよく、又は適当な割合で水和したものであっても良い。また、結晶形のものでも、粉末、又はアモルファス状のものであってもよい。
【００１６】
ＦＡ−７０Ｃ１物質の物理化学的性質を以下に示す。
【００１７】
（１）形状：白色粉末
（２）実験式：C27H43N9O7（Ｍ）（高分解能ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による。C27H44N9O7（Ｍ＋Ｈ）として実験値６０６．３３７３，計算値６０６．３３６４）
（３）分子量：６０５．６９（ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による）
（４）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法、
νmax (cm -1) ：３３４５，２９６５，１６５０，１５５５，１４５５，１３９５，１２０５，１１４０，７００（図１）
（５）核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシド−d6（ＤＭＳＯ−d6）溶液中３０℃で測定した４００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図２）の化学シフト値を表１に示す。
【００１８】
【表１】
（７）融点：２０５℃以上で分解
（８）比旋光度：［α］20 D＝−２５．８０００
（ｃ＝３．５６ｍｇ／ｍｌ、メタノール中）
（９）呈色反応：エールリッヒ反応、坂口反応において呈色する。ニンヒドリン反応において呈色しない
（１０）紫外部吸収スペクトル：図３に示す。
【００１９】
（１１) 高速液体クロマトグラフィー：下記分析条件において保持時間（ｔR ）６．６分にピークを与える：
カラム：イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２ ５μｍ
（内径４．６mm×１５０mm，ジーエルサイエンス社製）
移動相：アセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水
（ｖ／ｖ／ｖ、２２．５：０．０５：７７．５）
流速：１ml／分
検出：２１０nm（０．０４a.u.f.s.）。
【００２０】
本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、例えば、本物質の生産能力を有する菌株（以下ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌とも称する）を以下に示すような適当な条件下で培養することによって製造することができる。
【００２１】
ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌としては、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株が挙げられる。本発明には、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌を適当な培地を用いて培養し、得られる培養物から採取、取得できる上記ＦＡ−７０Ｃ１物質及びその塩が包含される。
【００２２】
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株の一例としては、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＦＡ−７０）株が例示できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和国河北省承徳の土壌から新たに分離したストレプトマイセス属に属する菌株であり、日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号に住所を有する通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に、１９９５年７月３１日に微生物の表示、（寄託者が付した識別のための表示）「Ｓｔｒａｉｎ ＦＡ−７０」、（受託番号）「ＦＥＲＭ ＢＰ−５１８３」として寄託されている。
【００２３】
ＦＡ−７０株について、インターナショナル ジャーナル オブ システィマティック バクテリオロジー(International Journal of Systematic Bacteriology),16 (3),313-340,1960に記載の方法に準じて検討した菌学的性質は次の通りである。
【００２４】
（ａ）形態：
ＩＳＰ（インターナショナル ストレプトマイセス プロジェクト（International Streptomyces Project）規定の培地Ｎｏ．４（ＩＳＰ ４）で２７℃、１３日間培養し、観察した結果を以下に示した。
【００２５】
胞子形成菌糸の分枝法；単純分枝
胞子形成の形態；螺旋状(spirales)、胞子の形は円筒状(cylindrical)
胞子の数；１０〜５０胞子又はそれ以上
胞子の表面構造；平滑(smooth)
胞子の大きさ；０．５〜０．６×０．８〜０．９μｍ
鞭毛胞子の有無；無
胞子のうの有無；無
胞子柄の着生位置；気菌糸
菌核形成性の有無；無。
【００２６】
（ｂ）各種培地における生育状態：
各種培地における生育状態を表２に示す。分類色名は（財団法人日本色彩研究所監修，標準色彩図表Ａ，１９８１年）で示した。なお、詳細な色はコンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ(Container Corporation of America)の（ザ・カラー・ハーモニー・マニュアル(The Color Harmony Manual)，第４版，１９５８年）の色コードで（ ）内につけ加えた。
【００２７】
【表２】
生育温度範囲；２０〜３７℃の温度範囲で良好に生育する
ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃）；陽性
ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地、２０℃）；陰性
ミルクの凝固（３７℃）；陰性
ミルクのペプトン化（３７℃）；陽性
メラニン様色素の生成；チロシン寒天（ＩＳＰ−７）培地上、トリプトン・酵母エキス（ＩＳＰ−１）培地上で陰性、ペプトン・酵母エキス・鉄寒天（ＩＳＰ−６）培地上で陽性
硫化水素の産生（ペプトン・酵母エキス・鉄寒天（ＩＳＰ−６）に０．５％酵母エキスを添加した培地）；陽性
澱粉の加水分解（スターチ・無機塩寒天、ＩＳＰ−４培地）；陽性
硝酸塩の還元（１％硝酸カリウム含有ブイヨン、ＩＳＰ−８培地）；陰性
セルロースの分解；陰性。
【００２８】
（ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴトリーブ寒天、ＩＳＰ−９培地）：
Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、イノシトール、溶性澱粉、デキストリン、グリセロール及びマルトースを利用してよく発育する。Ｌ−アラビノース、シュクロース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−ガラクトース及びサリシンは利用できない。
【００２９】
（ｅ）菌体組成：
（日本放線菌学会編，放線菌の同定実験法，６２−７０頁，１９８５年）に記載の方法に従い、全菌体中の酸加水分解物を薄層クロマトグラフィー法により分析した結果、ＬＬ−型のジアミノピメリン酸が検出された。
【００３０】
以上の菌学的性質、特に基生菌糸より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、細胞壁組成のアミノ酸がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成しない性質を有することから、本菌株はストレプトマイセス属に属することが明らかである。よって本菌株をストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＦＡ−７０）と称することとした。
【００３１】
本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、例えば、上記ＦＡ−７０株又はその変異株等のストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、ＦＡ−７０Ｃ１物質を生産する能力を有する菌を培地で培養し、培養物中に該化合物を生成せしめ、該培養物、特に培養液から本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物を分離し、更に粗抽出物からＦＡ−７０Ｃ１物質を単離、精製することにより製造することができる。
【００３２】
上記微生物の培養は原則的に一般の微生物の培養に準じて行われるが、通常液体培養による振盪培養法、通気撹拌培養法等の好気的条件下で行うのが好ましい。
【００３３】
培養に用いられる培地としては、ＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、天然培地等をいずれも用いることができる。培地の炭素源としてはグルコース、シュクロース、フラクトース、グリセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティープ・リカー、有機酸等を単独又は二種以上組み合わせたものが；窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素源を単独又は二種以上組み合わせたものが用いられる。また、培地にはナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その他の重金属塩などが必要に応じて適宜添加される。
【００３４】
なお、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合物などの消泡剤を適宜培地中に添加することもできる。
【００３５】
培地のｐＨは中性付近とするのが好ましい。培養温度はＦＡ−７０Ｃ１物質生産菌が良好に生育する温度、通常２０〜３７℃、特に２５〜３０℃付近に保つのがよい。培養時間は、液体振盪培養及び通気撹拌培養のいずれの場合も２〜６日間が好ましい。
【００３６】
上述した各種の培養条件は使用微生物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、またそれぞれに応じて上記範囲から最適条件を選択、調節できる。
【００３７】
培養液からのＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物の分離は、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行うことができ、例えば溶媒抽出、分配及び吸着クロマトグラフィー等の手段を単独又は二種以上を任意の順序に組み合わせて用いることができる。より詳しくは、上記培養により生産されるＦＡ−７０Ｃ１物質は主として培養濾液中に存在するので、常法に従い、まず濾過、遠心分離等を行って、培養濾液と菌体固形分とを分離し、得られたＦＡ−７０Ｃ１物質を含む培養濾液を得る。その培養濾液をダイアイオンＨＰ−２０樹脂（三菱化成（株）製）に吸着させ、精製水で樹脂を洗浄する。次いで、メタノールを用いて樹脂からＦＡ−７０Ｃ１物質の溶出を行い、次いで、減圧下に溶媒を留去すればＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗濃縮液を得ることができる。この粗濃縮液にブタノールを加えてＦＡ−７０Ｃ１物質を有機溶媒層に転溶させ溶媒を減圧下で留去し、酢酸エチルで洗浄後、溶媒を減圧下で留去すればＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物を得ることができる。
【００３８】
更に、粗抽出物からＦＡ−７０Ｃ１物質を単離、精製するためには、通常の低分子ペプチド物質の単離、精製手段、例えば活性炭、ダイアイオンＨＰ−２０、イオン系吸着樹脂などの吸着剤による種々の吸着クロマトグラフィー及びＯＤＳ−結合型シリカゲル等を用いる逆相クロマトグラフィーが使用できる。これらのうち、溶出溶媒にメタノール／水（ｐＨ２．０）の混合溶媒系を用いるダイアイオンＨＰ−２０クロマトグラフィー及びアセトニトリル／トリフルオロ酢酸の混合溶媒系を溶出に用いる逆相クロマトグラフィーが特に好ましい。また、更に精製を必要とする場合には、上記クロマトグラフィーを繰り返し行うかまたは溶出溶媒としてメタノールを用いたセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）によるゲル濾過クロマトグラフィー等を適宜組み合わせて行うことにより、高純度のＦＡ−７０Ｃ１物質を得ることができる。
【００３９】
なお、精製工程中のＦＡ−７０Ｃ１物質の確認は、本物質により阻害されるパパインの酵素活性を測定する方法と高速液体クロマトグラフィーを用いて精製されたことを検出する方法とを併用して行うのがよい。
【００４０】
酵素活性を測定する具体的方法は、実施例及び試験例中に記載する。また、試験例に示すように、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質はＡｒｇ−gingipain、並びにカテプシンＬ、Ｋ、Ｓ及びＢを阻害する活性を有している。このため、該物質はこれらの酵素の阻害剤として有用であるとともに、該酵素が関連する疾患の予防・治療剤の有効成分として有用である。
【００４１】
かかる観点から、本発明はまた、以上のようにして精製されたＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩を有効成分とする組成物を提供する。
【００４２】
当該組成物は、ＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩の上記活性に基づいて、カテプシン類プロテアーゼ、特にカテプシンＬ、Ｋ、Ｓ及びＢの阻害剤として有用である。従って、本発明の組成物は、カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢが関与する疾患の治療用又は予防用医薬組成物として有用である。また、本発明の組成物は、システインプロテアーゼ、特に Porphyromonas gingivalisが産生するＡｒｇ−gingipainの阻害剤として有用である。当該Ａｒｇ−gingipainは歯周病の病因であることから、本発明の組成物は歯周病の予防又は治療用の医薬組成物、口腔用組成物（医薬品、医薬部外品又は食品の別を問わない）として有用である。
【００４３】
ＦＡ−７０Ｃ１物質またはその塩を医薬組成物として使用する際の薬学的投与形態としては、目的に応じて各種の薬学的投与形態を広く採用でき、該形態としては、具体的には、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、貼付剤、エアゾール等の非経口剤を例示できる。また、口腔用組成物の形態としては、例えば歯磨剤、洗口剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤やゲル剤などの医薬品又は医薬部外品、トローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディなどの食品などが挙げられる。これら投与形態は、この分野で通常知られた慣用的な製剤方法により製剤化される。
【００４４】
錠剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【００４５】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００４６】
カプセル剤は常法に従い通常本発明化合物を上記で例示した各種の担体と混合して硬化ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。
【００４７】
経口用液体製剤を調製する場合は、本発明の有効成分に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等の担体を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が使用でき、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が使用できる。
【００４８】
注射剤として調製される場合、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに十分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、局所麻酔剤等の担体を添加し、常法により静脈内、筋肉内、皮下、皮内並びに腹腔内用注射剤を製造できる。ｐＨ調整剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸等が使用できる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が使用できる。
【００４９】
坐剤を調製する場合には、本発明の有効成分に基剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた後、常法により坐剤を製造することができる。基剤としては、例えばマクロゴール、ラノリン、カカオ油、脂肪酸トリグリセライド、ウィテップゾール（ダイナマイトノーベルズ社製）等の油性基剤を用いることができる。
【００５０】
軟膏剤を調製する場合は、本発明化合物に通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等の担体が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。基剤としては流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としてはパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
【００５１】
更に上記各製剤には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、抗酸化剤、滑沢剤などの通常医薬組成物に配合する添加剤や希釈剤等や他の薬物を含有することもできる。
【００５２】
本発明の医薬組成物中に含有されるべき本発明化合物の量としては、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常医薬製剤中０．０１〜７０重量％とするのがよい。
【００５３】
上記医薬組成物の投与方法は特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じて適宜決定される。
【００５４】
上記の各投与単位形態中に配合されるべき本発明有効成分の量は、これを適用すべき患者の症状によりあるいはその剤型等により一定ではないが、一般に投与単位形態あたり経口剤では約１〜１０００ｍｇ、注射剤では約０．１〜５００ｍｇ、坐剤では約５〜１０００ｍｇとするのが望ましい。
【００５５】
また、上記投与形態を有する薬剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別、その他の条件等に応じて適宜選択されるが、通常成人１日あたり約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に分けて投与することができる。
【００５６】
【実施例】
以下に実施例及び試験例を挙げて更に具体的に本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００５７】
実施例１ 本発明ＦＡ−７０Ｃ１物質の製造：
（ａ）培養工程
グルコース０．５％、可溶性澱粉２．４％、牛肉エキス０．３％、酵母エキス０．５％、ペプトン０．５％、コーン・スティープ・リカー０．４％、塩化コバルト０．００２％、炭酸カルシウム０．４％よりなる培地（pH７．２）１００mlを５００mlの三角フラスコに分注し、滅菌後、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０株（受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−５１８３）を一白金耳量接種し、２７℃で３日間振盪培養した（毎分２２０回、振幅７cm）。
【００５８】
次に、グリセロール２．０％、デキストリン２．０％、酵母エキス０．３％、ソイトン１．０％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなる培地（pH７．０）を５００mlの三角フラスコに１００mlずつ分注し、滅菌（１２１℃、１５分）後、上記の種菌を２％（ｖ／ｖ）の割合で添加し、２７℃、３日間振盪培養した（毎分２２０回、振幅７cm）。
【００５９】
（ｂ）分離工程
上記工程で得られた培養液（８．５Ｌ，ｐＨ６．１）を採取し、遠心分離（３０００回転、１５分）、濾過後、得られた培養瀘液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８．０に調整し、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ−２０（三菱化成（株））樹脂（８５０ｍｇ）を加えた。１時間撹拌後、濾過により樹脂を分離し、メタノール（４２５０ｍｌ）を加え１Ｎの塩酸でｐＨ２．０に調整しながら、撹拌抽出した。同操作をさらに２回繰り返して行い、メタノール抽出画分を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．０に調整し、遠心分離で沈殿を除去した後、減圧濃縮し、メタノールを除去したＦＡ−７０Ｃ１物質を含む水溶液を得た。この水溶液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８．０に調整し、同量（ｖ／ｖ）のブタノールで３回抽出した。このブタノール抽出画分を減圧濃縮して得た固形物を酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回洗浄し、乾燥してＦＡ−７０Ｃ１物質を含む粗抽出物（７．２ｇ）を得た。
【００６０】
（ｃ）単離、精製工程
上記粗抽出物（４．２ｇ）をメタノール（８４ｍｌ）に溶解し、遠心分離（３０００回転、１５分）によりメタノール可溶画分と不溶部に分け、更に不溶部にメタノール（３３ｍｌ）を加え、遠心分離によりメタノール可溶画分と不溶部に分離した。メタノール可溶画分を合わせ、水（２２１３ｍｌ）を加え１Ｎの塩酸でｐＨ３．０に調整し、生じた沈殿を除去した。メタノール含有水溶液を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．０に調整し、ＣＭ−セファデックスカラム（ファルマシア社製、ＣＭ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５，Ｈ+ 型、内径３．６ｃｍ×長さ３０ｃｍ）に付した。樹脂を水でよく洗浄したのち、０．１Ｍの塩化ナトリウム水溶液で樹脂からＦＡ−７０Ｃ１物質を含む画分を溶出した。その画分をダイアイオンＨＰ−２０樹脂カラム（内径２ｃｍ×長さ１５ｃｍ）に付した。水洗後、６０％メタノール水溶液（希塩酸にてｐＨ２．０に調整）で溶出する画分を集め、減圧濃縮しＦＡ−７０Ｃ１物質を含む乾燥粉末（５５５ｍｇ）を得た。
【００６１】
各工程のＦＡ−７０Ｃ１物質を含む活性画分の検出は、パパインの阻害活性を測定（バイオケミカル ジャーナル(Biochemical Journal),201,189-198,1982）することにより行った。
【００６２】
即ち、８ｍＭのジチオスレイトール、４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）０．５ｍｌ、５μＭのパパインと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル）（和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び試料を含む水溶液０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間プレインキュベーションをした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え酵素反応を停止させ、３５０ｎｍの光で励起される４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、試料を含む水溶液０．２ｍｌの代わりに、水０．２ｍｌを加え、同様に４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した：
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００。
【００６３】
得られた乾燥粉末（５００ｍｇ）をメタノールに溶解し、ゲル濾過カラム（ファルマシア社製、セファデックスＬＨ−２０、内径２ｃｍ×長さ１２７ｃｍ）に付し、メタノールで溶出した。活性画分を集め溶媒を除去し、乾燥粉末（１４５ｍｇ）を得た。得られた乾燥粉末をメタノールに溶解し、イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２カラム（ジ−エルサイエンス社製、５μｍ、内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）、移動相にアセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水（ｖ／ｖ／ｖ、２０：０．０５：８０）を用い、流速４．０ｍｌ／分で溶出する逆相高速液体クロマトグラフィーを実施した。活性画分を分取し有機溶媒を減圧留去した後、水溶液を凍結乾燥して白色粉末ＦＡ−７０Ｃ１物質（１０ｍｇ）を得た。
【００６４】
得られたＦＡ−７０Ｃ１物質の物理化学的性質を以下に示す：
（１）形状：白色粉末
（２）実験式：C27H43N9O7（Ｍ）（高分解能ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による。C27H44N9O7（Ｍ＋Ｈ）として実験値６０６．３３７３，計算値６０６．３３６４）
（３）分子量：６０５．６９（ファーストアトミック・ボンバードメント・マススペクトロメトリー法による）
（４）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法、
νmax (cm -1) ：３３４５，２９６５，１６５０，１５５５，１４５５，１３９５，１２０５，１１４０，７００（図１）
（５）核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシド−d6（ＤＭＳＯ−d6）溶液中３０℃で測定した４００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図２）の化学シフト値を表３に示す。
【００６５】
【表３】
（７）融点：２５０℃以上で分解
（８）比旋光度：［α］20 D＝−２５．８０００
（ｃ＝３．５６ｍｇ／ｍｌ、メタノール中）
（９）呈色反応：エールリッヒ反応、坂口反応に呈色する。ニンヒドリン反応に呈色しない
（１０）紫外部吸収スペクトル：図３に示す。
【００６６】
（１１) 高速液体クロマトグラフィー：下記分析条件において保持時間（ｔR ）６．６分にピークを与える。
【００６７】
カラム：イナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）ＯＤＳ−２ ５μｍ
（内径４．６mm×１５０mm，ジーエルサイエンス社製）
移動相：アセトニトリル／トリフルオロ酢酸／水
（ｖ／ｖ／ｖ、２２．５：０．０５：７７．５）
流速：１ml／分
検出：２１０nm（０．０４a.u.f.s.）。
【００６８】
試験例１ ＦＡ−７０Ｃ１物質の酵素阻害活性の測定
カテプシンＢ及びカテプシンＬに対する阻害活性の測定はＡ，Ｊ，Ｂａｒｒｅｔｔらの方法（バイオケミカル ジャーナル(Biochemical Journal),201,189-198,1982）に従った。
【００６９】
カテプシンＢに対する阻害活性は次のようにして測定した。まず、８ｍＭのジチオスレイトール及び４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．５ｍｌ、５μＭのカテプシンＢと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン(２３)ラウリルエーテル）（和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び本発明の化合物を含む水溶液０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間プレインキュベーションをした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え酵素反応を停止させ、３５０ｎｍの光で励起される４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、本発明化合物を含む水溶液０．２ｍｌの代わりに、水０．２ｍｌを加え、同様に４５８ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した；
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００。
【００７０】
カテプシンＬに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＬを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ５．５に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７１】
カテプシンＫに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＫを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ５．５に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７２】
カテプシンＳに対する阻害活性については、上記カテプシンＢに対する阻害活性測定法のカテプシンＢの代わりに同濃度のカテプシンＳを酵素液に加え、カルボベンゾキシ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドの代わりにカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを基質として加え、４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液をｐＨ７．０に調整し、同様な操作で測定し、酵素阻害活性を算出した。
【００７３】
Ａｒｇ−gingipainに対する阻害活性については、Kadowakiらの方法（ザ ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー(The Journal of Biological Chemistry),269,21371-21378,1994）に従って測定した。
【００７４】
まず、５０ｍＭのＬ−システイン１００μｌ、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００μｌ、０．０５％のＢｒｉｊ３５を含む１２．３ｎＭのＡｒｇ−gingipain酵素液２０μｌ、蒸留水８０μｌ、および本発明の化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌを混合し、３７℃で５分間プレインキュベーションした。その後、２０μＭのカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミドを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液５００μｌを加え、４０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１０ｍＭのヨード酢酸を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）１０００μｌを加え、酵素反応を停止させ、３８０ｎｍの光で励起される４６０ｎｍの蛍光強度（Ｆ）を測定した。対照として、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌの代わりに、ジメチルスルホキシド１００μｌを加え、同様に４６０ｎｍの蛍光強度（Ｆ0）を測定し、次式により酵素阻害活性を算出した：
酵素阻害活性（％）＝Ｆ／Ｆ0×１００
その結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
【００７６】
試験例２ Ａｒｇ− gingipain のγ−グロブリン分解に対するＦＡ−７０Ｃ１物質の阻害活性の測定
Ａｒｇ−gingipainのγ−グロブリン分解の測定は、Kadowakiらの方法（ザ ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー(The Journal of Biological Chemistry),269,21371-21378,1994）に従って行った。
【００７７】
まず、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）と１００ｍＭのシステインを２：１の割合で混ぜて調製した溶液１００μｌ、１２．３ｎＭのＡｒｇ−gingipain酵素液１００μｌ、および本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質の各濃度の水溶液１００μｌを混合し、３７℃で１０分間プレインキュベーションした。その後、１０００μｇ／ｍｌのウサギγ−グロブリン（シグマ社製）水溶液３００μｌを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。インキュベーションしたサンプルを２０μｌ取り、２ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（ペプチド研究所製）と１００ｍＭのＥＤＴＡを含む水溶液１μｌを加えて反応を停止させた。その後サンプル処理液（第一化学薬品（株）製）２０μｌを加え９７℃で５分間処理しＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。
【００７８】
処理液１０μｌを電気泳動用ゲルプレート（マルチゲル4/20、第一化学薬品（株）製）に付し、０．０２５Ｍのトリス塩酸緩衝液、０．１９２Ｍのグリシン、０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを含む泳動用緩衝液（ｐＨ８．４）中で２０ｍＡの定電圧で２時間泳動を行った。染色はページブルー８３（第一化学薬品（株）製）で行った。脱色後、写真撮影を行った。その結果を図４に示す。
【００７９】
図４の結果から明らかなように、本発明のＦＡ−７０Ｃ１物質は、Ａｒｇ−gingipainによるウサギγ−グロブリン分解を０．１μｇ／ｍｌの濃度で抑制し始め、１μｇ／ｍｌの濃度で完全に阻害した。
【００８０】
γ−グロブリンは生体の体液性免疫成分の一つである。Porphyromonas gingivalisが産生するＡｒｇ−gingipainは宿主のγーグロブリンを分解し、免疫機能を破壊し宿主の攻撃をかわし、これによってPorphyromonas gingivalisは歯周に生存することができると考えられている。上記結果で示すように、ＦＡ−７０Ｃ１物質がＡｒｇ−gingipainを阻害することは、本発明の物質が宿主の免疫機能を防御することができることを示唆している。
【００８１】
以下、本発明の組成物の処方例を記載するが、本発明は当該処方例に何ら制限されない。
【００８２】
処方例１ カプセル剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 １０ｍｇ
乳糖 ５０ｍｇ
トウモロコシデンプン ４７ｍｇ
結晶セルロース ５０ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １ｍｇ
１カプセル当たり １６０ｍｇ
上記配合割合で、常法に従いカプセル剤を調製した。
【００８３】
処方例２ 注射剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ５ｍｇ
注射用蒸留水 適量
１アンプル中 ５ｍｌ
上記配合割合で、常法に従い注射剤を調製した。
【００８４】
処方例３ 坐剤
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ２０ｍｇ
ウィテップゾールＷ−３５ １３８０ｍｇ
（登録商標、ダイナマイトノーベル社製）
１個当たり １４００ｍｇ
上記配合割合で、常法に従い坐剤を調製した。
【００８５】
処方例４ 練歯磨き
下記の処方からなる練歯磨きを常法に従って調製した。
【００８６】
第２リン酸カルシウム ３０.０ｍｇ
グリセリン １０.０ｍｇ
ソルビトール ２０.０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム １.０ｍｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １.５ｍｇ
カラギーナン ０.５ｍｇ
サッカリンナトリウム ０.１ｍｇ
香料 １.０ｍｇ
安息香酸ナトリウム ０.３ｍｇ
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.５ｍｇ
水 残 部
合 計 １００.００ｍｇ。
【００８７】
処方例５ 口腔用パスタ
下記の処方からなる口腔用パスタを常法に従って調製した。
【００８８】
流動パラフィン １３ ｍｇ
セタノール １０ ｍｇ
グリセリン ２５ ｍｇ
ソルビタンモノパルミテート ０.６ ｍｇ
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート ５ ｍｇ
ラウリル硫酸ナトリウム ０.１ ｍｇ
塩化ベンゾトニウム ０.１ ｍｇ
サリチル酸メチル ０.１ ｍｇ
サッカリン ０.２ ｍｇ
香料 ０.２５ｍｇ
ビタミンＥ ０.０５ｍｇ
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.３ ｍｇ
水 残 部
合 計 １００.００ｍｇ。
【００８９】
処方例６ チューインガム
下記の処方からなるチューインガムを常法に従って調製した。
【００９０】
炭酸カルシウム ５.０ｍｇ
エリスリトール １０.０ｍｇ
キシリトール ３８.０ｍｇ
マルチトール １２.０ｍｇ
香料 適 量
ＦＡ−７０Ｃ１物質 ０.１ｍｇ
ガムベース 残 部
合 計 １００.０ｍｇ。
【００９１】
なお、本発明には下記の実施態様が包含される：
（１）前記式（Ｉ）で表される化合物又はその塩；
（２）化合物が光学異性体である（１）記載の化合物またはその塩；
（３）上記塩が式（１）で示される化合物の塩基塩である（１）記載の化合物の塩。
【００９２】
（４）ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、（１）又は（２）記載の化合物を生産する能力を有する菌を培地に培養し、得られる培養物から該化合物を採取することを特徴とする（１）または（２）記載の化合物又はその塩の製造法；
（５）菌が、ストレプトマイセス エスピー．ＦＡ−７０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＦＡ−７０）株又はその変異株である（４）記載の製造法。
【００９３】
（６）（１）記載の化合物又はその塩を有効成分とする組成物；
（７）カテプシン類プロテアーゼの阻害剤である（６）記載の組成物；
（８）カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢの阻害剤である（７）記載の組成物
（９）Ａｒｇ−gingipain阻害剤である（６）記載の組成物。
【００９４】
（10）有効量の（１）記載の化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物；
（11）Ａｒｇ−gingipainが関与する疾患の治療薬である（10）記載の医薬組成物；
（12）歯周病の予防・治療薬である（11）記載の医薬組成物；
（13）カテプシン類プロテアーゼが関与する疾患の治療薬である（10）記載の医薬組成物；
（14）カテプシンＬ、Ｋ、Ｓ又はＢが関与する疾患の治療薬である（13）記載の医薬組成物。
【００９５】
（15）有効量の（１）記載の化合物又はその塩を含む口腔用組成物；
（16）口腔用組成物が、歯磨剤、洗口剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤及びゲル剤からなる群から選択されるいずれかの医薬品又は医薬部外品；またはトローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディからなる群から選択されるいずれかの食品である（15）記載の口腔用組成物。
【００９６】
（17）有効量の（１）記載の化合物又はその塩を患者に適用することを特徴とする歯周病の予防・治療方法。
【００９７】
【発明の効果】
本発明のＦＡ−７Ｃ１物質は、歯周病の病因となり得るＡｒｇ−gingipainを極めて強く阻害し、また骨粗鬆症や癌の悪化（転移、浸潤）等に関連するカテプシン類プロテアーゼをも強く阻害した。このことから、本発明のＦＡ−７Ｃ１物質又はその塩は、これらの酵素が関与する各種疾患の予防・治療薬、特に歯周病の予防・治療薬として有用と考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１で得られた本発明化合物の赤外吸収スペクトル図である。
【図２】実施例１で得られた本発明化合物の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図３】実施例１で得られた本発明化合物の紫外吸収スペクトル図である。
【図４】試験例２で得られた、Ａｒｇ−gingipainによるウサギγ−グロブリン分解に対する本発明化合物の抑制効果を示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動のクロマトグラムを示す図面に代わる写真である。
Claims (9)
- 式（Ｉ）
- 請求項１記載の化合物又はその塩を有効成分とするカテプシン類プロテアーゼ阻害剤。
- カテプシン類プロテアーゼがカテプシンＬ、Ｋ、Ｓ及びＢからなる群から選択されるいずれか少なくとも一種である請求項２記載のカテプシン類プロテアーゼ阻害剤。
- 請求項１記載の化合物又はその塩を有効成分とするＡｒｇ−ｇｉｇｉｐａｉｎ阻害剤。
- 有効量の請求項１記載の化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
- 歯周病の予防・治療薬である請求項５記載の医薬組成物。
- カテプシンＢを阻害する活性を有する、炎症、癌転移及び筋ジストロフィーの治療薬である請求項５記載の医薬組成物。
- カテプシンＫ又はカテプシンＬを阻害する活性を有する、骨粗鬆症の治療薬である請求項５記載の医薬組成物。
- 有効量の請求項１記載の化合物又はその塩を含む口腔用組成物。
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