JPS63245693A - Ｄ−（−）−酒石酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明はＤ−（−）−酒石酸の工業的製造法に関するも
のである。

〈従来の技術〉 Ｄ−（−）−酒石酸の生化学的製造法として、ＤＬ−酒
石酸溶液中で細菌エアロバクター属を培養させてＤ−（
−）−酒石酸を採取する方法が既に知られている（特開
昭５０−２４４９０号公報）。

〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしながら、前記の方法は、培地濃度が低い点や培養
時間が長い点などのなめ、工業的に有利な方法とは言え
ない。

そこで、本発明者らは上記問題点を解決するために鋭意
研究を行った。

まず、本発明者らは酒石酸を他の物質に変換する酵素を
有する微生物について検討した。

酒石酸を他の物質に変換する酵素は多数知られている。

例えばＬ−酒石酸デヒドラターゼ、Ｄ−酒石酸デヒドラ
ターゼ、酒石酸デヒドロゲナーゼ、メソー酒石酸デヒド
ロゲナーゼ、フマル酸デヒドラターゼ、乳酸デヒドロゲ
ナーゼなどがある。

これらの酵素を有する微生物にはペニシリウム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇ
　ｉ　Ｉ　Ｉｕｓ　）属、エアロバクター（八ｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ）、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅ
ｕｄｏｎｏｎａｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ）属の多翼に属する微生物が知られている。

しかしながら、これらのう・ちロドシュードモナス属に
属する微生物には、Ｄ、−（−）−酒石酸テ１：、トー
ｙ３１−ゼを有する株（Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ。

）４ｉｃｒｏｂｉｏ１．、４５　（２）　、７１６〜１
９）とＬ−（＋）−酒石酸デヒドロゲナーゼを有する株
（ＤＥ３，２１０，５８３）が知られている。

同様にシュードモナス属に属する微生物にはＤ−（−）
−酒石酸デヒドラターゼを有する株（Ｊ、　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、、　　１５１（３）　、１６０２〜４）とＬ
−（＋）−酒石酸デしドラターゼを有する株（１４ｅｔ
ｈ、　Ｅｎ、、９．６８０　（１９６６）　）　、酒石
酸デヒドロゲナーゼを有する株（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｍ、、２４３’、２４７９　（１９６８））　、およ
びメソー酒石酸デヒドロゲナーゼを有する株（Ｈｅｔｈ
、Ｅｎ、、９，２３６　（１９６６））が知られている
。

すなわち、同じ属に属する微生物であっても、酒石酸を
他の物質に変換する酵素のうち、必ずしもＬ−（＋）−
酒石酸のみを他の物質に変換する酵素をもつものばかり
ではない、また、Ｌ−（＋）−酒石酸を他の物質に変換
する酵素をもっていたとしても、微生物体内には、Ｄ−
（−）−酒石酸をさらに他の物質に変換する他の酵素も
併有している可能性もあり、その場合にはＤ−（−）−
酒石酸もともに資化されてしまう。

すなわち、Ｌ−（＋）−酒石酸を資化する微生物は、例
えばその微生物のもつ酵素のうちの一つが判明している
としても、ＤＬ−酒石酸を含有する培養液中で培養する
ことによりＤ−（−）−酒石酸のみを残留せしめること
が可能か否かは予測できない。

く問題点を解決するための手段および作用〉そこで、本
発明者らは工業的に有利なり一（−）−酒石酸の製造法
を提供することを目的として鋭意検討した結果、シュー
ドモナス属に属する微生物、特に、シュードモナス・プ
チダに属する微生物が本発明の目的を有効に達成せしめ
得ることを見い出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明はＤＬ−酒石酸を含有する培養液中で
、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏａｏｎａｓ）属に属し
、実質的にＬ−（＋）−酒石酸を資化する能力を有しか
つＤ−（−）−酒石酸を資化しない微生物を培養するこ
と、により、Ｌ−（＋）−酒石酸を不斉分解して残留す
るＤ−（−）−酒石酸を採取することを特徴とするＤ−
（−）−酒石酸の製造法である。

以下、本発明の構成を詳述する。

本発明で使用するシュードモナス属に属する微生物とし
ては、例えばシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ）Ａ　Ｔ　ＣＣ１７６４２。

シュードモナス・フルオレッセンス（ｆ’ｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）　ＡＴＣＣ１７６
３４などが挙げられる。シュードモナス属に属する微生
物のうち、実質的にＬ−（＋）−酒石酸を資化する能力
を有し、Ｄ−（−）−酒石酸を資化しない微生物が本発
明では使用される。ここで、Ｄ（−）−酒石酸を実質的
に資化しない微生物とは、本発明の効果を実質的に阻害
しない範囲においてＤ−（−）−酒石酸を少量のみ資化
する微生物、あるいはＬ−（＋）−酒石酸の資化後、Ｌ
−（＋）−酒石酸の不存在条件下ではＤ−（−）−酒石
酸を資化する微生物も含まれる。

培養液中のＤＬ−酒石酸濃度は、通常、１１中に１〜３
００ｇ、好ましくは３０〜１５０ｇである。

ＤＬ−酒石酸濃度が低いと生産効率が悪くなる傾向とな
り、逆に濃度が高いと培養時間が長くなったり微生物が
阻害を受ける傾向となる。

ＤＬ−酒石酸は始めから培養液に仕込んでもよいが何回
かに分割して添加してもよい。

培養は広範囲のｐＨで実論できる。培養液は通常、反応
開始時にｐＨ７に調整する。培養が進むにしたがってｐ
Ｈが上昇するが、そのままで、十分培養は可能である。

培養時間をより短縮するためには、ｐＨの上昇に伴って
培養途中で酸を添加するのが好ましい、培養時のＰＨは
好ましくは７〜８、さらに好ましくは７〜７゜５に調整
する。

培養途中で添加する酸としては、例えば、リン酸、硫酸
、塩酸などの無機酸水溶液が好ましい。

培養温度は通常、２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５
°Ｃである。

培養は通気しながら撹拌する。通気量は通常０．５〜２
゜ＯＶ、Ｖ、Ｍ、好ましくは０．７〜１．５Ｖ、Ｖ、Ｍ
である０通気量が少なすぎるとＬ−（十）−酒石酸消費
速度が遅くなる傾向となり、また多くしても効果に変わ
りがない。

Ｌ−（＋）−酒石酸がすべて消費されたのち通常の方法
でＤ−（−）−酒石酸を単離する。

すなわち、培養終了後、培養液を遠心分離して、菌体を
除去したのち、上澄液に塩化カルシウムを加えると、Ｄ
−（−）−酒石酸カルシウム塩を沈澱として単離するこ
とができる。

Ｄ−（−）−酒石酸カルシウムに硫酸を加えれば硫酸カ
ルシウムが沈澱となり、Ｄ−（−）−酒石酸が水中に遊
離してくるので水溶液を濃縮することによりＤ−（−）
−酒石酸を得ることができる。このＤ−（−）−酒石酸
を水で再結晶することにより精Ｄ　（−）−酒石酸が得
られる。

〈実施例〉 次に本発明の実施例を述べる。

実施例１ ブイヨン３ｇを水１００ｍ１に溶解し、１１の三角フラ
スコに仕込み、１２０℃、２０分間加熱滅菌した。この
培地にシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ　Ｐｕｔｉｄａ）Ａ　Ｔ　ＣＣ１７６４２を一白金耳
移植し、３０℃で１７時間振どう培養を行い種培養液を
得た。

ＤＬ−酒石酸８０ｇ、塩化アンモニウム１２ｇ、硫酸マ
グネシウム７水塩０．６ｇ、塩化カルシウム０．６＋ｒ
、塩化第二鉄６水塩０゜１５ｇ、リン酸二カリウム１０
ｇ１イーストエキス２．０ｇを水１．１００ｍ１に溶解
し、６Ｎ・水酸化ナトリウム水溶液でｐ　Ｈを７．０に
調整した。この培地を３１ミニジヤーに仕込み１２０℃
で２０分間、加熱滅菌し・た。

この培養液に、先の種倍液を加え、ｐＨ７゜０〜７，１
に２Ｎ・塩酸でコントロールしながら３０℃で３０時間
通気撹拌培養した。培養終了時のＯＤ　ｓ　ｓ。は６．
７であった。

培養液を１０，０ＯＯＧで１０分間遠心分離して菌体を
除去した。

上澄液に塩化カルシウム３５．８ｇを加え、室温中にて
１時間撹拌した。

析出結晶を濾過したのち真空乾燥してＤ−（−）−酒石
酸カルシウム塩４水和物６５．３ｇを得た。収率は９４
．２％であった。

〔α）Ｄ−５，４＠　（Ｃ＝４．０、Ｉ　Ｎ−ＨＣＪ　
）　Ｄ−（−）−酒石酸カルシウム塩・４水和物５２．
０４ｔを水３００ｍ１に懸濁し撹拌しながら４Ｎ・硫酸
水溶液１００ｍ１を加え、室温中で３時間撹拌した。

沈澱をＰ別したのちｒ液を減圧濃縮後、真空乾燥して！
ＦＩＩＤ−（−）−酒石酸３０．８ｇを得た。（はぼ定
量的である）。

〔α）Ｄ−１２，８°　（Ｃ＝４．０　　Ｈ２Ｏ）水で
再結晶すると棒状結晶のＤ−（−）−酒石酸が得られた
。

〔α）Ｄ−１４，１°　（Ｃ＝４．０　　Ｈｚ　Ｏ）実
施例２ 実施例１と同様にしてＤＬ−酒石酸を４０ｇ仕込み、塩
酸を途中で添加することなく培養すると、８．５時間で
Ｌ−（＋）−酒石酸がすべて消費され、Ｄ−（−）−酒
石酸が１９．８ｇ得られた。この時の０Ｄｓｓ０は５．
１であった。

〈発明の効果〉 本発明は次の効果を発揮する。

（１）ＤＬ−酒石酸から高選択的にＬ−（＋）−酒石酸
を消費することができる。

（２）さらに蓄積濃度も高く、短時間でＤ−（−）−酒
石酸が得られる。

（３）加えて、消費されたＬ−（＋）−酒石酸はほとん
ど炭酸ガスと水にまで変換されて、培養液中にはＤ−（
−）−酒石酸以外の有機酸がほとんど存在しない。

（４）このためにＤ−（−）−酒石酸の単離精製が容易
である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ＤＬ−酒石酸を含有する培養液中で、シュードモナス（
   Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属し、実質的にＬ−（＋
   ）−酒石酸を資化する能力を有しかつＤ−（−）−酒石
   酸を資化しない微生物を培養することにより、Ｌ−（＋
   ）−酒石酸を不斉分解して残留するＤ−（−）−酒石酸
   を採取することを特徴とするＤ−（−）−酒石酸の製造
   法。