JPH0464674B2

JPH0464674B2 -

Info

Publication number: JPH0464674B2
Application number: JP16581983A
Authority: JP
Inventors: Taiji Minoda; Toshio Oomori
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 1983-09-08
Filing date: 1983-09-08
Publication date: 1992-10-15
Also published as: JPS6058067A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はシユードモナス属に属する新規な微生
物に関する。 ω−アミノカルボン酸は代表的な合成繊維、合
成樹脂であるナイロンの原料などとして有用であ
り、種々の化学的合成法によつて製造されてい
る。しかし、醗酵法によるω−アミノカルボン酸
の製造法は現在まで知られていない。そこで、本発明者らは、斯かる現状に鑑み、脂
肪族ジアミンを対応するω−アミノカルボン酸に
変換する能力を有する菌を然界より広く検索した
結果、シユードモナス属に属する微生物中に斯か
る能力を有するものがあることを見出し、本発明
を完成した。すなわち、本発明はシユードモナス属に属し、
脂肪族ジアミンを資化してω−アミノカルボン酸
を生産する能力を有する新規なシユードモナス・
エスピー・K95（微工研菌寄第7041号）に関する
ものである。次に、本発明者らが分離、採取した本菌株の菌
学的性質を詳述する。 (a) 形態１）細胞の形および大きさ：桿菌、0.4〜0.6×1.5×2.0μ ２）多形性：なし３）運動性：運動性があり、極鞭毛を有する４）胞子：形成しない５）グラム染色性：陰性６）抗酸性：陰性 (b) 各培地における生育状態１）肉汁寒天平板培養：生育は豊富であり、コロニーの色は緑褐色
で、にぶい光沢がある。２）肉汁寒天斜面培養：生育は豊富であり、緑褐色の色素を生じ
る。３）肉汁液体培養：薄膜を形成し、全体的に混濁を生じる。４）肉汁ゼラチン穿刺培養：表層より液化。５）リトマスミルク：凝固、ペプトン化。共に陽性。 (c) 生理学的性質１）硝酸塩の還元：還元しない２）脱窒反応：陰性３） MRテスト：陰性４） VPテスト：陰性５）インドールの生成：陰性６）硫化水素の生成（TSI寒天）：陰性７）デンプンの加水分解：陰性８）クエン酸の利用 Koserの培地：利用する Christensenの培地：利用する９）無機窒素源の利用硝酸塩：利用するアンモニウム塩：利用する 10）色素の生成：蛍光性色素を生成する。 11）ウレアーゼ：陽性 12）オキシダーゼ：陽性 13）カタラーゼ：陽性 14）生育の範囲： 22〜41℃（最適28〜39℃） PH5.0〜8.5（最適5.0〜7.0） 15）酸素に対する態度：好気性 16） OFテスト：Ｏ型（酸化型） 17）糖類からの酸、ガスの生成＊：

【表】以上の菌学的性質を有する菌についてバージエ
イのマニユアル（Bergey′s Manual of
Determinative Bacteriology）第８版（1975年）
に基づいて検索した結果、本菌株はシユードモナ
ス（Pseudomonas）属に属する新菌株と認め、
シユードモナス・エスピー・K95（Pseudomonas
sp.K95）と命名した。なお、本菌株は、微工研
菌寄第7041号として工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されている。分離源の土壌からの本菌株の分離はドデカメチ
レンジアミン含有培地を用い常法で行なつた。本発明で使用する培地の組成は、使用する菌株
が良好に生育し、且つ、脂肪族ジアミンからのω
−アミノカルボン酸の生産を順調に行なわしめる
ために適当な炭素源、窒素源、無機塩および天然
有機栄養物などからなる。炭素源としては炭水化物（たとえばグルコー
ス、グリセロース、フラクトース等）、有機酸
（たとえばクエン酸、コハク酸等）、アミノ酸（た
とえばグルタミン酸、アスパラギン等）、炭化水
素（たとえばｎ−ドデカン等）、あるいは脂肪族
ジアミン（たとえばドデカメチレンジアミン等）
などが使用できる。窒素源としてはアンモニア、
無機および有機アンモニウム塩（たとえば塩化ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、コハク酸アンモニウム
等）、含窒素有機物（たとえば尿素、ペプトン、
NZアミン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチ
−プリカー、カゼイン加水分解物等）、あるいは
アミノ酸（たとえばグルタミン酸、アスパラギ
ン、チロシン等）などが使用できる。無機塩とし
ては各種燐酸塩、硫酸マグネシウムなどが使用で
きる。さらに微量の重金属塩類が使用されるが、
天然物を含む培地では必ずしも添加を必要としな
い。また、栄養要求を示す変異株を用いる場合に
は、当然その栄養要求を満足させる物質を培地に
加えなければならない。培養は通常、振盪または通気撹拌培養などの好
気的条件下に行なうのがよい。水に難溶性の炭素
源等を使用する場合には、ポリオキシエチレンソ
ルビタン等の各種界面活性剤、あるいはアセト
ン、エタノール等の有機溶媒を培地に添加するこ
とも可能である。培地のPHは6.0〜10.0、培養温
度は20〜40℃、培養期間は通常18〜72時間であ
る。叙上の如く得られた培養物は、そのまま酵素源
として用いることもできるが、菌体を培養液より
分離する場合は、通常の固液分離手段が用いられ
る。このように分離された生菌体及びその処理物
（凍結乾燥菌体等）も酵素源として用いることが
できる。脂肪族ジアミンを反応基質として本菌株を上記
の如く培養するとω−アミノカルボン酸が生産さ
れる。このとき基質として用いられる脂肪族ジア
ミンは炭素数６〜18の直鎖脂肪族のジアミンが良
い。具体的にはヘキサメチレンジアミン、ヘプタ
メチレンジアミン、オクタメチレンジアミン、ノ
ナメチレンジアミン、デカメチレンジアミン、ウ
ンデカメチレンジアミン、ドデカメチレンジアミ
ン、トリデカメチレンジアミン、テトラデカメチ
レンジアミン、ペンタデカメチレンジアミン、ヘ
キサデカメチレンジアミン、ヘプタデカメチレン
ジアミンおよびオクタデカメチレンジアミンが挙
げられる。上記の培養液から目的物質であるω−アミノカ
ルボン酸の採取および精製は、一般の有機化合物
の採取および精製の手段に準じて行なうことがで
きる。たとえば、培養液から菌体その他を除去し
たろ液を酸性とし、酢酸エチル等の有機溶媒で抽
出する。この抽出物をシリカゲルのカラムクロマ
トグラフイイー等、あるいは再結晶などの方法を
用いて、ω−アミノカルボン酸を単離することが
できる。以下、実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。実施例１採取した土壌約0.1ｇを８mlの下記組成のドデ
カメチレンジアミン含有の分離用液体培地（）
に加え（試験管中）、30℃にて７日間培養した。分離用寒天培地（）組成 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ドデカメチレンジアミン 2.0ｇ NH₄NO₃ 4.0ｇ KH₂PO₄ 1.5ｇ Na₃HPO₄・12H₂O 1.5ｇ Na₂SO₄ 0.6ｇ CuSO₄・5H₂O 0.06mg Na₂MoO₄・4H₂O 0.03mg Na₂B₄O₇・10H₂O 0.03mg CaCl₂・2H₂O 60mg 酵母エキス５mg イオン交換水１ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− PH ７上記培養液の0.1mlを８mlの上記組成の新しい
分離用液体培地（）に加え、再び30℃にて７日
間培養した。目に見えた増殖が認られた後、上記
組成の分離用液体培地に1.7％となるように寒天
を加えた平板培地に培養液一白金耳を画線した。発生する各コロニーの一白金耳を更に８mlの上
記組成の液体培地（）に懸濁し、平板上で均一
なコロニーになるまで繰り返した。生じた複数の
コロニーが相互間に相異しないことを肉眼的及び
顕微鏡的に確認する。上記コロニーのうち10個のコロニーをそれぞれ
分離用液体培地（）と同組成の斜面寒天培地に
接種し、30℃で３日間培養し、10本の斜面倍地上
の菌株が肉眼的及び顕微鏡的に同一菌株であるこ
とを確認し、また、これら10菌株の各培地上の性
状及び生理学的性質が同一であることを確認し
た。上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性質
は前述した通りである。上記試験の結果、各10本の培養菌はすべて自然
界より純粋に分離された単一菌株であることが判
る。次いで、上記で純粋培養された斜面培地上の菌
株より一白金耳を滅菌した10％グリセリン水溶液
（２ml）の入つた凍結保存用バイアルに懸濁し、−
80℃にて凍結保存する。かくして３ケ月凍結保存
後、迅速に解凍し得られる懸濁液の一白金耳を普
通寒天培地に蘇生後、前記と同条件下に各培地上
での性状及び生理学的性質を調べた結果、凍結前
とは変化が認められなかつた。また、上記凍結及び解凍を１ケ月毎に５度繰り
返した菌株について同様に、各培地上での性状及
び生理学的性質を調べた結果変化は認められなか
つた。次いで、本菌株を利用してω−アミノカルボン
酸を製造した例を参考例として挙げる。参考例１１中にドデカメチレンジアミン2.0ｇ、リン
酸１カリウム1.5ｇ、リン酸２ナトリウム（12水
塩）1.5ｇ、硝酸アンモニウム4.0ｇ、硫酸ナトリ
ウム0.6ｇ、硫酸マグネシウム（７水塩）0.1ｇ、
硫酸第一鉄（７水塩）0.005ｇ、硫酸マンガン
（４水塩）0.005ｇ、硫酸亜鉛（７水塩）0.0006
ｇ、硫酸銅（５水塩）0.00006ｇ、モリブデン酸
ナトリウム（４水塩）0.00003ｇ、ホウ酸ナトリ
ウム（10水塩）0.00003ｇ、塩化カルシウム（５
水塩）0.06ｇ、酵母エキス0.005ｇを含む液体培
地（PH7.0）100mlを入れた500ml容三角フラスコ
に、同様の組成の寒天スラント培地（寒天17ｇ／
含む）にて培養したシユードモナス・エスピ
ー・K95（Pseudomonas sp.K95）をスラント２
本分を接種し、30℃で３日間振盪培養を行なつ
た。得られた培養液を遠心分離により菌株を除去
後、上澄を5N−NaOHを用いてPH７にする。室
温にて30分以上放置し、析出した結晶を遠心分離
又はろ過し、乾燥してω−アミノドデカン酸の結
晶40mgを得た。なお、本結晶はIR及びGC−MS
にて12−アミノドデカン酸であると同定された。融点 184℃（文献値：185℃）参考例２参考例１と同様な組成のドデカメチレンジアミ
ンを含む液体培地20を入れた50容ジヤーフア
メンターに、同様な組成の液体培地で培養したシ
ユードモナス・エスピー・K95（Pseudomonas
sp.K95）を200ml接種し、30℃、600rpm、
1VVM（通気量）で２日間培養した。参考例１と同様な処理により、ω−アミノドデ
カン酸の結晶20ｇを得た。

Claims

【特許請求の範囲】１以下の性質を有する微工研菌寄第7041号とし
て寄託された新規なシユードモナス・エスピー・
K95株。 (a) 形態１）細胞の形および大きさ：桿菌、0.4〜0.6×1.5×2.0μ ２）多形性：なし３）運動性：運動性があり、極鞭毛を有する４）胞子：形成しない５）グラム染色性：陰性６）抗酸性：陰性 (b) 各培地における生育状態１）肉汁寒天平板培養：生育は豊富であり、コロニーの色は緑褐色
で、にぶい光沢がある。２）肉汁寒天斜面培養：生育は豊富であり、緑褐色の色素を生じ
る。３）肉汁液体培養：薄膜を形成し、全体的に混濁を生じる。４）肉汁ゼラチン穿刺培養：表層より液化。５）リトマスミルク：凝固、ペプトン化。共に陽性。 (c) 生理学的性質１）硝酸塩の還元：還元しない２）脱窒反応：陰性３） MRテスト：陰性４） VPテスト：陰性５）インドールの生成：陰性６）硫化水素の生成（TSI寒天）：陰性７）デンプンの加水分解：陰性８）クエン酸の利用 Koserの培地：利用する Christensenの培地：利用する９）無機窒素源の利用硝酸塩：利用するアンモニウム塩：利用する 10）色素の生成：蛍光性色素を生成する。 11）ウレアーゼ：陽性 12）オキシダーゼ：陽性 13）カタラーゼ：陽性 14）生育の範囲： 22〜41℃（最適28〜39℃） PH5.0〜8.5（最適5.0〜7.0） 15）酸素に対する態度：好気性 16） OFテスト：Ｏ型（酸化型） 17）糖類からの酸、ガスの生成＊：【表】