JPH0417637B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明微生物によるモノカルボン酸の製造法に
関する。更に詳しくは、 一般式（）、 Ｈ（CH₂）_oNH₂ （） ［式中ｎは６〜12の整数を示す］ で表される脂肪族アミンの１種又は２種以上を添
加した培地にシユウドモナス属に属するモノカル
ボン酸生産菌を培養し、培地中に一般式（）、 Ｈ（CH₂）_o-2COOH （） ［式中ｎは６〜12の整数を示す］ で表わされるモノカルボン酸を生成蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とするモノカルボン酸
の製造法に関する。 前記一般式（）で表わされるモノカルボン酸
は、種々の界面活性剤、潤滑油等の原料として有
用であり、種々の化学的合成法によつて製造され
ている。しかし、脂肪族アミンを原料とした醗酵
法によるモノカルボン酸の製造法は現在まで知ら
れていない。 本発明者らは、斯かる現状に鑑み、脂肪族アミ
ンを原料とした微生物によるモノカルボン酸の製
造法について鋭意研究を行なつた結果、本発明を
完成した。 本発明において利用される微生物としては、シ
ユードモナス属に属し、炭素数６〜12の脂肪族ア
ミンを原料としてモノカルボン酸を選択的に生産
するものが使用される。一例としてはシユードモ
ナス・エスピー・K95（Pseudomonas sp.K95）
が挙げられる。本菌株は本発明者らが土壌より分
離したものであつて、微工研菌寄第7041号として
工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されてお
り、以下の菌学的性質を有している。 (a) 形態 (1) 細胞の形および大きさ： 桿菌、0.4〜0.6×1.5×0.2μ (2) 多形性：なし (3) 運動性：運動性があり、極鞭毛を有する (4) 胞子：形成しない (5) グラム染色性：陰性 (6) 抗酸性：陰性 (b) 各培地における生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養： 生育は豊富であり、コロニーの色は緑褐色
で、にぶい光沢がある。 (2) 肉汁寒天斜面培養： 生育は豊富であり、緑褐色の色素を生じ
る。 (3) 肉汁液体培養： 薄膜を形成し、全体的に混濁を生じる。 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養： 表層より液化。 (5) リトマスミルク： 凝固、ペプトン化。共に陽性。 (c) 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元：還元しない (2) 脱窒反応：陰性 (3) MRテスト：陰性 (4) VPテスト：陰性 (5) インドールの生成：陰性 (6) 硫化水素の生成（TSI寒天）：陰性 (7) デンプンの加水分解：陰性 (8) クエン酸の利用 Koserの培地：利用する Christensenの培地：利用する (9) 無機窒素源の利用 硝酸塩：利用する アンモニウム塩：利用する (10) 色素の生成：蛍光性色素を生成する。 (11) ウレアーゼ：陽性 (12) オキシターゼ：陽性 (13) ガタラーゼ：陽性 (14) 生育の範囲： 22〜41℃（最適28〜39℃） PH5.0〜8.5（最適5.0〜7.0） (15) 酸素に対する態度：好気性 (16) OFテスト：Ｏ型（酸化型） (17) 糖類からの酸、ガスの生成＊：

【表】 ＊10％ペプトン水、30℃、14日間培養 指示薬：BCP（ブロムクレゾールパープル） 以上の菌学的性質を有する菌について、バージ
エイのマニユアル（Bergey′s Manual of
Determinative Bacteriology）第８版（1975年）
にもとづいて検索した結果、本菌株はシユードモ
ナス属に属することが判明した。 本発明の方法において、原料として用いられる
脂肪族アミン及び脂肪族ジアミンは炭素数６〜18
の直鎖脂肪族のアミン及びジアミンが良い。具体
的にはヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチ
ルアミン、ノニルアミン、デシルアミン、ウンデ
シルアミン、ドデシルアミンが挙げられる。 本発明で使用する培地の組成は、使用する菌株
が良好に生育し、且つ、脂肪族アミンからのモノ
カルボン酸の生産を順調に行なわしめるために適
当な炭素源、窒素源、無機塩および天然有機栄養
物などからなる。 炭素源としては炭化水素（たとえばグリコー
ル、グリセロール、フラクトース等）、有機酸
（たとえばクエン酸、コハク酸等）、アミノ酸（た
とえばグルタミン酸、アスパラギン等）、炭化水
素（たとえばｎ−ドデカン等）、あるいは脂肪族
アミン及び／又は脂肪族ジアミン（たとえばヘキ
シルアミン、ドデシルアミン、ドデカメチレンジ
アミン等）などが使用できる。窒素源としてはア
ンモニア、無機および有機アンモニウム塩（たと
えば塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、コハク酸アン
モニウム等）、含窒素有機物（たとえば尿素、ペ
プトン、NZアミン、肉エキス、酵母エキス、コ
ーンスチープリカー、カゼイン加水分解物等）、
あるいはアミノ酸（たとえばグルタミン酸、アス
パラギン、チロシン等）などが使用できる。無機
塩としては各種燐酸塩、硫酸マグネシウムなどが
使用できる。さらに微量の重金属塩類が使用され
るが、天然物を含む培地では必ずしも添加を必要
としない。また、栄養要求を示す変異株を用いる
場合には、当然その栄養要求を満足させる物質を
培地に変えなければならない。 培地は通常、振盪または通気撹拌培養などの好
気的条件下に行なうのがよい。水に難溶性の炭素
源等を使用する場合には、ポリオキシエチレンソ
ルビタン等の各種界面活性剤、あるいはアセト
ン、エタノール等の有機溶媒を培地に添加するこ
とも可能である。培地のPHは6.0〜10.0、培養温
度は20〜40℃、培養期間は通常18〜72時間であ
る。 これらの培養液から目的物質であるモノカルボ
ン酸の採取および精製は、一般の有機化合物の採
取および精製の手段に準じて行なうことができ
る。たとえば、培養液から菌体その他を除去した
ろ液を酸性とし、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出
する。この抽出物をシリカゲルのカラムクロマト
グラフイイー等、あるいは再結晶などの方法を用
いて、モノカルボン酸を単離することができる。 以下、実施例により本発明の方法をさらに詳細
に説明するが、本発明はこれらによつて限定され
るものではない。 実施例 １ １中にドデシルアミン2.0ｇ、リン酸１カリ
ウム1.5ｇ、リン酸２ナトリウム（12水塩）1.5
ｇ、硝酸アンモニウム4.0ｇ、硫酸ナトリウム0.6
ｇ、硫酸マグネシウム（７水塩）0.1ｇ、硫酸第
一鉄（７水塩）0.005ｇ、硫酸マンガン（４水塩）
0.005ｇ、硫酸亜鉛（７水塩）0.0006ｇ、硫酸銅
（５水塩）0.00006ｇ、モリブデン酸ナトリウム
（４水塩）0.00003ｇ、ホウ酸ナトリウム（10水
塩）0.00003ｇ、塩化カルシウム（５水塩）0.6
ｇ、酵母エキス0.005ｇを含む液体培地（PH7.0）
100mlを入れた500ml容三角フラスコに、同様の組
成の寒天スラント培地（寒天17ｇ／含む）にて
培養したシユードモナス・エスピー・K95
（Pseudomonas sp.K95）をスラント２本分を接
種し、30℃で３日間振盪培養を行なつた。 得られた培養液を遠心分離により菌体を除去
後、上澄を5N−NaOHを用いてPH７にする。室
温にて30分以上放置し、析出した結晶を遠心分離
又はろ過し、乾燥してドデカン酸の結晶60mgを得
た。なお、本結晶はGC−MSにてドデカン酸で
あると同定された。 融点 43℃（文献値：44℃） 実施例 ２ 実施例１と同様な組成のドデシルアミンを含む
液体培地20を入れた50容ジヤーフアメンター
に、同様な組成の液体培地で培養したシユードモ
ナス・エスピー・K95（Pseudomonas sp.K95）
を200ml接種し、30℃、600rpm、1VVM（通気
量）で２日間培養した。 実施例１と同様な処理により、ドデカン酸の結
晶20ｇを得た。 実施例 ３ １中にドデカメチレンジアミン2.0ｇ、リン
酸１カリウム1.5ｇ、リン酸２ナトリウム（12水
塩）1.5ｇ、硝酸アンモニウム4.0ｇ、硫酸ナトリ
ウム0.6ｇ、硫酸マグネシウム（７水塩）0.1ｇ、
硫酸第一鉄（７水塩）0.005ｇ、硫酸マンガン
（４水塩）0.005ｇ、硫酸亜鉛（７水塩）0.0006
ｇ、硫酸銅（５水塩）0.00006ｇ、モリブデン酸
ナトリウム（４水塩）0.00003ｇ、ホウ酸ナトリ
ウム（10水塩）0.00003ｇ、塩化カルシウム（５
水塩）0.6ｇ、酵母エキス0.005ｇを含む液体培地
（PH7.0）100mlを入れた500ml容三角フラスコに、
同様の組成の寒天スラント培地（寒天17ｇ／含
む）にて培養したシユードモナス・エスピー・
K95（Pseudomonas sp.K95）をスラント２本分
を接種し、30℃で３日間振盪培養を行なつた。 得られた培養液を遠心分離により菌体を除去
後、上澄を5N−NaOHを用いてPH７にする。室
温にて30分以上放置し、析出した結晶を遠心分離
又はろ過し、乾燥してω−アミノドデカン酸の結
晶40mgを得た。なお、本結晶はIR及びGC−MS
にて12−アミノドデカン酸であると同定された。 融点 184℃（文献値：185℃） 実施例 ４ 実施例３と同様な組成のドデカメチレンジアミ
ンを含む液体培地20を入れた50容ジヤーフア
メンターに、同様な組成の液体培地で培養したシ
ユードモナス・エスピー・K95（Pseudomonas
sp.K95）を200ml接種し、30℃、600rpm、
1VVM（通気量）で２日間培養した。 実施例３と同様な処理により、ω−アミノドデ
カン酸の結晶20ｇを得た。 実施例 ５ シユードモマス・エスピー・K95
（Pseudomonas sp.K−95）を対数増殖期後期に
集菌し、40ｍＭのTris−HCl緩衝液（PH7.2）で
３回遠心分離することによつて洗浄菌体の懸濁液
を得た。これをフレンチプレス（20000psi）に２
回通して菌体を破壊し、遠心分離（15000spi、20
分）によつて未破壊細胞を除いた遠心上清を50ｍ
Ｍのリン酸緩衝液（PH7.2）に対し、24時間透析
することによつて得られた透析内液を無細胞抽出
液とした。 下記反応系に各モノアミンを1.0μmol添加し反
応を開始し、フエナジンメトサルフエートを介し
た２，６−ジクロロフエノールインドフエノール
の還元反応を、30℃、10分間行い、分光光学的に
600nｍでの吸光度の減少を測定し、モノアミン
からのカルボン酸の生産性を検討した結果を下表
に示す。 反応系：１ml中の各成分量 リン酸緩衝液（PH7.2） 50μmol フエナジンメトサルフエート 0.5μmol ２，６−ジクロロフエノールインドフエノール
0.05μmol シアン化カリ． 1.0μmol 無細胞抽出液 0.1μmol モノアミン 1.0μmol

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式（）、 Ｈ（CH₂）_oNH₂ （） ［式中ｎは６〜12の整数を示す］ で表される脂肪族アミンの１種又は２種以上を添
   加した培地にシユウドモナス属に属するモノカル
   ボン酸生産菌を培養し、培地中に一般式（）、 Ｈ（CH₂）_o-2COOH （） ［式中ｎは６〜12の整数を示す］ で表されるモノカルボン酸を生成蓄積せしめ、こ
   れを採取することを特徴とするモノカルボン酸の
   製造法。