JPS63204150A - 免疫分析用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 （産業上の利用分野） 本発明は試料中に存在する特定の抗原又は抗体を定量分
析するための免疫分析用試薬に関する。

（従来の技術） 試料中に存在する特定の抗原又は抗体の定量分析には１
例えばラジオイムノアッセイ（以下、ＲＩＡと記す）が
用いられる。しかし、ＲＩＡでは放射性元素を用いるた
め、専用の機器を設置し、資格を有するオペレータが操
作を行なわなければならず、しかも廃棄物の処理等にも
注意を要するという問題がある。

また、その他の分析方法として、例えば免疫電気泳動が
知られている。しかし、免疫電気泳動では測定に長時間
を要するうえ、感度が低く被検物質がごく微量しか含ま
れていない場合には適用することができないという問題
がある。

そこで、本発明者らは先に特願昭５８−２２４５０９号
において、表面に親水性の抗体又は抗原を固定化し、内
部に親水性の標識物質を封入したリポソーム試薬を開示
した。この試薬を用いた免疫分析方法は以下のようなも
のである。すなわち、抗原又は抗体が存在する試料中に
前記リポソーム試薬を加え、これと別に補体を加えると
、抗原−抗体反応及びそれに伴なう補体の作用によって
リポソームが破壊され、封入されていた標識物質（例え
ば蛍光性化合物）が流出する。この流出した標識物質の
量と、試料中の被検物質の量との間には相関関係がある
ので、流出した標識物質を所定の分析方法（例えば蛍光
分析）によって定量することにより、被検物質を定量す
ることができる。この試薬を用いれば、ＲＩＡのような
問題が生じることはなく、免疫分析の簡便化が期待でき
る。

しかし、このリポソーム試薬を用いて血清やタンパク質
含有試料の分析を行なう場合、抗原−抗体反応以外に非
特異反応が起り、これに起因してリポソームが破壊され
るため精密な測定ができないことがわかってきた。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明者らは−に記すポソームの非特異反応について鋭
意研究を重ねた結果、リポソームの抗体結合用の官能基
が試料中の成分と反応しリポソームの破壊が起こる事が
明らかとなった。

これはリポソームに抗体を固定する反応において、リポ
ソームの抗体結合用官能基の全てに抗体が結合しない為
にリポソーム上に抗体と未結合の官能基が残存する為で
ある。

従って抗原−抗体反応以外の反応によってリポソームの
膜が破壊される為、測定対象物質の濃度とは無関係にリ
ポソームに封入された標識物質が流出し定量性が困難と
なるという問題があった。

本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り、精密かつ簡便な分析が行なえる免疫分析用試薬を提
供することを目的とする。

〔発明の構成〕

Ｃ問題点を解決するための手段と作用）本発明の免疫分
析用試薬は、リン脂質及び糖脂質の少なくとも一方より
なるリポソームと、架橋基により前記リポソーム」二に
固定化された親水性の抗原又は抗体もしくは少くとも抗
体の一部分と、前記リポソーム内に封入された親水性の
標識物質とからなる免疫分析用試薬において、前記リポ
ソームを構成するリン脂質及び糖脂質の少なくとも一方
と、架橋基の構成比が０．０１〜１モル％である事を特
徴とするものである。本発明の免疫分析用試薬は、大き
な一枚膜、小さな一枚膜及び多重層の膜からなるリポソ
ームのいずれでもよく特に限定されるものではない。

本発明の免疫分析試薬は、例えば以下のような方法によ
り多重層の膜から成るリポソームを製造することができ
る。

まず、所望の脂質と架橋剤とを溶媒中で反応させること
により、脂質分子に官能基を導入して官能性脂質とする
。この官能基がリポソーム上における抗体もしくは抗体
の一部又は抗原を固定化するための官能基として作用す
る。次に、得られた官能性脂質と、必要であればコレス
テロール及び＝４＝ 他の脂質の適当量をフラスコに入れ、溶媒を加えて溶解
・混合させた後、溶媒を吸引除去して乾燥する。この結
果、フラスコ壁面に脂質薄膜が形成される。つづいて、
フラスコ内に標識物質を含有する水溶液を加え、密栓し
て振どうすることにより、リポソームのｌ！ｌ濁液を調
製する。

一方、リポソームに固定化される抗体もしくは抗体の一
部又は抗原には、必要ならば架橋剤との反応により架橋
基を導入した後、必要に応じて還元剤で処理して修飾す
る。

次いで、前記リポソーム懸濁液と抗体もしくは抗体の一
部又は抗原とを適当な緩衝液中で反応させて、リポソー
ムに抗体もしくは抗体の一部又は抗原を固定化させる。

本発明で用いられるリン脂質及び糖脂質としては分子量
が小さいものだけでなくどの様なものであっても良く特
に限定されるものではない。例えばジパルミトイルホス
ファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジパルミトイルホスフ
ァチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイル
ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、シミリ
ストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）
、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（Ｄ
ＳＰＥ）等が挙げられる。

本発明の免疫分析試薬において、リポソームはリン脂質
及び糖脂質のうち少なくともいずれか一方を組成とする
ものである。なお、上述したように必要に応じてリン脂
質、糖脂質に対してコレステロールを１０〜５００モル
％を加えてもよく、これによって安定なリポソームを得
ることができる。

また、リン脂質、糖脂質中の脂肪酸炭素鎖は炭素原子数
が１２〜１８であることが好ましく、更に偶数であるこ
とがより好ましい。

本発明ではリポソームを構成するリン脂質及び糖脂質の
少なくとも一方と架橋基の構成比が０．０１〜１モル％
である。０．０１より少ないと感度が低く、１より大き
いと非特異溶解が起こりＳ／Ｎ比が低くなるとともに保
存安定性が悪くなる。好ましくは０．１〜１モル％であ
る。

本発明に係わる架橋基の濃度は、用いる官能性脂質の架
橋基と脂質の構成比が１：１である為、官能性脂質中の
燐の濃度を定量する事により架橋基濃度を決定した。官
能性脂質中の燐の定量はＦｉｓｋｅ　＆Ｓｕｂｂａｒｏ
ｗの方法に従った（参照：　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

ｚ、、倶巳、４７７（１９６３））。

本発明の免疫分析試薬において、リポソーム上に固定化
される抗体もしくは抗体の一部又は抗原は、ＩｇＧ、Ｉ
ｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等いかなるタンパク質で
あってもよい。感度の向上という点からは、モノクロー
ナル抗体であることが好ましい。

本発明の免疫分析試薬において、リポソームに固定化用
官能基を導入するために脂質分子との反応が行なわれる
架橋剤、また必要に応じて抗体もしくは抗体の一部又は
抗原に架橋基を導入するための架橋剤としては、例えば
、Ｎ−サクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プ
ロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−サクシンイミジル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、
Ｎ　−サクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル
）アセテート（Ｓ　Ｍ　Ｐ　Ａ）、Ｎ−サクシンイミジ
ル４−（ｐマレイミドフェニル）プロピオネート（ＳＭ
ＰＰ）、Ｎ＝（γ−マレイミドブチリルオキシ）サクシ
ンイミド（ＧＭＢＳ）、Ｎ　−（ε−マレイミドカプロ
イルオキシ）サクシンイミド（ＥＭＣ８）、ジサクシン
イミジルスペレート（ＤＳＳ）、グルタルアルデヒド（
Ｇ　Ａ）、フタルアルデヒド、テレフタルアルデヒド、
フタル酸、テレフタル酸、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｎ　　Ｃ
ＯＯＨ（ｎ　＝　１〜］、Ｏ）の化学式で表わされる脂
肪族ジカルボン酸等が挙げられる。

本発明の免疫分析試薬においては、リポソーム内に封入
される標識物質としては、親水性で、リポソーム外に流
出した際に定量可能な物質が選択される。このような物
質としては、例えば、高濃度では自己消光により蛍光を
示さないが、低濃度（１０−”　Ｍ以下）で非常に強い
蛍光を発するカルボキシフルオレセインのような蛍光性
物質；リポソーム外で酸化反応により発光するルミノー
ルやルシフェリンのような発光性物質；可視域又は紫外
域に特異的な吸収帯を有する吸光性化合物（水溶性色素
等）；酸化酵素の作用により分解され、酸素消費又は過
酸化水素生成をもたらすグリコール、シュークロース等
の糖類；テトラペンチルアンモニウムのような比較的大
きなイオン性化合物；ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド（ＮＡＤ）のような補酵素類；メチルビオロゲン
等のラジカル化合物等が挙げられる。これらの化合物は
、検出方法、感度及びリポソームの安定性等の因子を考
慮した上で適宜選択される。

本発明の免疫分析試薬は、以下のようにして使用される
。すなわち、まず被検物質を含有する試料に本発明の免
疫分析試薬を加え、これと別に補体を加える。なお、こ
の際被検物質に対する第２抗体を加え被検物質を挟みこ
む方法を用いてもよい。この結果、被検物質とリポソー
ム上に固定化された抗体もしくは抗体の一部又は抗原と
の抗原−抗体反応及びそれに伴なう補体の作用により、
リポソームが破壊されて封入されている標識物質（例え
ば蛍光性化合物）が流出する。この流出した標識物質の
量と、試料中の被検物質の量との間には相関関係がある
ので、流出した標識物質を適当な分析方法（例えば蛍光
分析）によって定量する事により、被検物質を定量する
ことができる。

本発明の免疫試薬によって定量が可能な被検物質は、腫
瘍マーカー（ＡＦＰ、ＢＦＰ、ＣＥＡ、ＰＯＡ等）、免
疫グロブリン（Ｉ　ｇ　Ｇ　ｔ　Ｉ　ｇ　Ｅ　ｖ　Ｉ　
ｇ　Ｄ　＋ＩｇＡ、ＩｇＭ等）、ホルモン（インシュリ
ン、Ｔ３等）及び薬物等が挙げられ、その対象は広範囲
にわたる。

（実施例） 以下、本発明の詳細な説明する。

実施例−１：リポソーム中の官能基量と補体に対する非
特異溶解■　官能性リン脂質：　ＤＰＰＥ−ジチオピリ
ジルプロピオン酸アミド（ＤＰＰＥ−ＤＴＰ）の調製密
栓付三角フラスコにＤＰＩ）Ｅ７０■を分取し、クロロ
ホルム／メタノール（５：１．）混合溶媒２５−に溶解
した、次に、トリエタノールアミン６０μＣ及び５ＰＤ
Ｐ５０■を添加し、窒素置換した後、室温で１時間反応
させてジチオピリジルプロピオン酸アミド（ＤＴＰ）を
導入した。つづいて、ロータリーエバポレータにより溶
媒を除去した。次いで、乾燥物をクロロホルム／メタノ
ール（１０：１）混合溶媒に溶解した後、シリカゲルカ
ラムを用いて精製し、Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｅ　−Ｄ　Ｔ　Ｐの
分画を回収した。

更に、ロータリーエバポレータにより約５ｍｌ１！まで
濃縮した。

この反応によりＤＰＰＥに導入されたジチオピリジル基
が固定化用官能基となる。

■　ＤＴＰ−ＤＰＰＥｉの異なる多重層の膜のリポソー
ムの調製 ＤＰＰＣとコレステロールの量を一定としてＤＴＰ−Ｄ
ＰＰＥ量の異なる６種類のリポソームを調製した。

使用した脂質は全てクロロボルム又はクロロボルム／メ
タノール（２／１）混合溶媒に溶解した。

５　ｍＭ（７）Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃ２００μＱ、１０ｍＭ（
７）：１　レステ。

−ル１００μＱ及び各濃度（６種類）のＤＰＰＥ−ＤＴ
Ｐ（■で得られた官能性リン脂質）の所定量を１０ｄ容
量のナス型フラスコに人乳、更にクロロホルム２ｍＱを
加えてよく混合した。次に’ｕ４ｏ℃の水浴中でロータ
リーエバポレータにより溶媒を除去した。

再びクロロホルム２−を加えて十分に撹拌した後、再度
ロータリーエバポレータにより溶媒を除去した。この操
作を数回繰り返すと、フラスコ壁面に脂質薄膜が形成さ
れた。つづいて、フラスコをデシケータ中に移して真空
ポンプで約１時間吸引し、溶媒を完全に除去した。

次いで、０．２Ｍのカルボキシフルオレセイン（イース
トマン・コダック社製、ｐ　Ｈ７，４：以下、ＣＦと記
す）１００μＱを添加し、フラスコ内部を窒素で置換し
た後、密栓して約６０’Ｃの水浴中に約１分間浸漬した
。つづいて、Ｖｏｒｔｅｘ　ミキサーヲ用い、フラスコ
壁面の脂質薄膜が完全に消失するまでフラスコを激しく
振とうした。この操作により多重層の膜のリポソーム懸
濁液が調製された。更にリポソームＩＩＩ！ｌ濁液ニ０
．ＯＩＭ　ノＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓ　、Ｗ衝液（０，８５％
ＮａＣＱ含有、ｐ　Ｈ７，４５：以下、ＨＢＳと記す）
を少量添加した後、全て遠心チューブに移し、４℃にお
いて１．５００Ｏｒｐｍで２０分間遠心する操作を数回
繰り返した。最後に１−のＩ（Ｂ　ＳにＳ濁させた。

以上のようにして９種類のリポソーム懸濁液を得た。以
下第１表にリポソーム９種類（Ａ−Ｆ）の組成を示す。

第１表 ■　抗ヒトＡＦＰ抗体の修飾 １　ｍｇ　／　ｍＱの抗ヒトＡＦＰ抗体２−をＨＢＳで
希釈し、１０ｍＭの５ＰＤＰエタノール溶液１０μＮを
添加して窒素置換した後、室温で３０分間反応させ、抗
ヒトＡＦＰ抗体にジチオピリジル基を導入した。

次に、予め０．１Ｍ酢酸緩衝液（０，８５％ＮａＣ（ｌ
含有、ｐ　Ｈ４，５）で平衡化したセファデックスＧ−
２５フアインカラム（ゲル体積約１５−）を用いたゲル
ろ過により未反応のＳＰ’ＤＰを除去して精製し、タン
パク質分画のみを回収した。

次いで、この分画にＤＴＴ約２０■を加え、窒素置換後
、室温で２０分間反応させ、ジチオピリジル基をＳＨ基
と置換して修飾した。つづいて、ＨＢＳで平衡化したセ
ファデックスＧ−２５フアインカラムを用いたゲルろ過
により未反応のＤＴＴを除去して精製し、タンパク質分
画のみを回収した。

■　抗ヒトＡＦＰ抗体固定化リポソームの調製■で得ら
れたリポソーム懸濁液Ａ−Ｆ、比較例１〜３１−を４℃
において１５０００ｒｐｍで２０分間遠心したリポソー
ム沈査と、■で得られた０、１ｇタンパク質／ｍＱの修
飾された抗ヒトＡＦＰ抗体溶液２−とを混合し、窒素置
換した後、密栓して２０℃でゆっくり振とうしながら１
晩反応させた。次に、ＨＢＳで洗浄して未反応の抗体を
除去した。

このようにして得られた免疫分析用試薬Ａ−Ｆ及び比較
例１〜３に、ゼラチンベロナール緩衝液（以下、ＧＶＢ
−と略する）２ｆｆＬｌｌ！及び１０％ＮａＮ、　２０
μＱを添加して十分に撹拌した後、窒素置換して４℃で
保存した。

■　抗ヒトＡＦＰ抗体固定化免疫分析用試薬の補体に対
する安定性３０〜５０ＣＨ，。の範囲で補体価を変化さ
せたモルモット補体溶液２５μＱに、予めＧ　Ｖ　Ｂ　
＋（Ｇ　Ｖ　Ｂ　−ニ０．５ｍ　Ｍ　（１’）　Ｍ　ｇ
ｃ１２□水溶液及び０．１５ｍＭのＣａ（４，水溶液を
添加したもので３０倍に希釈した免疫分析用試薬５μ℃
を添加し、３７℃において３０分間反応させた。次いで
、０．０１ＭのＥＤＴＡ−ベロナール緩衝液１００μＱ
で反応を停止させ各補体価の溶液について流出したＣＦ
量を蛍光分光器により、励起波長４９０ｎｍ、蛍光波長
５２ｏｎＩ１１の条件で測定した。

免疫分析用試薬Ａ−Ｆ及び比較例１〜３の補体濃度に対
する安定性の測定結果を第１図に示す。

ＤＴＰ−ＤＰＰＥ量を０．００１〜１モル％に調製した
免疫分析用試薬Ａ−Ｆ及び比較例３は補体に対し安定で
ある事が第１図から明らかである。また比較例３は感度
が悪いことが明らかである。

ＤＴＰ−ＤＰＰＥ景５，１０モル％の免疫分析用試薬（
１，２）は補体に対し不安定である。即ち非特異反応を
生じている事が明らかである。

尚、測定値の相対強度１００％とは、補体の代りに脱イ
オン水２５μＱにリポソーム試薬５μρを添加して全て
のＣＦが流出した時の値である。またこの第１図では、
試薬のバックグランドの影響を除去す皇ためにすべての
測定値から補体の代りにＧＶ　Ｂ　＋２５μβに試薬５
μβを添加した時の値を差引いて表示した。

実施例−２：ヒトＡＦＰ濃度の測定 実施例−１で調製したＤＴＰ−ＤＰＰＥ量の異なる免疫
分析用試薬２種類を用いてヒトＡＦＰ′ａ度の測定を行
った。リポソームは比較例２（ＤＴＰ−ＤＰＰＥ量＝５
モル％）とリポソームＢ（０，１モル％）を用いた。

■　抗ヒトＡＦＰ抗体固定化リポソーム試薬によるヒト
ＡＦＰ濃度の検量線作成 遊離のウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体を用いたサンドイッチア
ッセイにより以下のようにしてヒトＡＦＰ濃度を定量し
、検量線を作成した。

０．０１〜１１０００ｎ／ｍＱの範囲で濃度を変化させ
たヒトＡＦＰ溶液２５１１Ｃ１予めＧＶＢ＋で３ｏ倍に
希釈した免疫分析用試薬５μρを添加し、３７℃におい
て１０分間反応させた。次に、予めＧＶＢ＋で２００倍
に希釈したウサギ抗ヒトＡＦＰ抗体（Ｄ　ａｋｏ社製）
２５μＱを添加し、３７℃において５分間反応させた。

つづいて、補体（５ＣＨ５ｏ）２５　μｆｆを添加し、
３７℃において３０分間反応させた。次いで、Ｏ，ＯＩ
ＭのＥＤＴＡ−ベロナール緩衝液１００μａで反応を停
止させ、各濃度のヒトＡＦＰ溶液について、流出したＣ
Ｆ量を蛍光分光器で測定した。

このようにしてヒトＡＦＰ濃度と相対蛍光強度との関係
を示す検量線を得た。

■　ヒトＡＦＰ濃度の実測 ■で予め得られた検量線を用いて、患者血清１゜試料に
ついてヒトＡＦＰ濃度を実測した。この結果を第２表に
示す。なお、第２表中、参照例はＲＩＡによ測定値であ
る。

第２表が明らかなように、Ｄ　Ｔ　Ｐ　−Ｄ　Ｉ）　Ｐ
　Ｅ量＝０．１モル％の免疫分析試薬ＢではＲＩＡによ
るし１す定値とよく一致した測定値が得られる。これに
対して、ＤＴＰ−ＤＰＰＥ量：５モル％の免疫分析試薬
比較例２では測定不可能な場合がほとんどであった。こ
れは比較例２では、実施例−１で示したように補体に対
して不安定であるからである。

従って本実施例のヒトＡＦＰ検量線の作成の場合補体価
＝５ＣＨ，ｏの条件下ではＡＦＰの測定は可能であった
が、ヒト血清をサンプルとした場合、通常ヒト血清中に
含まれる補体が３０ＣＨ５ｏ前後であるために比較例２
は非特異反応を生じヒトＡＦＰの測定が不可能となる。

（以下余白） 第２表 実施例−３ ■　Ｄ　Ｔ　Ｉ）　−Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｅ量の異なる単層膜
のリポソームの調製 ＤＰＰＣとコレステロールの量を一定としＤＴＰ−ＤＰ
ＰＥ量の異なる２種類（５モル％とＯ，］モル％）の単
層膜のリポソームを調製した。使用した脂質は全てクロ
ロホルム又はクロロホルム／メタノール（２／１．）混
合溶媒に溶解した。

５ｍＭのＤ　Ｐ　Ｐ　Ｃ２００μｆｌ、ｌｏｒｎＭのコ
レステロール１００　μＱ及び１ｍＭのＤＴＰ−ＤＰＰ
Ｅ５０μａを１〇−容量のナス型フラスコに入れ、更に
クロロホルム１−を加えてよく混合した。次に約４０℃
の水浴中でロータリーエバポレータにより溶媒を除去し
たこの操作によりフラスコ壁面に脂質薄膜を形成した後
、フラスコ内にイソプロピルエーテルＬ　ｍ＋１゜０．
２ＭのＣＦを０．５ｒｄ添加しＶｏｒｔｅｙミキサーを
用いて約１分間接どう撹拌した。次いで超音波洗浄器（
Ｂｒａｎｓｏｎ　ＣｉＷｎｉｎｇ　ＥｇｕｉｐｍｅＷｔ
　Ｃｏ、製、Ｂ　−２２０型）内にフラスコを浸漬し約
３〜５分間超音波照射を行った後、ロータリーエバポレ
ータにより２５〜３７℃と、減圧条件下で溶媒を除去し
リポソームを含二の むゲルを得た。、＝＃ゲルにＨＢ　Ｓ　０．５ｍＭ　＠
加え混合撹拌した後、３７℃と、７０〜７５ｃｍＨｇの
条件下で１５分間減圧操作を行った。次いで室温にて３
０分間放置しＨＢＳで全量を２−とした後、０．４μａ
サイズのニュクリポアフィルターを用いてろ過し、ゲル
ろ過を行ない逆相蒸発法による単層膜リポソームを得た
。以上のようにして得たｖＴＰ−ＤＰＰＥ５モル％のリ
ポソーム（リポソームＧ）とは別にＤＴＰ−ＤＰＰＥ量
を０．１モル％（０，１ｍＭ、ｔｏμｃ添加）としたリ
ポソーム（リポソームＨ）を調製した。

■　抗ヒトＡＦＰ抗体固定化リポソームの調製実施例−
１の■及び■で示した方法で、上記単層膜からなるリポ
ソームＧと１■に抗体を固定化しそれぞれ免疫分析用試
薬Ｇ、Ｈとした。

■　抗ヒトＡＦＰ抗体固定化リポソーム試薬の補体に対
する安定性 実施例−１の■に示したものと同じ方法、条件にて、Ｄ
ＴＰ−ＤＰＰＥ量が異なり逆相蒸発法によって得た単層
膜から成る免疫分析用試薬ＧとＨの補体に対する安定性
をテストした。その結果を第２図に示す。ＤＴＰ−ＤＰ
ＰＥ量が０．１モル％の免疫分析用試薬Ｈの方が５モル
％の免疫分析用試薬Ｇより補体に対し安定である事が判
る。

■　ヒトＡＦＰ濃度の実測 実施例−２に示した条件及び方法にて、逆相蒸発法で調
製した免疫分析用試薬ＧとＨを用いてヒトＡＦＰ濃度の
実測を行った。その結果を第３表に示す。なお第３表中
、参照例とはＲＩＡによる測定値である。

第３表から判るように、逆相蒸発法で調製した単層膜リ
ポソームも実施例−１及び２に示した多重層膜のリポソ
ームと同様にＤＴＰ−ＤＰＰＥ量を５モル％とするより
０．１モル％とした方が血清中のＡＦＰ濃度を測定でき
る。

第３表 〔発明の効果〕 以」二、詳細したように本発明の免疫分析用試薬によれ
ば、精密かつ簡便な分析を行なうことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係わる多重層膜リポソームでなる免疫
分析試薬と従来の多重層膜リポソームでなる免疫分析試
薬の補体に対する安定性の比較図、第２図は本発明に係
わる逆相蒸発法にて調製した単層膜リポソームでなる免
疫分析試薬と従来の単層膜リポソームでなる免疫分析試
薬の補体に対する安定性の比較図である。 代理人　弁理士　則　近　憲　佑 同　　　　竹　花　喜久男

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）リン脂質及び糖脂質の少なくとも一方よりなるリ
   ポソームと、架橋基により前記リポソーム上に固定化さ
   れた親水性の抗原または抗体もしくは少くとも抗体の一
   部分と、前記リポソーム内に封入された親水性の標識物
   質からなる免疫分析用試薬において、 前記リポソームを構成するリン脂質及び糖脂質の少なく
   とも一方と、架橋基の構成比が０．０１〜１モル％であ
   ることを特徴とする免疫分析用試薬。
2. （２）前記リポソームがリン脂質及び糖脂質のうち少な
   くともいずれか一方とコレステロールから成ることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の免疫分析用試薬。
3. （３）前記親水性の標識物質が蛍光性化合物、発光性化
   合物、吸光性化合物、糖類、イオン性化合物、酵素、補
   酵素又はラジカル化合物である事を特徴とする特許請求
   の範囲第１項又は第２項記載の免疫分析用試薬。